靶向IGF1R的siRNA抑制人肝癌细胞SMMC7721裸鼠移植瘤的实验研究

背景与目的:利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制哺乳动物基因表达已成为研究基因功能的一种有效方法.本研究探讨人胰岛素样生长因子1类受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)的短发夹环RNA对人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤的抑制作用.方法:设计并合成特异性靶向IGFIR的siRNA片段,构建SMMC7721-IGFlR-siRNA表达质粒,将其转入SMMC7721细胞.通过G418筛选出稳定株,移植裸鼠成瘤.同时设立对照组.根据体积的均数值绘制肿瘤生长曲线,以HE染色法观察质粒处理后瘤组织的病理改变,Western blot检测肿瘤组织中IGF1R的表达变化,免疫组化SP法检测检测瘤组织内微血管密度,原位末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果:SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤体积与SMMC7721-IGF1R-mutation组、SMMC7721组相比差异有统计学意义(P＜0.05).病理学检查及TUNEL检测发现,SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞凋亡指数[(50.2±6.4)%]明显高于SMMC7721.IGF1R-mutation 组[(5.4±1.0)%]和SMMC7721组[(6.0±2.1)%](P＜0.05).SMMC7721-IGF1R-siRNA组与SMMC7721-IGF1R-mutation 组、SMMC7721相比,瘤内IGFIR蛋白表达明显下调.SMMC7721-IGF1R-siRNA组微血管密度(11.3±4.4)与SMMC7721-IGF1R-mutation组(36.7±7.6)、SMMC7721组(28.4±6.5)相比明显下降(P＜0.05).结论:构建的SMMC7721-IGF1R-siRNA具有RNA干扰作用,能抑制SMMC7721细胞裸鼠移植瘤的生长.     

siRNA沉默PI3K基因激活FoxO3α基因并抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤生长的实验研究

目的:探讨应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默磷酸肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)基因对人乳腺癌细胞MCF-7中抑癌基因FoxO3α的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响.方法:构建PI3K基因siRNA质粒Psilencerl.0-U6-PI3K-siRNA;乳腺癌细胞株MCF-7裸鼠背部皮下接种,建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型,成瘤后将实验动物分3组,每组9只,1组注射Psilencerl.0-U6-PI3K-siRNA质粒、另2组分别注射Psilencerl.0-U6空质粒或0.9%的氯化钠溶液作为对照.观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间;并用Western印迹法检测瘤组织中FoxO3α和PI3K的表达.结果:PI3K-siRNA质粒治疗组裸鼠的肿瘤体积明显缩小(P＜0.01),平均生存时间显著延长(P＜0.01);肿瘤内PI3K基因表达水平明显下降,而FoxO3α基因的表达水平明显升高.结论:PI3K基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的PI3K基因的表达,上调抑癌基因FoxO3α的表达,抑制肿瘤生长,延长荷瘤鼠的生存时间.     

载双歧杆菌胞外多糖纳米粒子诱导人胃癌裸鼠移植瘤细胞的凋亡

目的: 制备载双歧杆菌胞外多糖纳米粒子（Bifidobacterium exopolysaccharideloaded nanoparticles，B.EPSNPs)，探讨B.EPSNPs对人胃癌细胞裸鼠移植瘤增殖和凋亡的影响。方法：取Fe3O4纳米粒子和B.EPS，采用乳化高温固化法制备B.EPSNPs。建立人源胃癌细胞(BGC823)裸鼠移植瘤模型，接种6 d后随机分为5组，分别以生理盐水、NPs、环磷酰胺（cytoxan,CTX）、游离B.EPS及B.EPSNPs进行灌胃治疗。观察各组瘤体的生长情况，TUNEL法检测细胞凋亡，透射电镜观察细胞超微结构，免疫组化法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)及凋亡调控基因bcl2、bax蛋白表达水平。结果：空载NPs和B.EPSNPs平均粒径分别为（560±21）nm、（960±32）nm，B.EPSNPs载药率为30％。B.EPSNPs对移植瘤的抑瘤率为（46.4±2.94）%，高于游离B.EPS组的(32.0±1.62)％和NPs组的(4.9±0.98)％。B.EPSNPs组移植瘤细胞凋亡指数明显高于B.EPS组\[（66.8±5.58）％ vs （41.3±4.26）％\]（P<0 .01)。透射电镜观察到B.EPSNPs治疗后的移植瘤细胞核染色质凝集成块状，出现了典型的凋亡特征。与B.EPS相比，B.EPSNPs组PCNA及bcl2的表达水平有所降低（P<0.01），bax的表达水平有所提高（P<0 .01）。结论：纳米粒子运载B.EPS增强了后者对胃癌细胞(BGC823)移植瘤的增殖抑制作用和促凋亡作用，提高了B.EPS的抗肿瘤活性。      

