造血干细胞诱导大鼠肾脏移植免疫耐受

目的：以供体造血干细胞（HSC）诱导异基因大鼠肾脏移植免疫耐受,探讨免疫耐受的形成机制。方法：建立大鼠肾脏移植模型,通过免疫磁珠法负筛选系统提取供者骨髓中的造血干细胞。给低剂量放射线全身照射的Wistar大鼠管饲CsA,接着经尾静脉推注SD大鼠的造血干细胞,并当天完成肾移植。观察各组大鼠的存活时间,监测血清肌酐浓度,并进行移植肾彩色多普勒超声。采用体外混合淋巴细胞反应（MLR）法检测长期存活大鼠的免疫耐受状态。结果：实验组大鼠存活时间与对照组比较有显著差异。混合淋巴细胞培养提示,长期存活的受者脾细胞对供者脾细胞的刺激不表现出明显细胞增殖反应,而对无关大鼠脾细胞产生较明显的增殖反应。结论：应用造血干细胞能够成功地诱导出针对供者特异性的免疫耐受。     

MDR-1基因骨髓造血干细胞移植抑制大鼠肝癌移植术后复发的研究

目的探讨MDR-1基因骨髓造血干细胞移植对大鼠肝移植术后复发转移的影响。方法选用雄性Wistar大鼠30只为肝移植供体,另选雌性SD大鼠30只为异基因肝移植受体(将HCCLM6肿瘤组织原位接种于大鼠肝脏,10 d后行肝移植,2周后处死大鼠)随机分为两组,A组MDR-1基因骨髓造血干细胞移植联合肝移植组,B组为单纯肝移植组。比较两组大鼠肝移植术后2周生存率、肝内复发和肝外转移情况。结果术后两周,A组大鼠存活14只,B组存活10只(P<0.05)。两组大鼠肝内复发率均为100%,但复发瘤大小差异有统计学意义(P<0.05),A组为(323.23±29.56)mm3,B组为(692.73±142.56)mm3。A组肺转移率为22%,B组为70%,A组淋巴结转移率为15%,B组为50%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MDR-1基因骨髓造血干细胞移植对大鼠肝移植术后复发转移有一定抑制作用。     

HLA-G在异基因造血干细胞移植中诱导免疫耐受

目的 研究供者粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员前后外周血和骨髓中单个核细胞人白细胞分化抗原G(HLA-G)膜表达以及血浆和骨髓液中HLA-G水平,揭示G-CSF动员骨髓移植优于外周血干细胞移植与骨髓中HLA-G有关的机制.方法 流式细胞术检测外周血和骨髓中单个核细胞HLA-G膜表达以及酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆和骨髓液中HLA-G水平.结果 动员后膜结合型HLA-G(m HLA-G)在外周血和骨髓中均显著高于动员前(P=0.001,P=0.000),且动员后骨髓m HLA-G含量较外周血中高(P=0.001).动员后外周血中分泌型HLA-G(s HLA-G)较动员前无明显差异(P=0.279),动员后骨髓中s HLA-G较动员前明显增高(P=0.002),且动员后骨髓s HLA-G较动员后外周血中含量明显增高(P=0.004).结论 HLA-G在G-CSF动员后造血干细胞移植(HSCT)诱导免疫耐受中具有重要作用.     

TGF-β1诱导猕猴同种异体肝移植免疫耐受的实验研究

目的利用大型哺乳动物猕猴作为研究对象,建立同种异体原位肝脏移植模型.探讨TGF-β1对同种异体肝脏移植免疫耐受的诱导作用及机理.方法同种异体原位肝脏移植对照组及TGF-β1组各5例.对术后生存时间、肝功能、IL-2、IL-10、各时间段移植物的组织切片排斥反应的病理学分级结果及术后肝脏细胞凋亡指数进行观察分析.结果 （1）对照组移植猕猴平均存活时间为6.60d,TGF-β1组移植猕猴平均存活时间为14.90d,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;（2）肝功能变化：对照组移植猕猴术后ALT明显升高,ALB则明显降低;TGF-β1组ALT及ALB均维持于正常稳定水平;（3）细胞因子变化：对照组循环血中IL-2表达水平相对较高,而TGF-β1组IL-10的表达水平较对照组高;（4）移植物病理排斥反应分级：在移植术后第3天及以后各时间段TGF-β1组排斥反应程度明显比对照组轻;（5）对照组移植猕猴术后肝脏细胞凋亡指数（A）I较TGF-β1组明显升高.结论 （1）TGF-β1可以诱导移植后受体细胞因子网络发生Th1→Th2转变,从而诱导移植后免疫耐受,延长受体生存时间;（2）TGF-β1通过发挥多种免疫效应,在诱导移植耐受中具有重要作用;（3）细胞因子IL-2升高或者IL-10降低可能作为监测移植排斥反应或者免疫耐受的实验室指标之一.     

