脂滴在小鼠酒精性肝损伤过程中的表达变化

目的探究小鼠酒精性肝损伤中的病理表现.方法健康昆明小鼠♂30只,随机分为对照组(n=10),模型组(n=20),对照组于0 wk处死,取肝脏;模型组进行适应性喂养1 wk后,给予56度白酒灌胃(0.15 m L/20 g·d),连续8 w k,于4 wk和8 wk,颈椎脱臼处死小鼠,取其肝脏待用,制备石蜡切片和冰冻切片,采用HE染色和油红O染色,观察酒精性肝损伤中的脂滴表达变化,采用Image-Pro Plus6.0对病理切片样本进行累计光密度(integral optical density,IOD)定量分析.结果与对照组比较,第4周脂滴含量开始增加(20.29±7.07 vs 8.06±2.06,P0.01),第8周末脂滴含量明显增多(34.88±15.33 vs 8.06±2.06,P0.01),8 wk与4 wk相比,脂滴的表达量呈上升趋势(34.88±15.33 vs 20.29±7.07,P0.05).结论 8 wk末成功建立了酒精性脂肪肝模型,可以用来评估酒精性脂肪肝治疗药物的预后作用;在小鼠酒精性肝损伤中,随着脂肪变性的发生,脂滴含量不断增加.     

小鼠酒精性肝损伤过程中热休克蛋白70的表达及意义

目的:探讨热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)在小鼠酒精肝损伤过程中的变化规律及意义.方法:将50只♂小鼠随机分为两组,对照组(n=10)和模型组(n=40).对照组小鼠正常饲养处死取肝脏;模型组小鼠连续4 wk白酒灌胃(0.05 m L/10 g),每天1次,并分别在第1、2、3、4周各用小鼠5只取肝脏.将所得肝脏分别处理做组织切片染色观察小鼠肝脏组织病理变化以及用Western blot法检测小鼠酒精肝损伤过程中HSP70含量的动态变化.结果:在小鼠酒精性肝损伤过程中,模型组小鼠第1周HSP70的表达量明显高于对照组(P0.05),并在第2周达到最高峰(P0.01),随后HSP70表达量开始下降;在第3周时,H S P70的表达量仍比对照组高(P0.05);但在第4周时小鼠HSP70的表达量却明显低于对照组(P0.05).HE染色显示,与对照组相比,模型组中小鼠肝组织中炎细胞浸润增加,肝细胞的脂肪变、气球样变也明显增多,甚至在第4周时肝组织中出现了点状坏死.结论:小鼠酒精肝损伤过程中HSP70的表达量有明显的动态变化规律,与小鼠肝脏损伤程度变化一致,表明HSP70表达与小鼠酒精性肝损伤过程中的保护作用密切相关.     

增殖细胞核抗原在小鼠酒精性肝损伤中的表达及意义

目的:研究酒精诱导的小鼠肝损伤过程中肝脏增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达变化.方法:将100只健康清洁♂小鼠随机分为对照组(n=40)和模型组(n=60),模型组小鼠每日给予56%的红星二锅头(10 m L/kg)灌胃,对照组每日给予等体积的蒸馏水灌胃.分别于第1、2、3、4周将两组小鼠全部处死,并在各时间点取小鼠肝脏做苏木精-伊红(HE)染色并测定血清中ALT酶活力,以检测小鼠酒精性肝损伤程度.剩余肝脏通过蛋白印迹法用以检测小鼠肝脏增殖细胞核抗原的表达情况.应用SSPS16.0对实验数据进行ANOVA显著性分析和Duncan's test.结果:酒精灌胃第1周,病理HE染色显示肝细胞轻度损伤,ALT酶活力显著上升,小鼠肝脏中的PCNA的表达量相比正常小鼠显著下降(P0.05);第2周,病理HE染色显示肝细胞出现明显的水肿和大量的炎细胞浸润,ALT酶活力高于正常,PCNA的表达量达到了最低值(P0.01);第3周,病理HE染色显示中央静脉周围的肝细胞脂肪变性,门管区周围肝细胞水样变,ALT酶活力下降,PCNA的表达量显著上升,但仍低于正常小鼠肝脏PCNA的表达量(P0.05).     

