酶法制备甘油磷酸胆碱的研究

研究了水相体系中磷脂酶A<,1>水解大豆粉末磷脂制备甘油磷酸胆碱(GPC)的可行性,探讨了反应条件对磷脂酰胆碱(PC)转化率和GPC得率的影响.确定磷脂酶A<,1>催化制备GPC的最佳反应条件为:在pH 7的150 mL磷酸盐缓冲溶液中,粉末磷脂添加量5 g、CaCl2添加量0.50 g、酶添加量0.50 mL,温度55 ℃,反应时间6 h;利用LC-MS分析最佳条件下的反应液,得到PC转化率为98%,GPC得率达到95%;同时验证了在磷脂酶A<,1>催化制备GPC的过程中生成的溶血磷脂(LPC)Sn-2位不饱和脂肪酸发生了酰基转移,转移到Sn-1位.     

非水相生物催化制备甘油磷酸胆碱

通过在非水相中对生物催化剂脂肪酶水解大豆卵磷脂生成甘油磷酸胆碱的研究,确定最佳的工艺条件。结果表明：最佳条件为反应时间6h、反应温度40℃、pH5.0、加酶量12.5mg/mL、水含量4%,为了增加酶的利用率和减少有机溶剂的使用,反应1.5h后补加底物,补加质量为初始质量的50%,补加的底物质量浓度为0.437g/mL。在此工艺条件下,经高效液相色谱检测分析,3次平行实验测得反应液经水萃取后甘油磷酸胆碱产率为97%。该工艺为甘油磷酸胆碱的制备提供了一种可行的方法。     

乙醇冷冻法纯化分离大豆磷脂酰胆碱研究

以大豆粉末磷脂为原料,结合乙醇萃取和乙醇冷冻纯化两个步骤提取纯化磷脂酰胆碱;重点探讨乙醇冷冻纯化步骤工艺条件,考察冷冻时间、冷冻温度、料液比、乙醇浓度等因素对乙醇冷冻纯化效果影响,并在单因素试验基础上进行正交试验,确定最佳冷冻纯化工艺为:冷冻时间6h,冷冻温度-12℃,料液比1:8,乙醇浓度97.5%,在此条件下纯化分离,磷酯酰胆碱含量由45.8%提高至70.5%、得率为81.2%。     

微乳体系中磷脂酶A1水解磷脂酰胆碱的研究

在微乳体系中研究了新型磷脂酶A1(Lecitase Ultra)水解磷脂酰胆碱生成溶血磷脂酰胆碱的反应。磷脂酰胆碱既是反应底物,又是表面活性剂。分别讨论了底物浓度、酶浓度、水分含量对反应的影响,并采用响应面法分析了这3个主要因素的交互作用,确定反应的最佳工艺条件为:底物浓度0.0218 g/mL、酶浓度1.744 mg/mL、W0(水与表面活性剂的摩尔比值)为27.267、pH 5.0和温度50℃。经HPLC分析,反应转化率达到95.2%。     

HPLC-ESLD法分离测定大豆磷脂酰胆碱

通过HPLC-ELSD对大豆磷脂中的大豆磷脂酰胆碱进行了分离和检测.使用硅胶柱,以三氯甲烷-甲醇(88/12,V/V)为流动相,大豆磷脂酰胆碱在10 min内出峰.该法具有比HPLC-UV有更少的干扰、更高的检测灵敏度和更节省时间,同时该法具有良好的线性关系、分析准确度和分析精密度.该法可以方便地检测大豆磷脂中大豆磷脂酰胆碱的含量.     

非水介质中磷脂酶A1催化水解磷脂酰胆碱的研究

在非水介质中,采用磷脂酶A1——Lecitase Ultra作为催化剂研究了PC的水解反应。经HPLC分析,在不同的溶剂体系中,水解产物亦不同。溶剂和界面的疏水性质是影响产物组成的关键因素。水分含量对反应初速率的影响显著,非极性溶剂中的最大反应初速率大于极性溶剂体系中的。     

溶剂法精制磷脂酰胆碱的研究

为了提高磷脂产品中磷脂酰胆碱(PC)的含量,研究了以浓缩大豆磷脂为原料,采用丙酮和乙醇作溶剂,制备高含量磷脂酰胆碱.用丙酮脱油时,在料溶比为15:200、提取时间15 min、提取温度40℃的最佳脱油工艺条件下,得到丙酮不溶物含量为97.6%的中间产物--粉末磷脂.用乙醇提取富集其中的磷脂酰胆碱,通过单因子试验,研究了粉末磷脂与溶剂的比例、乙醇浓度、提取温度、时间和次数对PC含量和提取率的影响.试验结果表明,在乙醇浓度95%,固液比1:20,提取时间30 min,温度35℃,抽提次数2次的条件下,PC含量和提取率均较优.在最佳试验条件下,PC含量可提高到45.1%,提取率为62.0%.     

