医用臭氧通过下调神经病理性痛大鼠核因子κB/核因子κB抑制蛋白α/核因子κB抑制蛋白激酶β的表达发挥镇痛效应

目的观察医用臭氧(OZ)对坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)致神经病理性痛大鼠的镇痛作用及对核因子κB(NF-κB)、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)及核因子κB抑制蛋白激酶β(IKKβ)表达水平的影响。方法采用CCI法复制大鼠神经病理性痛动物模型,同时给予不同剂量(0.8、0.4、0.2ml)的OZ予以干预,用Von Frey纤维丝机械刺激触痛仪及冷板测痛仪测定不同剂量OZ对CCI大鼠的机械缩足反射阈值与冷缩足反射阈值的影响;用RT-PCR法和Western blotting法检测不同剂量OZ对CCI大鼠脊髓组织NF-κB p65、IκBα及IKKβmRNA和蛋白表达水平的影响。结果与CCI神经病理性痛模型组比较,OZ 0.8、0.4ml剂量升高CCI大鼠机械缩足反射阈值,降低冷缩足反射阈值(P0.05,P0.01);OZ 0.8、0.4ml剂量可下调CCI大鼠脊髓组织NF-κB p65、IκBα及IKKβmRNA和蛋白表达水平(P0.05,P0.01)。结论 OZ对CCI致神经病理性痛大鼠有镇痛作用,其机制可能与下调NF-κB p65、IκBα及IKKβ的表达有关。     

人参皂苷Re对球囊损伤所致大鼠血管内膜增生及NF-κB p65信号通路的影响

目的:研究人参皂苷Re对大鼠颈动脉球囊损伤所致血管内膜增生的作用及其对NF-κB p65炎症信号通路的影响。方法:40只SD大鼠随机分组为5组:假手术组,模型组,人参皂苷Re低、中、高剂量组。除假手术组外,其余组大鼠均用2F球囊导管建立颈动脉球囊损伤模型,制模后次日灌胃给药,假手术组和模型组给予等体积蒸馏水,人参皂苷低、中、高剂量组大鼠分别给予12.5、25、50 mg/kg人参皂苷Re。连续给药14 d后取损伤段颈动脉,HE染色观察血管形态学改变,并测定血管管腔面积(lumen area,LA)、内膜面积(intima area,IA)、中膜面积(media area,MA),计算内膜/中膜面积比(IA/MA);real-time PCR法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的mRNA水平;免疫组织化学法检测血管壁增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65蛋白的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠血管腔明显变窄(P0.01),血管壁TNF-α、IL-1β的mRNA水平及PCNA、NF-κB p65蛋白的表达均明显增高(P0.05);与模型组比较,人参皂苷Re中、高剂量组血管内膜增生明显减轻(P0.05),血管壁TNF-α和IL-1β的mRNA水平及PCNA和NF-κB p65的蛋白表达则明显下调(P0.05)。结论:人参皂苷Re能减轻球囊损伤所致大鼠颈动脉内膜增生,其机制可能与抑制NF-κB p65炎症信号通路有关。     

芝麻素通过PKCα/ NF-κB 信号途径抑制肥大细胞活化

目的:观察芝麻素对肥大细胞活化和炎症介质释放的影响并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养HMC-1细胞,用10 μg/ ml 的anti-DNP IgE 处理细胞6 h 后,再用100 ng/ ml 的DNP-HAS 孵育10 min 诱导HMC-1 细胞活化,在DNP-HAS 处理前给予最终浓度25、50 和100 μg/ L 芝麻素预处理30 min 后光镜下观察芝麻素对肥大细胞脱颗粒的影响,ELISA 法检测芝麻素对肥大细胞组胺、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8 释放的影响,Western blot 方法观察芝麻素对Fc RI 受体下游信号Lyn 和 Syk,PKC琢激活,IκB琢磷酸化和NF-κB 活化的影响。结果:DNP-HAS 能明显诱导HMC-1 细胞脱颗粒,促进组胺和TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-8 等细胞因子的释放,激活Fc着RI 受体下游信号分子Lyn、Syk 和PKCα,磷酸化IκBα,促进NF-κB 活化(P<0.05)。芝麻素高(100 μg/ L)、中(50 μg/ L)浓度能明显抑制HMC-1 细胞脱颗粒和炎症介质的释放,阻断Fc着RI 受体下游信号激活,抑制NF-κB 活化(P<0.05)。结论:芝麻素通过PKCα/ NF-κB 途径抑制肥大细胞活化和炎症介质释放。     