大鼠肝移植自发性免疫耐受的研究

目的建立大鼠肝移植自发性免疫耐受模型，初步了解其移植后的免疫学变化。方法按Kamada的双管套法，选用近交系Lewis（LEW）、Wistar Furth（WF）大鼠进行原位全肝移植，术后动态观察宿主的肝功能和肝脏病理变化。另外，观察移植后不同时期，宿主植入供体同源的心脏后的免疫耐受情况。结果LEW→WF肝移植后血清谷丙转氨酶（ALT）及总胆红素（TB）的峰值在术后第4天，ALT在2周内、TB在4周内基本恢复到正常范围内；但肝脏炎症细胞的浸润则在第2周最为明显。通过再移植供体心脏的方法提示宿主对供体的特异性免疫耐受是移植2周后建立的。结论该组合早期虽存在急性排斥反应，但术后不需给予免疫抑制剂，可以自然克服这种损害而长期生存，属自发性免疫耐受模型。     

CTLA4Ig与IDO基因共转染对大鼠肝移植后免疫耐受的影响

目的 研究经门静脉CTLA4Ig、IDO基因共转染对大鼠肝移植后免疫耐受的影响.方法 建立大鼠肝移植模型,将40只大鼠分为4组:CTLA4Ig-IDO组、CTLA4Ig组、IDO组、对照组.术后14 d处死5只大鼠并收集标本检测各组白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)、γ-干扰素(IFN-γ)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红集(TBIL)水平及T细胞凋亡的程度.结果 术后14 d,CLTA4Ig-IDO组血清中的AST、ALT、TBLI水平明显低于其余3组(P＜0.05).CTLA4Ig组、IDO组血清中的AST、ALT及TBLI水平均与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).对照组中IL-2、IFN-γ的mRNA及蛋白表达均高于CTLA4Ig-IDO组(P＜0.05),IL-4、IL-10、TGF-β的mRNA及蛋白表达均低于CT-LA4Ig-IDO组(P＜0.05).结论 CTLA4Ig-IDO基因共转染能够更加显著地改善肝移植后存活率及肝功能,并且能够通过诱导T细胞凋亡缓解急性排斥反应,形成肝移植免疫耐受.     

小剂量FK506作用下同种脾组织移植诱导大鼠原位肝移植术后免疫耐受的机制

目的:观察小剂量FK506作用下同种脾组织移植对大鼠肝移植术后免疫耐受的影响,探讨其可能的机制.方法:实验分5组(每组大鼠8只),同种肝移植组(A组)以纯系雄性Lewis大鼠为供体、雌性BN大鼠为受体进行同种原位肝移植;同种肝移植 小剂量FK506治疗组(B组)于肝移植术后口服途径给予小剂量FK506(0.25 mg/kg);同种肝脾联合移植组(C组)于肝移植同时移植供体脾脏;同种肝脾联合移植 小剂量FK506治疗组(D组)于肝脾联合移植后口服途径给予小剂量FK506;异体脾组织移植组(E组)于同种原位肝移植同时移植第三品系大鼠脾脏组织,术后进行小剂量FK506治疗.观察各组的存活期,并分析受体脾脏T淋巴细胞对同种抗原的反应性、嵌合体的形成情况以及肝脏病理变化.结果:与其他各组相比,C组大鼠的存活期明显延长;其受体T细胞同种抗原反应性明显降低;受体脾脏中供体阳性细胞明显升高(P＜0.01),且在60 d后受体脾脏中供体阳性细胞仍然较高;肝脏病理分析也未见明显排斥反应.结论:小剂量FK506作用下同种脾脏移植能明显诱导受体大鼠原位肝移植术后嵌合体的形成,降低受体T细胞对同种抗原的反应性,促进免疫耐受.     

