鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展

鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展高金新，甘孟侯，杨汉春（北京农业大学动物医学院，１０００９４）鸡传染性支气管炎病毒（ＡｖｉａｎＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＢｒｏｎ－ｃｈｉｔｉｓＶｉｒｕｓ，ＩＢＶ）是冠状病毒科冠状病毒属的代表种之一，可引起鸡的呼吸道症状...     

鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展(上)

鸡传染性支气管炎(Infections Bronchitis of chickens缩写为IB)是鸡的一种急性、高度接触性呼吸道和泌尿生殖道传染病.临诊上以气管罗音、咳嗽和打喷嚏为主要特征,幼鸡感染可致死亡,产蛋鸡群感染则导致蛋的产量和质量下降.主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿系统、消化系统、生殖系统.传染性支气管炎病毒(IBV)属冠状病毒科,其血清型极为复杂,目前已知IBV有30多个血清型,不同血清型及变异株间抗原性差异很大,且不断变异,这就给IBV的诊断、免疫及IBV血清型分型带来很大的困难.该病对养鸡业危害极大,从而引起了国内外禽病工作者的高度重视.分子生物学研究进展(上).     

鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展

鸡传染性支气管炎 ( IB)是由鸡传染性支气管炎病毒 ( IBV)感染引起的鸡的一种急性高度接触性呼吸道和生殖管道的疾病 ,有的毒株还可以引起肾脏、肠道和腺胃的病变。近几年 ,国内由于新的变异株不断出现 ,导致现有疫苗的免疫效果不够理想 ,在临床上时有 IB的发生和流行 ,引起兽医科技工作者的广泛关注。与先进的生物技术相结合 ,我国 IBV分子生物学的研究取得较大进展 ,有些方面已经达到国际领先水平 ,本文主要就近几年来国内的研究成果作一综述。1　病毒的结构蛋白IBV的主要结构蛋白有 3种——纤突蛋白 ( S蛋白 )、膜蛋白 ( M蛋白 )和…     

鸡传染性支气管炎病毒分子流行病学研究进展

１概况鸡传染性支气管炎（ＩＢ）是由鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）引起的鸡的一种急性、高度接触传染性疾病,以气管口罗音、咳嗽、打喷嚏为特征［１］。本病最早由Ｓｃｈａｌｋ等（１９３１）首次在美国报道,后来由Ｂｅａｃｈ等（１９３６）确定该病为病毒感染所致。...     

鸡传染性支气管炎病毒血清学和分子生物学检测技术研究进展

鸡传染性支气管炎(IB)是鸡的一种急性高度接触性、呼吸道传染病,严重危害养禽业的健康发展。为有效控制本病流行,科研人员不断开发建立快速、准确的检测方法,尤其在血清学和分子生物学方面。本文围绕这2个方面综述了IB的实验室检测技术相关研究进展及优缺点,提出在实际检测中,要根据检测目的,结合实际情况,选择适宜方法,以保证检测结果准确。     

鸡传染性支气管炎分子生物学研究进展

鸡传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒引起的一种急性、高度接触性传染病，是严重危害我国养鸡业的重要疾病之一。笔者综述了IBV的基因组结构、蛋白组成以及分子生物学诊断技术，为传染性支气管炎的研究提供资料。     

单克隆抗体在鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究中的应用

单克隆抗体在鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究中的应用朱建国（郑州牧业工程高等专科学校医药系，４５００４５）刘秀梵（扬州大学农学院）鸡传染性支气管炎（ＩＢ），是由传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）引起的鸡的一种急性、高度接触性传染的呼吸道疾病，以气管罗音、...     

鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究及其应用

鸡传染性支气管炎（Avian Infectious Bronchitis,IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus,IBV）引起的一种急性、高度接触传染性、病毒性疾病。IBV具有广泛的组织嗜性,可以在呼吸道组织、肾脏、输卵管及消化道的许多部位进行复制,不同日龄、品种和性别的鸡均易感,自上个世纪30年代发现鸡传染性支气管炎以来,虽然疫苗得到广泛应用,     

鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展

鸡传染性(IBV)支气管炎是由冠状病毒属传染性支气管炎病毒引起的高度接触性传染病。此病在世界各地均有发生,危害严重,给全球养禽业造成巨大的经济损失。IBV血清型较多且抗原易发生变异,肾型和肠型变异株的出现,给该病的诊断和防治造成了困难。近年来国内外学者对其研究不断深入,特别在病毒基因组的组成、病毒结构蛋白的功能、病毒的转录合成机制、病毒粒子的组装等方面取得了重要进展,所有这些成果为IBV预防与控制提供了科学依据。     

鸡传染性支气管炎病毒分型研究进展

鸡传染性支气管炎严重危害养禽业,其病原传染性支气管炎病毒血清型/基因型复杂,不同血清型/基因型之间免疫交叉保护效果差。IBV毒株的分型对于实施有效的疫病控制、病原研究、流行病学调查及研究病毒的演化意义重大。文章就IBV分型的最新研究进展进行综述,为IBV相关研究提供参考。     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的高效表达

将鸡传染性支气管炎病毒（ Ｉ Ｂ Ｖ） Ｓ１ 基因 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆至含有起始密码 Ａ Ｔ Ｇ 的转移载体 ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４,构建成重组转移质粒 ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４ Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ,再与粉纹夜蛾核型多角体病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ Ｓ Ｖ Ｉ－ Ｇ Ｄ Ｎ Ａ（ Ｏ Ｃ Ｃ－ , ｇａｌ＋ ）共转染 草地夜蛾（ Ｓｆ９） 细胞, 经空斑纯化得 到已插入 Ｓ１ 基 因并能形成多角体 的重组病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 。以重组毒株感染 Ｔｎ５ Ｂ１ 细胞,在不同时间收取感染了病毒的细胞进行 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 与 Ｗ ｅｓｔｅｒｎ 印迹检测。 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 在感染的细胞中高效表达了 Ｓ１ 基因,表达产物为约 １００ ０００ 的融合蛋白,与预计的表达修饰后的产物大小相符,推测此蛋白已糖基化。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ凝胶薄层色谱分析结果显示,感染病毒后 ４８、７２、９６ ｈ, Ｓ１ 蛋白分别占细胞内总蛋白量的 ２８７％ 、３５８％ 、３７１％ 。     

分泌抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

利用超速离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）广东地方分离株Ｄ４１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合,经筛选及克隆,成功地建立了６株可分泌抗ＩＢＶＤ４１株的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞：Ｂ５、Ｂ８、Ｃ７、Ｄ８、Ｄ９、Ｇ１１。其中Ｂ８、Ｃ７、Ｇ１１的稳定性最好,腹水ＭｃＡｂ效价高达１０１０,无血清培养上清ＭｃＡｂ（浓缩３０倍）效价达４×１０４以上。６株杂交瘤细胞的特异性均很好。     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的表达

将含有传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）广东地方分离株Ｄ４１的Ｓ１基因ｃＤＮＡ（从ＡＴＧ到Ｓ前体蛋白裂解位点）的片段克隆到具有多角体启动子（ＰＸＩＶ）和人工合成启动子（Ｐｓｙｎ）的杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸ－ＩＶＶＩ＋Ｘ３中，构建了重组转基因载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３－Ｓ１．Ｄ４１。用该重组转移质粒与无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ－ＳＶＩ－ＧＤＮＡ（ｏｃｃ－，ｇａｌ＋）共转染草地夜蛾（Ｓｆ９）细胞，筛选并纯化出既能表达Ｓ１基因又能形成多角体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ＩＢＶＳ１－ｏｃｃ＋（ｏｃｃ＋，ｇａｌ－）。通过间接ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ等方法在感染了重组病毒的Ｓｆ９细胞中成功地检测到分子量约６２０００的Ｓ１基因表达产物。虽然该重组Ｓ１糖蛋白可能由于Ｎ－糖基化不完全而分子量小于天然蛋白，但它可以像正常病毒粒子一样，被鸡抗ＩＢＶＤ４１株血清特异识别。     

Establishment of Indirect ELISA Method for Detecting Antibodies against Avain Infectious Bronchitis Virus

The purpose of this research was to establish a rapid detection serological method against avain infectious bronchitis virus (IBV).In this study,an indirect ELISA method was established using IBV as the detected antigen and a variety of testing conditions were optimized.The results showed that the optimal antigen coating concentration was 19.2 μg/mL and the optimal condition for coating was incubated at 37 ℃ for 1 h and then 4 ℃ overnight.The optimal dilutions of serum and enzyme labeled antibody were 1:800 and 1:7 000 incubated at 37 ℃ for 60 min,respectively.The optimal condition of chromogenic substrate was incubated at 37 ℃ for 10 min in the dark.The specificity,repeatability and sensitivity tests proved that the indirect ELISA did not cross-react with positive antiviral sera of other chicken diseases,had good repeatability and could detect IBV antibody when serum was diluted 1:12 800.We concluded that the established indirect ELISA was specific,repeatable and sensitive.     

