人参皂苷Rb1、Re对Aβ25-35诱导SK-N-SH细胞损伤的保护作用

目的观察人参皂苷Rb1和Re对Aβ25-35诱导损伤SK-N-SH细胞的保护作用进而研究其内在机制。方法用Aβ25-35处理人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞),模拟阿尔茨海默病的神经元损伤,并以适当浓度人参皂苷Rb1或Re处理。采用MTT法测定细胞存活率,荧光探针法检测细胞内ROS水平变化,Western blot法检测tau蛋白磷酸化水平及活性GSK-3β蛋白表达。结果培养基中添加Aβ25-35后SK-N-SH细胞存活率明显下降,而人参皂苷Rb1和Re均能显著提高损伤细胞的存活率,降低细胞内ROS水平,降低活性GSK-3β的表达,造成tau蛋白396位点的磷酸化程度下降,缓解tau蛋白的过度磷酸化。结论人参皂苷Rb1和Re对Aβ25-35诱导损伤的SK-N-SH细胞具有一定的保护作用。     

长时程增强形成机制的研究进展

突触传递的长时程增强 (LTP)现象 ,作为信息贮存的客观指标 ,已在中枢神经系统的多个区域进行了广泛的研究 ,对其形成机制的探讨也获得了大量实验资料。LTP的形成和维持是突触前和突触后机制的联合作用 ,而以突触后机制为主。关于LTP形成的突触后机制的研究主要集中在N 甲基 D 天冬氨酸 (NMDA)受体被激活后的细胞内级联反应。近年来 ,“寂静突触”[1] 概念的提出 ,使人们对LTP产生的突触后机制有了新的认识 ,使君子氨酸 (AMPA)受体功能和 /或数目的改变可能参与了LTP形成的突触后机制。1　 钙离子与LTP突触前和突触后神经元内…     

缺氧对ECV-304细胞CASK表达及细胞内分布的影响

目的 了解缺氧后ECV-304细胞钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase, CASK)蛋白表达及细胞内分布的变化.方法 将培养的ECV-304细胞置于缺氧(5%O2) 条件培养1、3、6、12 h,用Western blot方法检测CASK表达的变化,用免疫组化技术观察CASK在细胞内分布情况.结果 ECV-304细胞的CASK表达随缺氧时间延长而逐渐增高,3 h开始增加,6 h达高峰,12 h下降但仍高于正常.免疫组织化学染色的结果显示,随着缺氧时间的延长,细胞染色加深、并出现CASK向核膜聚集的现象.结论 缺氧可以影响CASK的蛋白表达和细胞内分布,提示CASK可能是一个新的值得关注的缺氧相关蛋白.     

长期酒精灌胃对大鼠肝GSK-3β及AMPK水平的影响

目的 探索长期饮酒对大鼠肝内糖原合成酶激酶-3(GSK-3)、磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的影响.方法 用AMPK激动剂(AICAR)注射大鼠,观察其对糖原、GSK-3β、AMPK的影响.取Wistar大鼠48只,随机分为A、B、C、D组,给予酒精灌胃,对应酒精剂量分别为5g/kg·d、2.5g/kg·d、0.5 g/kg·d及0(生理盐水),20周后取其肝组织测GSK-3β、AMPK(AMPKα,P-AMPKα)、GLUT4蛋白和AMPK、GLUT4 mRNA的表达以及切片组织GSK-3β的荧光表达.结果 注射AICAR大鼠的肝糖原含量增高,GSK-3β、AMPK也较原水平有所变化.服酒精各组GSK-3β荧光信号强,A组更明显,蛋白表达增强;而酒精各组P-AMPKα蛋白表达均明显降低(P均＜0.01);GLUT4mRNA和蛋白也降低(P均＜0.05).结论 大鼠长期酒精灌胃可能影响GSK-3β、AMPK水平,继而降低肝糖原水平.     