肝脏移植的免疫耐受

肝脏移植的免疫耐受具有其独特性。在耐受的诱导形成中,中枢机制的重要性次于外周机制,供肝源性白细胞和树突状细胞起着重要作用。耐受的形成可能有微嵌合态和受体淋巴细胞活化相关的耐受两种机制参与,并具有剂量效应关系。因此,综合各种措施的方案或许能获得普遍耐受。     

雷公藤多甙诱导大鼠原位肝移植免疫耐受的作用

目的:探讨雷公藤多甙在大鼠肝移植急性排斥反应中诱导免疫耐受的作用。方法:本实验应用120只肝移植SD大鼠,分为四组:对照组(A组),TII组(B组),CsA组(C组),TII+CsA组(D组)。分别于术后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d检测脾脏细胞的CD4+、CD25+、CD8+、CD28+的蛋白表达。结果:三组治疗组的CD4+、CD25+、CD8+的蛋白活性表达均高于对照组,而CD28+的蛋白活性表达却相反。三组治疗组间的CD4+、CD28+的比较,均有显著性差异。结论:雷公藤多甙不但具有免疫抑制作用,而且还能够诱导一定程度的免疫耐受。     

半乳凝集素-9在诱导大鼠肝移植免疫耐受中的作用

目的通过观察半乳凝集素-9(Galectin-9)在大鼠肝移植急性排斥模型中的作用,探讨其在诱导肝移植免疫耐受中的机制。方法建立Lewis到BN大鼠肝移植急性排斥反应模型(n=30),受体分为3组,每组10只。转染组于肝移植冷缺血期经门静脉转染重组galectin-9腺病毒质粒2 ml,空质粒组灌注2 ml空腺病毒载体,对照组灌注2 ml生理盐水。术后7 d各组处死5只大鼠,余观察生存率,采用Banff分级观察移植物排斥程度;实时荧光定量PCR检查肝组织Galectin-9、T-bet、RORγt mRNA表达水平;Western blot检测肝组织IFN-γ及IL-17蛋白表达水平。结果术后7 d转染组Banff评分Ⅰ～Ⅱ级,空质粒组及对照组为Ⅲ级;转染组、空质粒组及对照组Galectin-9 mRNA水平依次为(1.14±0.05)、(0.46±0.03)、(0.49±0.07),转染组Galectin-9 mRNA水平较其余2组明显增加(P<0.05)。转染组、空质粒组及对照组T-bet及RORγt mRNA表达水平分别为(0.27±0.07)、(1.26±0.12)、(1.31±0.08)和(0.57±0.13)、(1.57±0.09)、(1.58±0.07),转染组T-bet及RORγt mRNA表达水平明显低于其余2组(P<0.05);转染组、空质粒组及对照组IFN-γ及IL-17蛋白表达水平分别为(0.39±0.06)、(1.28±0.11)、(1.47±0.05)和(0.64±0.07)、(1.52±0.05)、(1.67±0.04),转染组IFN-γ及IL-17蛋白表达水平低于空质粒组及对照组(P<0.05)。结论 Galectin-9通过清除Th1/Th17细胞诱导肝移植免疫耐受形成。     

组蛋白去乙酰化酶11在诱导大鼠肝移植免疫耐受中的作用

目的通过观察组蛋白去乙酰化酶11(histone deacetylase 11,HDAC11)及IL-10表达水平在3种大鼠肝移植模型中的变化,探讨肝移植免疫耐受形成的相关机制。方法纯系Lewis和BN大鼠各30只,建立肝移植排斥模型后将受体分为排斥组(Lewis-BN)、免疫抑制剂干预组(Lewis-BN)、耐受组(BN-lewis),每组10只。干预组于术后1~7 d以1 mg/kg肌肉注射他克莫司(FK506);分别于术后7 d处死受体。移植物排斥反应程度采用Banff评分标准;免疫荧光组织化学观察HDAC11表达情况;实时荧光定量PCR及Western blot测定肝组织HDAC11 mRNA和蛋白表达水平;酶联免疫吸附法检测血清IL-10及IFN-γ的含量。结果术后7 d,排斥组为严重的急性排斥反应,Banff评分Ⅲ级,干预组为Ⅱ级,耐受组为0~I级。排斥组HDAC11 mRNA及蛋白表达的水平明显高于干预组和耐受组(P<0.05),耐受组表达量最低,与干预组有统计学差异(P<0.05)。排斥组IL-10表达明显低于干预组和耐受组(P<0.05);而IFN-γ含量排斥组明显高于干预组和耐受组(P<0...     

