固醇调节元件结合蛋白-1c与肝脂肪变性

固醇调节元件结合蛋白-1c是一种核转录因子,可参与脂质生成相关基因表达的调控,增加肝脏脂质合成,与肝脂肪变性关系密切,并参与各种原因引起的脂肪肝的发生.一些药物可以通过抑制固醇调节元件结合蛋白-1c的表达而预防或改善肝脂肪变性,为脂肪肝的治疗提供了新的方向.     

固醇调节元件结合蛋白1c的研究进展

固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)是一种重要的核转录因子，它主要调控脂肪合成和葡萄糖代谢相关酶基因的表达。SREBP－1c不但受到胰岛素／葡萄糖和瘦素等多种激素和营养物的调控，而且介导胰岛素对多种基因表达的调控。最近研究发现，SREBP－1c的过度表达与肝脏和胰岛等非脂肪组织的脂质积聚相关。实验研究提示，干预SREBP－1c的不适当表达可能是预防和治疗2型糖尿病的一条有效途径。     

固醇调节元件结合蛋白1c的研究进展

固醇调节元件结合蛋白 1c(SREBP 1c)是一种重要的核转录因子 ,它主要调控脂肪合成和葡萄糖代谢相关酶基因的表达。SREBP 1c不但受到胰岛素 葡萄糖和瘦素等多种激素和营养物的调控 ,而且介导胰岛素对多种基因表达的调控。最近研究发现 ,SREBP 1c的过度表达与肝脏和胰岛等非脂肪组织的脂质积聚相关。实验研究提示 ,干预SREBP 1c的不适当表达可能是预防和治疗 2型糖尿病的一条有效途径     

固醇调节元件结合蛋白1c对骨骼肌细胞胰岛素受体底物1表达调控的影响

目的 探讨固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物1（IRS-1）表达调控的影响.方法 采用酶联合消化法取2～3 d SPF级雄性SD大鼠原代骨骼肌细胞,将原代细胞分为对照组（C）、对照＋胰岛素组（C＋I）、高脂组（PA）及高脂＋胰岛素组（PA＋I）.将表达SREBP-1c腺病毒转染L6细胞,根据感染复数（MOI）分为含绿色荧光蛋白阴性载体（GFP）组、MOI值为5、50、100、200组.将靶基因为SREBP-1c的干扰RNA （siRNA）转染L6细胞,并分为空白对照组、阴性siRNA组及SREBP-1c siRNA组.Western blotting和实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测SREBP-1c、IRS-1、蛋白激酶B（Akt）基因及蛋白表达,油红O染色法检测细胞内脂质沉积情况.多组资料比较采用方差分析,两两比较采用最小显著差异法.结果 与C组相比,PA组SREBP-1c基因和蛋白水平升高（分别为2.72±0.08比1.00±0.18,3.02 ±0.19比1.00±0.05,t=15.240、18.289,均P＜0.05）,IRS-1基因和蛋白水平降低（分别为0.71 ±0.04比1.00 ±0.05,0.82 ±0.04比1.00±0.04,t=-7.960、-6.052,均P＜0.05）,丝氨酸磷酸化IRS-1蛋白表达升高,丝氨酸磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达下降（t=20.987、-5.869,均P＜0.05）.与GFP组相比,MOI值为50、100和200组的SREBP-1c基因和蛋白表达呈剂量依赖性上升（均P＜0.05）,IRS-1基因和蛋白表达水平呈剂量依赖性下降（均P＜0.05）.与空白对照组和阴性siRNA组相比,SREBP-1c siRNA组SREBP-1c基因和蛋白水平降低,IRS-1蛋白表达升高（均P＜0.05）.结论 SREBP-1c可抑制骨骼肌IRS-1胰岛素信号通路,参与肌细胞胰岛素抵抗的发生.     