NF-κB抑制剂对脑出血大鼠神经损伤的影响

目的:探讨核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对脑出血(ICH)大鼠神经功能及神经细胞凋亡的调节作用。方法:取SPF级SD大鼠随机分假手术组(sham组)、ICH组、PDTC低浓度组(Plow组)和PDTC高浓度组(P_(high)组),每组6只。采用自体血注入法建立大鼠ICH模型,Plow组和P_(high)组在缺血后2h分别给予100 mg/kg和200 mg/kg的PDTC腹腔注射,sham组和ICH组给予等体积的生理盐水;24 h后,采用改良的Longa分级法进行神经功能评分;TUNEL法测定神经细胞凋亡情况;并检测脑组织中丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。此外,采用Western blot法检测脑组织中p-P65及cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:与sham组相比,ICH组大鼠的神经功能评分显著升高(P0.05);应用PDTC后,Plow组和P_(high)组动物的神经功能评分都有所降低,但2组间差异无统计学意义。与sham组相比,ICH组大鼠神经细胞凋亡明显增多(P0.05);应用PDTC后,2组动物神经细胞凋亡数目显著降低,且P_(high)组的细胞凋亡数目显著低于Plow组(P0.05)。与sham组相比,ICH组大鼠脑组织的MDA含量升高,SOD活性降低(P0.05);应用PDTC后,2组动物脑组织中的MDA含量显著降低,而SOD活性升高,且这一趋势在P_(high)组表现更为明显。与sham组相比,ICH组大鼠脑组织中p-P65和cleaved caspase-3的蛋白水平显著增加(P0.05);应用PDTC后,2组动物脑组织中p-P65和cleaved caspase-3的蛋白水平显著降低,且P_(high)组中p-P65和cleaved caspase-3的蛋白水平显著低于Plow组。结论:NF-κB抑制剂PDTC能减轻脑出血后继发性脑损伤,且大剂量作用效果较好;其作用机制可能与降低MDA含量、提高SOD活性进而抑制神经细胞凋亡有关。     

染料木黄酮对氨诱导的星形胶质细胞NF-κB活化的影响

目的:探讨染料木黄酮对氨所致星形胶质细胞NF-κB活化的影响及其机制。方法:以氯化铵刺激原代培养的星形胶质细胞,建立高血氨模型,Western blot检测星形胶质细胞中ERK、Akt及核因子κB(NF-κB)的活化。结果:AG1478及染料木黄酮可显著抑制氨诱导的星形胶质细胞ERK及Akt的活化。LY294002、染料木黄酮及AG1478可显著抑制氨诱导的星形胶质细胞NF-κB核转位。结论:染料木黄酮可显著抑制氨诱导的星形胶质细胞ERK活化和Akt介导的NF-κB活化,这可能是该天然物质抑制星形胶质细胞水肿的重要机制。     

枸杞多糖干预糖尿病大鼠颌下腺组织中核因子κB的表达

背景：核因子κB是一种广泛存在于体内多种细胞的核转录因子,能介导多种炎性递质转录表达,也参与细胞凋亡的调控。 目的：观察枸杞多糖对糖尿病大鼠颌下腺组织中核因子κB表达的影响。 方法：60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、补枸杞多糖组,后2组用四氧嘧啶诱发糖尿病大鼠模型。造模成功后补枸杞多糖组灌胃50%枸杞多糖水溶液,糖尿病组和对照组灌胃等容量生理盐水,连续灌胃8周。 结果与结论：灌胃8周后糖尿病组和补枸杞多糖组体质量低于正常对照组(P < 0.05),补枸杞多糖组体质量高于糖尿病组(P < 0.05)。灌胃8周后糖尿病组、补枸杞多糖组血糖高于正常对照组(P < 0.05),补枸杞多糖组血糖低于糖尿病组(P < 0.05)。核因子κB在正常颌下腺中无表达或仅有少量表达;糖尿病时表达量明显增多,而补枸杞多糖组表达量则明显减少。结果可见枸杞多糖能够抑制核因子κB的活化与表达,对糖尿病大鼠颌下腺组织起到一定的保护作用。     