泡状棘球蚴感染纯系大鼠肝移植免疫耐受的实验研究

目的:探讨感染泡球蚴的大鼠原位肝移植(Orthotopiclivertransplantation,OLT)后免疫系统的变化特点及其对移植物的影响。方法:分为3组:(1)A组为正常对照组(同系移植):健康(Lewis)LEW大鼠→健康LEW大鼠;(2)B组为对照组(非同系移植):健康BrownNorway(BN)大鼠→健康LEW大鼠;(3)C组为实验组:BN大鼠→LEW大鼠(感染泡球蚴后3个月)。术后LEW大鼠存活48h判定为肝脏移植手术成功。每组于术后1、3、5、7d4个时间点各处死2只LEW大鼠,取血清及移植的肝脏、脾脏。每组留8只用于观察生存期。结果:A组、B组、C组受体存活时间平均为(54.13±16.62)d、(4.75±1.58)d、(15.50±3.93)d,差异有统计学意义(P<0.05)。病理结果示:(1)A组无排斥反应现象;(2)B组排斥反应随移植天数的增加逐渐加重,术后1、3、5、7d分别出现0、1、2、3级排斥反应;(3)C组第7天出现1级排斥反应。结论:感染泡状棘球蚴后有利于同种异体移植物的存活;该模型为研究感染泡球的肝脏移植提供了良好的实验平台     

小鼠对大鼠异种皮肤移植耐受的诱导

目的探索更为温和的适合临床应用的诱导异种移植耐受的方案。方法给小剂量照射（ 300 rad）的 C57BL/6 (B6)小鼠静脉注射抗小鼠 CD4单抗 0.5 ml后输注 Lewis大鼠骨髓细胞 ,并联合应用腹腔注射环磷酰胺诱导耐受。于耐受诱导后 30 d对受体小鼠作耐受状态的检查,包括供体特异性皮肤移植、混合淋巴细胞反应（ MLR）及迟发型超敏反应（ DTH）。并通过过继转移实验、外源 IL- 2对耐受小鼠供体特异性 MLR的影响等进一步探讨耐受形成的机制。结果 Lewis大鼠的皮肤移植物在耐受 B6小鼠中存活期特异性延长, MLR及 DTH检查证明 B6小鼠对 Lewis大鼠的脾细胞产生特异性耐受,对无关第三者 DA大鼠及 BALB/c小鼠的脾细胞仍表现出强烈的免疫应答。体内外过继转移实验表明 ,耐受不能被转移 ,未发现抑制细胞的存在。耐受小鼠供体特异的 MLR可以被外源 IL- 2逆转 ,说明耐受主要不是克隆排除,而与克隆不应答有关。结论应用低剂量照射、骨髓移植、环磷酰胺及抗 CD4单抗等方法法可以有效诱导出小鼠对大鼠的移植耐受。     

非清髓性预处理联合髓腔内骨髓细胞输注诱导免疫耐受的实验研究

目的本研究通过非清髓性预处理方案联合髓腔内骨髓移植建立异基因小鼠免疫耐受模型,并探讨其诱导耐受的机理.方法受鼠C57BL/6(B6)于第0天接受60Coγ射线全身照射(TBI,550-cGy),4 h内输注雄性BALB/C(H2d)小鼠来源的骨髓细胞,2 d后腹腔注射环磷酰胺(CTX,200 mg·kg-1).通过皮肤移植、混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction, MLR)检测耐受状态,并应用体外过继转移实验、IL 2逆转实验等探讨免疫耐受机制.结果经骨髓移植的B6小鼠对BALB/C小鼠的皮肤移植物平均存活时间超过300d,较空白组明显延长(P＜0.001);MLR结果证明B6小鼠获得供体特异性耐受,该耐受可以被IL 2逆转且可被过继转移;所有受鼠均未出现GVHD表现.结论非清髓预处理联合髓腔内骨髓移植可以有效诱导异基因小鼠的免疫耐受.     

