siRNA干扰FLOT2基因表达对肾细胞癌细胞增殖的影响

目的:探讨FLOT2在肾细胞癌细胞株中的表达,并观察小干扰RNA沉默FLOT2基因对肾细胞癌786-O细胞增殖能力的影响。方法:将化学合成的FLOT2的小干扰siRNA用脂质体 Lipofectamine2000转染至肾细胞癌786-O细胞;分别用RT-PCR、Western blot方法检测细胞转染前后FLOT2以及细胞增殖相关因子CCND1的表达。CCK-8与克隆形成实验检测其增殖情况。结果:转染FLOT2-siRNA的肾细胞癌786-O细胞,RT-PCR、Western blot检测显示FLOT2在基因及蛋白水平明显下调（P<0.05）;与对照组比较786-O细胞增殖能力明显下降（P<0.05）,细胞增殖相关因子CCND1明显下调（P<0.05）。结论:FLOT2在肾细胞癌细胞系中高表达,采用特异性FLOT2-siRNA 能够显著降低FLOT2和CCND1表达。干扰FLOT2表达能显著抑制786-O细胞的增殖,FLOT2基因可能参与了肾细胞癌的生物学行为。     

肝细胞肝癌组织MCM2和FAP-1表达及其与癌细胞增殖和凋亡的相关性研究

目的:研究微型染色体维持蛋白2(MCM2)和Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)在肝细胞肝癌组织中的表达及其与肝细胞肝癌增殖和凋亡的关系。方法:免疫组化SP法检测40例肝细胞肝癌、15例癌旁肝硬化和10例正常肝组织中MCM2和FAP-1蛋白的表达水平并进行分析。结果:40例肝细胞肝癌组织中29例MCM2表达阳性,28例FAP-1表达阳性,而在癌旁肝硬化和正常肝组织中两者均未见表达。肝细胞肝癌组织中MCM2的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小和转移差异无统计学意义,P>0.05;而与分化程度有关,肿瘤分化越低,MCM2阳性率越高,P<0.05。MCM2与FAP-1两者呈正相关,P<0.05。结论:MCM2和FAP-1可能均参与了肝细胞肝癌的发生发展,两者可能相互协同共同促进了癌细胞异常增殖。     

肾细胞癌中c-IAP1的表达和细胞凋亡的研究

目的　探讨凋亡抑制蛋白(c IAP1)在肾细胞癌中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法　应用免疫组织化学技术和末端脱氧核苷酸转移酶介导的X dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测2 8例肾细胞癌中c IAP1的表达与细胞凋亡。结果　2 8例肾细胞癌c IAP1阳性率为5 7.1% ,9例正常肾组织c IAP1阳性率为11.1% ,差别有显著意义(P <0 .0 5 )。c IAP1表达与AI呈负相关(n =16,r= -0 .86) (P <0 .0 1)。结论　c IAP1引起的凋亡抑制与肾细胞癌的发生和发展关系密切,为靶向c IAP1的抗肾细胞癌治疗提供了理论依据。     

细胞增殖凋亡及血管生成在肾盂输尿管移行细胞癌中的作用

我们通过检测肾盂输尿管移行细胞癌中Ｋｉ 6 7、细胞凋亡、ＣＤ31的表达 ,探讨了细胞增殖、凋亡及血管生成在肾盂输尿管移行细胞癌中的作用。一、资料与方法1 研究对象 :肾盂输尿管移行细胞癌 4 2例中 ,Ｔ1期 14例 ,Ｔ2期 17例 ,Ｔ3～ 4期 11例。细胞分级为 :1级 8例 ,2级2 2例 ,3级 12例。2 细胞增殖、微血管密度和原位凋亡细胞的检测 :用免疫组化ＳＰ法检测Ｋｉ 6 7与ＣＤ31的表达 ,用ＴＵＮＥＬ法检测凋亡细胞。在每张切片阳性细胞最密集的区域中 ,计数 10 0 0个肿瘤细胞 ,并按Ｋｉ 6 7阳性细胞所占的比率计算增殖指数(ＰＩ) ;按ＴＵＮ…     

