基于NLRP3/Caspase-1通路探讨针刀对兔膝骨关节炎软骨细胞的影响

目的 观察针刀对膝骨关节炎(KOA)兔软骨NLRP3/Caspase-1通路的调控作用及软骨细胞焦亡的影响。方法 选用24只新西兰兔雄兔,年龄均为6个月。使用随机数字表法将其分为3组,分别为空白组、模型组、针刀组,每组各8只。造模方法采用改良Videman法进行固定,造模时间为6周,空白组不予固定。针刀组选取经筋病灶点行针刀松解治疗,每周1次,共治疗3次;空白组和模型组正常饲养,行同样抓捕行为。采用HE染色观察软骨形态学改变;并检测软骨Caspase-1、NLRP3、ASC、IL-1βmRNA和蛋白的表达。结果 空白组软骨细胞均匀地分布在软骨基质中,表面相对光滑,层次结构较为清晰,潮线清晰完整。模型组软骨细胞数量较少,且分布状态较不均匀,表层出现缺损,潮线紊乱。与模型组相比,针刀组软骨表面较光滑,且软骨细胞分布较均匀,排列较规整,潮线较完整。与空白组比较,模型组软骨组织Caspase-1、NLRP3、IL-1β mRNA表达显著上调(P<0.05);与模型组比较,针刀组软骨组织Caspase-1、NLRP3、IL-1β mRNA表达显著下调(P<0.05)。与空白组比较,模...     

灯盏花素干预大鼠肝星状细胞Caspase-3、NF-κB表达的研究

目的:研究灯盏花素对CCl4诱导的肝纤维化模型大鼠Caspase-3、NF-κB p65表达的研究。方法:本实验用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,喂服灯盏花素。60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、灯盏花素高剂量组、灯盏花素中剂量组、灯盏花素低剂量组、秋水仙碱组。用药4周后,检测NF-κB p65mRNA及蛋白的表达,Caspase-3mRNA蛋白的表达。结果:灯盏花素不同剂量组均能使Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01)。模型组与正常对照组Caspase-3蛋白表达有显著性差异(P<0.01),灯盏花素不同剂量组均能使NF-κB蛋白的表达显著降低(P<0.01或P<0.05)。光镜显示:灯盏花素各剂量组的肝脏病理学改变较模型组减轻。结论:①灯盏花素能保护肝细胞活性,促进肝细胞修复再生;降低转氨酶,具有抗肝纤维化作用。②灯盏花素可以降低Caspase-3、NF-κB p65表达,抑制星状细胞激活。     

银杏内酯B抑制高糖诱导内皮细胞TLR4及炎症蛋白表达

目的评价银杏内酯B对高糖诱导内皮细胞TLR4表达的影响以及分子机制。方法使用人原代脐静脉内皮细胞,用高糖刺激内皮细胞,用Western blot分析TLR4、炎症蛋白表达以及Akt磷酸化。免疫荧光检测NF-κB核转位。结果高糖(30 mmol·L-1)刺激内皮细胞TLR4和PAF受体表达明显增加,PAF受体抑制剂银杏内酯B(0.6 g·L-1)和CV3988(30μmol·L-1)分别抑制了TLR4及PAF受体表达。银杏内酯B有效地抑制了高糖刺激内皮细胞ICAM-1、VCAM-1表达。分子机制的研究表明,银杏内酯B明显抑制了高糖诱导的Akt磷酸化,以及NF-κB p65的核转位。结论高糖刺激内皮细胞TLR4和PAF受体表达增高,银杏内酯B能够抑制高糖刺激TLR4、PAF受体和炎症蛋白表达,分子机制与抑制Akt磷酸化以及NF-κB活化相关。     

金茵清热口服液通过NF-κB/NLRP3信号通路改善小鼠急性肺损伤

目的 探究金茵清热口服液对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤的保护作用及机制。方法 C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为6组：空白对照组、模型对照组、金茵清热口服液小剂量组、金茵清热口服液中剂量组、金茵清热口服液大剂量组和地塞米松组。除空白对照组,其他各组气管滴注LPS溶液(5 mg·kg^-1)构建小鼠急性肺损伤模型,金茵清热口服液低中高组连续灌胃给药3 d。24 h后,6组分别取小鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar larage fluid, BALF)进行后续检测,HE染色观察各组小鼠肺组织病理损伤;检测肺泡灌洗液总细胞数;BCA法检测BALF的总蛋白含量;ELISA法检测BALF中炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和免疫球蛋白M(IgM)的含量;免疫组化和Western blotting法检测肺组织核因子κB(NF-κB)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)蛋白的表达情况。结果 与模型对照组比较,金茵清热口服液减轻了肺组织的病理学损伤(P<0.05...     