乙型肝炎病毒对肝脂肪变患者肝细胞固醇调节元件结合蛋白表达的影响

目的 探讨HBV对肝脂肪变患者肝细胞固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)表达的影响.方法 收集我院感染科诊断为CHB合并肝脂肪变的患者55例,根据患者外周血清HBV DNA载量的不同分为3组:A组:HBV DNA≤103拷贝/ml的患者(15例);B组:103拷贝/ml＜HBV DNA＜105拷贝/ml的患者(18例); C组:HBV DNA≥105拷贝/ml的患者(22例).将C组抗病毒治疗后HBV DNA≤103拷贝/ml的10例患者分为C1组(治疗前)和C2组(治疗后);将C组抗病毒治疗后HBV DNA≥105拷贝/ml的12例患者分为C3组(治疗前)和C4组(治疗后).用油红O染色观察肝组织脂滴的变化;实时荧光定量PCR检测SREBP-1c及SREBP-2 mRNA的表达;免疫组织化学法检测SREBP-1c及SREBP-2蛋白的表达.多组间比较用单因素方差分析及q检验,配对样本t检验进行抗病毒前后两组间数据的比较.结果 (1)A、B、C组脂滴表 达的红色积分吸光度值分别为1004.27±218.63、1937.01±401.47、4133.79±389.28,各组间油红O红染程度不同(F=385.69,P＜0.01);C1、C2、C3、C4组脂滴表达的红色积分吸光度值分别为4020.84±326.64、1012.02±244.89、4189.18±329.21、4121.76±304.09,与C1组比较,C2组油红O红染程度下调,t=22.55,P＜0.01,差异有统计学意义;C4组与C3组比较,差异无统计学意义.(2)与A组比较,B组与C组SREBP-1c mRNA分别上调(1.218±0.130)倍、(1.798±0.118)倍,A、B、C组SREBP-1c mRNA表达水平比较,F=297.47,P＜0.01,差异有统计学意义.与A组比较,B组与C组SREBP-2 mRNA分别下调95.6%±11.8%、97.2%±15.3%,A、B、C组间SREBP-2 mRNA表达水平比较,差异无统计学意义.与C1组比较,C2组SREBP-1c mRNA表达水平下调71.4%±8.1%,t=11.224,P＜0.01,差异有统计学意义;与C1组比较,C2组SREBP-2 mRNA表达水平上调(1.034±0.155)倍,差异无统计学意义.与C3组比较,C4组SREBP-1c mRNA表达水平上调(1.012±0.206)倍,差异无统计学意义;与C3组比较,C4组SREBP-2 mRNA表达水平下调99.8%±18.3%,差异无统计学意义.(3)A、B、C组SREBP-1c蛋白表达量分别为36257.21±5709.79、50413.47±4989.28、71025.83±6047.13,3组SREBP-1c蛋白比较,F=178.26,P＜0.01,差异有统计学意义;A、B、C组SREBP-2蛋白表达量分别为32913.52±3951.21、32625.91±4025.06、34173.44±5316.25,3组比较,差异无统计学意义.C1、C2、C3、C4组SREBP-1c蛋白表达量分别为69832.16±4941.36、48735.47±5471.41、70871.69±5083.14、68913.32±5343.22,C1组与C2组比较,t=10.260,P＜0.01,差异有统计学意义;C3与C4组比较,差异无统计学意义.C1、C2、C3、C4组SREBP-2蛋白表达量分别为33980.21±4081.80、34011.50±3859.27、33610.12±4761.10、32915.66±5023.61,C1组与C2组比较,差异无统计学意义,C3组与C4组比较,差异无统计学意义.结论 HBV DNA可能通过干扰SREBP-1c的表达而参与了肝细胞脂肪变性的形成.     

固醇调节元件结合蛋白研究进展

脊椎动物细胞的脂代谢平衡受到一类重要的膜结合转录因子家族-固醇调节元件结合蛋白（sterol regulatory elementbinding proteins，SREBPs）的调控。SREBPs直接激活胆固醇、脂肪酸、甘油三酯合成和摄取的相关基因达30个以上。     

非酒精性脂肪性肝病患者肝脏固醇调节元件结合蛋白-1c的表达及其意义

目的 研究非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者肝组织因醇凋节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)的表达变化,探讨其在NAFLD中的作用. 方法对临床与病理确诊的NAFLD患者,检测肝组织SREBP-1c蛋白质和mRNA的表达变化及脂肪酸合成酶的表达,并对相应的临床资料进行分析. 结果 NAFLD患者肝脂肪变程度与血清甘油三酯和胆固醇含量呈明显正相关(r值分别为0.71和0.70,P值均<0.05);NAFLD患者肝SREBP-1c表达在蛋白质和mRNA水平都明显增强,分别为2.19±0.31和0.69±0.02,高于对照组的1.15±0.20和0.40±0.02(t值分别为11.06和-14.63,P值均<0.05),且其表达强度随脂变程度的加重,由1.47±0.08和0.67±0.08增加至2.82±0.78和0.85±0.04(F=24.54,P<0.01),而与是否合并糖尿病无关; NAFLD患者肝脂肪酸合成酶表达增加,脂肪酸合成增加. 结论肝细胞SREBP-1c表达增加,导致脂肪酸合成酶蛋白增加,脂肪合成增加是NAFLD患者肝脂肪蓄积的原因之一.     