4-HNE通过抑制TNF-α介导的NF-κB活化诱导酒精性肝损伤

 目的：通过体外细胞及体内动物实验,研究肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的4-羟基壬烯酸（4-HNE）致敏肝细胞发生死亡的作用及机制。方法：以人肝细胞株HepG2及小鼠原代肝细胞为细胞模型,通过乳酸脱氢酶（LDH）释放及MTT比色法检测4-HNE对TNF-α诱导的肝细胞死亡的作用,利用Western blotting技术检测细胞内4-HNE与蛋白质形成的加合物水平,通过Western blotting和ELISA技术检测细胞核内NF-κB（p65）的表达及其与DNA结合活性。以C57BL/6小鼠为动物模型,利用HE染色、ELISA、Western blotting及TUNEL等技术,检测长期摄入酒精前后动物肝组织形态、甘油三酯（TG）水平、4-HNE水平、TNF-α水平及血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性的变化。结果：（1） 4-HNE可以显著增加HepG2细胞及小鼠原代肝细胞对TNF-α杀伤作用的敏感性,从而使TNF-α诱导4-HNE致敏的肝细胞死亡。（2） 4-HNE可显著提高HepG2细胞内4-HNE-蛋白质加合物的水平。（3） 4-HNE抑制HepG2细胞内TNF-α介导的NF-κB活化。（4） 长期摄入酒精导致小鼠肝细胞内4-HNE和TNF-α水平升高,引起肝细胞内TG水平升高,血浆ALT活性升高,肝细胞死亡增多。结论：长期摄入酒精使肝细胞发生氧化应激,其产物4-HNE可作为一种肝细胞致敏因子,通过抑制肝细胞内TNF-α介导的NF-κB抗细胞凋亡信号通路,诱导酒精性肝损伤。这可能是一种新的酒精性肝病发病机制。     

一氧化氮对香烟烟雾提取物诱导大鼠肺泡巨噬细胞核因子κB活化的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中核因子κB(NF—κB)活化的影响及机 制。方法:将大鼠AM与不同浓度的NO前体左旋精氨酸(L-Arg)或iNOS特异性抑制剂N6-(1-亚氨乙基)赖氨酸(L-NIL)及CSE共同培养,用免疫细胞化学染色法检测NF-κB,用Western blot检测I-κB蛋白含量,用Griess法测定培养上清液中NO的水平。结果:CSE可使NF-κB活化细胞的百分率增加,I-κB的水平下降。加入CSE和低浓度L-Arg培养的AM,NF-κB活化细胞的百分率显著高于只加入CSE的AM;而I-κB的水平显著低于只加入CSE的AM。加入CSE和高浓度L-Arg培养的AM,NF-κB活化细胞的百分率显著低于只加入CSE的AM,而I-κB的水平无显著变化。加入CSE和不同浓度的L-NIL培养的AM,NF-κB活化细胞的百分率显著低于只加入CSE的AM;而I-κB的水平则显著高于只加入CSE的AM,并呈浓度依赖(P<0.01)。结论:内源性NO对香烟烟雾所致NF-κB的活化具有双向调控作用。     

右美托咪定对创伤后应激障碍大鼠核因子κB抑制蛋白激酶/核因子κB抑制蛋白α/核因子κB通路及认知功能障碍的影响

目的 探讨右美托咪定（DEX）对创伤后应激障碍大鼠（PTSD）核因子κB抑制蛋白激酶（IKK）/核因子κB抑制蛋白α（IκBα）/核因子κB（NF-κB）通路及认知功能障碍的影响。 方法 将大鼠按照随机数字表法分为空白对照（control）组、模型（model）组、阳性对照（positive）组和DEX组。除control组外,其余各组使用单一延长应激法（SPS）构建PTSD模型,并于模型制作后分别给予相应药物。旷场实验和Morris水迷宫法检测大鼠自主活动和学习记忆能力;HE染色法观察大脑皮层和海马组织病理变化;ELISA和Western blotting检测海马组织白细胞介素（IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量及IKK、IκBα、嘌呤能离子通道型受体7（P2X7R）和富含亮氨酸重复结构域蛋白3（NALP3）表达水平;凝胶电泳迁移率转变分析（EMSA）评价NF-κB活性。 结果 与control组相比,model组大鼠大脑皮层及海马CA1区出现结构紊乱,细胞核固缩等病理变化,大鼠自主活动和学习记忆能力降低（P<0.05）, IL-1β、IL-6和TNF-α含量、IKK、IκBα、P2X7R和NALP3表达水平及NF-κB活性升高（P<0.05）;与model组相比,positive组和DEX组大鼠大脑皮层及海马CA1区病理现象缓解,上述指标变化均与model组相反（P<0.05）。 结论 DEX可显著提高PTSD大鼠自主活动和学习记忆能力,减少海马组织炎症反应,改善认知功能障碍,可能与下调IKK/IκBα/NF-κB通路有关。     