急性缺氧对大鼠心肌组织AMPK磷酸化和糖原含量的影响

目的研究急性缺氧对大鼠心肌组织AMPK磷酸化和糖原含量的影响,探讨急性缺氧时心肌组织的能量代谢状况。方法用随机数字表将16只健康雄性SD大鼠分为平原对照组(n=8)和急性缺氧组(n=8)。急性缺氧组大鼠置于模拟海拔5 000 m高原的低压舱中。24 h后测定2组大鼠血糖、血乳酸以及心肌组织糖原含量,用心导管技术测定大鼠心脏功能,Western blot法检测心肌组织AMPK、磷酸化AMPK(pAMPK)水平以及葡萄糖转运体-4(GLUT4)的表达。结果与平原对照组相比较,急性缺氧组大鼠肺动脉压显著升高,右心室功能显著增强,左心室功能无明显变化;血糖含量显著升高[(5.6±0.6)mmol/Lvs(7.5±0.5)mmol/L,P<0.05];左、右心室心肌组织GLUT4表达显著增强,糖原含量显著增加[右心室心肌:(4.78±1.29)mg/gvs(6.55±1.20)mg/g,P<0.05;左心室心肌:(4.15±0.77)mg/gvs(5.73±1.57)mg/g,P<0.05];左、右心室心肌组织AMPK含量无明显变化,但pAMPK含量显著降低,pAMPK/AMPK比值显著降低(P<0.05)。结论模拟高原5 000 m急性缺氧静息状态下心肌组织AMPK磷酸化水平降低,说明心肌能量供求处于平衡状态,心肌糖原含量增加可能是AMPK磷酸化水平降低的机制之一。     

尼莫地平对癫痫大鼠海马Ca2+浓度及Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα表达的影响

目的 探讨尼莫地平( nimodipin,NIM)对戊四氮( pentylenetetrazol,PTZ) 点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离 Ca2+浓度([Ca2+]I)、ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium / calmodulin-dependent protein kinase Ⅱa,CaMKⅡα 蛋白表达的影响.方法 将动物分为正常对照组、PTZ 组和 NIM + PTZ组,采用 PTZ 慢性点燃癫痫模型,应用 Mor-ris 水迷宫观察各组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+]I变化,Western blot方法测定 CaMKⅡα蛋白的表达.结果 PTZ 组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca2+]I明显升高(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平较正常对照组减少(P<0.05);与 PTZ 组比较,NIM + PTZ 组大鼠空间学习记忆能力好转,其海马细胞内[Ca2+]I;下降(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平升高(P<0.05).结论 PTZ 点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKⅡα的表达异常,由此引起大鼠空间学习记忆能力受损;NIM 可以降低细胞内[Ca2+]I;,提高 CaMKⅡα的表达,改善癫痫大鼠的学习记忆能力.     

CASK下调表达对人血管内皮细胞ECV-304增殖能力的影响

目的 建立CASK下调表达细胞株,研究钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium,calmodulin-associated serine/threonine kinase,CASK)下调表达对ECV-304细胞增殖能力的影响.方法 将包含针对CASK基因干扰siRNA片段的pGenesil-1-hCASK重组质粒转染人ECV-304细胞株,经G418加压筛选,成功筛选出CASK下调表达的细胞株.用蛋白免疫印迹法鉴定转染细胞中CASK基因的表达水平.采用流式细胞技术、MTT法观察CASK下调表达对ECV-304细胞增殖能力的变化.结果 成功筛选出CASK下调表达ECV-304细胞株(siCASK细胞株),这些细胞在传代过程中绿色荧光蛋白能维持表达,细胞株中转染阳性率在90%以上;经蛋白免疫印迹法检测CASK表达明显降低;siCASK细胞株中G0/G1细胞比率下降,G2M期细胞比率明显上升,增殖指数明显提高,生长曲线左移.结论 成功建立了CASK下调表达的ECV-304细胞株,CASK下调表达可导致细胞增殖能力增强.     

