Wnt/β-catenin信号通路抑制剂对脑胶质瘤细胞迁移的影响

目的探讨Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制剂对脑胶质瘤细胞迁移能力的影响。方法抑制组用浓度为20μmol/L的Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535处理脑胶质瘤U251细胞,对照组细胞中不加入抑制剂。培养48 h后,噻唑蓝(MTT)检测各组细胞的存活率,细胞划痕实验检测各组细胞的迁徙率,Transwell小室检测各组细胞迁移的数目,用Western印迹法检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、C-myc、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2蛋白的表达水平。结果抑制组细胞存活率、细胞迁移数目、迁徙率和MMP-9、MMP-2蛋白水平与对照组相比明显降低(P<0.01)。抑制组细胞中β-catenin、C-myc水平明显低于对照组(P<0.01)。结论 Wnt/β-catenin信号通路抑制剂能够抑制脑胶质瘤细胞增殖、迁徙及迁移能力。     

猕猴桃根多糖调控Wnt信号通路抑制结肠癌增殖促进其凋亡

目的探讨猕猴桃根多糖(ACPS)调控Wnt信号通路对结肠癌细胞增殖凋亡的影响。方法 0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/ml的ACPS处理人结肠癌HT29细胞,细胞计数试剂盒(CCK)8检测ACPS对HT29细胞活力的影响;ACPS或Wnt信号通路抑制剂XAV-939处理HT29细胞,细胞被分为阴性对照组、ACPS组(4.00 mg/ml的ACPS处理细胞)、XAV-939组(10μmol/L的XAV-939处理细胞)和ACPS+XAV-939组(4.00 mg/ml的ACPS和10μmol/L的XAV-939处理细胞),处理细胞48 h后CCK8检测细胞活力,流式细胞仪检测凋亡率;Western印迹检测Wnt信号通路关键分子β-catenin及下游靶基因cyclinD1和survivin的蛋白表达。结果 0.25 mg/ml和0.50 mg/ml的ACPS对HT29细胞活力影响与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05),而1.00～4.00 mg/ml的ACPS在24～72 h均能降低HT29细胞活力,与阴性对照组比较差异具有统计学意义,且具有浓度依赖性,各浓度均呈现时间依赖性(P0.05);ACPS或XAV-939均能抑制HT29细胞活力,诱导细胞凋亡,下调β-catenin、cyclinD1和survivin的蛋白表达,与阴性对照组比较差异均具有统计学意义(P0.05),两者合用效果更显著。结论 ACPS可通过抑制Wnt信号通路降低结肠癌细胞活力,诱导细胞凋亡。     

Wnt信号通路抑制剂对脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用及其作用机制研究

目的探究Wnt信号通路抑制剂(IWR-1)对脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法2014年1月—2015年8月,体外培养脑胶质瘤细胞,给予不同浓度IWR-1处理,采用MTT法测定脑胶质瘤细胞增殖情况,并计算其抑制率,其中实验1组终浓度为5μmol/L IWR-1、培养液、细胞悬液,实验2组终浓度为10μmol/L IWR-1、培养液、细胞悬液,对照组添加等量培养液和细胞悬液。采用蛋白质印迹法检测Wnt5a蛋白、β-连锁蛋白表达水平。结果实验1组、实验2组脑胶质瘤细胞增殖抑制率高于对照组,实验2组脑胶质瘤细胞增殖抑制率高于实验1组(P0.05);培养48 h时实验1组、实验2组脑胶质瘤细胞增殖抑制率均高于培养24 h(P0.05);培养48 h与24 h对照组脑胶质瘤细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义(P0.05)。实验1组、实验2组脑胶质瘤细胞中Wnt5a蛋白、β-连锁蛋白表达水平低于对照组,实验2组脑胶质瘤细胞中Wnt5a蛋白、β-连锁蛋白表达水平低于实验1组(P0.05)。结论 IWR-1能有效抑制脑胶质瘤细胞增殖,其作用机制可能与抑制Wnt5a蛋白和β-连锁蛋白的表达有关。     

miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌SGC-7901细胞生物学特性的研究

背景 miR-183在胃癌、乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤组织中低表达,发挥抑癌基因的作用,但其在胃癌中作用机制目前尚不十分清楚.研究表明, miR-183可以通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤细胞的生长、迁移和侵袭,而Wnt/β-catenin信号通路在胃癌中高度激活与胃癌的发生和转移密切相关.但miR-183是否调节Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞生物学特性尚不清楚.目的探讨miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞生物学特性的影响.方法采用q RT-PCR检测miR-183在不同胃癌细胞株中的表达情况,在胃癌细胞SGC-7901中转染miR-183mimics或mimics对照,分别设为miR-183组和miR-NC组, qRT-PCR检测转染效率,噻唑蓝增殖实验检测SGC-7901细胞增殖变化,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡情况, Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力, Western blot法检测凋亡相关及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平.使用Wnt/β-catenin信号通路激动剂氯化锂处理过表达miR-183的SGC-7901细胞,观察SGC-7901细胞生物学特性的变化.结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比, 4株胃癌细胞中miR-183的表达水平明显降低(P 0.05).转染miR-183mimics后SGC-7901细胞中miR-183的表达水平显著升高(P0.05).过表达miR-183后SGC-7901细胞OD值降低(P0.05),凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P 0.05),侵袭和迁移细胞数减少(P0.05),β-catenin、p-GSK-3β和Cyclin D1蛋白表达水平下调(P0.05), GSK-3β蛋白表达水平上调(P 0.05).激活Wnt/β-catenin信号通路部分逆转了过表达miR-183对SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及凋亡促进作用(P0.05).结论miR-183可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路阻碍人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡.     

葛根素对H_2O_2诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响及机制

目的探讨葛根素对过氧化氢(H_2O_2)诱导颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响及机制。方法分离培养大鼠颈椎间盘纤维环原代细胞,将细胞分为对照组、H_2O_2组和葛根素组,氯化锂(LiCl)为Wnt信号通路激活剂。噻唑蓝(MTT)及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)探针检测活性氧(ROS)水平。Western印迹检测Wnt1、β-catenin、糖原合成酶激酶(GSK)-3β和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,H_2O_2组细胞活力降低,凋亡率升高,ROS水平升高,Wnt1、β-catenin和GSK-3β蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与H_2O_2组比较,葛根素组细胞活力升高,凋亡率降低,ROS水平降低,Wnt1、β-catenin和GSK-3β的蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P0.05)。葛根素+LiCl组细胞活力显著高于葛根素组,凋亡率显著低于葛根素组(P0.05)。结论葛根素可降低由H_2O_2诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡,机制与细胞内ROS水平降低及激活Wnt信号通路有关。     

Cullin7表达下调对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

背景:结肠癌为常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率均较高。Cullin7定位于染色体6p21. 1,与恶性肿瘤的发生、发展密切相关。目的:探讨Cullin7表达下调对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用q RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测结肠癌组织、癌旁组织中Cullin7 m RNA和蛋白表达。以si RNA沉默Cullin7基因,并转染结肠癌HCT116细胞,q RT-PCR和蛋白质印迹法检测沉默效果。CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测cleaved caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白表达。以si RNA Cullin7联合Wnt信号通路抑制剂FH-535处理结肠癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测cleaved caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白表达。结果:结肠癌组织中Cullin7 m RNA和蛋白表达明显高于癌旁正常组织(P 0. 05)。与对照组相比,si RNA Cullin7 1组、si RNA Cullin7 2组、si RNA Cullin7 3组Cullin7 m RNA和蛋白表达均明显降低(P 0. 05),尤其是si RNA Cullin7 2组。与对照组相比,沉默Cullin7表达后,结肠癌细胞增殖活性明显下降,细胞凋亡率明显增加,cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,β-catenin、C-myc蛋白表达明显下调(P 0. 05)。与si RNA Cullin7 2组相比,联合Wnt信号通路抑制剂FH-535后,结肠癌细胞凋亡率明显增加,cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,β-catenin、C-myc蛋白表达明显下调(P 0. 05)。结论:Cullin7基因参与了结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡,沉默Cullin7可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