中药降脂颗粒对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏瘦素受体mRNA及P-JAK2/P-STAT3的影响

目的:观察降脂颗粒对非酒精性脂肪肝大鼠的治疗作用及其对血清瘦素、肝组织瘦素受体mRNA、P-JAK2/P-STAT3蛋白含量表达的影响.方法:将60只SD♂大鼠,随机分为空白组(正常饮食)和造模组(高脂饮食).待造模成功后将造模组大鼠随机分为模型对照组、降脂颗粒低、中、高剂量组和东宝甘泰组.治疗4 wk后行肝组织生化和病理学检测,并同时应用ELISA试剂盒检测血清瘦素,RT-PCR法检测肝组织瘦素受体mRNA表达,应用Western blot检测肝组织P-JAK2和P-STAT3蛋白的表达.结果:低、中、高剂量组降脂颗粒能明显降低非酒精性脂肪肝大鼠模型肝脂(TG和TC)水平,改善脂肪变性,降低肝脏炎症反应,并能明显降低血清瘦素高水平状态(193.02±23.8 ng/L,163.97±31.38 ng/L,147.83±17.59 ng/L vs 317.22±39.26 ng/L,P＜0.01),改善瘦素抵抗,同时增加瘦素受体mRNA的表达(1.87±0.06,2.20±0.04,2.78±0.04 vs 1.50±0.05,P＜0.01),增加肝组织P-JAK2和P-STAT3蛋白的含量(119.88±2.98,123.45±0.68,124.34±3.42 vs 113.15±1.27,P＜0.01;94.15±0.78,100.18±3.33,101.94±2.20 vs 89.06±0.69,P＜0.01).结论:降脂颗粒对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏脂质和炎症有较好的治疗作用,其可能机制是改善瘦素抵抗,增加肝脏瘦素受体mRNA表达及P-JAK2,P-STAT3蛋白含量.     

模式识别分子Mindin蛋白在CCl4诱导急性肝损伤小鼠模型中的表达

目的研究Mindin蛋白在CCl4诱导的小鼠急性肝损伤过程中的动态表达情况,并探讨其作用机制。方法雄性C57B1/6小鼠48只,随机抽取40只应用CCl4橄榄油溶液腹腔注射诱导急性肝损伤,分别于造模后6、12、24、48和72 h取小鼠肝脏组织作病理学观察(实验组),余下8只腹腔注射橄榄油作为对照(对照组)。应用Western Blot法检测Mindin蛋白的表达以及变化趋势,实时荧光定量PCR检测肝组织Mindin mRNA的表达。计量资料两组间比较采用t检验。结果 CCl4诱导肝损伤后,小鼠肝脏失去其正常结构,48 h时肝脏病理改变最为显著。肝脏Mindin蛋白在注射CCl4后12～72 h内呈现低表达水平,而其转录水平即Mindin mRNA在给予CCl4后12 h降至最低(实验组vs对照组:0. 183±0. 105 vs 1. 023±0. 247,t=8. 841,P 0. 01),随后逐渐升高,在48 h(2. 548±0. 775 vs 1. 023±0. 247)和72 h(2. 699±0. 995 vs 1. 023±0. 247)时转录水平甚至是正常水平的2倍以上,差异均有统计学意义(t值分别为5. 428、4. 621,P值均0. 01)。结论 CCl4诱导小鼠急性肝损伤过程中,Mindin蛋白显著变化,表现为蛋白表达下调,以及转录后mRNA水平的调节。提示Mindin蛋白在CCl4诱导急性肝损伤过程中可能发挥重要作用。     

Wnt-1在化学诱发肝癌过程中的表达及意义

目的:检测Wnt/β-catenin信号通路中Wnt-1在化学诱发小鼠肝癌过程中的表达,揭示Wnt/β-catenin通路与肝癌发生之间的关系.方法:95只C57BL/6J♂小鼠随机分为实验组(n=50)和对照组(n=45).实验组联合二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)/四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)/乙醇(ethanol)诱发小鼠肝癌.实验组和对照组每2周各随机抽取5只小鼠定期处死并取组织标本进行病理学观察,并通过Real-time PCR、Western blot、免疫组织化学动态监测肝组织的Wnt-1 mRNA及蛋白表达情况.结果:(1)化学诱导20 wk后,成功诱发小鼠肝癌;(2)Real-time PCR显示,Wnt-1 mRNA的表达在第4至12周实验组和同期对照组相比差异没有显著性,第14至20周实验组较同期对照组表达升高,且随着诱癌时间延长实验组第14、16、18周Wnt-1 mRNA表达逐渐升高(4.192±0.322 vs 5.630±0.579 vs 8.060±0.795,P0.05),第18周和第20周表达差异没有显著性(8.060±0.795 vs 8.038±0.649,P0.05);(3)Western blot显示对照组Wnt-1蛋白微弱表达;实验组Wnt-1蛋白第4至12周微弱表达,第14至18周随着诱癌时间延长Wnt-1蛋白表达逐渐升高,第18周和第20周蛋白表达差异没有显著性;(4)免疫组织化学显示,Wnt-1在实验组第8周和对照组仅见微弱表达,实验组从16 wk开始较对照组表达增加,至20 wk时表达最强.结论:Wnt-1参与了小鼠肝癌的发生发展,Wnt/β-catenin信号通路在肝癌的发生过程中可能扮演重要角色.     

