吗啡和芬太尼对人胃癌MGC-803细胞迁移能力的影响

目的 观察吗啡、芬太尼对人胃癌MGC-803细胞迁移能力的影响.方法 将含0.1、10.0、1000.0μmol/L吗啡及0.0001、0.0100、1.0000 μmol/L芬太尼的细胞培养液,分别与胃癌MGC-803细胞一同孵育48 h,同时设空白对照组.应用划痕试验检测细胞迁移能力,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测胃癌MGC-803细胞中磷酸酶基因(PTEN) mRNA和蛋白的表达.结果 划痕损伤48 h后,各吗啡组及各芬太尼组细胞的愈合率均低于对照组,细胞迁移能力下降(P＜0.05);RT-PCR和Western blot结果显示,吗啡或芬太尼均使胃癌MGC-803细胞PTEN mRNA和蛋白表达增高(P＜0.05).结论 吗啡和芬太尼可通过促进PTEN的表达而使胃癌MGC-803细胞的迁移能力降低.     

吗啡对人胃癌MGC-803细胞磷酸酶基因表达和NF-κB活性的影响

目的 探讨吗啡对人胃癌MGC-803细胞磷酸酶基因(PTEN)和NF-κB活性的影响.方法 胃癌MGC-803细胞随机分为对照组和吗啡组(n=6):对照组不加任何药物,吗啡组将吗啡加入细胞培养液中使吗啡终浓度为0.1μmol/L.孵育24 h后应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,应用RT-PCR和Western blot法检测胃癌MGC-803细胞PTEN表达和NF-κB活性.结果 与对照组比较,吗啡组胃癌MGC-803细胞凋亡率升高,PTEN表达上调,NF-κB活性降低(P＜0.05).结论 吗啡可通过上调PTEN表达,降低NF-κB活性促进胃癌MGC-803细胞凋亡.     

吗啡对胃癌细胞生物学性状的影响

目的 观察吗啡对人胃癌MGC-803细胞生物学性状的影响.方法 将吗啡加入细胞培养液中使吗啡浓度分别稀释至0.1、10、1000 μmol/L,分别与胃癌MGC-803细胞一同孵育,应用噻唑蓝(MTT)比色法绘制12、24、36、48、60、72h的细胞生长曲线并计算细胞增殖率,7d后应用克隆形成实验检测MGC-803细胞生长增殖的变化;应用流式细胞仪检测MGC-803细胞周期和细胞凋亡的变化,用透射电子显微镜观察MGC-803细胞超微结构的变化.结果 吗啡使胃癌细胞生长缓慢,0.1 μmol/L吗啡组、10 μmol/L吗啡组、1000 μmol/L吗啡组细胞增殖率分别为对照组的(81.89±6.44)%、(78.52±4.68)%和(78.53±5.68)%(P＜0.05),3组细胞的克隆形成率分别为(0.76±0.18)%、(0.72±0.17)%和(0.56±0.18)%,低于对照组的克隆形成率(1.19±0.29)%(P＜0.05);与对照组比较,各吗啡组细胞周期G2/M期比例上升,G0/G1期和S期比例下降(P＜0.05);0.1μmol/L吗啡组、10 μmol/L吗啡组、1000 μmol/L吗啡组细胞凋亡率分别为(17.20±2.95)%、(19.13±3.86)%、(24.38 ±4.94)%,明显高于对照组的凋亡率(11.40±2.86)%(P＜0.05);透射电镜显示吗啡使胃癌细胞出现明显的凋亡表现.结论 吗啡抑制胃癌MGC-803细胞的生长增殖,促进胃癌细胞的凋亡.     

吗啡对人胃癌MGC-803细胞p53 mRNA和E2F-1 mRNA表达的影响

目的 探讨吗啡对人胃癌MGC-803细胞p53 mRNA和E2F-1 mRNA表达的影响.方法 人胃癌MGC-803细胞以1×103/ml或2×105/ml密度接种于6孔培养板中,1 ml/孔,随机分为2组(n=18),正常对照组(C组)不作任何处理,吗啡组(M组)加入吗啡,使其终浓度为10μmol/L.于吗啡孵育7 d时应用克隆形成实验测定细胞增殖情况,于吗啡孵育24 h时测定细胞中p53 mRNA、E2F-1 mRNA的表达情况,并采用透射电子显微镜观察细胞超微结构.结果 与C组比较,M组克隆形成率降低,p53 mRNA表达上调,E2F-1 mRNA表达下调(P＜0.05).C组细胞核膜完整、核仁及染色质清晰,M组细胞核膜破裂、核仁碎裂,并出现凋亡小体.结论 吗啡可上调人胃癌MGC-803细胞p53基因表达、下调E2F-1基因表达,从而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.     