抑制Wnt/β-catenin信号通路可减轻脓毒症急性肺损伤

摘要 目的：探讨抑制Wnt/β-catenin信号通路对脓毒症急性肺损伤(ALI)的影响。方法：选取（250±10）g健康成年SD雄性大鼠50只,随机分为3组：对照组10只、脓毒症ALI组（CLP组）20只、脓毒症ALI治疗组（CLP+XAV939组）20只。统计各组大鼠体重下降率及死亡率,取肺组织观察肺组织病理学变化,通过蛋白印迹法（WB）、免疫组化（IHC）、免疫荧光(IF)、实时定量PCR等技术检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白（TNF-α、β-catenin、Cyclin D 、LRP5/6）表达在3组之间的差异性。结果：CLP组48h内死亡率为40%,而对照组和CLP+XAV939组无大鼠死亡。对照组大鼠术后48h体重无变化,而CLP组大鼠体重下降20%,CLP+XAV939组下降10%。组织病理学表现,对照组可见完整的肺泡结构,未见炎症细胞浸润;CLP组见肺泡水肿和塌陷,肺泡间隔增厚增宽并有大量炎症细胞浸润,肺血管充血明显;CLP+XAV939组可见基本完整的肺组织结构,炎症细胞数量及分部范围较CLP组减小。WB显示,与对照组比较,CLP组、CLP+XAV939组Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白表达量上升,且CLP组高于CLP+XAV939组（P<0.01或P<0.05）。 实时定量PCR示,CLP组β-cateninmRNA表达量较对照组增高（P<0.05）,CLP+XAV939组与对照组无差异。 IHC示,与对照组比较,CLP组和CLP+XAV939组肺内多种细胞内β-catenin蛋白表达量明显增多,且CLP组多于CLP+XAV939组（P<0.05）。IF示,与对照组比较,CLP组和CLP+XAV939组肺内LRP5/6表达量明显升高,且CLP组高于CLP+XAV939组（P均<0.05）。结论：Wnt/β-catenin信号通路参与脓毒症ALI过程,腹腔注射XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路可减轻ALI。     

SOX1过表达抑制食管癌细胞的增殖并促进凋亡的发生

目的 探索SOX1过表达对食管癌细胞增殖及凋亡的作用及其机制。方法 构建SOX1过表达细胞株，检测SOX1 mRNA和蛋白表达，CCK-8检测细胞增殖，细胞划痕及结晶紫染色检测细胞的迁移及克隆形成能力，Hochest染色实验检测细胞凋亡情况，Western blotting检测GSK-3β及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达水平。结果 SOX1过表达组mRNA显著高于对照组(P<0.01)。CCK-8 OD值及增殖曲线绘制表明SOX1过表达组增殖速率显著降低(P<0.05);SOX1过表达组细胞的迁移速率和克隆形成能力明显下降(P<0.05);显微镜下观察到SOX1过表达组细胞的皱缩明显，提示凋亡的发生；Western blotting检测结果表明，SOX1过表达组GSK-3β上调，Wnt信号通路相关基因β-catenin、Cyclin D1、c-Myc蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论 SOX1通过抑制Wnt/β-catenin信号传导抑制食管癌细胞的增殖和促进凋亡。     

急性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区细胞凋亡与β-catenin、GSK-3β蛋白表达的关系

目的探讨急性脑缺血再灌注(IR)大鼠海马CA1区细胞凋亡与Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)蛋白表达的关系。方法选择雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组6只、脑IR组30只,脑IR组又分为IR后3、6、24、48、72 h各6只,采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。应用原位末端标记法检测各组细胞凋亡情况,免疫组化法及Western blotting蛋白印记法分别检测β-catenin、GSK-3β蛋白表达;并对IR组的β-catenin、GSK-3β蛋白表达与细胞凋亡进行相关性分析。结果与假手术组比较,IR组各时间点细胞凋亡数、GSK-3β蛋白阳性数及β-catenin蛋白表达量明显增加(P均<0.01),β-catenin蛋白阳性数、GSK-3β蛋白表达量增加,但无统计学意义(P均>0.05)。脑IR后不同时间点的细胞凋亡数与GSK-3β蛋白阳性数呈正相关(P<0.05),与β-catenin蛋白阳性数无相关性(P>0.05)。结论 Wnt信号通路在脑IR组损伤中可能发挥重要作用,GSK-3β蛋白对缺血性脑损伤的细胞凋亡起促进作用。     