固醇调节元件结合蛋白与脂代谢的基因调控

固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)是脂肪合成基因重要的转录调节因子。SREBP-1a、-1c主要调节与脂肪酸代谢相关的酶，SREBP-2主要调控胆固醇代谢。SREBP-1c又称脂肪细胞定向和分化因子(ADD1)，在脂肪细胞的分化中发挥重要作用。SREBPs还参与脂肪合成基因的营养调控，并受胰岛素／葡萄糖和瘦素调控，而且是代谢综合征中重要的基因调控连结点。对其调控作用进行全面深入的研究，将对糖尿病、肥胖等代谢综合征的发病机理和临床治疗有更新、更全面的认识。     

固醇调节元件结合蛋白-1c基因54G/C多态性与新疆维吾尔族冠心病的相关性

目的: 探讨固醇调节元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）基因18号外显子54G/C基因多态性与新疆地区维吾尔族人群冠心病的相关性。方法: 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,对260例冠心病患者和256例健康体检者SREBP-1c基因18号外显子54G/C位点进行分析,同时进行血糖及血脂水平检测。结果: SREBP-1c基因18号外显子54G/C在冠心病组和健康对照组中基因型频率分别为:CC型0.146和0.051,CG型0.346和0.387,GG型:0.508和0.563,两组CC基因型差异具有统计学意义（P<0.05）,且冠心病组C等位基因频率高于对照组（P<0.01）,而GC和GG基因型差异无统计学意义。不同基因型间血糖、血脂水平差异具有统计学意义（P<0.05）。结论: 固醇调节元件结合蛋白-1c基因CC基因型和等位基因C与新疆维吾尔族人群冠心病有关联,并可影响患者的血糖、三酰甘油代谢。     

核糖体蛋白S6激酶1基因沉默对高脂喂养小鼠肝脏炎性因子和肝脏胰岛素抵抗的影响

目的研究核糖体蛋白S6激酶1（S6K1）基因沉默对肝脏炎性因子表达的影响,探讨S6K1在肝脏胰岛素抵抗中的作用机制。方法将48只体重12．6～14．8g的6周龄雄性C57BL／6J小鼠按随机数字表法分为4组：普食对照组[普通饲料（ND）＋含U6启动子空载体腺病毒组（pU6Ax组）,即ND＋pU6Ax组]、普食实验组[ND＋S6K1短发夹RNA（shRNA）重组基因腺病毒组,即ND＋S6KIAx组]、高脂对照组[高脂饲料（HFD）’pU6Ax组,即HFD＋pU6Ax组]、高脂实验组（HFD＋S6K1Ax组）,分别喂养16周。实验组和对照组尾静脉分别注射S6K1Ax、pU6Ax（均为普食实验组及对照组90ml,高脂实验组及对照组120ml,效价为2．0×10^10pfu／m1）。注射后第6天过夜饥饿后,4组各随机抽取6只行葡萄糖耐量实验,剩余的小鼠处死取肝脏,逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测肝脏炎性因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-10mRNA的表达,Western blotting观察肝脏蛋白S6K1、S6K1苏氨酸389（S6K1-thr389）、胰岛素受体底物1（IRS1）丝氨酸1101（IRS1-ser1101）、IRS1丝氨酸636／639（IRS1-ser636／639）、蛋白激酶B丝氨酸473（Akt—ser473）、c—Jun氨基末端激苏氨酸183／酪氨酸185（JNK—thr183／tyr185）表达。两组比较采用t检验,多组问比较采用单因素方差分析。结果肝脏S6KI基因沉默后,与高脂对照组相比,HFD＋S6K1Ax组小鼠炎性因子MCP-1、TNF-α、IL-1βmRNA均表达下降（分别为0．549±0．016比0．871±0．081、0．635±0．079比0．905±0．059、0．642±0．042比1．327±0．025;t=9．55、6．71、34．07,均P〈0．05）。IL-6mRNA未表现出组间差异（P〉0．05）,抗炎因子IL-10mRNA在HFD＋S6KIAx组肝脏S6K1基因沉默后升高（0．773±0．076比0．436±0．046,t=9．27,P〈0．05）。Western blotting显示与HFD＋pU6Ax组相比,HFD＋S6K1Ax组肝脏S6K1基因沉默后,IRS1－serll01、IRS1-ser636／639、S6K1-thr389、JNK—thr183／tyr185表达下降,Akt—ser473表达增强（t=6．59、8．44、5．37、3．15、6．52,均P〈0．05）。结论高脂喂养可引起肝脏低度炎症并介导胰岛素抵抗的发生,肝脏S6K1可能通过促进炎症因子、抑制抗炎因子表达参与了肝脏胰岛素抵抗发生。     