基质细胞衍生因子-1对小鼠急性肝损伤修复的实验研究

目的探索基质细胞衍生因子对急性肝损伤修复的影响,并与单纯骨髓单个核细胞移植治疗肝损伤疗效相比较。方法建立小鼠CCl4-AAF肝损伤模型,从小鼠骨髓分离骨髓单个核细胞。实验A组经腹腔向模型小鼠体内注入基质细胞衍生因子,实验B组经尾静脉向模型小鼠体内注入单个核细胞,对照C组经尾静脉向模型小鼠体内注入生理盐水,在第2周、3周、4周,从各组取出相同的小鼠处死,通过测肝功能指标（AST、ALT、TBil）和肝组织病理切片,比较各组小鼠肝损伤修复的差异。结果分别在第2周、3周、4周测得的SDF-1组（A组）和单个核细胞组（B组）的数值比较（U/L）：ALT（第2周：19.0±2.0 vs 19.7±4.7,P〉0.05;第3周：19.0±5.0 vs 14.5±2.5,P〉0.05;第4周：40.0±17.0 vs 15.0±3.0,P〉0.05）;AST（第2周：117.1±18.0 vs 116.7±20.0,P〉0.05;第3周：97.5±5.0 vs 104.5±23.5,P〉0.05;第4周：177.3±61.0 vs 105.0±49.1,P〉0.05）;TBil（第2周：1.8±0.1 vs 1.9±0.3,P〉0.05;第3周：1.75±0.55 vs 1.5±0.4,P〉0.05;第4周：1.8±0.6 vs 1.5±0.3,P〉0.05）。在病理方面第2周、4周时A组及B组肝细胞仍有肿胀,但组织结构较急性损伤时有明显改善。结论基质细胞衍生因子和单个核细胞都能够促进肝损伤的修复,在病理方面骨髓单个核细胞对损伤修复效果更明显一些。     

CCl4诱导大鼠肝硬化形成过程中Caspase-12蛋白表达与肝细胞凋亡的相关性

目的:探讨CCl4大鼠肝硬化形成过程中Caspase-12蛋白表达与肝细胞凋亡的相关性.方法:首次CCl4 3 mL/kg sc,以后500 mL/LCCl4橄榄油溶液2 mL/kg sc,2次/wk,共计12wk制备大鼠肝硬化模型.设4 wk、8 wk、12wk 3个时间点,动态观察肝细胞凋亡指数、肝组织Caspase-12免疫组织化学及蛋白表达.结果:模型大鼠4 wk时呈典型的急性肝损伤改变,8 wk时大鼠呈典型的慢性肝损伤肝纤维化的病理改变,12 wk时已形成肝硬化;随着肝损伤加重和肝硬化形成,肝细胞凋亡指数显著增加,模型对照4 wk与正常组、模型对照8wk比较有显著差异(70.4±11.59 vs 9.6±1.14,95.8±10.94,P＜0.01),模型对照12 wk与模型对照8 wk比较有统计学意义(122.8±17.51 vs 95.8±10.94,P＜0.05).Caspase-12蛋白表达亦显著增加,模型对照4 wk与正常组、模型对照8 wk比较有显著差异(0.071±0.014 vs 0.014±0.007,1.172±0.028,P＜0.01),模型对照12wk与模型对照8 wk比较亦有显著差异(1.84±0.083 vs 1.172±0.028,P＜0.01);且肝细胞凋亡指数和Caspase-12蛋白表达量之间呈正相关(r=0.89,t=9.125,P＜0.01).结论:内质网凋亡通路参与CCl4大鼠肝硬化形成过程中肝细胞凋亡事件,其关键的凋亡酶Caspase-12蛋白表达量基本能够反映肝细胞的凋亡程度.     