SFRP1基因沉默抑制人胃黏膜上皮GES-1细胞失巢凋亡

目的观察RNA干扰沉默分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)1基因对人胃黏膜上皮细胞(GES)-1失巢凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法应用SFRP1基因小干扰RNA(siRNA)转染处理GES-1后,分别采用Realtime RT-PCR和Western印迹检测SFRP1 mRNA和蛋白表达。细胞悬浮培养应用Poly-HEMA方法。采用流式细胞术和Calcein AM/EthD-1荧光双染法检测细胞失巢凋亡,软琼脂集落实验检测细胞非锚定生长状态,免疫荧光和Western印迹实验检测SFRP1沉默后Wnt通路中β-catenin的定位及表达,Realtime RT-PCR检测β-catenin靶基因c-Myc和CyclinD1 mRNA表达。结果与对照组比较,siRNA-891组中SFRP1 mRNA和蛋白表达明显被抑制。siRNA-891组细胞失巢凋亡率明显下降(P0.05),EthD-1荧光染色的失巢凋亡细胞数目明显减少(P0.05),软琼脂集落形成数目明显增多(P0.05)。siRNA-891组中β-catenin蛋白表达水平明显增加,其靶基因c-Myc mRNA和CyclinD1 mRNA表达明显增高(P0.01)。结论 SFRP1siRNA可抑制GES-1细胞失巢凋亡,使其失巢凋亡敏感性下降,激活Wnt分子通路可能是其机制之一。     

Wnt/β-catenin抑制剂XAV939对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响

目的探究Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV939对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响。方法选取60只无特定病原体级3周龄SD大鼠,采用随机数字表法分为假手术组、模型组和抑制剂组,每组20只。除假手术组外各组采用结扎左冠状动脉前降支,制成心肌梗死大鼠模型;抑制剂组从造模后第10天开始腹腔注射Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV939,连续注射7 d,其余两组注射等量0.9%氯化钠溶液;采用超声心动图检测各组大鼠左心室收缩末期内径(left ventricular end systolic diameter,LVESd)、左心室舒张末期内径(left ventricular end diastolic diameter,LVEDd)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)和左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS);采用图像法检测各组大鼠左心室梗死范围;采用氯胺T法测定羟脯氨酸浓度检测各组大鼠心肌胶原浓度;TUNEL染色分析法分析大鼠心肌细胞凋亡情况;采用蛋白质印记法检测大鼠心肌组织中促心肌纤维化因子转化生长因子-β1(transforming growth factor 1,TGF-β1)和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9的表达情况;采用蛋白质印迹法检测大鼠心肌组织Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果 TUNNEL染色结果显示,假手术组、模型组、抑制剂组大鼠心肌细胞凋亡率分别为(10.02±2.36)%、(49.36±9.32)%和(22.01±8.32)%;相比假手术组,模型组大鼠LVESd、LVEDd、羟脯氨酸浓度、胶原浓度、心肌梗死面积、TGF-β1蛋白相对表达、MMP-9蛋白相对表达、β-catenin蛋白相对表达均显著升高,LVEF、LVFS显著降低,差异有统计学意义(P0.05);相比模型组,抑制剂组大鼠LVESd、LVEDd、羟脯氨酸浓度、胶原浓度、心肌梗死面积、TGF-β1蛋白相对表达、MMP-9蛋白相对表达、β-catenin蛋白相对表达均显著降低,LVEF、LVFS显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 XAV939通过抑制Wnt/β-catenin信号通路降低大鼠心肌组织中促纤维化因子的表达及胶原的浓度并抑制心肌细胞凋亡,实现防止心肌梗死后心肌纤维化的发生与发展。     

