细粒棘球蚴囊液抗原纯化方法的比较评价

对于绵羊肝脏细粒棘球蚴囊液用常规粗制法,通过抗绵羊全血清抗体免疫吸附柱的亲和层析法,Oriol氏纯化法,Burstein氏纯化法,以及将纯化抗原再经酚提取法制备的六种抗原,以SDS-PAGE,免疫电泳,ELISA,IHA等方法进行了抗原得率、纯度、组份、免疫活性和特异性等方面的比较。结果表明:亲和层析抗原得率最高(l6.25％～22.64％),Oriol氏法纯化抗原最低(3.35％)。与囊液粗抗原相比,纯化抗原中Burstein抗原组份最多。经酚提取的纯化抗原组份最少。各种抗原组份数目显然相差明显,但在免疫电泳中均出现弧5沉淀线。酚提取法不能达到将抗原5和抗原B分离的目的。在ELISA和IHA中,Burstein法纯化抗原的活性最高。作者分析了亲和层析抗原活性低于Burstein和Oriol两种抗原的原因可能是亲和层析抗原缺少68kDa和36.5kDa两种宿主组份。因而认为这两个组份可能同时具有寄生虫抗原的性质。在ELISA试验中,各种纯化抗原均与囊虫病人血清产生部分交叉反应,但比粗抗原低。在IHA试验中,纯化抗原均不与囊虫病人血清产生交叉反应。作者推荐由于Burstein法纯化抗原得率高,提纯程序较简单,抗原活性高而且在IHA中没有与囊虫病人血清的交叉反应,因而可作为常规诊断抗原使用。     

纯化抗原和粗抗原诊断包虫病的效果比较

目的 比较纯化细粒棘球蚴囊液抗原和囊液粗抗原诊断包虫病的效果。方法 用Burstein法纯化抗原，与粗抗原平行同步检测包虫病病人、健康人及其它寄生虫病病人血清，以标化阳性预告值（SPPV），标化阴性预告值（SNPV），标准化准确度（SAc)等计算综合积分指数（SII）。结果 两种抗原检测包虫病病人与健康人，其SII值：纯化抗原为96．0％，粗抗原为95．5％。包虫病与其他寄生虫病，其SII值：纯化抗原为94．9％，粗抗原为92．8％。结论 表明Burstein法纯化抗原在诊断包虫病的质和量上均优于囊液粗抗原。     

纯化抗原和粗抗原诊断包虫病的效果比较

目的比较纯化细粒棘球蚴囊液抗原和囊液粗抗原诊断包虫病的效果。方法用 Burstein法纯化抗原 ,与粗抗原平行同步检测包虫病病人、健康人及其它寄生虫病病人血清 ,以标化阳性预告值 ( SPPV) ,标化阴性预告值 ( SNPV) ,标准化准确度 ( SAc)等计算综合积分指数 ( SII)。结果两种抗原检测包虫病病人与健康人 ,其 SII值 :纯化抗原为 96 .0 % ,粗抗原为 95 .5 %。包虫病与其他寄生虫病 ,其 SII值 :纯化抗原为 94 .9% ,粗抗原为92 .8%。结论表明 Burstein法纯化抗原在诊断包虫病的质和量上均优于囊液粗抗原。     

检测包虫病患者血清特异IgG4诊断价值的研究

目的 探讨检测患者血清特异IgG4诊断包虫病的效果。方法 采用两种抗原（棘球蚴囊液粗抗原及其抗原B）通过ELISA法检测棘球蚴病病人、非棘球蚴病病人和健康对照血清特异IgG4。结果 粗抗原和抗原B检测棘球蚴患者血清特异IgG4的阳性率分别为94．4％和89．8％;与部分猪囊尾蚴病患者血清出现交叉反应外,与肺吸虫病、旋毛虫病、血吸虫病、肝囊肿等患者的血清以及健康对照血清均未出现交叉反应。结论 检测棘球蚴患者血清特异IgG4敏感性高,特异性强,具有较好的诊断价值。     