Surivin 启动子调控靶向IGF1R基因miR30-shRNA慢病毒的构建及抗肝癌细胞生长作用的研究(英文)

Objective  

The aim of the study was to investigate the interference and anti-tumor effects of lentiviral vector of miRNA targeting IGF1R gene regulated by survivin promoter.     

沙利度胺联合三氧化二砷抑制SMMC7721裸鼠移植瘤生长及毒副反应观察

目的：研究高低剂量沙利度胺（Tha）联合三氧化二砷（AsT）干预SMMC7721裸鼠移植瘤生长,检测移植瘤微血管密度（MVD）和核转录因子（NF—κB）表达,观察毒副反应。方法：取人肝癌细胞株SMMC7721接种于BALB／c裸鼠颈部皮下,随机分为7组。一周后按实验设计开始给药,每周称裸鼠体重,测移植瘤体积,连续给药4周。实验结束处死裸鼠,检测移植瘤MVD及NF-κB表达,鼠肺、肝、肾行HE染色,鼠血行血常规、ALT、cr分析。结果：各组间裸鼠体重差异无统计学意义（P〉0．05）。裸鼠接种成瘤率100％,各组瘤体积：组4〈组5〈组1〈组2〈组3〈PG〈NG,差异均有统计学意义（P〈0．05）。各组移植瘤MVD：组4〈组5〈组1〈组2〈组3〈PG〈NG,差异有统计学意义（P〈0．05）。各组移植瘤NF—κB表达：组4〈组5〈组3〈PG〈组1〈组2〈NG,差异有统计学意义（P〈0．05）。实验组肺、肝、肾组织细胞结构及裸鼠血常规、ALT、Cr检测结果与阴性对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：Tha联合AsT能够降低移植瘤MVD,下调NF—κB表达,具有协同抑瘤作用,毒副反应轻微,值得进一步研究。     

泌乳素诱导蛋白表达下调对三阴性乳腺癌细胞裸鼠体内成瘤影响研究

目的：探讨泌乳素诱导蛋白（prolactininducibleprotein,PIP）表达下调对三阴性乳腺癌（triplenegativebreastcancer,TNBC）MDA-MB453细胞在裸鼠体内成瘤的影响。方法：采用脂质体将PIPsiRNA转染至乳腺癌MDA_MB453细胞,蛋白质印迹法检测PIP的表达下调情况。采用4周龄BALB／c雌性裸鼠,建立乳腺癌MDA-MB-453细胞裸鼠皮下种植瘤模型,瘤内注射siRNA-脂质体混悬液,观察PIPsiRNA对肿瘤生长的影响。采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中CyclinDl和VEGF的表达情况。结果：PIP表达下调后,其在裸鼠体内成瘤能力明显降低,肿瘤平均体积空白对照组为（1075±65）mm2,阴性对照组为（1095±72）mm2,实验组为（473±56）mm2,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．719,空白对照组与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈0．001。空白对照组肿瘤平均体质量为（908士86）mg,阴性对照组为（889±64）mg,实验组为（272±30）mg,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．738,空白对照组与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈0．001。肿瘤生长抑制率为71．1％。免疫组化结果显示,PIP表达下调的肿瘤组织中CyclinD1的相对表达量空白对照组为1535±78,阴性对照组为1594±123,实验组为367±72,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．472,空白对照与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈O．001。VEGF的相对表达量空白对照组为4270±558,阴性对照组为4365±324,实验组为1286±292,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．758,空白对照与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈0．001。结论：下调PIP基因表达可明显抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞体内成瘤能力,提示PIP可能在乳腺癌发生和发展中发挥重要作用。     