干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的探讨干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及可能的作用机制。方法采用RNA干扰技术下调Wnt1基因表达,实验分为对照组(未做处理的细胞)、shRNA NC组(转染siRNA-NC)、shRNA Wnt1组(转染siRNA-Wnt1)。细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell法检测细胞的侵袭能力,免疫印迹实验(Western印迹)观察细胞中Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素(cyclin)-D1蛋白的表达量。结果转染siRNA-Wnt1到MCF-7细胞后,Wnt1蛋白的表达量受到显著抑制(P0.05);细胞的侵袭、迁移能力受到显著抑制(P0.05);β-catenin、cyclin-D1蛋白的表达下调(P0.05)。结论干扰Wnt1基因表达可以抑制MCF-7细胞的迁移和侵袭,其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路及其下游靶基因cyclin-D1蛋白表达下调有关。     

Frat1通过Wnt/β-catenin信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨Frat1能否通过Wnt/β-catenin信号通路对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、凋亡产生影响。方法 RT-PCR检测非小细胞肺癌组织及正常肺组织中Frat1、β-catenin的表达;CCK-8试验检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞的增殖;TUNEL免疫荧光法检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞的凋亡;Western Blot检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞β-catenin蛋白的表达。结果非小细胞肺癌组织中Frat1、β-catenin基因的表达显著高于正常肺组织(P0.05);Frat1沉默组细胞的增殖能力显著弱于Frat1正常表达组(P0.05);Frat1沉默组细胞的凋亡显著高于Frat1正常表达组(P0.05);Frat1正常表达组细胞β-catenin蛋白的表达显著高于Frat1沉默组(P0.05)。结论 Frat1与β-catenin在非小细胞肺癌的表达被激活;Frat1能促进非小细胞肺癌A549细胞的增殖,抑制其凋亡,这种作用可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路而实现的。     

miR-92a对H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响

目的探讨miR-92a对过氧化氢(H2O2)诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响。方法通过Lipofectamine~(TM)2000将miR-92a抑制物(inhibitor)及阴性对照组转染大鼠心肌细胞H9C2,RT-PCR检测转染后细胞中miR-92a的表达;将后续实验分为空白对照组、H2O2组和miR-92a inhibitor+H2O2组,利用CCK8法、流式细胞仪及Western印迹分别检测3组细胞的增殖、凋亡、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)和c-Myc的蛋白表达。结果 miR-92a inhibitor组miR-92a mRNA表达显著低于空白对照组(P0.05),阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P0.05);与空白对照组比较,H2O2组细胞增殖显著降低,凋亡率显著增加,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著上调表达,Bcl-2蛋白显著下调表达(均P0.05),与H_2O_2组比较,miR-92a inhibitor+H_2O_2组细胞增殖显著升高,凋亡率显著降低,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著下调表达,Bcl-2蛋白显著上调表达(均P0.05)。结论抑制miR-92a的表达可促进H2O2诱导的H9C2心肌细胞增殖,抑制细胞的凋亡,其机制与调节Bax、Bcl-2蛋白及Wnt信号通路表达有关。     

LATS2基因通过Wnt信号通路对H9C2心肌细胞保护的作用机制研究

目的探讨大肿瘤抑制因子2(LATS2)基因对缺氧复氧(H/R)诱导的H9C2心肌细胞凋亡及Wnt信号通路的影响。方法 LATS2 siRNA或LATS2过表达质粒转染H9C2心肌细胞,并分别转染阴性对照siRNA及空载体(vector),转染48 h后,通过Western blotting检测转染后的各组细胞中LATS2的蛋白表达;建立H/R模型,细胞分为正常对照组(Control组)、单纯缺氧复氧组(H/R组)、H/R+LATS2-siRNA组和H/R+pcDNA3.1-LATS2组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率及活性氧(ROS)含量;Western blotting检测凋亡蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)及Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)和c-myc的蛋白表达。结果 siRNA组和PcDNA3.1组的LATS2蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P0.05),而LATS2-siRNA组LATS2的蛋白表达显著低于Control组(P0.05),pcDNA3.1-LATS2组LATS2的蛋白表达显著高于Control组(P0.05);与Control组比较,H/R组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著升高(P0.05),与H/R组比较,H/R+LATS2-siRNA组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著升高,H/R+pcDNA3.1-LATS2组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论抑制LATS2基因表达可诱导心肌细胞凋亡及上调Wnt信号通路,而抑制LATS2基因表达反之。     