外源性FasL基因诱导Caspase-3的表达及胃癌细胞凋亡的研究

目的　研究FasL基因转染胃癌细胞中Caspase 3的表达并观察其与胃癌细胞凋亡的关系。方法　逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、流式细胞术和免疫组织化学检测Caspase 3在FasL基因转染的SGC 790 1胃癌细胞中的表达 ,流式细胞术、原位末端标记 (TUNEL)检测胃癌细胞凋亡。结果　Caspase 3在SGC 790 1母系细胞中低水平表达 ,转移FasL基因后的SGC 790 1/FasL细胞的Caspase 3的表达显著升高 (P <0 .0 1) ,同时胃癌细胞凋亡率升高 (2 5 .4%vs 7.2 % ,P <0 .0 0 1) ,凋亡率与Caspase 3的表达呈明显正相关关系 (r =0 .64 7,P <0 .0 1)。结论　Caspase 3在胃癌发生中起重要作用 ;FasL基因转染的胃癌细胞的凋亡与其Caspase 3的表达增加有密切关系。     

吗啡对胃癌细胞Survivin和Caspase-9表达的影响

目的 观察吗啡对人胃癌MGC-803细胞Survivin和Caspase-9基因表达的影响.方法 胃癌MGC-803细胞分为两组:对照组和吗啡组.对照组不加任何药物,吗啡组将吗啡加入细胞培养液中使吗啡终质量浓度为0.1 μmol/L.孵育24h后应用流式细胞仪检测细胞凋亡,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测胃癌MGC-803细胞中Survivin和Caspase-9基因mRNA和蛋白的表达.结果 吗啡组胃癌细胞凋亡率为(17.20±2.95)％,明显高于对照组的凋亡率(11.40±2.86)％(P＜0.05);RT-PCR和Western blot结果显示,吗啡组胃癌细胞中Survivin mRNA和蛋白表达降低,而Caspase-9 mRNA和蛋白表达增高(P＜0.05).结论 0.1μmol/L吗啡通过抑制Survivin的表达、增强Caspase-9的活性而促进胃癌细胞的凋亡.     

纳洛酮复合吗啡对胃癌MGC-803细胞生长的影响

本研究旨在观察纳洛酮复合吗啡对胃癌细胞生长的影响,现报道如下. 一、材料与方法 1.细胞培养及分组:人胃癌MGC-803细胞接种在6孔或96孔培养板中,分为4组,每组54孔.对照组(C组)不加任何药物;吗啡组(M组)或纳洛酮组(N组)分别在培养液中加入吗啡(东北制药集团公司沈阳第一制药厂,批号:080701-1)或纳洛酮(北京华素制药股份有限公司,批号:1107131),使药物的终质量浓度分别为0.10 mmol/L或0.01 mmol/L;吗啡+纳洛酮组(MN组)则先在培养液加入纳洛酮,使其终质量浓度为0.010 mmol/L,孵育30 min后再将吗啡加入培养液中使其浓度为0.1 mmol/L继续孵育.     

芬太尼对人胃癌MGC-803细胞活力的影响

目的 评价芬太尼对人胃癌MGC-803细胞活力的影响.方法 人胃癌MGC-803细胞,接种于6孔或96孔培养板中,随机分为3组(n=60),正常对照组(C组)不作任何处理,低浓度芬太尼(F1组)和高浓度芬太尼组(F2组)芬太尼的终浓度分别为0.01、1.00 μmol/L,分别于芬太尼孵育12、24、36、48、60、72 h时测定细胞活力,于芬太尼孵育7 d时测定细胞增殖情况,于芬太尼孵育24 h时测定细胞周期和细胞凋亡情况,于芬太尼孵育24 h时采用透射电子显微镜观察细胞超微结构.结果 与C组比较,F1组和F2组细胞活力、克隆形成率和S期比例均降低,细胞凋亡率和G2/M期比例升高(P＜0.05);F1组与F2组比较上述指标差异无统计学意义(P＜0.05);C组细胞核膜完整、核仁及染色质清晰,F1组细胞核膜及核仁碎裂、染色质边集,F2组细胞核膜破裂、核仁碎裂,并出现凋亡小体.结论 芬太尼可抑制人胃癌细胞的活力,其机制与诱导促细胞凋亡作用有关.     