高纯度磷脂酰胆碱研制

高纯度磷脂酰胆碱(PC)作为药物脂质体重要原料之一,是当今药物研究新成果及研究热点。该研究报道采用层析分离法提纯卵磷脂,并对物料浓度、填充剂、洗脱剂、及干燥等工艺参数进行研究,制备成PC含量达90%以上高纯度产品。     

水相体系酶法制备甘油磷脂酰胆碱的研究

研究了脂肪酶（Thermo4S-3）在水相体系中制备甘油磷脂酰胆碱（GPC）的可行性,并探讨了脂肪酶水解条件对GPC得率的影响。实验结果表明脂肪酶（Thermo4S-3）可以实现豆粉末磷脂的水解反应,具有制备甘油磷酸胆碱（GPC）的工业应用前景。正交实验优化结果如下:反应温度40℃,底物浓度33.3g/L,酶添加量30U/mL,CaCl2添加量2g/L。利用HPLC-ELSD进行定量分析,GPC得率达到96.5%。LC-MS/MS定性分析,GPC的结构与标样分析的一致。      

柱层析法制备高纯磷脂酰胆碱

对三氧化二铝柱层析法富集大豆磷脂酰胆碱(PC)过程中产生的溶血磷脂的分离及分析进行了探讨,用高效液相色谱法对PC进行了定性和定量分析。食品级大豆浓缩磷脂经丙酮脱油、乙醇萃取后,进行三氧化二铝柱层析,经95%乙醇洗脱,制备高纯磷脂酰胆碱,同时实现了柱洗脱中间产物溶血磷脂与PC的分离,所得产品中PC纯度接近100%。     

醇相体系制备高纯甘油磷脂酰胆碱的研究

探讨了在醇相体系中甲醇钠催化制备甘油磷脂酰胆碱(L-alpha glycerylphosphorylcholine)的可行性,建立了磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine)和L-α-GPC的HPLC-ELSD检测方法,研究了温度、料液比、甲醇钠添加量、反应时间对PC转化率和GPC得率的影响。利用Design Expert软件对工艺参数进行优化,得最佳条件:温度35℃、料液比3/20(g/mL)、甲醇钠添加量2 mL、反应时间1.5 h,GPC得率为88.2%。极差分析结果,反应条件对GPC得率影响的顺序为:甲醇钠添加量>温度>反应时间>料液比。大豆粉末磷脂的醇解反应液经过硅胶柱色谱纯化,最终可以得到纯度为99.8%的L-α-GPC,回收率78.4%,这为工业级规模制备高纯L-α-GPC提供了一种好的思路和方法。     

柱色谱纯化溶血磷脂酰胆碱的方法研究

利用磷脂酶A1水解蛋黄磷脂酰胆碱制备溶血磷脂酰胆碱(LPC),探讨柱色谱纯化溶血磷脂酰胆碱的可行性。通过实验确定固定相为硅胶,洗脱液为甲醇-氯仿(体积比为2.5∶1),进行LPC的纯化方法研究。得到最佳工艺条件为硅胶粒径为38～48μm,上样质量为300 mg(固定相质量为10 g),样品浓度为30 mg/mL,在最佳工艺条件下得到LPC产品的纯度为93.09%,回收率为82.06%,为工业上提纯LPC提供理论指导。     

乙醇低温提取纯化磷脂酰胆碱研究

该文研究在低温条件下,用乙醇作为溶剂,从大豆磷脂粉中精制磷脂酰胆碱工艺。通过单因素实验考察了提取温度、提取时间、乙醇浓度和料液比等因素在不同水平下对磷脂酰胆碱含量和得率影响。在综合考虑纯度和得率基础上,选取以乙醇(95%)为溶剂,提取温度–10℃、提取时间20 h、液料比为8∶1条件下进行中试。中试产品磷脂酰胆碱的纯度为71.74%,得率为13.48%。     