苦参碱诱导H466肺癌细胞凋亡及对Wnt信号通路的影响

目的探讨苦参碱诱导H466肺癌细胞凋亡及对Wnt信号通路的影响。方法将肺癌H466细胞分为三组,对照组为H466细胞,低处理组为H466细胞+0.5g的苦参碱;高处理组为H466细胞+2.0g的苦参碱,采用MTT、免疫双荧光、流式细胞仪、免疫印迹及qRT-PCR检测肺癌H466细胞的凋亡率、细胞周期及Wnt的蛋白表达及β-cateninmRNA表达。结果 MTT实验证明,低处理组的肺癌H466细胞活性低于对照组(P0.05),高处理组的肺癌H466细胞活性低于低处理组(P0.05),说明苦参碱对肺癌H466细胞具有抗肿瘤作用;对照组为正常的肺癌H466细胞呈蓝色荧光表达的活细胞,低处理组发现H466细胞呈现早期凋亡并细胞核破碎形成凋亡小体,凋亡程度高于对照组(P0.05),死亡的肺癌细胞呈现荧红色,在高处理组中的死亡率高于低处理组(P0.05);H466细胞在苦参碱作用下,在G0/G1期细胞比例升高,S期呈现下降趋势,对照组与低处理组相比差异较小(P0.05),高处理组与低处理组比较有差异(P0.05),但在G2/M无明显改变,G0/G1在高处理组凋亡率呈现增高的趋势;低处理组中的Wnt-2信号通路中的表达少于对照组(P0.05),与低处理组相比高处理组中表达最低(P0.05);qRT-PCR显示:低处理组的β-catenin mRNA表达少于对照组,在高处理组中β-catenin mRNA表达少于低处理组。结论苦参碱可以加快肺癌H466细胞凋亡,在这过程中可能与阻断Wnt信号通路传导有关,苦参碱可以阻断Wnt信号表达,抑制肺癌细胞分化。     

Galectin-3基因调控Wnt/β-catenin信号通路对肺癌细胞凋亡的影响

目的探讨半乳糖凝集素(Galectin)-3基因对肺癌细胞凋亡的影响及机制。方法将NC-siRNA、Galectin-3-siRNA1和Galectin-3-siRNA2转染人肺癌A549细胞,未转染任何的siRNA作为对照组,转染48 h后提取细胞中的蛋白,Western印迹检测各组细胞中Galectin-3蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western印迹检测酶切含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved caspase)3、β-链蛋白(catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白表达。结果 NC-siRNA组Galectin-3蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),Galectin-3-siRNA1、Galectin-3-siRNA2组Galectin-3蛋白表达均显著低于对照组(P<0.01),Galectin-3-siRNA1组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;与对照组及NC-siRNA组比较,Galectin-3-siRNA组β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论抑制Galectin-3在肺癌细胞中的表达可诱导细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

