康莱特对HepG2细胞凋亡及其Caspase-3和Survivin表达影响

目的观察康莱特注射液对HepG2肝癌细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和存活素（Survivin）表达的影响,并初步探讨其作用机制。方法分别采用体积分数0.005、0.010、0.015、0.020的康莱特体外培养HepG2细胞。采用MTT法检测HepG2细胞抑制率,流式细胞仪检测HepG2凋亡情况以及Caspase-3和Survivin表达的变化。结果康莱特能明显抑制HepG2肝癌细胞生长,且呈时间和浓度依赖性。康莱特组中Caspase-3、Survivin蛋白的表达与对照组比较,差异有显著性（P〈0.01）。结论康莱特可抑制HepG2肝癌细胞增殖,并可通过提高Caspase-3蛋白表达和降低Survivin蛋白表达诱导HepG2肝癌细胞凋亡。     

Caspase-3和Survivin在HBV感染的肝癌组织中表达的意义

近年来研究表明，肿瘤不仅是一种增值失控的疾病，也是细胞凋亡异常的疾病。细胞增殖与凋亡之间的动态平衡是维持机体稳定的重要方式，这种平衡一旦被打破，肿瘤就会发生。细胞凋亡是凋亡促进因子P53、FAS、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）等和凋亡抑制因子BCL-2、生存素（Survivin）等共同作用的结果。survivin是新近发现的IAPs（inhibition apoptosis proteins）家族成员之一，主要通过抑制Caspase-3、Caspase-7的活性而发挥抗凋亡作用。本文就Caspase-3和survivin在乙肝病毒（HBV）感染的原发性肝细胞肝癌（HCC）组织中的表达的作用进行探讨。     

大黄素对胃癌细胞生长及Bcl-2表达的调控

目的:研究大黄素对人胃腺癌SGC-7901细胞生长及凋亡的影响及对Bcl-2基因表达水平的改变,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制.方法:将不同浓度的大黄素作用于体外培养的人胃腺癌细胞,MTT法观察细胞增殖率的改变;流式细胞仪检测细胞凋亡;细胞免疫组化法检测Bcl-2蛋白表达.结果:各实验组均抑制胃癌细胞的生长,细胞增殖率随大黄素浓度的升高和作用时间的延长而下降,与对照组相比差异有统计学意义(P ＜ 0.01);各实验组作用于胃癌细胞48 h后,凋亡细胞可以检出且与对照组相比差异有统计学意义(P ＜ 0.01);各实验组可不同程度地下调胃癌细胞Bcl-2蛋白表达水平,与对照组相比差异有统计学意义(P ＜ 0.01),并呈浓度相关性.结论:大黄素体外可以抑制人胃腺癌SGC-7901细胞的增殖及诱导细胞的凋亡;大黄素诱导SGC-7901细胞凋亡可能与其下调Bcl-2蛋白表达有关.     

透骨消痛胶囊对体外关节软骨细胞Caspase-9和Caspase-3表达的影响

目的:观察透骨消痛胶囊对大鼠体外培养关节软骨细胞凋亡的影响。方法:采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立稳定的软骨细胞体外培养体系,采用Ⅱ型胶原对第3代软骨细胞进行鉴定。用20 ng/ml TNF-α诱导体外培养软骨细胞的凋亡,诱导成功后,给予不同浓度的透骨消痛胶囊干预24 h后,镜下观察软骨细胞的生长情况;采用MTT法检测各组软骨细胞的存活率;DAPI染色观察各组软骨细胞的凋亡情况,分光光度法检测凋亡软骨细胞中Caspase-9和Caspase-3活性。结果:透骨消痛胶囊能够减轻软骨细胞的核固缩,减少软骨细胞凋亡,提高细胞的存活率,同时能够下调Caspase-9和Caspase-3活性。结论:透骨消痛胶囊可以通过下调Caspase-9和Caspase-3活性,抑制软骨细胞的凋亡,从而起到治疗骨性关节炎的作用。     