肾细胞癌缺氧诱导因子表达与增殖和凋亡的关系

目的研究缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)、微血管密度(MVD)在肾细胞癌中的表达及其与细胞增殖、凋亡的关系,并探讨其可能机制。方法应用免疫组织化学DAKO Envision Sys- tem(二步法)和原位缺口末端标记法检测66例肾明透细胞癌中HIF-2α的表达、MVD与细胞增殖、凋亡。结果66例肾透明细胞癌HIF-2α阳性率为68.2%,其表达随TNM分期的升高而增加(P＜0.01)。肾细胞癌中HIF-2α表达与MVD呈正相关(r=0.786,P＜0.01)；与肿瘤细胞凋亡指数(AI)呈负相关(r=-0.560,P＜0.01)；MVD与AI呈负相关(r=-0.618,P＜0.01)；HIF- 2α与AI/增殖指数(PI)负相关(r=-0.352,P＜0.01)。结论在肾细胞癌发展过程中,HIF-2α对肿瘤的能量代谢和新血管生成有促进作用,微血管的形成可抑制肿瘤细胞的凋亡,促进肿瘤的恶性进展。     

肾细胞癌缺氧诱导因子表达与增殖和凋亡的关系

目的 研究缺氧诱导因子-2α（HIF-2α）、微血管密度（MVD）在肾细胞癌中的表达及其与细胞增殖、凋亡的关系,并探讨其可能机制。方法 应用免疫组织化学DAKO Envision System（二步法）和原位缺口末端标记法检测66例肾明透细胞癌中HIF-2α的表达、MVD与细胞增殖、凋亡。结果 66例肾透明细胞癌HIF-2α阳性率为68．2％,其表达随TNM分期的升高而增加（P〈0．01）。肾细胞癌中HIF-2α表达与MVD呈正相关（r=0．786,P〈0．01）;与肿瘤细胞凋亡指数（AI）呈负相关（r=-0．560,P〈0．01）;MVD与AI呈负相关（r=-0．618,P〈0．01）;HIF-2α与AI／增殖指数（PI）负相关（r=-0．352,P〈0．01）。结论 在肾细胞癌发展过程中,HIF-2α对肿瘤的能量代谢和新血管生成有促进作用,微血管的形成可抑制肿瘤细胞的凋亡,促进肿瘤的恶性进展。     

SKA1对肾细胞癌细胞增殖凋亡的影响及其分子机制研究

目的 研究SKA1在肾细胞癌中的表达情况,探讨其表达对肾细胞癌细胞增殖凋亡的影响及其分子机制。方法 从癌症基因组图谱(TCGA)数据库收集肾细胞癌数据集,分析SKA1在肾细胞癌组织和正常肾组织中的表达差异及其与临床病理特征的关系和对预后的影响。收集2016年1月—2018年9月在新疆医科大学附属肿瘤医院就诊的72例肾透明细胞癌患者切除的肿瘤组织及癌旁组织,利用实时荧光定量PCR法检测SKA1的表达水平。体外培养的人肾细胞癌细胞系786-O和ACHN分别用shSKA1干扰慢病毒和对照病毒载体感染。CCK-8法检测细胞增殖活性;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;Annexin V-FITC检测细胞凋亡率。运用IPA@在线生物信息学软件,对基因表达谱芯片检测的差异基因进行信号传导通路及生物学功能分析。Western blot法检测各组细胞TNF-α、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9、p-Akt、p-mTOR蛋白水平变化。结果 在各病理亚型肾细胞癌组织中SKA1的表达水平明显高于正常肾组织(P＜0.01),与肾透明细胞癌和肾乳头状细胞癌患者的T、N、M(TNM)及AJCC分期有关(P＜0.01)。SKA1高表达患者总生存期明显短于低表达患者(P＜0.001)。组织样本研究结果证实,SKA1在肾透明细胞癌组织中表达水平高于癌旁组织,与TCGA数据库分析结果一致。与对照组相比,感染shSKA1慢病毒的肾细胞癌细胞增殖能力明显下降,凋亡细胞比例增加(P＜0.01)。IPA@分析发现,生物功能富集排名第一的是细胞生长与增殖,TNF被强烈激活,PI3K/Akt/mTOR通路信号分子被显著抑制。Western blot实验结果证实,SKA1干扰组中TNF-α、Caspase 3和Caspase 9表达水平显著上升,而与细胞增殖相关的通路信号分子Akt和mTOR的磷酸化表达水平显著下调,与富集分析结果相一致。结论 SKA1是肾细胞癌预后不良因素。降低肾细胞癌中SKA1表达能减弱肾细胞癌细胞增殖,同时促进凋亡,其机制可能与TNF-α激活和PI3K/Akt/mTOR通路分子磷酸化水平抑制有关。     