纳洛酮复合吗啡对裸鼠人胃癌皮下瘤生长的影响

目的观察纳洛酮复合吗啡对裸鼠人胃癌皮下瘤生长的影响。方法建立裸鼠人胃癌MGC-803细胞皮下瘤模型,将50只裸鼠随机分为五组:对照组(C组)、生理盐水组(S组)、20mg/kg吗啡组(M组)、1mg/kg纳洛酮组(N组)、1 mg/kg纳洛酮+20 mg/kg吗啡组(NM组),每组10只。成瘤后,C组不作任何处理;S、M、N组裸鼠每天在右下腹分别腹腔注射生理盐水1.5ml/kg、吗啡20mg/kg或纳洛酮1mg/kg;NM组裸鼠每天在右下腹先腹腔注射纳洛酮1mg/kg,30min后再给予吗啡20mg/kg;连续注射14d。每2天测量1次肿瘤的长径和短径,计算肿瘤相对体积(RTV);用药结束后拉颈处死裸鼠,采用透射电镜观察肿瘤组织的结构变化,免疫组化、半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测肿瘤组织中Cyclin D1、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达。结果 M组裸鼠皮下瘤RTV为(2.21±0.62)%,明显小于C组的(3.16±0.68)%、S组的(2.98±0.61)%、N组的(3.16±0.35)%和NM组的(2.64±0.37)%(P0.05);NM组裸鼠皮下瘤RTV明显小于C、S和N组(P0.05)。电镜下,C、S、N及NM组皮下瘤组织结构基本正常,M组皮下瘤细胞出现胞浆空泡化、核膜破裂、核染色质边集等。M组裸鼠皮下瘤组织内Cyclin D1、VEGF、MMP-9阳性染色肿瘤细胞、mRNA和蛋白的表达明显低于C组(P0.05);NM组裸鼠皮下瘤组织内Cyclin D1、VEGF、MMP-9阳性染色肿瘤细胞、mRNA和蛋白的表达明显高于M组(P0.05)。结论吗啡可抑制裸鼠人胃癌皮下瘤的生长,纳洛酮可拮抗这一作用,其机制可能与其调节Cyclin D1、VEGF、MMP-9的表达有关。     

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

[目的]探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素（minocyc line）对Caspase-3表达及细胞凋亡的影响。[方法]成年大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组（A组）和应用生理盐水对照组（B组），于损伤后不同时点取材，用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，用免疫组化染色检测Caspase-3表达阳性细胞，原位末端标记法（TUNEL法）标记凋亡细胞。[结果]HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组。A、B两组均发现凋亡细胞及Caspase-3表达，神经细胞凋亡指数及Caspase-3表达均B组〉A组（P〈0．01）。[结论]二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡。     

芬太尼对胃癌MGC-803细胞E2F-1、p53基因表达的影响

目的观察芬太尼对人胃癌MGC-803细胞生长增殖及E2F-1、p53基因表达的影响。方法芬太尼10-4μmol/L与胃癌MGC-803细胞共同孵育为芬太尼组,未加入芬太尼的胃癌MGC-803细胞孵育为对照组。7d后检测胃癌MGC-803细胞生长增殖的变化,观察细胞超微结构的变化,检测细胞E2F-1、p53基因的表达。结果与对照组相比,芬太尼组MGC-803细胞生长增殖缓慢,细胞克隆形成率更低(P<0.05);细胞胞质深染、细胞核固缩、染色质碎裂,出现明显的凋亡表现;细胞E2F-1基因表达增加、p53基因表达减少。结论 10-4μmol/L芬太尼可抑制胃癌MGC-803细胞的生长增殖,促进细胞的凋亡,并改变E2F-1、p53基因的表达。     