局部应用塞来昔布对7,12-二甲基苯蒽诱导的大鼠舌癌组织Caspase-3和Survivin表达的影响

目的 观察局部应用环氧化酶2抑制剂塞来昔布对7,12-二甲基苯葸(DMBA)诱导的sD大鼠舌癌发生的抑制作用及对Caspase-3和Survivin表达的影响.方法 采用DMBA刺激联合创伤诱导SD大鼠舌黏膜癌变的过程中,局部应用6%塞来昔布膏剂进行干预,肉眼及光镜观察SD大鼠舌组织大体及病理学改变,免疫组织化学染色及Western blot观察Caspase-3和Survivin蛋白表达,RT-PCR检测Caspase-3和Survivin mRNA的表达.结果 局部应用塞来昔布膏剂可有效抑制DMBA诱导的SD大鼠舌黏膜发生癌变,在12、16和20周,对照组癌变率分别为20%、60%和70%,而塞来昔布处理组仅在20周有2只大鼠发生舌黏膜癌变,其癌变率为20%,两组差异有统计学意义(P<0.01).同时塞来昔布可显著增强SD大鼠舌组织Caspase-3蛋白及mRNA表达,下调Survivin蛋白及mRNA表达,与对照组相比,差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 局部应用的塞来昔布膏剂可抑制DMBA诱导的SD大鼠的舌癌变作用,其作用机制可能与调节Caspase-3、Survivin蛋白及mRNA的表达有关.     

沉默Survivin基因对鼻咽癌CNE1细胞增殖和凋亡的研究

目的：探讨 Survivin表达降低时,对鼻咽癌细胞的增殖及凋亡的影响。方法运用 RNA 干扰技术,结合 RT-PCR,Western blot技术,观察干扰 Survivin效果。干扰 Survivn后用 MTT法和 TUNEL法检测鼻咽癌细胞增殖,凋亡的情况。用 Western-blot方法检测凋亡相关蛋白 PARP,Bcl-2和Bax的表达。结果 RT-PCR检测显示 Survivin-siRNA干扰组,Survivin mRNA表达明显下调,其相对表达量为0.26±0.02,抑制率为43.7％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;Western blot检测显示 Survivin-siRNA组蛋白表达下调,其蛋白相对表达量下降了57％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;MTT检测显示 Survivin-siRNA组对细胞增殖有明显抑制作用,在24,48和72 h的抑制率分别为21.9％,37.1％和29.6％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;Tunel染色结果显示 Survivin-siRNA组细胞凋亡数明显增高。Western blot结果显示Survivin-siRNA组凋亡蛋白PARP（89KD）显著升高,为对照组的3.9倍,抑制凋亡蛋白Bcl-2降低,降低了70％,促进凋亡蛋白Bax升高,为对照组的2.4倍;同时也抑制AKT的磷酸化,磷酸化水平降低了57％,与对照组相比以上结果差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论干扰 Survivin表达,抑制鼻咽癌细胞增殖,促进细胞凋亡。Survivin基因可成为鼻咽癌基因治疗的一个潜在靶点。     

肺癌组织中Survivin和Caspase-3基因的表达

目的探讨survivin和caspase-3基因在肺癌中的表达及其意义。方法应用原位杂交法检测47例肺癌及相应癌旁肺组织survivin mRNA的表达,采用免疫组化SP法测定上述组织标本中caspase-3蛋白表达。结果Survivin-mRNA在肺癌组织中阳性表达率为78.7%,明显高于相应癌旁组织(P<0.01),caspase-3蛋白在肺癌组织中阳性表达率为59.6%,显著高于癌旁肺组织(P<0.01),caspase-3蛋白表达与survivin mRNA表达呈显著正相关(r=0.702,P<0.01)。结论Survivin mRNA和caspase-3蛋白表达上调与肺癌的发生密切相关。     