基于NLRP3/GSDMD信号通路研究人参皂苷Rb1对高糖诱导的胰岛β细胞焦亡的影响

目的: 研究人参皂苷Rb1(GRb1)抑制高糖诱导的胰岛β细胞焦亡及对NLRP3/GSDMD信号通路的调节机制。方法: 高糖(50 mmol·L^-1)诱导大鼠胰岛细胞瘤细胞(rat insulinoma cells, INS-1)焦亡模型,并构建NLRP3过表达质粒转染INS-1细胞,采用倒置显微镜观察GRb1对细胞形态变化的影响;采用ELISA法检测GRb1对细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素-1β(IL-1β)、胰岛素水平的影响;采用Western blot法和qRT-PCR法检测GRb1对INS-1细胞中核苷酸结合域样受体蛋白3(nucleotide binding domain like receptor protein 3, NLRP3)和切割蛋白D(gasdermin D, GSDMD)表达的影响。结果: 在高糖环境下,GRb1可减轻INS-1细胞形态学改变,显著增加INS-1细胞胰岛素分泌,降低细胞上清液中IL-1β、LDH水平(P＜0.05),且呈剂量依赖性;GRb1呈剂量依赖性抑制高糖诱导的INS-1细胞中GSDMD及上游调节因子NLRP3的表达(P＜0.05);过表达NLRP3后可显著逆转高糖环境下GRb1对INS-1细胞的部分保护性作用(P＜0.05)。结论: GRb1能够改善高糖诱导的INS-1细胞焦亡,减轻炎症反应,其机制可能与抑制NLRP3/GSDMD信号通路有关,从而防治糖尿病及其并发症的发生。     

STING/TBK1/NF-κB信号通路调节PD-1/PD-L1对肺癌细胞免疫逃逸的影响

目的 探讨干扰素基因刺激因子(STING)/TANK结合激酶1(TBK1)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路调节程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)/程序性死亡配体-1(PD-L1)对肺癌细胞免疫逃逸的影响。方法 分离培养小鼠脾脏淋巴细胞,以1∶1的比例与小鼠Lewis肺癌细胞共培养,随机分为对照组、diABZI(STING激活剂)组、BMS-1(PD-1/PD-L1信号抑制剂)组、diABZI+BMS-1组,以diABZI和BMS-1分组处理24 h,流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞中活化CD₈⁺T细胞比例;CCK-8实验检测脾脏淋巴细胞对Lewis细胞杀伤率;免疫印迹实验检测脾脏淋巴细胞和Lewis细胞PD-1、PD-L1和STING/TBK1/NF-κB通路蛋白表达。皮下注射Lewis细胞构建肺癌移植瘤小鼠模型48只,随机分为对照组、diABZI组、BMS-1组、diABZI+BMS-1组,每组12只,以diABZI和BMS-1分组处理后,测量小鼠肿瘤体积;检测肿瘤组织中浸润的CD₈⁺T细胞数;免...     

瓜蒌皮提取物对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨瓜蒌皮提取物(extractive pericarpium trichosanthes,EPT)对体外高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(HUVECs),观察不同浓度瓜蒌皮提取物干预高糖处理的HUVECs凋亡的变化。MTT法检测HUVECs的存活率、采用Hoechst染色法检测细胞凋亡、采用比色法测定细胞内Caspase-3的活性、Western blot法以及免疫荧光染色法检测核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的蛋白表达和p65核移位情况。结果 30 mmol·L-1葡萄糖处理内皮细胞48h能引起细胞活性明显降低,细胞凋亡率及caspase-3的活性明显增加,细胞中NF-κB蛋白表达升高及p65核移位增加。用瓜蒌皮提取物(12.5、25、50 mg·L-1)预处理细胞1 h,可以增加细胞活性;降低细胞凋亡率、caspase-3的活性及NF-κB蛋白表达,呈浓度依赖性,且对高糖诱导的p65核移位有抑制作用。结论瓜蒌皮提取物对体外高糖诱导的HUVECs凋亡有抑制作用,其作用机制与下调NF-κB表达和降低caspase-3活性有关。     