2-脱氧-D-葡萄糖联合氟尿嘧啶对胃癌细胞MGC-803凋亡影响的实验研究

目的探讨糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）与氟尿嘧啶（5-Fu）单独及联合应用对人胃癌细胞MGC-803增殖及凋亡的影响。方法实验设立2-DG组、5-Fu组、联合组（2-DG＋5一Fu）及空白对照组,将2-DG（10mmol／L）及5-Fu（5．0μg／L）单药及联合用药作用于人胃癌细胞MGC-803,MTT法检测各组MGC-803细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果2-DG和5-Fu均可使胃癌细胞增殖受到抑制并可诱导细胞凋亡,两药合用后其作用明显增强。结论2-DG能有效抑制人胃癌细胞MGC-803细胞生长增殖,并诱导其凋亡;2-DG与5-Fu联合应用抗肿瘤作用明显增强。     

野生型P53基因诱导人胃腺癌MGC—803细胞凋亡的实验研究

目的 观察野生型P53基因诱导人胃腺癌MGC－803细胞凋亡的现象,探讨野生型P53基因导入抑制细胞增殖的机制。方法 构建含目的基因P53腺病毒载体（AdCMV P53),转染P53基因表达缺失的人胃腺癌细胞MGC－803。应用流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳图谱及脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）技术检测细胞凋亡。结果 腺病毒介导的P53基因转染人胃腺癌细胞MGC－803后,流式细胞仪显示75．7％细胞生长停滞在G0／G1期,20．8％的细胞发生凋亡;琼脂糖凝胶电泳可观察到呈阶梯DNA区带图谱（DNA ladder);AdCMV P53转染组可见细胞凋亡,细胞核内有特异性的蓝黑色团块。结论 野生型P53基因通过诱导MGC－803细胞凋亡抑制细胞增殖。     

重组的r-Caspsae-3促凋亡基因体内外治疗胰腺癌的试验研究

目的 观察重组活化的Caspsae-3(r-Caspase-3)促凋亡基因对胰腺癌细胞(PC-Ⅱ)及裸鼠皮下种植瘤的治疗作用。方法 采用先前构建的r-Caspase-3促凋亡基因转染胰腺癌细胞，细胞形态学、DNA电泳、流式细胞学观察胰腺癌细胞凋亡状况；用脂质体-pcDNA3．1( )／r-Caspase-3复合物，治疗人胰腺癌细胞裸鼠种植瘤，观察肿瘤生长速度并计算肿瘤体积大小。结果 DNA电泳、流式细胞学可分别观测到特征性的DNA Ladder和凋亡峰，皮下种植肿瘤治疗后生长速度开始减缓，组织切片HE染色可见散在凋亡细胞；对照组肿瘤生长速度明显快于治疗组。结论 r-Caspase-3具有自催化凋亡诱导活性，以r-Caspase-3为目的基因的基因治疗可能为治疗胰腺癌以及其它恶性肿瘤开辟新的途径。     

The effects of morphine on human 5-HT3A receptors

5-HT3 receptors are ligand-gated ion channels that are involved in the modulation of emesis and pain. In this study, we investigated whether the opioid analgesic, morphine, exerts specific effects on human 5-HT3 receptors. Whole-cell patches from HEK-293 cells stably transfected with the human 5-HT3A receptor cDNA were used to determine the effects of morphine on the 5-HT-induced currents using the patch clamp technique. At negative membrane potentials, 5-HT induced inward currents in a concentration-dependent manner. The 5-HT3 receptor antagonist, ondansetron, (0.3 nM) reversibly inhibited the 5-HT-induced signals. Morphine reversibly suppressed 5-HT-induced peak currents as a function of concentration (IC50 = 1.1 microM, Hill coefficient = 1.2). The block by morphine decreased with increasing 5-HT concentrations, suggesting a competitive effect. In addition, the activation, as well as the inactivation, kinetics of the currents were significantly slowed in the presence of morphine. The morphine antagonist, naloxone, also inhibited 5-HT-induced currents (e.g., at 3 microM by 17%). The effects of morphine and naloxone were not additive. The potency of morphine and the competitivity of the blocking effect points to a specific mechanism at a receptor site rather than an unspecific membrane effect.