Caspase-9在结直肠正常黏膜和癌中的表达

目的:定量测定Caspase-9基因在人类结直肠癌及癌旁正常组织中的表达,从而探讨其在结直肠癌发病中的作用。方法:采用实时荧光定量PCR技术测定88例配对的结直肠癌组织及癌旁正常组织中Capase-9 mRNA的表达,并分析表达的变化与临床病理特征的关系。结果:Caspase-9在结直肠癌中相对于癌旁正常组织表达下调(P=0.003)。结直肠癌组织分化程度与Caspase-9表达下调相关(P=0.048),与Dukes分期、年龄、性别及是否淋巴结转移无关。结论:Caspase-9在结直肠癌的发病中可能发挥了重要作用,并参与了肿瘤组织的分化。     

胃腺癌组织Survivin和Ki-67表达及其意义

目的探讨Survivin与Ki-67在胃腺癌组织表达及其临床意义。方法应用免疫组化方法检测20例正常胃黏膜组织和50例胃腺癌组织Survivin和Ki-67表达情况。结果胃腺癌组织组织Survivin与Ki-67阳性表达率均明显高于正常胃黏膜组织（Uc=3.693、5.640,P〈0.001）;Survivin阳性表达与病人性别、年龄、组织分化程度、TNM分期及浸润深度均无关（Uc=1.299、0.679,Hc=0.488、0.369、0.756,P〉0.05）,而与淋巴结转移有关（Uc=2.138,P〈0.05）;Ki-67阳性表达与TNM分期及淋巴结转移有关（Hc=6.539,Uc=2.987,P〈0.05、0.01）,而与病人性别、年龄、组织分化程度和浸润深度均无关（Uc=0.645、0.976,Hc=4.070、3.243,P〉0.05）。胃腺癌组织Survivin的表达与Ki-67呈正相关（rs=0.321,P〈0.05）。结论Survivin蛋白可能具有促进肿瘤细胞增殖活性的作用,联合检测Survivin和Ki-67对判断淋巴结转移的危险性具有较高的价值。     

hvrdC基因表达水平对胃癌细胞SGC-7901增殖影响的实验研究

目的 观察胃癌SGC-7901细胞株中hyrdC基因的不同表达水平对细胞增殖的影响.方法 分别将已构建的携带hyrdC基因的Ad-hyrdC重组腺病毒和靶向抑制hyrdC基因表达的AdshyrdC重组腺病毒,转染人胃癌SGC-7901细胞株,同时设空病毒Ad-null组和正常对照组,利用绘制生长曲线法和MTT法观察各组间胃癌细胞增殖的差异;将各组胃癌细胞接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型,比较各组胃癌细胞瘤体生长率的差异.结果 Ad-hyrdC组胃癌SCC-7901细胞增殖显著快于Ad-shyrdC组、Ad-null组和正常对照组,48 h后细胞数与Ad-shyrdC组、Ad-null组和正常对照组比较有统计学差异(P<0.05):Ad-shyrdC组胃癌SCC-7901细胞的光吸收值明显低于Ad-hyrdC组、Ad-null组和正常对照组(P<0.05):Ad-shyrdC组瘤体生长率较Ad-hyrdC组、Ad-null组以及正常对照组明显减慢(P<0.05),Ad-hyrdC组瘤体生长率较Ad-shyrdC组、Ad-null组以及正常对照组明显加快(P<0.05).结论 hyrdC基因具有促进胃癌细胞生长的功能,而靶向沉默hyrdC基因表达可抑制胃癌细胞的生长,hyrdC基因有望成为胃癌基因治疗领域的新靶点.     