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路研究三叶香茶菜含药血清对枯否细胞活化的影响

目的 研究三叶香茶菜含药血清(isodon ternifolius-containing serum,ITS)通过Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠原代肝枯否细胞(Kupffer cell,KC)活化的影响。方法 分离培养大鼠原代KC,将LPS诱导的大鼠原代KC分为空白对照组、模型对照组、空白血清组、阳性对照组(秋水仙碱含药血清组)、ITS组、TLR4阻断剂组、TLR4阻断剂+ITS组。MTT法检测不同浓度ITS对KC增殖活性的影响;ELISA法检测KC细胞上清液白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量;荧光定量聚合应(PCR)、Western blotting和免疫荧光检测KC中TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路中TLR4、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、半胱肽氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、NLRP3 mRNA和TLR4、IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、Caspase-1、NLRP3、NF-κBp65蛋白表达情况。结果 与模型对照组相比,各药物组KC上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α和IL-6含量,以及细胞中TLR4、IκBα、Caspase-1、NLRP3 mRNA和TLR4、IκBα、p-IκBα、Caspase-1、NLRP3、NF-κBp65蛋白的表达均下调或降低(P<0.05或P<0.01);与TLR4阻断剂组比较,TLR4阻断剂+ITS组上述多数指标的改善更加明显。结论 三叶香茶菜可能通过下调TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路抑制KC活化,减少炎性因子的表达和释放,从而减轻肝脏炎症损伤。     

迷迭香酸通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对高糖诱发大鼠神经细胞损伤的保护机制

目的 分析迷迭香酸(RA)通过Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对高糖诱发大鼠神经细胞损伤的保护机制。方法 取大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤高分化PC12细胞作为神经元细胞模型,采用不同浓度的D-葡萄糖处理后,通过MTT法观察细胞活性变化筛选最佳葡萄糖浓度。收集对数生长期PC12细胞随机分为对照组、高糖组,在高糖组基础上分别加入不同浓度RA及TLR4激活剂-脂多糖(LPA),记为RA低浓度组(30μmol/L RA)、RA高浓度组(60μmol/L RA)、RA高浓度+LPA组(60μmol/L RA+2μg/ml LPA),MTT检测各组细胞存活率;Hoechst33258观察细胞凋亡变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测5组细胞中TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及凋亡蛋白-Bax的表达水平。结果 100 mmol/L D-葡萄糖为本研究的最佳浓度。与对照组比较,高糖组细胞核严重皱缩,细胞形态发生明显变化,细胞活力明显下降,细胞凋亡率、Bax、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p...     

银杏内酯A对小鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及其抑制NF-κB信号通路下调p53、Caspase-3表达的机制

目的探讨银杏内酯A(Ginkgolide A,GA)对缺血/再灌注脑损伤小鼠的保护作用及其可能的作用机制。方法采用小鼠短暂性大脑中动脉阻塞(transient middle cerebralartery occlusion,tMCAO)模型观察GA(10,20 and 40 mg.kg-1)对小鼠脑梗死范围、脑含水量及神经症状的影响,并进行病理组织学检查;采用实时荧光定量PCR技术检测缺血大脑皮层p53 mRNA的表达;应用Western blot法检测缺血大脑皮层IκBα、pIκBα及Caspase-3蛋白水平的表达。结果 GA对缺血/再灌注小鼠神经症状有明显的改善作用,能明显降低脑梗死范围,降低脑含水量,脑组织病理组织学也显示了GA对神经细胞的保护作用。Western blot结果显示:小鼠脑缺血/再灌后,IκBα蛋白水平明显降低,GA能明显升高IκBα的蛋白水平,降低pIκBα和Caspase-3的蛋白水平。PCR结果表明:小鼠脑缺血/再灌后,p53 mRNA水平升高,GA能下调p53 mRNA的表达。结论 GA对缺血/再灌注小鼠脑损伤有明显保护作用,该作用可能与其抑制NF-κB信号通路,下调p53、Caspase-3的表达有关。     