骨髓干细胞在大鼠移植肝中的诱导分化

目的 研究骨髓干细胞在大鼠移植肝中的诱导分化情况及对大鼠长期存活的影响.方法 雌性受体大鼠随机分3组:空白对照组(A组)、D-hanks液组(B组)、骨髓干细胞组(C组).观察大鼠的中位生存时间、肝组织病理变化,基因Sry原位杂交和甲胎蛋白免疫组化双检测观察骨髓干细胞的分化情况.结果 C组中位生存时间大于180 d(P＜0.05);C组无明显的急性排斥反应.基因Sry原位杂交阳性,并且表达甲胎蛋白.结论 骨髓干细胞门静脉输注能减轻急性排斥反应,诱导大鼠肝移植术后长期存活;并能在移植肝的环境中诱导分化为肝细胞,表达甲胎蛋白,并逐渐替代移植肝本身的细胞.     

经脾脏注射未成熟树突状细胞对大鼠小肠移植免疫耐受的诱导作用

目的:研究经脾脏注射末成熟树突状细胞(iDC)对大鼠小肠移植免疫耐受的诱导.方法:健康成年F344大鼠为供体,SD大鼠为受体.随机分为4组(n=10),A组(阴性对照组):移植前7天,受体经阴茎背静脉注射生理盐水1ml;B组(阴性对照组):移植前7天,受体经脾脏注射生理盐水1ml;C组(iDC阴茎背静脉注射组):移植前7天,受体经阴茎背静脉注射供体的iDC,细胞数为2 X 106个;D组(iDC脾脏注射组):移植前7天,受体经脾脏注射供体的iDC,细胞数为2 X 106个.4组1周后行大鼠异位节段性小肠移植术.观察各组受体存活情况,移植小肠采用病理学检查及细胞凋亡检测.结果:D组大鼠移植小肠存活时间为(17.50±1.05)天,较A组(7.17±1.17)天、B组(7.33±1.51)天、C组(12.83±2.79)天显著延长:D组移植小肠炎性细胞浸润、黏膜组织结构破坏程度和黏膜细胞的凋亡数目明显低于A、B、C组.结论:经脾脏注射供体来源的iDC,可在一定程度上诱导受体产生免疫耐受,显著延长受体大鼠小肠移植术后的存活时间.     

Semi-mature MyD88-silenced bone marrow dendritic cells prolong the allograft survival in a rat model of intestinal transplantation

Background  Semi-mature dendritic cells (DCs) may induce tolerance rather than immunity. However, little is known about the regulatory mechanism by which these DCs induce transplant tolerance. Myeloid differentiation factor 88 (MyD88) is a key adaptor of Toll-like receptor signaling, which plays a critical role in DC maturation. Activation of MyD88-silenced immature DCs results in the generation of semi-mature DCs. We explored the possibility of using these DCs to induce intestinal transplant tolerance in rats.

Methods  MyD88 expression was silenced in bone marrow DCs (F344 rats) using small interfering RNAs for 24 hours, at which point, lipopolysaccharide (LPS) was added to the culture for another 48 hours. These cells were analyzed for their in vitro and in vivo tolerizing capacities.

Results  Semi-mature DCs expressing moderate levels of MHC class II and low levels of co-stimulatory molecules were found to produce interleukin (IL)-10, while IL-12 production was decreased. In vitro co-culture with completely allogeneic T cells from Wistar rats led to a significant decrease in alloreactive T-cell responses. In vivo, the transfer of semi-mature DCs (1×10⁶ cells) followed by the transplantation of fully mismatched intestinal grafts (F344 rats) led to significantly prolonged survival compared to rats receiving immature and mature DCs. Serum from semi-mature DC-treated rats contained lower concentrations of the pro-inflammatory cytokines IL-2 and interferon-γ 5 days after transplantation.

Conclusion  Semi-mature DCs may promote inducible allograft tolerance and this study suggests a new strategy by which to facilitate the induction of transplant tolerance.