环氧化酶-2RNA干扰对肺癌A549细胞凋亡及caspase家族的影响

目的观察环氧化酶-2（COX-2）RNA干扰对肺癌细胞凋亡的影响,以及对凋亡调控蛋白caspase-8、caspase-9、caspase-3的调控作用。方法构建COX-2特异性干扰质粒,并转染至肺癌A549细胞株中,AnnexinV-FITC／PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot检测caspase-8、caspase-9、caspase-3的活性。结果成功构建COX-2特异性干扰质粒并转染至肺癌A549细胞株中,获得抑制COX-2表达的肺癌细胞模型;干扰COX-2的A549细胞凋亡率[（24．3±2．46）％]较未干扰组[（6．52±0．13）％]明显升高（P〈0．01）。干扰COX-2的肺癌细胞．4549caspase．8蛋白表达（0．86±0．09）较未干扰组（0．12±0．01）明显升高（P〈0．01）,caspase-3蛋白表达（0．94±0．09）较未干扰组（0．16±0．02）明显升高（P〈0．01）,caspase-9蛋白表达（1．12±0．11）较未干扰组（0．13±0．01）明显升高（P〈0．01）。结论干扰COX-2可以促进肺癌A549细胞的凋亡,并且活化caspase-8及caspase-9,从而活化caspase-3。     

RNA干扰Caspase-8基因及抑制细胞凋亡的作用

目的:探讨RNA干扰caspase-8基因及抑制细胞凋亡的作用效果.方法:构建针对大鼠caspase-8基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-caspase-8 shRNA,采用电穿孔的方法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定表达caspase-8 shRNA的细胞系.实验分为3组,(1)正常对照组,未转染的RK3E细胞;(2)阴性对照组,转染空载体pRNAT-U 6.1的RK3E细胞系;(3)实验组,转染caspase-8 shRNA的RK3E细胞系.经脂多糖孵育12 h后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR和Real time PCR检测mRNA的表达,以及各组caspase-8蛋白的活性.结果:与正常对照组和阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率显著降低(P＜0.01),caspase-8的mRNA水平和蛋白活性显著降低(P＜0.01).结论:针对caspase-8的特异性shRNA可以明显引起靶基因的沉默,进而抑制细胞凋亡的发生.     

抑制IGFBP-2基因的表达对U251细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨 RNA干扰技术沉默胰岛素生长因子结合蛋白2（IGFBP-2）对胶质瘤细胞株 U251增殖、凋亡的影响,为胶质瘤的基因治疗提供一个可选择的靶点和方法。方法构建靶向 IGFBP-2基因的 RNAi表达载体;采用脂质体法将 siRNA转染U251细胞,设非特异的 siRNA阴性对照组和未转染 siRNA的阴性对照组;采用RT-PCR法半定量检测 siRNA对 IGFBP-2基因表达的抑制作用;用 MTT法测定 U251细胞增殖变化;流式细胞术检测 siRNA诱导细胞凋亡作用。结果构建的 RNAi表达载体抑制了 IGFBP-2基因的表达（P＜0．01）;RNA干扰沉默 IGFBP-2基因可抑制 U251细胞增殖,促进细胞凋亡。结论在细胞水平上,构建的靶向 IGFBP-2的 siRNA可明显抑制 IG-FBP-2基因的表达,导致胶质瘤细胞凋亡率明显上升（P＜0．01）,为进一步利用 RNA干扰进行胶质瘤的基因治疗研究奠定基础。     

针对不同靶位点的siRNA对HepG2人肝肿瘤细胞株FOX03a表达的抑制作用

目的：探讨针对FOXO3a的小干扰RNA（siRNA）对HepG2 FOXO3a的表达、细胞增殖的抑制及细胞凋亡的作用。方法利用RNA干扰（RNAi）效应设计针对FOXO3a的不同siRNA,构建表达载体质粒并转染HepG2细胞系。RT-PCR和Western Blot分别检测FOXO3a mRNA及蛋白的表达,细胞生长实验和流式细胞观察转染前后细胞增殖及细胞凋亡的变化。另设一无意义RNA载体质粒为阴性对照。结果 P2、P3实验组,细胞核绿色荧光明显减淡,有细胞核的排出。特异性siRNA对FOXO3a mRNA及蛋白的表达具有抑制作用（P〈0.05）,细胞凋亡减少,增殖明显增加（P〈0.05）。结论抑制 FOXO3a 基因的表达能够减少HepG2细胞的凋亡,并增加细胞的增殖。FOXO3a有望成为治疗肝癌的有效的靶基因。     