肝X受体通过NF-κB信号通路减轻高糖诱导的H9C2细胞凋亡

目的探讨肝X受体(LXRs)是否通过抑制核转录因子κB(NF-κB)表达减轻高糖诱导的H9C2细胞凋亡。方法LXRs过表达慢病毒载体的构建及转染高糖培养的H9C2细胞;实验分组:对照组(5.5 mmol·L-1葡萄糖)、甘露醇组(5.5 mmol·L-1葡萄糖+27.5 mmol·L-1甘露醇)、高糖组(33 mmol·L-1葡萄糖)、GFP组、LXRα组、LXRβ组。检测细胞增殖抑制率,Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达,NF-κB、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3蛋白量,细胞凋亡率。结果过表达LXRs组明显降低高糖诱导的Bax、NF-κB及Cleaved caspase-3蛋白表达及细胞凋亡(P<0.05),上调由高糖抑制Bcl-2的表达(P<0.05)。结论 LXRs通过NF-κB信号通路减轻高糖诱导的H9C2细胞凋亡。     

大黄素对新生坏死性小肠结肠炎模型大鼠细胞焦亡及NLRP3-IL-1β通路的影响

目的 探究大黄素对新生坏死性小肠结肠炎模型大鼠细胞焦亡及胞内模式识别受体3(NLRP3)-白细胞介素1β(IL-1β)通路的影响.方法 将72只新出生1 d的SD大鼠,随机分为对照组、模型组及大黄素高、中、低剂量(20、10、5 mg/kg)组,每组15只(对照组12只).除对照组外,其余大鼠均采用配方奶粉人工喂养+缺...     

紫草素通过调节NF-κB通路改善糖尿病心肌病的研究

目的 研究紫草素改善糖尿病心肌病的作用及其对炎症相关信号通路的影响。方法 构建糖尿病心肌病细胞模型,用不同浓度的紫草素处理细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,qRT-PCR法检测炎症细胞因子的表达,western blotting检测蛋白表达水平。结果 体外高糖培养乳鼠心肌H9C2细胞后IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症指标明显升高（P<0.01）,NF-κB信号通路被激活（P<0.01）,不同浓度紫草素处理高糖诱导的H9C2细胞,紫草素可呈时间和浓度依赖性改善糖尿病心肌病炎症,降低IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA及NF-κB p65表达水平。结论 紫草素可能通过调节NF-kB通路改善高糖诱导的H9C2心肌细胞炎症反应。     

基于NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号轴探究白藜芦醇对痛风性肾病模型大鼠肾脏的保护作用机制

目的 基于NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号轴探究白藜芦醇对痛风性肾病模型大鼠的肾脏的保护作用机制。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、秋水仙碱（阳性对照,0.03 mg · kg^-1）组和白藜芦醇高、中、低剂量（1 000、500、250 mg·kg^-1）组,连续7 d ig给药,给药过程中,除对照组外,其余各组使用氧嗪酸钾合并尿酸钠的方法制备大鼠痛风性肾病模型。ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素（IL）-1β、IL-18、尿酸、肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）水平,肾脏组织匀浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、环氧合酶-2（COX-2）水平;HE、Masson染色观察肾脏组织细胞形态变化;PAS染色检测大鼠肾组织中肾小球损伤情况,TUNEL观察肾脏组织细胞DNA损伤情况;实时荧光定量PCR （qRT-PCR）、免疫组化法检测肾脏组织中核因子-κB （NF-κB）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1） mRNA以及蛋白的表达量,最后采用分子对接研究白藜芦醇与NF-κB、NLRP3、Caspase-1的结合情况。结果 与模型组比较,秋水仙碱组及白藜芦醇各给药组大鼠血清中IL-1β、IL-18、SCr、BUN及肾脏TNF-α、MCP-1、COX-2水平显著降低（P<0.01）,白藜芦醇高剂量组尿酸、中和高剂量组BUN显著降低（P<0.05）;白藜芦醇各剂量组不同程度降低肾组织中胶原纤维化面积、肾小球阳性率以及肾组织细胞TUNEL染色阳性率,减缓病理损伤情况,其中高剂量组作用最显著（P<0.05）;qRT-PCR、免疫组化结果表明,白藜芦醇各给药组均抑制肾脏组织细胞中NF-κB、NLRP3、Caspase-1mRNA和蛋白的表达,其中高剂量组作用最显著（P<0.05）;分子对接结果进一步表明,白藜芦醇与NF-κB、NLRP3、Caspase-1结合状态良好,即白藜芦醇对NF-κB、NLRP3、Caspase-1具有良好的靶向调控作用。结论 白藜芦醇对痛风性肾病模型大鼠的肾脏保护作用可能为抑制NF-κB信号通路,进而抑制NLRP3的激活从而阻断Caspase-1招募IL-1β、IL-18,降低其分泌,遏制肾脏细胞程序性死亡的初始阶段细胞焦亡的发生,从而逆转痛风性肾病大鼠肾组织的炎症损伤。     