HOXA13 在非小细胞肺癌组织中的表达及其对A549 细胞和移植瘤生长的影响

[摘要] 目的：探讨HOXA13 在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）组织中的表达及沉默HOXA13 基因表达对A549 细胞和移植瘤生长的影响。方法：收集2014 年3 月至2016 年4 月在焦作煤业集团有限责任公司中央医院胸外科接受手术切除治疗的112 例NSCLC癌组织和相对应的癌旁组织。qPCR实验检测NSCLC癌和癌旁组织中HOXA13 表达。培养A549 细胞并分为siRNA-HOXA13 组、阴性对照组和对照组,qPCR实验检测A549 细胞中HOXA13 表达,CCK-8 法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞侵袭能力。建立裸鼠移植瘤模型,观察裸鼠生长情况,5 周后处死,称瘤体质量并计算抑瘤率;qPCR实验检测瘤体组织中HOXA13 表达水平。结果：NSCLC 癌组织中HOXA13 mRNA相对表达量明显高于癌旁组织（1.83±0.13 vs 1.12±0.10,t=47.008,P=0.000）,其相对表达量与TNM 分期、分化程度和淋巴结转移相关（P<0.05）。siRNA-HOXA13 组细胞中HOXA13 mRNA相对表达量低于阴性对照组和对照组（均P<0.05）;siRNA-HOXA13 组24、48、72、96 h 时细胞增殖水平（D值）明显低于阴性对照组和对照组（F=30.727、5.427、13.816 和24.454,均P<0.05 或P<0.01）;siRNA-HOXA13 组侵袭细胞数低于阴性对照组和对照组（均P<0.05）;siRNA-HOXA13 组裸鼠移植瘤5 周时瘤体质量小于阴性对照组和对照组,而抑瘤率高于阴性对照组（均P<0.05）;siRNA-HOXA13 组裸鼠移植瘤组织中HOXA13 mRNA相对表达量低于阴性对照组和对照组（均P<0.01）。结论：NSCLC癌组织中HOXA13 呈高表达,且与肿瘤发生、进展及转移有关;特异性沉默HOXA13 基因表达可抑制细胞增殖和侵袭力,并抑制裸鼠移植瘤生长。     

IGF-1R表达下调抑制肾癌786-0细胞的增殖、迁移、侵袭和细胞周期G1/S期转变

目的:观察小干扰RNA (siRNA)介导的胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)基因沉默对肾癌细胞786-0增殖、迁移、侵袭和细胞周期的影响.方法:采用实时定量PCR(real-time PCR)和蛋白印迹法(West-ern blot)测定转染后肾癌细胞IGF-lR及下游相关产物的表达;采用Cell counting kit-8(CCK-8)检测细胞增殖能力;Transwell实验及划痕实验检测细胞迁移及侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变.结果:IGF-1R基因的siRNA可有效抑制IGF-1R mRNA及蛋白的表达(P＜0.01);细胞增殖实验结果显示IGF-1R-siRNA转染组增殖能力显著减弱(P＜0.01);Transwell实验及划痕实验结果显示IGF-1R-siRNA转染组侵袭及迁移能力明显降低(P＜0.01);流式细胞术检测到转染后细胞G1期细胞数明显升高,发生G1/S期阻滞(P＜0.05);IGF-1R下游蛋白p-IRS1、p-IRS2、p-SHC水平显著降低.结论:IGF-1R表达下调可以抑制肾癌786-0细胞的生长、增殖、迁移和侵袭的能力,并可以使肾癌786-0细胞G1/S期细胞周期停滞.     

Oncogenic functions of IGF1R and INSR in prostate cancer include enhanced tumor growth,cell migration and angiogenesis

We scrutinized the effect of insulin receptor (INSR) in addition to IGF1R in PCa using in vitro and in vivo models. In-vitro overexpression of IGF1R and INSRA, but not INSRB increased cell proliferation, colony formation, migration, invasion and resistance to apoptosis in prostate cancer cells (DU145, LNCaP, PC3). Opposite effects were induced by downregulation of IGF1R and total INSR, but not INSRB. In contrast to tumor cells, non-cancerous epithelial cells of the prostate (EP156T, RWPE-1) were inhibited on overexpression and stimulated by knockdown of receptors. In-vivo analyses using the chicken allantoic membrane assay confirmed the tumorigenic effects of IGF1R and INSR. Apart from promoting tumor growth, IGF1R and INSR overexpression also enhanced angiogenesis indicated by higher vessel density and increased number of desmin-immunoreactive pericytes. Our study underscores the oncogenic impact of IGF1R including significant effects on tumor growth, cell migration, sensitivity to apoptotic/chemotherapeutic agents and angiogenesis, and characterizes the INSR, in particular the isoform INSRA, as additional cancer-promoting receptor in prostate cancer. Both, the insulin-like growth factor receptor 1 and the insulin receptor exert oncogenic functions, thus proposing that both receptors need to be considered in therapeutic settings.     