非酒精性脂肪肝大鼠肝脏硬脂酰CoA去饱和酶-1表达与ATP浓度之间的关系

目的:研究非酒精性脂肪肝大鼠肝脏SCD-1表达及ATP含量之间的关系.方法:SD大鼠30只分成正常组、高脂组,在实验的第8,16和24周分批处死,观察肝脏组织学改变,荧光素酶-荧光素法测定肝脏ATP含量,RT-PCR实时荧光分析大鼠肝SCD-1mRNA与β-actinmRNA的比值.结果:肝组织HE染色显示高脂组大鼠肝脏内有弥漫性肝细胞脂肪变性,8wk达到脂肪肝诊断标准.8wk表现为单纯性脂肪肝,16-24wk进展为脂肪性肝炎.电镜下发现实验组与对照组相比,肝细胞线粒体肿胀、增大,部分内膜嵴粒脱落,16wk发现线粒体内有类圆形结晶样物质沉积.实验组肝SCD-1mRNA表达下降,8,16和24wk的测定值分别为0.39±0.18vs0.83±0.28(P<0.05)、0.44±0.17vs0.81±0.30(P<0.05)和0.47±0.23vs0.88±0.22(P<0.01);每克肝匀浆ATP含量(10-8μmol/L)减低(2.40±0.54vs2.96±0.43,P>0.05,2.26±0.55vs3.00±0.42,P<0.05和1.74±0.45vs2.79±0.40,P<0.01).肝SCD-1mRNA表达与ATP含量呈正相关(r=0.46,P<0.05).结论:长期高脂饮食引起肝SCD-1的表达下调,促使脂肪在肝内蓄积形成非酒精性脂肪肝.同时使肝细胞内饱和游离脂肪酸增加,线粒体结构和功能受损,使ATP的合成和储存下降,加重氧化应激对肝细胞的打击和肝脏的炎症反应.     

全反式维甲酸对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏TGF-β1、CTGF和Col1a1表达的影响

目的:通过观察全反式维甲酸对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏TGF-β1、CTGF和Collal表达的影响,探讨该药物对酒精性肝纤维化形成的作用．方法:大鼠24只随机分为3组:酒精组(J组),给予酒精-玉米油混悬液灌胃;治疗组(A组),给予上述混悬液灌胃8 wk后加用0,15 mg／(kg·d) 的全反式维甲酸灌胃;对照组(N组),给予等量的生理盐水和玉米油灌胃．16 wk后处死大鼠．光、电镜下观察肝组织病理改变,高压液相色谱法(HPLC)测肝组织中维甲酸的含量,免疫组化法检测肝组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中TGF-β1、CTGF和Ⅰ型胶原前胶原α1(Collal)的mRNA水平．结果:光镜下酒精组及治疗组均呈不同程度的酒精性肝炎改变,电镜下酒精组肝细胞线粒体肿胀,内质网扩张,脱颗粒,而治疗组改变轻于酒精组．肝组织中维甲酸含量:酒精组低于正常组,治疗组接近对照组水平．Collal 的mRNA表达在酒精组中较对照组明显增高 (0．18±0．03 vs 0．10±0．02,P<0．01),治疗组较酒精组表达下降(0．14±0．03 vs 0．18±0．03,P <0．05)．TGF-β1的mRNA及蛋白表达在酒精组中增高(0．53±0．17 vs 0．34±0．05,105．93 ±10．12 vs 149．27±10．17,P<0．01),治疗组相对于酒精组有所下降(0．41±0．06 vs 0．53± 0．17,130．80±6.23 vs 105．93±10．12,P<0．05)． CTGF的mRNA及蛋白表达在酒精组中增高 (0．41±0．13 vs 0．17±0．05,130．84±5．72 vs 158.37±6．64,P<0．05),治疗组对于酒精组有所下降(0.30±0．04 vs 0．41±0．13,149．23± 6．65 vs 130．84±5．72．P<0．05)．结论:小剂量全反式维甲酸通过降低慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏致纤维化因子TGF-β1, CTGF和Collal的表达抑制早期酒精性肝纤维化的形成．     