TRAF3抑制NF-κB引起的肾囊腔形成作用

目的:研究肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)对多囊肾集合管上皮细胞中核因子κB(NF-κB)信号通路及其下游产物表达的影响;观察TRAF3基因过表达的多囊肾集合管上皮细胞形成管状分支结构的变化,探讨TRAF3在多囊肾囊腔形成的发生发展中可能产生的作用。方法:Western blot检测多囊肾集合管上皮细胞和TRAF3基因过表达多囊肾集合管上皮细胞中NF-κB信号通路的变化,同时检测下游凋亡因子Bax及Bid的表达及caspase-3活性变化;通过Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞的凋亡情况;应用三维(3D)培养法观察多囊肾集合管上皮细胞形成管状分支结构变化的差异。结果:TRAF3的过表达能显著抑制多囊肾集合管上皮细胞中NF-κB信号通路的活性,使下游的Bax及Bid表达显著下调,细胞凋亡明显减少;TRAF3基因过表达多囊肾集合管上皮细胞管状分支结构较多囊肾集合管上皮细胞组明显增多。结论:TRAF3可能通过调节NF-κB信号通路降低Bax及Bid活性,抑制细胞凋亡,从而抑制多囊肾囊腔形成。     

黄芩苷对惊厥持续状态幼年大鼠海马GFAP和NF-κB表达的影响

目的:观察幼年大鼠惊厥持续状态(status convulsion,SC)后脑组织海马中胶质细胞原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、核因子κB(NF-κB)的表达及神经细胞凋亡的变化,并探讨黄芩苷(baicalin,BC)对三者的影响。方法:将195只19日龄SD雄性大鼠随机分成生理盐水对照组(NS组)、惊厥持续状态组(SC组)和黄芩苷预处理组(BC组)3组;各组再按处死时点不同随机分为4 h、12 h、24 h、48 h和72 h亚组。采用氯化锂-匹鲁卡品化学点燃法制备幼年大鼠SC模型;应用免疫组化法检测大鼠海马中GFAP和NF-κB蛋白的表达情况,RT-PCR法检测GFAP的mRNA表达,TUNEL法检测神经细胞凋亡数的变化。结果:(1)免疫组织化学法检测显示SC组幼年大鼠海马中GFAP表达增强,与NS组比较差异有统计学意义(P0.05);与SC组比较,BC组的GFAP表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05);SC组幼年大鼠海马中NF-κB表达增强,与NS组比较差异显著(P0.05);与SC组比较,BC组的NF-κB表达明显降低(P0.05)。(2)RT-PCR检测结果显示GFAP的mRNA表达趋势与蛋白基本相似。(3)SC组在惊厥后12 h海马CA1区TUNEL阳性细胞数已显著高于NS组(P0.01),48 h达峰值,而BC组TUNEL阳性细胞数在12 h~48 h均较SC组显著下降(P0.05或P0.01),但仍高于NS组(P0.05)。结论:SC后大鼠海马GFAP和NF-κB的表达增强。黄芩苷可下调匹鲁卡品致痫大鼠海马GFAP和NF-κB的表达,并使神经细胞凋亡数减少,提示黄芩苷在SC引起的脑损伤时对大鼠有保护作用。     

NF-κB的活性和iNOS基因表达在低氧性肺动脉高压中的变化

目的：探讨NF-κB的活性及iNOS基因表达在低氧性肺动脉高压（HPH）发病过程中的变化。方法：复制低氧性肺动脉高压大鼠模型，用免疫组化、原位杂交、半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和Western blot等方法进行检测。结果：iNOS mRNA在腺泡内肺动脉（IAPA）的表达，低氧28 d（H28d）组染色强于正常（N）组、低氧5 d（H5d）组和低氧14 d（H14d）组。半定量RT-PCR证实低氧肺组织iNOS mRNA含量在H28d组分别是N组、H5d组和H14d组的2.1倍、1.9倍和1.8倍。H28d组肺组织NF-κB的核染色增多，I-κBα的含量在N组、H5d组和H14d组分别是H28d组的2.7倍、2.8倍和2.5倍。结论：在HPH中NF-κB的激活可能与低氧肺血管构建及iNOS mRNA的表达有关。     

跨膜蛋白66过表达减轻大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生

目的研究跨膜蛋白66(TMEM66)在大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生中的作用。方法将SD大鼠随机分为对照组,左侧颈动脉球囊损伤组和TMEM66过表达组(n=10)。HE染色检测各组血管内膜增生情况。Western blot、q-PCR及IHC分别检测颈动脉血管中TMEM66的表达。CCK8和划痕实验分别检测TMEM66过表达后原代培养血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和迁移。结果颈动脉球囊损伤血管中TMEM66的表达量较对照组显著下降(P0.05)。球囊损伤后血管内膜明显增生,慢病毒特异性转染TMEM66过表达可显著逆转血管内膜增生(P0.05)。上调TMEM66能够改善PDGF所诱导的VSMC增殖和迁移(P0.05)。结论 TMEM66可以改善大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生。     