天麻对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆和海马突触传递蛋白表达的影响

目的 探讨天麻对阿尔茨海默病大鼠学习记忆和海马突触传递蛋白( P38、Ca2+ -CaMKⅡα、CREB)的影响.方法 将24只成年Wistar大鼠分为对照组、干预组和实验组,干预组和实验组大鼠双侧海马注射凝聚态的Aβ1-40,对照组注射等量生理盐水;模型成功后,对照组和实验组给予羧甲基纤维素钠(50g/kg)灌胃,干预组给予天麻粉剂(50g/kg)灌胃,持续15d,Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力,应用免疫组化法检测大鼠海马神经元P38、Ca2+ -CaMK Ⅱα、CREB的表达.结果 行为学试验显示:实验组平均潜伏期、搜索时间较对照组和干预组明显延长,搜索距离百分比明显降低(P＜0.01).免疫组化结果:实验组海马CA1区P38、Ca2+ -CaMKⅡα、CREB阳性细胞数和光密度明显低于对照组和干预组(实验组P38阳性细胞数和光密度值为58.92±10.82,0.208±0.037;Ca2+ -CaMK Ⅱα为72.38±14.67,0.174±0.036; CREB为53.86±5.31,0.161 ±0.043.干预组P38阳性细胞数和光密度值为87.32±9.56,0.371±0.046;Ca2+ -CaMKⅡα为98.16±16.29,0.283 ±0.051;CREB为86.76±7.73,0.356±0.052.对照组P38阳性细胞数和光密度值为102.54±16.73,0.563±0.078;Ca2+ -CaMK Ⅱα为123.46±17.65,0.436±0.057;CREB为125.43 ±9.16,0.524 ±0.057).结论 天麻对阿尔茨海默病具有治疗作用,主要通过促进P38、Ca2+ -CaMK Ⅱα、CREB的表达发挥作用.     

脑发育不同阶段甲醛暴露对大鼠学习记忆能力及海马CA3区CaMKⅡ表达的影响

目的:研究低浓度甲醛吸入对脑发育不同阶段大鼠空间学习记忆能力、生长发育及海马CA3区CaMKⅡ表达的影响.方法:选择生后3 d、14 d、60 d(相当于新生儿期、幼年期、成年期)Wistar大鼠,每年龄段随机分为对照组和染毒组各8只,采用吸入方式染毒(甲醛浓度为0.5 mg/m3),2 h/d,连续28 d;监测大鼠体重,用Morris水迷宫检测其空间学习记忆能力,免疫组织化学方法检测海马CA3区CaMKⅡ表达.结果:所有染毒组大鼠较同龄对照组均出现体重增长落后(P<0.05);新生鼠染毒组和幼年鼠染毒组在Morris水迷宫中定位航行实验逃避潜伏期比同龄对照组明显延长(P<0.05);空间探索试验穿越平台次数也明显少于同龄对照组(P<0.05);免疫组织化学检测海马CA3区CaMKⅡ表达较同龄对照组下降(P<0.05);而成年组除染毒组体重增长落后外,水迷宫逃避潜伏期、穿越平台次数及海马CA3区CaMKⅡ表达两组均无显著性差异(P>0.05).结论:甲醛吸入染毒可能影响Wistar大鼠学习记忆能力,脑发育早期(新生儿期和婴幼儿期) 对甲醛的神经毒性更为敏感;海马CA3区CaMKⅡ表达下降可能是甲醛影响大鼠学习记忆的机制之一.     