绵羊牦牛棘球蚴囊液及囊壁抗原的SDS—PAGE分析

本文应用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对绵羊、耗牛棘球蚴囊液及绵羊棘球蚴囊壁可溶性粗抗原的蛋白组分进行了分析。使用10％凝胶,采用垂直板型电泳、考马斯亮兰R—250染色进行SDS-PAGE的结果表明,绵羊及耗牛棘球蚴囊液分别含有16及11种蛋白组分,分子量范围分别为270～16.5KD及280～17KD;主带均为8条。绵羊棘球蚴囊壁可溶性粗抗原共显示17条蛋白带,分子量范围245～17KD,主带8条。本项研究为进一步分析分离特异性抗原奠定了基础。     

绵羊细粒棘球蚴囊液抗原诱发小鼠免疫反应及保护性免疫的研究

本文用绵羊细粒棘球蚴囊液抗原制剂,给小鼠3次腹腔注射诱发初次免疫,然后腹腔移植泡球蚴组织作攻击感染,观察保护性免疫。实验提示,注射免疫原制剂后1月能诱发小鼠免疫反应,间接血凝试验(IHA)可测出血清抗体;攻击感染后23周,IHA阳性率达94.4％,而未诱发初次免疫的对照鼠IHA阳性率为90.0％,表明无论是初次免疫或攻击感染,均能诱发小鼠产生抗体,二者无显著差别(P>0.05);但IHA血清滴度1:256百分率分别为94.1％和55.5％,有显著差别(P<0.01),表明攻击感染有强化初次免疫的作用。攻击感染后23周,对比免疫鼠和对照鼠的腹腔泡球蚴湿重均值和病理分级率均无显著差别(P>0.05),提示本文小鼠初次免疫未显保护性免疫之效。     

囊型棘球蚴和泡型棘球蚴不同组织抗原可溶性蛋白SDS—PAGE电泳分析

对囊型棘球蚴和泡型棘球蚴的不同组织及犬泡状带绦虫和豆状带绦虫、猪囊尾蚴，细颈囊尾蚴等四种异源绦虫组织共１４种抗原进行了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析。两种棘球蚴同种组织的主要蛋白质区带的电泳图谱差别不大，不同组织的电泳图谱差别较大。     

单克隆抗体Dot-ABC-ELISA检测包虫病人循环抗原

作者用活化生物素标记抗细粒棘球蚴抗原单克隆抗体（ＭｃＡｂ）１Ｄ８，以聚氯乙烯（ＰＶＣ）白色薄膜凹孔板为载体，建立了ＭｃＡｂ－Ｄｏｔ－ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ检测包虫病人循环抗原的方法。测定人源包虫囊液抗原的灵敏度为６ｎｇ／３μｌ样品．９２例确诊包虫病人血清循环抗原检出率为７６．１％（７０／９２），在抗体阳性者中循环抗原检出率为８１．６％（６２／７６），抗体阴性者中检出率为５０％（８／１６）。１００份正常人和１２２份羹虫病等其它寄生虫病人血清，仅１份囊虫病人血清出现交叉反应．测定循环抗原对包虫病人，尤其是血清抗体阴性者的免疫诊断有重要价值．本法简便、快速，适于推广．     

SPA-ELISA评价三种不同纯度牛源细粒棘球蚴囊液抗原在包虫病免疫诊断中的价值

本文采用SPA-ELISA法评价了三种不同纯度牛源细粒棘球蚴囊液抗原在包虫病免疫诊断中的价值,用三种抗原检测了41例包虫病患者血清中特异IgG抗体的水平,它们的阳性率分别为:牛源细粒棘球蚴液粗抗原86.0％,半饱和硫酸铵法纯化抗原91.4％,氯化镁—磷钨酸法纯化抗原92.3％,两种纯化抗原与粗抗原的阳性检出率相比,经统计学处理具有显著差异,认为西北地区牦牛体内寄生的细粒棘球蚴囊液抗原不乏抗原活性;氯化镁—磷钨酸法和半饱和硫酸铵法是两种简便易行,纯化效果理想的抗原纯化方法,宜于在基层推广应用。     