PAK6基因对人乳腺癌放疗敏感性及细胞凋亡影响及机制

目的探讨P21激活的蛋白激酶(PAK)6基因对乳腺癌细胞放疗敏感性及细胞凋亡的影响。方法以乳腺癌细胞MDA-MB-468为研究对象,细胞转染PAK6小干扰RNA(PAK6 siRNA组)和阴性对照序列(siRNA对照组),qRT-PCR和Western印迹检测转染效果。流式细胞术检测细胞凋亡,细胞克隆实验检测放疗敏感性,Western印迹检测细胞中β-连环蛋白(catenin)、Wnt信号通路下游靶基因c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3表达水平。结果 siRNA对照组PAK6mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率及细胞中β-catenin、c-myc、酶切Caspase-3蛋白水平与未转染组相比差异无统计学意义(P0.05)。PAK6 siRNA组PAK6 mRNA和蛋白水平均明显低于未转染组,细胞凋亡率及细胞中酶切Caspase-3蛋白水平明显高于未转染组,细胞中β-catenin、c-myc蛋白水平明显低于未转染组(P0.01)。PAK6 siRNA组放疗敏感性较未转染组显著增加,增敏比为:1.896。结论干扰PAK6表达能够促进乳腺癌细胞凋亡,增加乳腺癌细胞放疗敏感性,作用机制可能与Wnt信号通路及酶切Caspase-3水平有关。     

Wnt信号通路介导CIP2A沉默诱导肺癌细胞凋亡

目的探讨Wnt信号通路在沉默蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(CIP2A)对肺癌细胞凋亡影响中的作用。方法以H1299细胞为探讨对象,用CIP2A shRNA慢病毒感染后,Realtime PCR和Western印迹检测沉默效果。以Western印迹检测沉默CIP2A后的肺癌细胞中β-catenin、c-myc蛋白表达水平。用Wnt信号通路激活剂处理沉默CIP2A后的肺癌细胞,噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9、β-catenin、c-myc蛋白水平。结论 CIP2A shRNA慢病毒感染显著降低肺癌细胞中CIP2A表达水平。沉默CIP2A后的肺癌细胞增殖活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平显著升高,β-catenin、c-myc蛋白水平显著降低(P0.05)。Wnt信号通路激活剂可以逆转沉默CIP2A对肺癌细胞增殖抑制、凋亡促进作用,降低细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平,升高细胞中β-catenin、c-myc蛋白水平。结论 Wnt信号通路参与介导沉默CIP2A对肺癌细胞凋亡诱导作用。     

17β-雌二醇及Wnt/β-catenin信号通路对人成骨肉瘤细胞基质Gla蛋白表达的影响

目的观察17β-雌二醇(17β-E2 17β-estradiol)对骨肉瘤细胞(osteosarcoma MG 63)基质Gla蛋白(MGP Matrix GLA protein)表达的影响及Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用,探讨MGP在骨质疏松症发病过程中的可能机制。方法 17β-E2 10~(-10)、10~(-8)、10-6mol/L及雌激素受体抑制剂氟维司群(Faslodex简称ICI)10-7mol/L,ICI 10-7mol/L+17β-E2 10~(-8)mol/L干预MG63细胞48 h。用10~(-8)mol/L的17β-E2及200 ng/m L Wnt/β-catenin信号通路阻断剂Dickkopf1分泌蛋白-1(DKK-1)干预MG63细胞48 h。用10~(-8)mol/L17β-E2及MGP抑制剂华法林10μmol/L干预MG63细胞48 h。干预后的细胞提取蛋白及总RNA,后用荧光定量PCR及Western blotting观察MGP、β-catenin、Runx2、LRP5蛋白及基因的表达。结果 17β-E2能上调MGP的表达,10~(-10)、10~(-8)、10-6mol/L 17β-E2干预后,MGP mRNA的表达是对照组的4.63、7.16、2.95倍(P0.05),MGP蛋白的表达分别是对照组的1.17、1.58、1.28倍(P0.05),以10~(-8)mol/L 17β-E2的作用最明显。ICI能阻断17β-E2对MGP的上调作用,与单用17β-E2相比,差异有统计学意义(P0.05)。17β-E2能增加Wnt/β-catenin经典信号通路中相关蛋白的表达,β-catenin及Runx2 mRNA及蛋白的表达与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。DKK-1则阻断17β-E2对MGP、β-catenin、Runx2、LRP5的上调作用,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。华法林可阻断17β-E2的作用,与对照组相比MGP、β-catenin、Runx2、LRP5的表达均下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论 17β-E2调节成骨肉瘤细胞内Wnt/β-catenin信号通路同时也调节MGP表达,该作用可能是骨质疏松症发病的机制之一。