HIF-lα、Caspase-3、Survivin蛋白的表达与食管鳞癌发生关系的研究

目的 研究缺氧诱导因子-lα(HIF-la),Caspase-3,Survivin在食管癌的发生、发展中的作用.方法 应用免疫组化SP法检测49例食管鳞癌中HIF-lα、Caspase-3、Survivin蛋白的表达.结果 HIF-lα蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率为51.0%(25/49),显著高于正常食管黏膜0(0/32)(P＜0.05);Caspase-3蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率为34.7%(17/49),显著低于癌旁正常黏膜100%(32/32)(P＜0.05);Survivin蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率为57.1%(28/49),显著高于癌旁正常黏膜6.3%(2/32)(P＜0.05).结论 HIF-lα蛋白Survivin蛋白的高表达和Caspase-3蛋白的低表达,在食管鳞癌发生、发展中起重要作用,HIF-lα蛋白的阳性表达可能下调下Caspase-3蛋白的表达,使Survivin蛋白的表达增加.联合检测HIF-lα、Caspase-3与Survivin可作为判断食管癌生物学行为的客观指标,对判断食管癌的预后具有重要意义.     

Survivin与Caspase-3基因在小儿肝母细胞瘤中的表达及其临床病理价值

目的 研究Survivin与Caspase-3基因在小儿肝母细胞瘤(HB)中的表达及其临床病理价值。方法 回顾性选择2011年6月至2013年9月在河北北方学院附属第一医院确诊的HB患儿42例,取HB样本作为实验样本、瘤旁样本作为对照。测定Survivin与Caspase-3基因的阳性表达率以及与HB患儿临床病理特征的关系;随访HB患儿5年总体生存率(OS)及无病生存率(EFS),分析不同Survivin、Caspase-3表达的HB患儿生存率的差异。结果 HB组织中Survivin的阳性表达率显著高于瘤旁组织,Caspase-3的阳性表达率显著低于瘤旁组织,差异有统计学意义(P <0. 05);HB组织中Survivin、Caspase-3的阳性表达率与患儿的年龄、性别、组织学分型无关,差异无统计学意义(P>0. 05),与患儿的肿瘤直径、临床分级、淋巴转移有关,差异有统计学意义(P <0. 05);Survivin阳性表达HB患儿的5年OS及EFS均显著低于Survivin阴性表达的HB患儿,Caspase-3阳性表达HB患儿的5年OS及EFS均显著高于Caspase-3阴性表达的HB患儿,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 Survivin基因的高表达与Caspase-3基因的低表达参与HB的发生且与HB的预后有关。     

小干扰RNA对人肝癌细胞株HepG2 Survivin基因表达的影响

目的构建Survivin基因特异性小干扰RNA(siRNA),检测siRNA-Survivin对Survivin基因表达的抑制,在人肝癌细胞株HepG2中研究survivin和survivin siRNA对细胞凋亡的影响。方法设计survivin siRNA序列,构建靶向Survivin siRNA真核载体。利用脂质体转染人肝癌HepG2细胞,通过相差显微镜下观察、四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察转染后survivin的表达,以及HepG2细胞的凋亡。结果成功构建了survivin siRNA表达载体,并且si-survivin对survivin有明显抑制效应,可显著抑制HepG2细胞的发生凋亡。转染Survivin-siRNA细胞活性受到显著抑制(P<0.05),光镜下出现明显的凋亡形态,DNA电泳出现典型的凋亡"梯状"带。RT-PCR结果显示细胞转染24 h、48 h和72 h后HepG2 Survivin mRNA分别减少了56%、78%和50%,而siR-NA阴性对照与未转染细胞相比差异不显著。结论转染的Survivin-siRNA可特异性抑制肝癌细胞株HepG2凋亡抑制基因的表达,从而为肿瘤的基因治疗提供新的实验基础。     