咯利普兰通过NF-κB抑制MRP8/14在RAW264.7细胞中促炎性因子的释放

目的:探讨PDE4抑制剂咯利普兰抑制髓样相关蛋白8/14(MRP8/14)对小鼠巨噬细胞系RAW264.7中促炎性因子释放的刺激作用,并研究核因子κB(NF-κB)在其中的作用。方法:MRP8/14刺激RAW264.7细胞,采用液相芯片技术和实时荧光定量PCR(q PCR)技术分别检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的蛋白和mRNA水平;咯利普兰预处理RAW264.7细胞后,MRP8/14刺激细胞,采用液相芯片技术和q PCR技术分别检测TNF-α和IL-6的蛋白水平和mRNA水平;Western blot法检测NF-κB P65蛋白磷酸化水平;间接免疫荧光法检测RAW264.7细胞内NF-κB P65蛋白核移位情况。结果:液相芯片及q PCR结果显示MRP8/14具有很强的促炎性因子TNF-α和IL-6释放的作用(P0.01),而咯利普兰可以显著减弱MRP8/14促炎性因子释放的作用(P0.05)。此外,MRP8/14能够诱导NF-κB P65蛋白发生磷酸化,胞核中P65蛋白增加;而咯利普兰显著减弱NF-κB P65蛋白磷酸化(P0.05)。结论:咯利普兰可能通过NF-κB途径显著减弱MRP8/14的促炎作用。     

病毒性心肌炎小鼠心肌中MMP-2和NF-κB的表达

目的:初步探讨基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65在柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的小鼠病毒性心肌炎心肌中的表达。方法:6周龄近交系雄性BALB/c小鼠随机分为对照组和病毒性心肌炎组,分别给予0.1 m L PBS和10-5.69TCID50/m L CVB3注射,第4天和第10天各随机取8只小鼠处死并取血和心脏标本。Reed-Muench法测定接种病毒滴度;苏木素伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色后光镜观察心肌组织病理学改变;应用免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)检测MMP-2和NF-κB p65在心肌组织表达的分布和含量;用Western blot法检测MMP-2、NF-κB p65和IκBα在心肌组织的表达,用ELISA检测血清TNF-α含量的变化。结果:与对照组相比,免疫组化和Western blot实验结果提示病毒性心肌炎小鼠心肌中MMP-2和NF-κB p65的表达显著升高(P0.05);感染组IκBα的表达呈下降趋势(P0.05);ELISA结果提示血清TNF-α含量在感染组显著升高,差异有统计学显著性(P0.05)。结论:病毒性心肌炎小鼠心肌组织中TNF-α、NF-κB p65和MMP-2表达显著上调,可能通过相关机制参与疾病的发生。     

TLR4/NF-κB在烟雾暴露大鼠肺血管重塑中的表达及意义

目的:观察烟雾暴露环境下肺血管Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)亚基P65蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,探讨TLR4及NF-κB信号通路在大鼠肺血管重塑中的可能作用机制。方法:SPF级健康雄性SD大鼠48只,随机分为对照组(control组)、烟雾暴露4周组(S4组)、烟雾暴露8周组(S8组)和烟雾暴露12周组(S12组),每组各12只。制备烟雾暴露大鼠模型,HE染色法观察肺血管形态学变化,并测量各组大鼠肺血管管壁面积/血管总面积(WA%)和血管壁厚度/血管外径(WT%)。免疫组织化学染色法检测肺血管TLR4、P65和PCNA的表达,蛋白含量用平均积分吸光度来表示。RT-q PCR检测肺血管TLR4的mRNA表达,并分析各组肺血管WA%、WT%、TLR4蛋白和TLR4 mRNA、P65蛋白、PCNA蛋白与肺血管重塑的相关性及TLR4蛋白与WA%、WT%、P65蛋白、PCNA蛋白之间的相关性。结果:与对照组比,烟雾暴露组大鼠肺血管WA%及WT%都明显增高,且WA%及WT%与烟雾暴露时间呈正相关关系(P0.05);烟雾暴露组肺血管TLR4蛋白、P65蛋白、PCNA蛋白和TLR4 mRNA的表达量较对照组比显著增加,且与烟雾暴露时间呈正相关关系(P0.05)。结论:烟雾暴露上调大鼠肺血管TLR4蛋白的表达,TLR4和NF-κB P65蛋白的表达量与肺血管重塑程度呈正相关性。肺血管重塑可能与TLR4/NF-κB信号通路激活有关。