鸡传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的血清学方法,本试验以IBV为检测抗原,建立了一种检测IBV抗体的间接ELISA方法,并对各种检测条件进行了优化.研究结果显示,抗原的最佳包被浓度为19.2 μg/mL,最佳包被条件为37 ℃ 1 h后4 ℃过夜;血清的最佳稀释度为1:800,37 ℃孵育60 min;酶标二抗稀释度为1:7 000,37 ℃孵育60 min;底物显色为37 ℃避光作用10 min.经特异性、重复性、敏感性试验证明,该方法与鸡常见病原的阳性血清均无交叉反应,重复性较好及血清稀释至1:12 800时仍可检测到IBV抗体.结果表明,本试验所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性.     

间接法DOT—ELISA检测临床病料中的鸡传染性支气管炎病毒

将间接法ＤＯＴ－ＥＬＩＳＡ用于鸡传染性支气管炎感染的诊断，以病鸡肾１：１００的悬浮上清液进行了检测可以显示出阳性反应。     

鸡传染性支气管炎病毒血凝抑制试验研究

用A型魏氏梭菌滤液处理鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,使其产生血凝性,成功建立IBV血凝抑制试验方法(IBV-HI).血凝效价为1:256～1:1024.抗原在2～8℃的保存期至少为5个月.用该抗原对IBV标准阳性血清、SPF鸡血清、其它鸡病标准阳性血清以及含M41株病毒的灭活苗免疫的鸡血清进行检测,证明IBV-HI试验具有很好的特异性.结果表明,该方法简便、快速、特异性强,可用于疫苗质量控制和疫苗免疫效力测定.     

单抗免疫过氧化物酶技术检测鸡传染性支气管炎病毒

以抗鸡传染性支气管病毒（ＩＢＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）的单抗株６ＤＨ８作为一抗,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠ＩｇＧ作为二抗,建立了检测石蜡切片中ＩＢＶ抗原的单抗免疫过氧化物酶技术（Ｍｃ－ＩＰ）,并对人工攻毒鸡及临床ＩＢＶ感染疑似鸡进行了检测。在ＩＢＶＭ４１株人工攻毒鸡,用该技术于１～１２ｄ从气管、２～７ｄ从肾脏可以检测到ＩＢＶ抗原,阳性染色集中于气管粘膜上皮细胞及肾小管上皮细胞胞浆;临床疑为ＩＢＶ感染的病鸡,以Ｍｃ－ＩＰ技术和单抗免疫荧光试验（Ｍｃ－ＩＦＡ）同时进行检测,结果阳性率分别为９０．３％及８３．９％。     

鸡传染性支气管炎病毒纳米PCR检测方法的建立及初步应用

根据鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的3′端非编码区保守区域,设计并合成一对特异性引物,建立IBV纳米PCR检测方法,并进行了特异性、灵敏性和重复性试验,然后将建立的方法进行初步应用。结果显示:该方法特异性良好,能从4种不同基因型IBV核酸样品中检测到约346bp的目的条带,而对禽偏肺病毒、H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病毒、马立克氏病病毒、禽白血病病毒、鸭肝炎病毒等其他病原检测结果均为阴性;敏感性试验表明,纳米PCR的最低检测浓度为1.01×10^-4ng/μL,其敏感性是普通PCR的10倍;重复性试验显示3次均能检出IBV核酸。纳米PCR方法的临床应用表明,送检样品及攻毒鸡样品的检出率分别达到50%(10/20)和60%(30/50),与普通PCR方法检测结果符合率为100%。研究建立的IBV纳米PCR检测方法具有较高的敏感性和良好的特异性,为IBV的临床诊断、病原检测和流行病学调查提供了新的技术手段。