包虫病人循环抗原的检测及应用价值的探讨

利用亲和层析纯化的抗包虫免疫球蛋白以双抗体ELISA法检测包虫抗原,对经亲和层析纯化的包虫抗原的检出下限可达40ng/ml。以1:2健康人混合血清稀释抗原时,检出下限为2.5μg/ml。用此法检测79例包虫病人的循环抗原,阳性率为40.51％。其中肝包虫病人阳性率为38.98％,肺包虫病人为33.33％。血清抗体阳性的包虫病人循环抗原检出率为33.33％,抗体阴性者中为43.75％。在抗体阴性的肺包虫病人中循环抗原的阳性率可达50％。循环抗原的测定在血清抗体阴性包虫病人的免疫学诊断中具有辅助意义。     

编码刚地弓形虫棒状体蛋白2与主要表面抗原1基因的克隆和表达

目的 构建编码弓形虫RH株棒状体蛋白2（ROP2）和主要表面抗原1的重组表达质粒，纯化和复性的融合蛋白为弓形虫病快速诊断试剂盒及蛋白质疫苗的研制作准备。方法 用PCR技术从弓形虫基因组DNA中扩增出ROP2和P30基因片段，分别克隆人pMDl8-T载体，并对重组人外源基因的质粒通过PCR、双酶切和测序鉴定，将pMD-ROP2中RoP2基因片段经EcoRI和HindⅢ酶切、连接等反应，亚克隆入pET-30a（＋）原核表达载体，构建pET-ROP2载体，然后再将pMD-P30中的P30基因片段与经同样NcoI和EcoRI酶切的pET-30a（＋）载体连接，经含卡那霉素的LB平板筛选，酶切和PCR鉴定。阳性重组质粒转化到大肠埃希菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导，表达产物用SDS-PAGE进行鉴定。大量的表达融合蛋白经纯化和复性后，用Westernblot分析。结果 从弓形虫RH株DNA中扩增出特异的RoP2和P30基因片段，成功克隆出pET-ROP2和pET-P30载体。结论 成功构建了pET-ROP2和pET-P30重组体，获得纯化和复性的弓形虫ROP2和P30的高效表达产物，为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础。     

以融合蛋白为抗原的简化Western blot法诊断囊虫病

目的：为囊虫的诊断提供简便有效的方法。方法：猪囊尾蚴cDNA表达文库中筛选出的β－半乳糖苷糖－猪囊虫cDNA编码的融合蛋白为抗原，进行简化的Westernblot分析。结果：四个克隆的融合蛋白（cC1、cC2、cP1和cH1）联合使用，检测124例人囊虫病血清中的抗囊尾蚴IgG抗体，阳性率达93．7％，三个克隆的融合蛋白（cC1、cC2、和cP1）联合使用，检测38例猪囊虫病血清中的相应抗体，阳性率达100％，均高于各克隆融合蛋白单独使用的阳性率，且与其他寄生虫病血清无交叉反应。结论：以融合蛋白为抗原所进行的Westernblot分析具有高度灵敏性和特异性，且简便易操作。     

新疆包虫病流行病学基线的调查研究——I.人类包虫病的血清流行病学调查

1984～1989年期间,应用ELISA和IHA两种血清学方法,在新疆十二个有代表性的地区进行居民血清流行病学调查的结果表明,在新疆全境均有包虫病的感染存在。根据居民血清ELISA阳性率,参照家犬细粒棘球绦虫成虫感染率和绵羊细粒棘球蚴感染状况,可将全区划分为三种不同程度的地方性流行区。天山、阿尔泰山和昆仑山区域的牧业和农牧业区居民的血清阳性率在20％以上,属于重度地方性流行区。准噶尔盆地和塔里木盆地的绿洲农业地带包括荒漠牧场,居民血清阳性率在10％以上,属于中度地方性流行区。帕米尔高原的塔什库尔干和塔里木盆地东南缘的一些干旱农业区居民血清阳性率在10％以下,属于轻度地方性流行区。作者认为在流行程度的划分上,不能单纯以血清阳性率而定,还应考虑到家犬和绵羊的感染程度。血清IHA的阳性率大致与ELISA结果相关。但南疆地区居民血清IHA阳性率极低,不与ELISA结果相关。不同民族血清阳性率不同,同一民族在不同地区之间也有明显差异。女性的阳性率高于男性。在血清阳性率的年龄分布上,南北疆不同。北疆居民血清阳性率的高峰在10～14岁年龄段,而南疆在20～24岁年龄段。由血清阳性率反映的包虫病感染的相对危险性以从事游牧生活的地区最高。作者讨论了这些现象的原因。     