脾气虚大鼠肝组织三磷酸腺苷酶活性和CaMKII通路CaM、CaMKII蛋白表达变化的研究

目的 观察脾气虚大鼠肝组织三磷酸腺苷酶活性和CaMKII通路关键分子[Ca2 ]i 以及CaM、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ蛋白表达水平的变化。方法 受试动物随机分为4组,即空白对照组,脾气虚模型7d、14d、21d组,每组10只。除空白对照组外,其余受试动物采用复合法（苦寒破气法、游泳力竭法及饥饿法）成功建立脾气虚证大鼠模型,在观测各组大鼠一般生存状态和肝组织ATP酶活性的基础上,采用激光共聚焦技术检测肝组织细胞内[Ca2 ]i浓度,蛋白免疫印迹技术检测肝组织CaM、CaMKⅡ和p-CaMKⅡ的表达变化。结果 与空白组比较,脾气虚大鼠随着造模时间的延长,一般生存状况渐差,肝组织Na -K -ATPase和Ca2 -Mg2 -ATPase活性均降低（P <0.05,P <0.01）;肝组织[Ca2 ]i浓度和CaM、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ蛋白表达量显著降低（P <0.01）;且脾气虚模型7d、14d、21d组之间比较,以脾气虚21d组变化更为显著。结论 脾气虚大鼠肝组织Na -K -ATPase、Ca2 -Mg2 -ATPase活性和[Ca2 ]i浓度降低,并且CaMKII信号通路关键分子CaM、CaMKⅡ和p-CaMKⅡ蛋白表现为低表达。     

愈痫灵对致痫大鼠海马神经元CaM和CaMKⅡα表达的影响

目的研究愈痫灵颗粒对致痫大鼠海马组织钙调蛋白(CaM)和钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)表达的影响。方法采用腹腔注射戊四氮(PTZ)造成慢性癫痫大鼠模型,以半定量RT-PCR技术检测不同药物干预后大鼠海马组织CaM和CaMKⅡα的mRNA表达水平;图像自动分析系统进行其吸光度扫描。结果愈痫灵颗粒可降低海马神经元CaMmRNA的表达,升高CaMKⅡαmRNA的表达。结论通过调控Ca2 信号转导途径中的某些靶位点,影响Ca2 -CaM-CaMKⅡα信息链是愈痫灵颗粒抗癫痫的重要途径之一。     

淫羊藿苷激活抑制鼻咽癌CNE-2细胞存活、侵袭、迁移的体内外研究

[目的]探讨淫羊藿苷对鼻咽癌CNE-2细胞存活和侵袭迁移特性的影响.[方法]①体外研究:用不同浓度淫羊藿苷处理鼻咽癌CNE-2细胞,采用细胞计数试剂盒8(CCK8)测定细胞增殖能力以选择合适的剂量进行后续实验.采用Transwell实验观察细胞侵袭能力;划痕实验观察细胞迁移能力;蛋白免疫印迹法检测血管内皮生长因子(VE...     

鞘内注射钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN93对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的 探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在骨癌痛发病机制中的作用.方法 雄性C3H/HeN小鼠40只分为5组:假手对照Sham组(S组n=8),癌痛模型对照Control组(C组n=8)和KN93 Treat组(T1组n=8、T2组n=8、T3组n=8).C组和T组(T1、T2、T3)小鼠左侧股骨远端骨髓腔接种溶于α-MEM的NCTC 2472纤维肉瘤细胞,建立骨癌痛模型;S组小鼠骨髓腔注入不含NCTC 2472细胞的α-MEM.在术后的第14天S组和C组鞘内注射20%DMSO 5μl,T1、T2、T3组分别鞘内注射溶于20%DMSO的KN93 15 nmol/5μl、30nmol/5μl、60nmol/5μl.各组于给药前及给药后的0.5 h、2h、4h、8 h检测小鼠的自发抬足次数、机械性缩足反射阈值(PWMT)和热缩足反射潜伏期(PWTL).结果 鞘内给予KN9315 nmol对骨癌痛小鼠痛行为无影响,鞘内给予KN93 30nmol、60nmol能剂量依赖性减轻小鼠痛行为反应,给药后0.5 h 2组小鼠自发抬足次数[(7.25±1.49)次、(4.12±1.36)次]比C组[(11.62±1.92)次]降低,PWMT[(1.28±0.14)g、(1.75+0.46)g]、PWTL[(14.64±2.12)s、(16.85±1.61)s]比C组[(0.47±0.16)g、(11.32±1.68)s]升高,差异有显著性(P＜0.05).作用2h达到高峰,维持到4h左右,8 h后基本消失.结论 CaMKⅡ在骨癌痛的发病中起重要作用,鞘内注射KN93能够剂量依赖性改善骨癌痛小鼠的痛行为.     