乙醇低温提取纯化磷脂酰胆碱研究

该文研究在低温条件下,用乙醇作为溶剂,从大豆磷脂粉中精制磷脂酰胆碱工艺。通过单因素实验考察了提取温度、提取时间、乙醇浓度和料液比等因素在不同水平下对磷脂酰胆碱含量和得率影响。在综合考虑纯度和得率基础上,选取以乙醇(95%)为溶剂,提取温度–10℃、提取时间20 h、液料比为8∶1条件下进行中试。中试产品磷脂酰胆碱的纯度为71.74%,得率为13.48%。     

HPLC-ELSD法测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱含量

该研究探讨采用HPLC–ELSD(蒸发光散射检测器)法测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱含量。结果表明,选用硅胶色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),磷脂酰胆碱(PC)和溶血磷脂酰胆碱(LPC)分别在0.5 mg/mL~8.0 mg/mL和0.4 mg/mL~6.0 mg/mL范围呈良好线性关系;PC和LPC平均回收率为99.42%和99.83%,相对标准偏差(RSD)分别为1.44%和1.21%。该法对大豆磷脂PC和LPC分析均具有良好精密度和重复性。     

油菜磷脂中磷脂酰胆碱的液相色谱分析方法

建立了油菜磷脂中磷脂酰胆碱的液相色谱分析方法.为了避免流动相在紫外(UV)200～210 nm处有吸收,对磷脂酰胆碱(PC)检测产生干扰,选用蒸发光散射检测器(ELSD)进行油菜磷脂中PC定量分析的研究.采用Alltima Silica 5u,250 mm×4.0 mm色谱柱,流动相为9:1(V/V)的甲醇/乙腈,流速为0.5 mL/min等度洗脱;ELSD检测器漂移温度为70℃,载气流速1.5 L/min,增益1.该法检测PC具有更少的干扰和更高的检测灵敏度,时间更节省,PC在15 min完成分析.在0.2068～1.034 mg/mL范围内,线性相关系数(R~2)为1.00,重复变异系数为1.16%,具有良好的线性关系和重复性,有较好的实用价值.     

HPLC-TLC/HPLC-MS法分离、鉴定与测定二亚油酰磷脂酰胆碱

应用HPLC/HPLC-MS研究了二亚油酰磷脂酰胆碱的测定方法,磷脂样品首先经过HPLC分离得到磷脂酰胆碱,该磷脂酰胆碱再进一步通过不同的HPLC系统分离二亚油酰磷脂酰胆碱,并通过标准样品和质谱进行二亚油酰磷脂酰胆碱的定性。定量方法通过标准样品外标法定量,由方法的回收率和精密度实验可知,该方法用来测定一般磷脂样品和磷脂酰胆碱样品中的二亚油酰磷脂酰胆碱含量,方法准确、可靠、简便。     

高纯度磷脂酰胆碱的制备及其脂肪酸分析

利用不同溶剂对大豆浓缩磷脂中各成分溶解性的差异,建立一种溶剂法制备高纯度大豆磷脂酰胆碱的新工艺。大豆浓缩磷脂通过丙酮脱油、乙醇提取、活性炭脱色、乙腈萃取,可制备纯度高达95% 以上的大豆磷脂酰胆碱。大豆磷脂酰胆碱的脂肪酸主要为多不饱和脂肪酸,其中亚油酸占总脂肪酸的70.71%、亚麻酸11.04%。     

磷脂及磷脂酰胆碱生物学功能

本文研究了磷脂的生物学功能及机理,认为在磷脂中,磷脂酰胆碱是最值得关注的磷脂之一。     

混合溶剂提取法从粉末磷脂中分离磷脂酰胆碱的研究

通过实验探讨了乙腈与低碳醇的混合溶剂用于提取粉末磷脂中磷脂酰胆碱（PC）的可行性。结果表明，混合溶剂在对粉末磷脂中PC的提取率和选择性上，综合性能大大优于单一溶剂。尤其是乙腈-甲醇混合溶剂，当乙腈和甲醇的体积比为4：1时，混合溶剂对PC一次提取的选择性和提取率分别达到72.8%和67.8%，实验结果还显示，溶剂的含水不利于PC的提取。