RNA干扰巨噬细胞移动抑制因子对宫颈癌Caski细胞上皮-间质转化的影响

目的通过RNA干扰技术研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对宫颈癌Caski细胞上皮-间质转化(EMT)的影响作用。方法通过构建重组真核表达载体p Genesil-1-MIF si RNA,转染宫颈癌Caski细胞(Caski-p Genesil-MIF si RNA组),同时设空载体转染组(Caski-p Genesil-1组)和空白对照组(Caski组),采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测Caski细胞中MIF m RNA相对表达量的变化,并检测转染前后Caski细胞中EMT相关指标E-cadherin和Vimentin的表达变化。结果 p Genesil-1-MIF si RNA转染Caski细胞后MIF m RNA的表达量减少,低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);RNA干扰抑制MIF基因表达后,与对照组相比,p Genesil-1-MIF si RNA组Caski细胞上皮标记物E-cadherin m RNA及蛋白表达水平上调(P<0.05),间叶标记物Vimentin m RNA及蛋白表达水平显著下调(P<0.05)。结论抑制MIF基因表达可抑制宫颈癌Caski细胞发生EMT的能力。     

基因干扰技术抑制PC-3细胞90K/Mac-2BP基因mRNA表达并诱导细胞凋亡

目的研究人前列腺癌PC-3细胞90K/Mac-2BP基因干扰后其mRNA表达水平及细胞凋亡的效果。方法设计、构建多个针对90K/Mac-2BP的干扰性小RNA（small interfering RNA,siRNA）,转染前列腺癌PC-3细胞,筛选出对90K/Mac-2BP基因干扰效率最高的90K/Mac-2BP siRNA,采用RT-PCR、Western blot技术检测90K/Mac-2BP mRNA及蛋白表达,酶标仪测定PC-3细胞的增殖,流式细胞仪检测PC-3细胞凋亡率。结果实验组和对照组前列腺癌PC-3细胞90K/Mac-2BP mRNA的表达强度分别为（19.23±1.33）%、（46.34±1.26）%,细胞凋亡率分别为（16.64±1.18）%、（2.52±0.19）%,两组差异有统计学意义（P〈0.05）。表明构建的表达载体有效抑制了90K/Mac-2BP mRNA表达并诱导细胞凋亡。结论 RNA干扰可有效抑制PC-3细胞90K/Mac-2BP mRNA和蛋白表达,并诱导细胞凋亡。     

贲门癌组织中生存素与p53基因表达的相关性研究

目的探讨凋亡抑制基因生存素(survivin)在贲门癌组织中表达的临床意义,及其与p53基因表达的相关性。方法采用免疫组化技术(二步法),检测66例术前未经化疗的贲门癌组织中survivin和p53基因的表达情况。结果66例贲门癌组织中,survivin阳性表达41例,阳性率为62.1%(41/66);而p53阳性率为51.5%(34/66)。survivin表达与贲门癌组织学类型、临床分期和淋巴结转移有明显相关性(P<0.05);survivin在p53阳性和阴性患者中阳性率分别为82.4%(28/34)和40.6%(13/32),两者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论贲门癌组织中survivin高表达导致的凋亡抑制在贲门癌的发生、发展中可能起重要作用。survivin在贲门癌组织中的表达与p53基因表达密切相关,提示二者可能存在协同作用,构成抑制贲门癌细胞凋亡的多种途径。survivin和p53阳性的贲门癌可能有较强的侵袭性,预后不良。