慢性持续性低氧对大鼠海马CaMKⅡ的影响

目的探讨慢性持续性低氧对大鼠海马钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）表达量及其磷酸化水平的影响。方法选取清洁级SD成年雄性大鼠,随机分为6组每组6只。正常对照组（C组）,低氧1d组（H1）,低氧3d组（H3）,低氧7d组（H7）,低氧14d组（H14）,低氧21d组（H21）。建立慢性持续性低氧模型。测量右心室收缩压,计算右心室肥厚指数,即右心室重量与左心室加室间隔重量比值[RV/（LV＋S）]。断头取海马组织,应用10%SDS-PAGE和Western blot技术及GelDoc凝胶成像系统半定量检测T-CaMKⅡ和p-CaMKⅡ水平。结果与C组（100%）相比,H1[（77.6±14.9）%]、H3[（66.7±19.3）%]、H7[（79.6±21.7）%]、H14[（75.7±14.2）%]、H21[（78.8±12.9）%]组大鼠海马p-CaMKⅡ水平显著下降（P〈0.05）。同时与C组（100%）相比,H1[（67.9±25.3）%]、H3[（74.1±23.2）%]、H7[（72.2±25.1）%]、H14[（75.3±12.4）%]、H21[（73.3±16.1）%]组大鼠海马CaMKⅡ蛋白表达量显著下降（P〈0.05）。结论慢性持续性低氧可使大鼠海马组织内CaMKII活性下降,并抑制该蛋白的正常表达。     

鞘内注射吗啡对切口痛大鼠脊髓背角p-αCaMK Ⅱ表达的影响

目的 研究鞘内注射（IT）吗啡对切口痛大鼠脊髓背角磷酸化钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（p-αCaMKⅡ）表达的影响.方法 雄性SD大鼠32只,随机分为4组（n=8）,分别为假手术组（S组）、切口痛组（IP组）、术前吗啡组和术后吗啡组.按Yaksh法鞘内置管,按Brennan法制备大鼠足底切口痛模型,以von Frey细丝法和热辐射法测定机械缩足反射阈值（MWT）和热刺激缩足反射潜伏期（TWL）,观察大鼠术后2 h时的疼痛行为学变化,应用免疫组织化学和Western blot法观察脊髓背角p-αCaMK Ⅱ表达的变化.结果 与S组比较,IP组大鼠MWT明显降低（P＜0.01）,TWL明显缩短（P＜0.01）.脊髓背角p-αCaMKⅡ阳性神经元数量和蛋白表达明显增加（P＜0.01） 与IP组比较,术前吗啡组和术后吗啡组大鼠的MWT明显升高（P＜0.01）,TWL明显延长（P＜0.01）,术前吗啡组大鼠脊髓背角p-aCaMK Ⅱ阳性神经元数量和蛋白表达明显减少（P＜0.05或P＜0.01）.结论 在大鼠切口痛模型中,术前IT吗啡的抗伤害作用可能与抑制切口痛引起的脊髓背角P-aCaMK Ⅱ表达增加有关.     