人、沙鼠、小鼠泡球蚴抗原诊断泡球蚴病的比较研究

用同一组47例泡球蚴患者和115例对照血清比较研究了人、沙鼠和小鼠泡球蚴抗原的诊断价值。人、沙鼠和小鼠泡球蚴抗原的阳性率各为97.8％、100％和97.8％,三者无显著差异(P>0.05)。三者的假阳性率也无显著差异(P>0.05)。用沙鼠泡球蚴抗原检测时,95.74％病例的消光值在0.70以上,非常显著地高于人(48.94％)和小鼠(57.45％)抗原,P均<0.01。在1:1600以上抗体滴度组中,沙鼠泡球蚴抗原检出74.47％病例,非常显著地高于人(6.38％)和小鼠(29.79％)泡球蚴抗原(P均<0.01)。以滴度几何均数计,沙鼠泡球蚴抗原检测最高为1:1209,是小鼠泡球蚴检测的2.89倍和人泡球蚴抗原检测的3.32倍。说明在诊断人体泡球蚴病时宜用沙鼠泡球蚴抗原。以SDS-PAGE分离的人、沙鼠和小鼠泡球蚴抗原的蛋白质带数各为23、36和15。讨论了蛋白质带数与泡球蚴病诊断的关系。     

棘球蚴病CAb、CAg与CIC检测结果的评价

对棘球蚴病患者用ABC-ELISA法检测CAb,ABC-夹心双抗体法和Pernice法分别检测CAg和CIC,阳性率分别为87.0％(40/46)、15.6％(7/45)和17.8％(8/45)。在检测CAb阴性的6例中CAg阳性者4例,表明CAb与CAg同时检测可提高阳性检出率达95.6％(43/45)。 CAb阴性病例主要是肺棘球蚴病,占83.3％(5/6)。CAg的检出率仅15.6％,但特异性高,未出现交叉反应和假阳性反应。检测CIC不但检出率不高,而且非特异性反应与检测CAb时相似。     

18kDa抗原诊断泡型包虫病的评价

目的：评价１８ｋＤａ抗原在泡型包虫病（ＡＥ）诊断中的价值。方法：用免疫印渍法检测３３例泡型包虫病、６９例囊型包虫病（ＣＥ）、３０例囊虫病和８２例健康人血清对泡型棘球蚴（Ｅｍ）和囊型棘球蚴（Ｅｇ）原头节１８ｋＤａ抗原的抗体反应。同时用羊包囊液抗原常规ＥＬＩＳＡ法检测上述血清。结果：ＥＬＩＳＡ试验,ＡＥ血清阳性率为９３．９％、ＣＥ为８５．５％、囊虫病为５０％、健康人为６．１％。显示３种患者血清存在较强的交叉反应。免疫印渍试验,两种原头节的１８ｋＤａ抗原对ＡＥ血清阳性反应均为９０．９％、ＣＥ分别为１０．１％和１３％、囊虫病患者为１３．３％和１６．７％。与健康人血清不发生反应。结论：１８ｋＤａ抗原可以有效的鉴别两型包虫病。     

黑热病患者尿中循环抗原的检测及识别抗原分子的研究

“致死性疾病”在苏丹蔓延。我国黑热病亦回升。急迫需要建立新的、对病人无损伤的诊断方法。作者等已建立用血清ＭｃＡｂ－ＡＳＴ诊断黑热病的方法。本文报道用同法检测病人尿中循环抗原的结果。对１７例确诊黑热病患者尿液的检测，１６例呈阳性反应，阳性率９４％。正常人对照３０例均呈阴性结果。１５／１５例黑热病息者血清ＭｃＡｂ－ＡＳＴ显阳性。同一病倒尿样、血清反应的阳性程度相近。取尿液较之任何采样途经都更为简便，特别是对婴幼儿发病率高的山丘疫区，更为适合。免疫印迹法显示识别出二条特异区带。其分子量分别为４５ｋＤ和２２ｋＤ。进一步鉴定出黑热病患者尿中的Ｌ．ｄ抗原。系国内外首次报道。