小鼠日本血吸虫性肝纤维化组织TGF-β1及Smads的表达

目的:探讨小鼠日本血吸虫病纤维化肝组织中转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2/3、Smad4和Smad7的表达和肝纤维化的发病机制.方法:清洁级6-8 wk龄ICR小鼠80只,雌雄各半,随机分为模型组和正常对照组,用血吸虫尾蚴腹部贴附法制成动物模型,正常组未予处理.感染后wk 4、6、8和12末分批处死2组小鼠且称肝脾质量,取部分肝做病理学观察,HE染色和猩红染色,制作组织芯片,免疫组化检测TGF-β1、Smad2/3、Smad4和Smad7在各细的表达状况.结果:与正常组相比,模型组小鼠肝脾质量和肝指数均高(肝,12 wk:2.99±0.28 g vs 1.83±0.13 g;脾,12 wk:0.87±0.15 g vs 0.14±0.02g;肝指数,12 wk:0.09±0.01 vs 0.04±0.00;均P＜0.01),TGF-β1和Smad2/3表达也均高于正常对照组(TGF-β1.12 wk:0.105±0.008 vs 0.024±0.002;Smad2/3.12 wk:0.094±0.009 vs 0.003±0.001,均P＜0.01),以上指数分别与肝纤维化程度呈正相关(r=0.635,0.482,0.646,0.347,0.662;均P<0.01);Smad4表达高于对照组且随着纤维化的发展表达量在逐渐下降(4wk:0.075±0.011 vs 0.023±0.006.6 wk:0.043±0.008 vs 0.010±0.002.8 wk:0.038±0.009 vs 0.003±0.002.12 wk:0.028±0.004 vs 0.013±0.006;均P＜0.01).Smad7仅8 wk表达增强.结论:TGF-β1和Smad2/3表达增强在肝纤维化的发生中起重要作用,Smad4可能主要在纤维化的早中期发挥效应.     

小鼠急性酒精性肝损伤过程中热休克蛋白Gp96的表达变化及意义

目的研究小鼠急性酒精性肝损伤过程中热休克蛋白Gp96的表达变化及意义。方法选取健康昆明雄性小鼠50只随机分为2组:正常组(n=10)、实验组(n=40)。正常组小鼠不做处理,实验组小鼠酒精灌胃(红星二锅头,16 ml/kg)诱导小鼠急性肝损伤,分别于灌胃后6、12、18和24 h将各组小鼠眼球取血并分离血清,检测谷丙转氨酶(ALT)活性;颈椎脱臼处死小鼠分离提取肝脏,石蜡切片苏木精-伊红染色(HE染色)观察各组小鼠肝组织病理学改变,蛋白免疫印迹法检测小鼠肝组织中热休克蛋白Gp96的表达变化。结果 ALT检测结果显示,酒精灌胃后,随着时间增加,血清ALT酶的活性持续升高,18 h后达最高值(P0.01),随着肝损伤的修复,血清ALT酶的活性开始出现下降;HE染色结果显示,酒精灌胃后,随着时间的增加,肝组织出现了不同程度的损伤,18 h后损伤积分达到最高值(P0.01),随着肝组织修复损伤积分有所降低:免疫印迹结果显示,酒精灌胃后Gp96的蛋白表达量随着时间的增加持续升高,18 h后达最高值(P0.01),随着肝损伤的修复,Gp96蛋白表达量开始下降。结论小鼠急性酒精性肝损伤过程中Gp96的变化显著表现为先升高后降低,Gp96可能在肝损伤后的修复中起重要作用。     

清肝活血方对酒精性肝损伤大鼠内质网应激反应性凋亡基因表达的影响

目的:探讨清肝活血方及拆方对酒精性肝损伤大鼠内质网应激反应性凋亡GRP78/Bip、GRP94、caspase-12基因和蛋白表达的影响.方法:建立大鼠慢性酒精性肝损伤复合模型, 第11周将造模大鼠按体质量和状态均衡分为模型组、清肝活血方组9.5 g/(kg·d)、清肝方组3 g/(kg·d)、活血方组6.5 g/(kg·d)和空白对照组, 每组10只. 各组每日上午仍灌胃给予乙醇混合液, 下午给予药液或生理盐水,连续给药2 wk, 末次给药1 h后称质量, 腹主动脉采血, 处死, 分离肝脏. DNA ladder法和流式细胞术对肝细胞凋亡进行定性和定量检测, RT-PCR和Western blot法检测大鼠肝组织GRP78/Bip、GRP94和caspase-12基因和蛋白表达.结果:与正常组比较, 造模12 wk大鼠血清ALT和AST水平明显升高(138.3±43.3 U/Lvs 33.9±9.8 U/L, 257.4±162.3 U/L vs 119.6±28.6 U/L, P<0.01); 肝细胞发生早期凋亡改变, 总凋亡率和早期凋亡率分别达到29%和26%( P<0.01); 肝组织GRP78/Bip、GRP94和caspase-12基因和蛋白表达明显增强( P<0.05或0.01). 经2 wk治疗后, 清肝活血方及拆方均能明显降低酒精性肝损伤大鼠血清ALT、AST水平; 抑制肝细胞凋亡, 总凋亡率和早期凋亡率分别降至8%和6%; 清肝活血方及清肝方显著降低肝组织GRP78/Bip、GRP94和caspase-12基因和蛋白表达, 与模型组比较有统计学差异( P<0.05或0.01), 而活血方组与模型组则无明显差异.结论:清肝活血方及拆方对酒精性肝损伤大鼠肝细胞凋亡均表现出较强的抑制作用, 其机制可能与下调内质网应激反应性凋亡相关基因caspase-12、GRP78/Bip和GRP94表达有关.     