annexin Ⅰ对胰腺癌细胞生物学行为影响的体内研究

目的 探讨annexin Ⅰ在胰腺癌发生过程中的作用.方法 应用RNA干扰技术,敲低annexin Ⅰ基因在mRNA水平的表达,并经Western blot检测证实.分别接种人胰腺癌Suit-Ⅱ细胞及转染annexin Ⅰ-siRNA2、annexin Ⅰ-siRNA3、annexin Ⅰ-siRNAN的Suit-Ⅱ细胞,建立裸鼠胰腺癌移植瘤模型,观察胰腺癌细胞的成瘤能力、肿瘤生长速度的变化,测定肿瘤体积和瘤重.结果 (1)Westernblot检测结果显示,转染pSilencer-annexin Ⅰ-siRNA1的Suit-Ⅱ细胞annexin Ⅰ表达显著降低,转染pSilencer-annexin Ⅰ-siRNA2和pSilencer-annexin Ⅰ-siRNA3的Suit-Ⅱ细胞annexin Ⅰ的表达几乎被完全抑制.(2)接种转染annexin Ⅰ-siRNA2、annexin Ⅰ-siRNA3细胞组的肿瘤生长速度较接种亲本Suit-Ⅱ细胞组明显减慢,肿瘤生长被抑制,抑制率分别达76.6%和68.4%.接种肿瘤细胞后44 d,接种转染annexin Ⅰ-siRNA2细胞组、接种转染annexin Ⅰ-siRNA3细胞组的瘤重分别为0.8987和0.8992 g,显著低于接种亲本Suit-Ⅱ细胞组和接种转染annexin Ⅰ-siRNAN细胞组(分别为2.5866和2.4070 g,P<0.001).结论 annexin Ⅰ基因在胰腺癌发生过程中起到了促进胰腺癌细胞生长增殖、增强胰腺癌细胞成瘤能力的重要作用,可作为基因治疗的潜在靶点.     

槲皮素对裸鼠人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤生长的抑制作用

目的研究槲皮素对裸鼠人肝癌细胞SMMC-7721移植瘤生长的影响。方法建立SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤模型,通过比较肿瘤体积（TV）、相对肿瘤体积（RTV）和相对肿瘤增殖率[T/C（%）]变化检测槲皮素对肿瘤生长的影响;采用免疫组织化学方法测试槲皮素对移植瘤微血管密度（microvessel density,MVD）的影响。结果槲皮素治疗组不同程度抑制裸鼠移植瘤的生长,腹腔注射给药4周后,TV、RTV和T/C%明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;槲皮素50 mg/kg处理组MVD值（19.35±2.88）与对照组的MVD值（42.56±4.98）比较明显降低,差异有统计学意义。结论槲皮素可抑制裸鼠人肝癌SMMC-7721移植瘤生长,降低移植瘤MVD,从而抑制肝癌的侵袭转移。     

乳腺癌组织中IGF1R、ER表达与新辅助化疗疗效的关系

目的:探讨乳腺癌组织中胰岛素样生长因子受体1（insulin-like growth factor receptor 1,IGF1R）、雌激素受体（estrogen receptor,ER）蛋白的表达对患者新辅助化疗疗效的影响。方法:对我院接受新辅助化疗的114例乳腺癌患者（2015年1月至2015年12月）进行回顾性分析,所有患者于化疗前均接受免疫组织化学检测,根据新辅助化疗结果将患者分为完全缓解（pCR）组25例、未完全缓解（nCR）组89例,采用非条件Logistic回归模型探讨IGF1R、ER表达与新辅助化疗疗效的关系。结果:IGF1R阳性表达患者的pCR率为19.23%,阴性表达患者的pCR率为24.19%,差异无统计学意义（P>0.05）;ER阳性表达患者的pCR率为14.08%,低于阴性表达患者的34.88%,差异具有统计学意义（P<0.05）;发生淋巴结转移、ER阳性表达患者会降低新辅助化疗的疗效（P<0.05）,分化程度越高,患者的新辅助化疗疗效越好。结论:ER阳性表达患者新辅助化疗疗效较差,IGF1R表达程度与患者新辅助化疗疗效无关。