镉对细胞信号转导系统干扰作用研究进展

镉（Cd）是常见的环境和工业毒物，可通过食物与饮水摄入、吸烟及职业接触等途径进入人体．生物半衰期长达10～35年。Cd被美国毒物管理委员会（ATSDR）列为第6位危害人体健康的有毒物质。Cd具有多器官多系统毒性，不仅可引起骨骼、肾脏、肝脏的损伤．还具有明显的生殖内分泌干扰作用，而Cd作为高度可疑的具有雌激素样作用的物质已越来越受到关注。Cd的毒性机制问题一直是个难点、热点问题，近年来国内外开展了一系列Cd对细胞信号转导系统干扰作用的研究，并取得了一些进展，深化了Cd的毒性机制研究与认识。笔者就Cd对Ca^2＋相关信号通路、促丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路以及cAMP—PKA信号转导系统影响的相关报道作一综述。     

黄芩总黄酮对大鼠膝骨性关节炎软骨组织Camk2d、Ppp3r2表达的影响

目的: 探讨黄芩总黄酮对大鼠膝骨性关节炎（knee osteoarthritis,KOA）软骨组织钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ（Camk2d）、蛋白磷酸酶3调节亚基2（Ppp3r2）表达的影响。方法: 采用膝关节腔内注射木瓜蛋白酶的方法制备大鼠KOA模型,阴性对照组和模型组大鼠灌胃给予生理盐水,黄芩总黄酮低、中和高剂量组大鼠灌胃给予黄芩总黄酮,剂量分别为12.5、25、50 mg/kg,阳性对照组大鼠灌胃给予塞来昔布（10 mg/kg）,连续14 d后对大鼠膝关节进行病理学观察和Makin′s评分,同时ELISA法检测膝关节软骨组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-6含量,蛋白质印迹法检测膝关节软骨组织中Camk2d和Ppp3r2表达水平。结果: 模型组大鼠膝关节软骨纤维结缔组织增生,结构不清,伴炎症细胞浸润;黄芩总黄酮低剂量组大鼠膝关节软骨纤维结缔组织增生,细胞排列无规则,炎症细胞浸润,但较模型组明显改善,随着黄芩总黄酮剂量的增加,病变改善越明显。与阴性对照组比较,模型组大鼠膝关节软骨组织Makin′s评分,TNF-α、IL-1β、IL-6和Camk2d水平明显升高,Ppp3r2水平明显降低（P均<0.05）;与模型组相比,黄芩总黄酮各剂量组及阳性对照组大鼠膝关节软骨组织Makin′s评分,TNF-α、IL-1β、IL-6和Camk2d水平明显降低,Ppp3r2水平明显升高,且黄芩总黄酮各剂量组效应呈剂量依赖性（P均<0.05）;黄芩总黄酮高剂量组和阳性对照组间各指标差异无统计学意义（P均＞0.05）。结论:黄芩总黄酮可能通过增加软骨组织中Ppp3r2表达,降低Camk2d表达,对大鼠KOA发挥治疗作用。     

低浓度铅对大鼠脑组织CaMKⅡ mRNA及其蛋白表达的影响及驱铅丸的干预作用

目的探讨低浓度铅对大鼠脑组织钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响及中药驱铅丸的干预作用。方法 40只大鼠随机分为5组:对照组、模型组、中药高、低剂量组、依地酸钠钙(EDTA)组。除对照组外,其他4组饮水中均添加0.02%醋酸铅,中药高、低剂量组分别按每日3.5g/kg和2.0g/kg的剂量灌服驱铅丸,EDTA组以每日EDTA加普鲁卡因按50.0mg/kg肌肉注射。60d后,检测全血、脑组织铅含量,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学法检测脑组织CaMKⅡ mRNA及其蛋白表达。结果与对照组比较,模型组血铅、脑铅含量显著增高(P0.01),脑组织CaMKⅡ mRNA及其蛋白表达显著降低(P0.01);与模型组比较,驱铅丸高剂量组脑铅、血铅含量显著降低(P0.05),脑组织CaMKⅡ mRNA及其蛋白表达显著增高(P0.05)。结论驱铅丸可降低铅中毒大鼠血铅、脑组织铅含量,其机制与增加脑组织CaMKⅡmRNA及其蛋白表达等有关。