贞清方对2型糖尿病并发非酒精性脂肪肝大鼠LXRα表达的影响

目的:探讨贞清方对2型糖尿病非酒精性脂肪肝的治疗作用及可能机制.方法:高脂高糖饮食结合小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立2型糖尿病并发非酒精性脂肪肝大鼠模型.将成模大鼠随机分为模型组、贞清方治疗组和女贞子治疗组( n= 8),并设立正常对照组( n = 10),灌胃治疗8 wk.比较喂养4、8和16 wk时各组大鼠空腹血糖(FBG)、血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、胰岛素(FINs)和胰岛素敏感指数(ISI)的变化.并于喂养16 wk时观察各组大鼠肝脏指数、TG含量和血清丙氨酸转氨酶(ALT)的水平以及病理变化.用PCR法观察大鼠肝X受体(LXRα)及其下游固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c) mRNA的表达,免疫组织化学法观察肝脏LXRα蛋白的表达.结果:灌胃干预8 wk后,与正常组相比,模型组大鼠FBG、血清TG、肝脏指数及肝脏TG含量明显升高(均P<0.01),胰岛素敏感性明显降低( P<0.01),肝脏脂肪变明显加重,肝脏LXRα mRNA、SREBP-1c mRNA和LXRα蛋白的表达明显增多(均P<0.01).与模型组相比,贞清方治疗组大鼠FBG水平、血清TG水平、肝脏指数及肝脏TG含量明显降低(10.94±3.33 mmol/L vs 16.67±4.33 mmol/L; 0.79±0.27 mmol/L vs 1.33±0.33 mmol/L; 5.72±0.81vs 7.61±1.24; 0.041±0.0110 mmol/g vs 0.059±0.0160 mmol/g,均P<0.01),肝脏脂肪变明显改善,肝脏LXRα mRNA、SREBP-1c mRNA和LXRα蛋白的表达明显减少(0.75±0.11 vs1.23±0.17,0.68±0.16 vs 1.07±0.14,0.220±0.071 vs 0.334±0.037,均P<0.01).结论:贞清方对2型糖尿病性非酒精性脂肪肝具有一定的治疗作用,且其治疗作用可能与贞清方能下调非酒精性脂肪肝组织LXRα的表达有关.     

Bcl-2、Bax蛋白表达在非酒精性脂肪性肝病中的作用

目的: 探讨凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax表达在大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用.方法: 采用高脂饮食建立大鼠NAFLD模型, 以正常饮食设立对照组. HE染色观察肝脏脂肪变、炎症活动和纤维化程度, 采用Western blot检测Bcl-2、Bax在肝脏组织中的表达.结果: 实验组大鼠4 wk可见轻度脂肪变, 8 wk呈单纯性脂肪肝改变, 至12 wk肝小叶内肝细胞弥漫性脂肪变, 伴大量炎性细胞浸润, 个别出现肝纤维化. Western blot结果显示, 实验组大鼠4、8、12 wk肝组织Bax蛋白表达显著高于对照组(0.61±0.03, 0.78±0.03, 1.02±0.03vs 0.51±0.03, 均P <0.01), Bcl-2蛋白随着造模时间的延长, 表达逐渐下降(0.39±0.01, 0.28±0.01, 0.15±0.01 vs 0.52±0.01, 均P <0.01),Bcl-2、Bax两者比率逐渐降低, 尤以12 wk降低明显.结论: 在NAFLD发生过程中, 细胞凋亡调节蛋白Bax表达上调, Bcl-2表达减少, 二者表达的相对比例发生异常. 这可能是NAFLD中肝细胞发生凋亡的重要原因之一.     