早期胰岛素治疗对糖尿病大鼠骨骼肌细胞胆固醇调节元件结合蛋白-1c表达的影响

目的 探讨早期胰岛素治疗对糖尿病大鼠骨骼肌细胞内胆固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)表达的影响及可能的分子机制.方法 将7～8周龄高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素诱导的雄性糖尿病SD大鼠24只按随机数字表法分为4组:正常对照组、未治疗糖尿病组、胰岛素组、格列齐特组,每组各6只.通过real-time PCR和Western blot法检测骨骼肌细胞SREBP-1c mRNA和核内成熟型蛋白表达水平、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达、信号转导及转录活化子3磷酸化(Tyr705)(p-STAT3)蛋白表达水平.结果 与对照组(3.7±1.1)比较,糖尿病大鼠骨骼肌细胞SREBP-1c mRNA(7.3±2.6)和核内蛋白(3.3±0.4)、TNF-α(0.44±0.03)及P-STAT3蛋白(0.50 ±0.08)表达水平显著上调,早期胰岛素治疗则下调了SREBP-1c mRNA(4.1±1.8)和核内蛋白(2.7±0.3)表达、TNF-α(0.19±0.22)及P-STAT3蛋白(0.29±0.03)表达,差异有统计学意义(P<0.05).结论 早期胰岛素治疗抑制骨骼肌细胞内脂质合成通路中关键转录分子的表达,可能是骨骼肌内脂质沉积减少的机制之一.     

沉默胆固醇调节原件结合蛋白2基因对炎症因子所致HepG2细胞内胆固醇异常积聚的影响

目的 探讨沉默胆固醇调节原件结合蛋白(SREBP)2对炎症因子所致HepG2细胞内脂质异常积聚的影响.方法 通过脂质体转染SREBP2-shRNA质粒、G418抗性筛选HepG2细胞,建立沉默SREBP2的HepG2稳定细胞株(SREBP2 shRNA-HepG2)及阴性对照质粒HepG2稳定细胞株(NC shRNA-HepG2).对两种细胞分别给予无血清培养处理(对照组)、炎症因子[肿瘤坏死因子(TNF)α20ng/ml]、高脂[低密度脂蛋白(LDL) 100 μ g/ml]和联合干预(20ng/ml TNFα +100μg/ml LDL)处理.油红O染色及酶法检测细胞中脂质积聚情况,实时定量PCR和Western blot 分别检测SREBP2及其下游靶基因低密度脂蛋白受体(LDLr)和3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(HMGCoA)还原酶的基因和蛋白表达情况.对数据用单因素方差分析及2×2×2析因设计方差分析比较. 结果 成功建立阴性对照稳定细胞株NC shRNA-HepG2及抑制SREBP2表达的稳定细胞株SREBP2shRNA-HepG2.在NC shRNA-HepG2细胞中,TNF α处理使细胞内胆固醇积聚增加,并能上调SREBP2下游靶基因LDLr、HMGCoA还原酶基因和蛋白的表达,其mRNA相对表达量分别为1.68±0.03、1.31±0.05,F值分别为107.42,59.08,P值均＜0.01 ;其蛋白相对表达量分别为1.49±0.10、1.54±0.06,F值分别为46.24,247.10,P值均＜0.01.而在SREBP2 shRNA-HepG2细胞中,TNFα对胞内胆固醇沉积的作用可以被明显减弱,进一步基因和蛋白检测结果显示,炎症因子TNF α对LDLr、HMGCoA还原酶的上调作用亦被明显抑制. 结论 炎症因子通过促进SREBP2及其下游靶基因表达致HepG2细胞内胆固醇异常积聚,而通过RNA干扰抑制SREBP2的表达,可以明显减轻炎症因子所致的细胞内胆固醇的异常积聚.     

核糖体蛋白S6激酶1基因沉默对小鼠肝脏胰岛素抵抗的影响

目的 探讨核糖体蛋白S6激酶1基因沉默对db/db小鼠肝脏胰岛素抵抗的影响及机制.方法 采用随机数字表法将24只9周龄健康雄性db/db小鼠(体质量44.5～48.2 g)随机分至对照组(n1=12)和实验组(n=12),实验组小鼠尾静脉注射核糖体蛋白S6激酶1短发夹RNA重组基因腺病毒,对照组尾静脉注射含U6启动子空...     