干扰组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET8对肾透明细胞癌786-O细胞增殖的影响

目的 细胞增殖是影响肾细胞癌进展的重要因素,本研究旨在探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET8在调节肾透明细胞癌786-O细胞增殖中的作用.方法 将体外培养肾透明细胞癌786-O细胞随机分为空白对照组、空质粒组和SET8-shRNA组3组.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测3组细胞的增殖能力;RT-PCR和蛋白质印迹法检测3组细胞Survivin和Caspase-3的表达水平,分析干扰SET8对肾透明细胞癌786-O细胞增殖及相关基因和蛋白表达的影响.结果 shRNA-SET8可成功抑制786-O细胞中SET8蛋白的表达.MTT检测结果显示,0、12、24、36和48 h SET8-shRNA组增殖抑制率分别为(10.97±2.68)%、(20.38±7.12)%、(25.03±7.60)%、(30.35±1.97)%和(31.33±1.04)%,SET8-shRNA组786-O细胞的增殖能力较空白对照组和空质粒组明显降低,P<0.05.RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示,SET8-shRNA组Survivin mRNA相对表达量为0.257±0.024,较空白对照组(1.046±0.041)和空质粒组(0.994±0.018)明显下降(P<0.05),其蛋白的相对表达量为0.834±0.072,较空白对照组(0.951±0.047)和空质粒组(1.203±0.092)明显下降,P<0.05;而Caspase-3 mRNA的相对表达量为0.921±0.072,较空白对照组(0.421±0.022)和空质粒组(0.439±0.007)明显上升(P<0.05),蛋白的相对表达量为1.188±0.022,较空白对照组(0.541±0.060)和空质粒组(0.617±0.028)明显上升,P<0.05.结论 干扰SET8可以有效抑制肾透明细胞癌786-O细胞SET8蛋白表达,从而抑制Survivin和上调Caspase-3的表达而抑制肾透明细胞癌786-O细胞增殖能力.     

代谢综合征与肾透明细胞癌相关性研究

目的 代谢综合征(metabolic syndrome,MS)是一组临床症候群,MS及其相关组分与癌症发生发展及病理特征具有密切关系.本研究旨在分析MS及其相关组分与肾透明细胞癌(clear cell cenal cell carcinoma,CCRCC)分期、分级及肿瘤大小的相关性.方法 回顾性分析2013-01-01-2015-12-30于山西医科大学第一医院就诊且病理诊断为CCRCC的375例患者的临床资料,包括年龄、性别、身高、体质量、血压、空腹血糖、生化结果、病理分期分级和肿瘤大小等.计数资料采用x2检验,计量资料以(x)±s表示,组间比较采用t检验,多因素分析采用Logistic回归分析.结果 MS组56例患者,其中男性患者32例,女性患者24例;非MS组319例患者,其中男性患者206例,女性患者113例.男女患者比较,差异无统计学意义,P=0.287.MS组与非MS组相比,年龄、吸烟、饮酒等差异无统计学意义,P值分别为0.100、0.691和0.269;而BMI指数、收缩压、空腹血糖、TG、HDL-C等差异均有统计学意义,均P＜0.001.在病理特点方面,MS与非MS相比,CCRCC病理分期(P=0.018)、分级(P=0.026)及肿瘤大小(P=0.026),差异均有统计学意义.MS相关疾病与CCRCC分期分析,糖尿病(P＜0.001)、高血压(P=0.015)、血脂紊乱(P=0.006)与CCRCC的分期有关.结论 CCRCC合并MS者病理分期较高、分级较低、肿瘤更大,糖尿病、高血压和血脂紊乱都可增加CCRCC的病理分期.     