脂联素在小鼠急性肝损伤中的表达及作用

目的: 观察脂联素在小鼠急性肝损伤的表达及作用.方法: 健康♂BALB/c小鼠随机分为3组. 刀豆蛋白A(concanavalin A, ConA)组8只: ConA 30mg/kg 尾静脉注射. 脂联素组5只: 在静脉注射ConA前12 h和2 h, 分别应用脂联素3 mg/kg腹膜内注射. 对照组8只: 尾静脉注射生理盐水10mL/kg. 注射ConA 8 h后处死小鼠, 检测脂联素及ALT血清水平、肝组织病理变化、肝组织脂联素蛋白及mRNA的表达.结果: 脂联素血清水平在脂联素组与对照组无差异, 2组均高于ConA组(15.4±3.0 mg/L,16.5±2.8 mg/L vs 11.8±2.1 mg/L, P <0.05或0.01);肝组织脂联素蛋白表达在脂联素组强于对照组(5.39%±1.72% vs 1.82%±0.36%,P <0.05), 弱于ConA组(10.63±4.35%, P <0.05);肝组织脂联素mRNA表达在脂联素组和ConA组均强于对照组(0.46±0.17, 0.51±0.21 vs0.23±0.05, P <0.05或0.01);血清ALT水平及肝组织炎症程度脂联素组高于对照组(192.50±45.87 U/L vs 44.71±21.29 U/L;21.5±9.2vs 8.4±4.3, 均P <0.05), 低于ConA组(616.00±171.50 U/L, 48.5±8.6, 均P <0.05).结论: 在ConA诱导的急性肝损伤中, 肝组织脂联素蛋白及其mRNA的表达增强, 但血清脂联素水平降低. 脂联素对急性肝损伤小鼠起着抗炎作用.     

氢盐水对大鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的:研究肝脏病理形态学、肝功能、氧化应激因子的变化,探讨氢盐水(hydrogen-rich saline,HS)对大鼠酒精性肝损伤的保护作用.方法:将40只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、低剂量HS治疗组、高剂量HS治疗组;采用梯度酒精灌胃方法建立大鼠慢性酒精性肝损伤模型,模型组及治疗组给予酒精灌胃12wk,低剂量HS治疗组和高剂量HS治疗组同时分别给予HS5g/kg、10g/kg体质量,腹腔注射;空白对照组给予等热量、等体积的糖水灌胃.12wk后检测大鼠血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、甘油三酯(triglyceride,TG)、肝组织匀浆丙二醛(malonyldialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(reduced glulathione hormone,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量,肝组织HE染色观察肝组织形态学变化.结果:灌酒12wk后模型组大鼠血清ALT、AST、TG、TBIL水平均明显上升(65.82±16.14vs36.43±4.92,180.45±35.51vs110.53±18.43,0.92±0.13vs0.35±0.07,1.92±0.34vs0.74±0.12,P<0.01);肝脏GSH含量、SOD活性下降(78.56±16.45vs135.43±19.81,93.14±21.05vs181.53±30.13,P<0.01),而MDA含量增加显著(8.04±1.12vs3.25±0.83,P<0.01);HS低剂量组和高剂量组大鼠血清ALT、AST、TG、TBIL下降显著(43.26±8.81,41.15±8.89vs65.82±16.14;130.42±11.64,125.81±10.84vs180.45±35.51;0.44±0.09,0.38±0.08vs0.92±0.13;1.03±0.21,0.89±0.15vs1.92±0.34;P<0.01);SOD、GSH活性明显增加(162.51±28.56,164.24±30.07vs93.14±21.05;105.42±17.32,110.67±20.51vs78.56±16.45;P<0.01),MDA含量明显上升(4.56±0.98,4.21±1.05vs8.04±1.12;P<0.01).HE染色结果显示,模型组大鼠肝组织可见中重度肝细胞变性,胞质内见大小不一的脂滴空泡,窦内皮细胞肿胀,汇管区炎细胞浸润;HS低、高剂量组肝组织脂肪变性、炎细胞浸润程度减轻.结论:HS可有效地抗氧化应激和脂质过氧化,改善肝功能,减轻酒精诱导的大鼠慢性肝损伤.     