高脂饮食非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏成脂相关基因表达增强

目的探讨非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肝脏成脂相关基因mRNA表达的动态变化.方法模型组SD大鼠给予高脂饮食饲养,分批于实验第4、8、12、16、24周处死,同期设普通饮食饲养大鼠作对照.RT-PCR分别检测肝脏固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）及其靶基因脂肪酸合成酶（FAS）、脂联素、抵抗素mRNA表达.结果模型组大鼠4周肝脏可见散在性肝细胞脂肪变性,8周为单纯性脂肪性肝炎,12～24周从脂肪性肝炎进展为脂肪性肝炎伴肝纤维化.从实验第4周起,模型组大鼠肝脏SREBP-1c和FAS mRNA表达逐渐增强,至24周时分别较对照组升高5～6倍和2～2.5倍;模型组大鼠肝脏从第12周起出现脂联素和抵抗素mRNA表达,两者表达量均随造模时间延长而增强.相关分析显示,SREBP-1c、FAS、脂联素、抵抗素mRNA表达量均与肝脂肪变程度呈正相关（r值分别为0.808、0.834、0.592、0.577,P值均＜0.01）.结论高脂饮食NAFLD大鼠肝脏SREBP-1c、FAS、脂联素、抵抗素等成脂基因表达增强,提示脂肪变性的肝细胞可能部分具有脂肪细胞的特征,即发生了成脂性改变.     

糖尿病大鼠肝脏损伤与胆固醇调节元件结合蛋白-1c及蛋白激酶表达的相关性

目的 动态研究2型糖尿病大鼠肝脏脂质代谢紊乱所致的损伤和细胞凋亡及其与固醇调节组件结合蛋白-1c(SREBP-1c)及C Jun氨基端激酶(JNK)表达的关系. 方法 试验大鼠分为4组:(1)糖尿病组,64只,用高糖高脂饲料喂养,予链脲佐菌素(STZ)30 mg/kg个次性腹腔注射复制糖尿病模型;(2)正常对照组,37只,饲以普通饲料,腹腔注射柠檬酸盐缓冲液;(3)STZ组,42只,饲以普通饲料,腹腔注射STZ;(4)高糖高脂组,37只,饲以高糖高脂饲料,腹腔注射柠檬酸盐缓冲液.在不同阶段抽样检查动物体质量、肝质量、空腹血糖、空腹胰岛素(FINS)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST);观察肝脏病理组织学变化及超微结构变化;用实时荧光定量PCR技术检测SREBP-1c、JNK蛋白及mRNA的表达;用流式细胞术检测肝脏细胞凋亡.比较不同组间的差异. 结果(1)糖尿病组大鼠体质量比正常对照组、STZ组、高糖高脂组明显下降(P＜0.05),肝质量则明显上升(P＜0.05);糖尿病组大鼠空腹血糖、FINS、TG、TC、ALT、AST亦明显升高(P＜0.05).光镜下见肝细胞脂肪变性、炎性细胞浸润,网状纤维增多;电镜显示细胞器结构紊乱,随着病程延长病变逐渐加重,肝细胞凋亡增高;SREBP-1c、JNK蛋白及mRNA的表达增高.(2)高糖高脂组亦呈类似的肝脏病变及SREBP-1c、JNK蛋白及mRNA的表达增高的改变,但程度较轻. 结论 胰岛素抵抗和高血糖可导致糖尿病肝脏病变;2型糖尿病、SREBP-1c、JNK表达升高参与了肝脏脂质代谢紊乱与细胞凋亡.     

核糖体S6激酶与大鼠肝纤维化相关性研究

目的　探讨核糖体S6激酶(RSK)在大鼠肝纤维化发生中的作用。方法　采用腹腔注射二甲基亚硝胺的方法构建大鼠实验性肝纤维化模型。以免疫荧光双标记 激光扫描共聚焦显微镜成像技术检测RSK与α-平滑肌肌动蛋白(α- SMA)及Ⅰ型胶原。进一步利用免疫组化法检测 RSK与Ⅰ、Ⅲ型胶原在肝纤维化组织中的表达及其相关性。结果　在纤维化肝组织中,RSK的定位与α-SMA完全一致,Ⅰ型胶原伴随RSK周围分布。RSK与Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达量之间亦呈显著相关(P<0.05)。结论　肝纤维化发生中,RSK定位于活化的肝星状细胞内,并参与胶原的表达调控。RSK可能成为治疗肝纤维化的新靶点。