肾透明细胞癌组织中RSK4的表达及临床意义

目的:检测核糖体S6蛋白激酶4（RSK4）在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）中的表达,探讨其高表达与预后及对肾癌细胞系增殖的影响。方法:采用免疫组织化学EnVision法检测48例ccRCC标本及20例肾盂积水标本中RSK4蛋白的表达,用统计学方法分析RSK4的表达与患者临床病理特征及预后的关系;建立过表达RSK4的肾癌细胞系,检测RSK4过表达对肾癌细胞周期及增殖的影响。结果:48例ccRCC肿瘤组织标本中,RSK4的阳性率为75%（36/48）;在20例肾盂积水患者中,RSK4的阳性率为25%（5/20）,二者具有统计学差异（P＜0.05）;经统计学分析,RSK4的表达与ccRCC患者的年龄、性别之间未见明确相关性（P＞0.05）,但与肾透明细胞癌的WHO/ISUP分级显著相关（P=0.019）;单因素及多因素生存分析发现,RSK4的表达及WHO/ISUP分级与患者预后相关（P＜0.05）;过表达RSK4的肾癌细胞系增殖能力显著增强,对细胞周期也有明显的影响（P＜0.05）。结论:RSK4在ccRCC中的表达显著升高,与预后相关;RSK4过表达对肾癌细胞系的周期、增殖均有显著影响,提示RSK4在肾透明细胞癌中高表达,可能通过促进细胞增殖导致预后不良,而其具体作用机制尚有待进一步研究。     

Expression of PTEN in renal cell carcinoma and its relation to tumor behavior and growth

BACKGROUND AND OBJECTIVES: PTEN is a candidate tumor suppressor gene in a variety of malignant tumors, including renal cell carcinoma (RCC). PTEN regulates cell cycle progression and cell survival in vivo. However, the role of PTEN alterations and their association with tumor growth and behavior in patients with RCC has not been well established. The aim of our study was to evaluate PTEN expression in RCC and its correlation with clinicopathologic features, cell proliferation, and apoptosis. METHODS: Sixty-seven RCC specimens were examined immunohistochemically with anti-PTEN antibody. The apoptotic cells were visualized by terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) and proliferative cells were visualized by staining with Ki-67 antibody. RESULTS: Twenty-one (31.3%) of the 67 RCCs showed reduced PTEN expression. The apoptotic index (AI) varied from 0.2 to 25.5%, and the Ki-67 index (KI) ranged from 1.6 to 69.8%. Reduced PTEN expression correlated with TNM stage (P < 0.05) and nuclear grade (P < 0.05). Tumors with reduced PTEN expression had a significantly higher KI than those with normal PTEN expression (P < 0.01). By univariate analysis, nuclear grade (P = 0.0005), TNM stage (P < 0.0001), AI (P = 0.0220), KI (P = 0.0002), and reduced PTEN expression (P < 0.0001) were associated with shortened survival. However, TNM stage was the only independent prognostic factors by multivariate analysis (P = 0.0007). CONCLUSIONS: Our results suggest that PTEN expression is frequently reduced in advanced RCC. The PTEN gene seems to be important for the growth suppression of RCC, by inhibiting cell proliferation.     

miR-1271-5p在肾细胞癌组织和细胞中的表达及其对A-498 细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨miR-1271-5p 在肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）组织和细胞系中的表达及其对RCC细胞株A-498 增殖及凋亡的影响。方法：用实时荧光定量PCR（qPCR）检测手术切除并经病理确诊为RCC组织和癌旁组织,以及RCC细胞系ACHN、A498、HK-2、786-O、CaKi-1 和人胚肾细胞株HEK293 中miR-1271-5p 的表达水平。用miR-1271-5p（实验组）和miR-NC（对照组）分别转染A-498 细胞。通过生物信息学预测鸟嘌呤交换因子DOCK1 为miR-1271-5p 可能的靶基因,构建DOCK1 基因的3’UTR 野生型及突变体序列双荧光素酶报告基因载体并进行荧光素酶活性检测,qPCR检测两组细胞中DOCK1 mRNA表达水平,Western blotting 检测两组细胞中DOCK1、p-ERK、p-AKT、Bcl-2 和Bax蛋白的表达情况,MTS法、集落形成实验和流式细胞术检测A-489 细胞增殖、集落形成数目和凋亡情况。结果：RCC组织和细胞系中miR-1271-5p 表达水平显著低于癌旁组织和人胚肾HEK293 细胞（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因系统结果显示DOCK1 是miR-1271-5p 的靶基因(P<0.01)。与miR-NC组细胞相比,miR-1271-5p 组A-498 细胞中DOCK1 mRNA的表达水平显著下降(P<0.01);DOCK1、p-ERK、p-AKT、Bcl-2 蛋白表达水平显著下调(P<0.05),Bax 蛋白明显上调(P<0.05);A-498 细胞增殖活力显著降低(P<0.01);集落形成数显著减少(P<0.05);细胞凋亡率显著增高(P<0.01)。结论：RCC组织和细胞系中miR-1271-5p 表达下调,通过干扰DOCK1 基因表达能明显抑制A-489 细胞的增殖及诱导其凋亡,miR-1271-5p 可能成为未来RCC治疗的分子靶标。     