软脉灵对大鼠非酒精性脂肪肝的预防作用

目的:观察软脉灵对非酒精性脂肪性肝病大鼠模型的预防作用.方法:采用高脂膳食喂养方式建立大鼠非酒精性脂肪性肝病模型.♂SD大鼠90只,随机分为模型组、药物组与空白对照组,每组30只.模型组应用高脂饲料喂养,药物组在高脂饲料喂养同时应用软脉灵灌胃,空白对照组应用基础饲料喂养.每组均于8,12及16 wk时各处死10只,观察肝脏指数,血清与肝组织生化指标及肝组织病理改变.结果:16 wk时与模型组相比较,药物组肝脏指数显著降低(F=51.626,P=0.000);血清胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c),丙氨酸转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)水平明显降低(2.27±0.38 mmol/L VS 3.09±0.45 mmol/L;0.83±0.13 mmol/L vs 1.03±0.18 mmol/L;0.41±0.06 mmol/L vs 1.09±0.27 mmol/L;52.0±6.50 U/L vs 79.0±4.72 U/L;182.9±26.43 U/L vs 326.5±28.21 U/L;均P<0.01),但血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)水平提高(0.76±0.17 mmol/L vs 0.55±0.11 mmol/L,P<0.01);肝组织丙二醛(MDA)水平降低明显(167.2±14.00 mmol/g vs 263.6±26.84 mmol/g,P<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)活力增加显著(9.95±0.33 U/g vs 4.36±0.46 U/g,P<0.01),肝组织脂肪变性程度(χ~2 =19.828-20.470,均P=0.000)和炎症活动度(F =10.170,P=0.000)明显减轻.结论:软脉灵具有预防大鼠非酒精性脂肪性肝病的作用.     

内质网分子伴侣糖调节蛋白94在大鼠酒精性肝损伤中的高表达和意义

目的检测酒精性肝损伤大鼠肝组织内质网分子伴侣糖调节蛋白94的表达情况,探讨酒精性肝损伤的发病机制.方法24只SD雌性大鼠分成对照组和模型组.模型组大鼠给予乙醇加鱼油灌胃配合高脂饮食8周,建立酒精性肝损伤模型,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组化法检测大鼠肝组织内质网分子伴侣糖调节蛋白94 mRNA和蛋白水平.结果与正常组比较,模型组大鼠肝组织糖调节蛋白94 mRNA和蛋白表达明显增强(P＜0.01).结论酒精性肝损伤大鼠存在糖调节蛋白94高表达,这可能是该病的发病机制之一.     

茵陈蒿汤及其变方对ConA诱导慢性免疫性肝损伤小鼠IP-10、CXCR3的影响

目的:观察茵陈蒿汤及其变方对刀豆蛋白(concanavalin A,ConA)诱导小鼠慢性免疫性肝损伤的保护作用.方法:选用Balb/c小鼠70只,雌雄各半,随机分为正常对照组、模型组、茵陈蒿汤组、茵陈蒿汤加丹参组、茵陈蒿汤加黄芪组、荣肝合剂组和荣肝小方组.正常组小鼠尾静脉注射PBS溶液0.3 mL,其他各组按ConA 6 g/g体质量尾静脉注射造模,1次/wk,连续8 wk,制备慢性肝损伤模型.造模成功后,模型组和正常组以等体积蒸馏水灌胃.各治疗组灌胃给药,每日1次,连续4 wk,末次给药后24 h,检测血清中IP-10、CXCR-3和TNF-活性;肝组织光镜下观察其病理变化.结果:与模型组比较,各用药组(茵陈蒿组、茵陈蒿汤加丹参组、茵陈蒿汤加黄芪组、荣肝合剂组和小方组)血清IP-10、CXCR-3、TNF-的水平(ng/mL)均降低(IP-10:44.56±0.30、42.18±0.54、32.18±0.37、36.46±0.47、35.98±0.65 vs 52.73±0.46;CXCR-3:64.86±0.63、37.88±0.63、40.18±0.57、38.58±0.62、36.94±0.26 vs 64.86±0.63;T N T-:43.45±0.65、32.78±0.27、42.18±0.37、28.69±0.85、24.46±0.57 vs 93.32±0.81,均P<0.05),各组间无统计学差异(P>0.05);与模型组比较,中药组肝细胞坏死减轻、变性减少、炎细胞浸润和肝纤维化减轻(均P<0.05);茵陈蒿汤加丹参组、荣肝合剂组和小方组肝组织纤维增生程度较小(均P<0.05).结论:清利湿热,健脾活血的荣肝合剂及荣肝小方组对ConA所致小鼠肝损伤具有较好的综合保护作用.