肾透明细胞癌中Spl的表达特征及意义

目的：探讨核转录因子Spl在肾透明细胞癌（renal clear cell carcinoma,RCCC）组织中的表达特征和临床意义。方法：用免疫组织化学PV-6000法,检测59例RCCC和11例正常肾脏组织中Spl的表达,分析其与肿瘤分级和分期的关系。结果：Spl在RCCC组织中阳性表达率为71.2%（42/59）,明显高于正常肾组织的18.2%（2/11）。Sp1蛋白阳性表达与RCCC的组织学分级和临床分期正相关。结论：转录因子Spl可作为一个新的与RCCC发生、发展密切相关的生物学标记物。     

RhoB在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨RhoB在肾透明细胞癌中的表达及临床意义.方法:采用实时定量PCR、Western blot和免疫组化方法检测RhoB在肾透明细胞癌组织中的表达情况.选取60例肾透明细胞癌组织标本,详细收集病人临床病理资料,通过免疫组化方法检测RhoB在肾透明细胞癌组织中的蛋白表达水平,并分析RhoB的蛋白水平与临床病理资料的关系.结果:与对应瘤旁肾组织相比,RhoB的mRNA及蛋白表达水平在肾透明细胞癌组织标本中明显降低;RhoB的蛋白表达水平在不同年龄、性别组间差异无统计学意义(P>0.05),而在肿瘤直径大小、T分期、临床分期和组织分级间差异有显著统计学差异(P<0.05).结论:RhoB的表达降低可能在肾透明细胞癌的肿瘤发生中发挥作用,且其表达下降可能与肾透明细胞癌的恶性进展有关.     

Knockdown of COUP‐TFII inhibits cell proliferation and induces apoptosis through upregulating BRCA1 in renal cell carcinoma cells

COUP‐TFII belongs to the nuclear receptor family, which is highly expressed in many kinds of tumors. Previous studies have shown that COUP‐TFII can promote tumor progression through regulating tumor angiogenesis and cell proliferation and migration of certain cancer cells. However, the function of COUP‐TFII in renal cell carcinoma (RCC) is not clear. Here, we showed that clinical RCC tumor tissues showed much higher COUP‐TFII expression level than adjacent normal tissues. When COUP‐TFII was knocked down in RCC 769‐P and 786‐O cells by siRNA or shRNA‐expressing lentivirus, the cell proliferation was markedly inhibited, and apoptosis increased. Moreover, the tumor growth of COUP‐TFII knockdown 769‐P and 786‐O xenografts in nude mice was also obviously inhibited. Using qRT‐PCR and Western blot, we showed that the expression of the tumor suppressor gene BRCA1 was upregulated in COUP‐TFII knockdown cells. Simultaneously knockdown of BRCA1 and COUP‐TFII partially rescued the inhibited cell proliferation and increased apoptosis in COUP‐TFII single knockdown cells. These results indicate that COUP‐TFII may play an oncogenic role in RCC, and COUP‐TFII may promote tumor progression through inhibiting BRCA1.     

肾透明细胞癌中Spl的表达特征及意义

目的:探讨核转录因子Spl在肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,RCCC)组织中的表达特征和临床意义。方法:用免疫组织化学PV-6000法,检测59例RCCC和11例正常肾脏组织中Spl的表达,分析其与肿瘤分级和分期的关系。结果:Spl在RCCC组织中阳性表达率为71.2%(42/59),明显高于正常肾组织的18.2%(2/11)。Sp1蛋白阳性表达与RCCC的组织学分级和临床分期正相关。结论:转录因子Spl可作为一个新的与RCCC发生、发展密切相关的生物学标记物。