CKLF1高表达激活NF-κB信号通路导致小鼠肺部炎症

目的 有报道表明趋化素样因子1(CKLF1)在哮喘病人肺部高表达,但具体情况和机制尚不明确.本研究拟在动物水平考察CKLF1的致炎作用及相关机制.方法 将pCDB-CKLF1质粒或空载体pCDB电转入Balb/C小鼠体内,HE染色观察其肺部病理改变;硝酸酶还原法和ELISA法分别检测小鼠血清中NO和TNF-α的含量;提取小鼠肺部组织的胞质和胞核蛋白,蛋白免疫印迹实验考察胞质和胞核内NF-κB和IκBα表达的改变.结果 病理切片结果显示,转染pCDB-CKLF1质粒后,小鼠肺部出现明显的病理改变;小鼠血清中NO和TNF-α含量明显升高;胞质内NF-κB和IκBα表达明显减少,胞核内NF-κB和IκBα表达明显增加.结论 趋化因子CKLF1高表达能够导致动物肺部炎症的发生,CKLF1可能通过激活NF-κB 信号通路导致炎症.     

益气升清方调节HIF-1α/NLRP3信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡的影响

目的 探究益气升清方调节缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡的影响。方法 将SD大鼠随机分为假手术组（S组）,模型组（M组）,益气升清方低、中、高剂量组（3.465、6.930、13.860 g/kg）及益气升清方高剂量+HIF-1α激活剂DMOG组（13.860 g/kg益气升清方+40 mg/kg DMOG）,每组15只。采用线栓法构建脑卒中模型。造模成功后进行神经功能缺陷评估;TTC染色评估脑梗死体积;ELISA法检测血清白细胞介素（IL）-1β、IL-18水平;HE染色检测缺血皮质区病理变化;TUNEL染色检测神经元凋亡;Western blot检测焦亡及HIF-1α/NLRP3通路相关蛋白表达。结果 与S组比较,M组神经功能缺陷评分、梗死体积、IL-1β含量、IL-18含量、神经细胞凋亡率、胞膜穿孔蛋白D-N端（GSDMD-N）、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、HIF-1α、NLRP3蛋白水平均上升（P<0.05）;与M组比较,低、中、高剂量益气升清方组神经功能缺陷评分、梗死体积、I...     

高分子量脂联素在EA.hy926血管内皮细胞中对前炎症因子介导的NF-κB信号通路及其下游因子的影响

目的本研究通过促炎因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1对血管内皮细胞株EA.hy926的作用,来探讨高分子量脂联素对EA.hy926中NF-κB活性及其下游因子的影响,以阐明高分子量脂联素在血管内皮细胞炎症反应中的作用。方法构建NF-κB荧光素酶报告质粒,并稳定转染血管内皮细胞株EA.hy926。在TNF-α和IL-1作用之前,用不同浓度(0~8μg/ml)高分子量脂联素处理转染后的血管内皮细胞EA.hy926。NF-κB的活性通过荧光酶报告分析法测定。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞培养上清液中TNF-α、IL-1及IL-6的浓度。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)法、蛋白印迹法(Western blot)在m RNA和蛋白水平上检测血管内皮细胞的细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量。结果研究表明高分子量脂联素抑制促炎因子TNF-α和IL-1介导的NF-κB活性及其下游因子的表达。结论高分子量脂联素通过抑制NF-κB的活性及其下游因子的表达,抑制前炎症因子介导的炎症反应,从而保护血管内皮细胞。     

金合欢素对糖尿病肾病大鼠肾损伤及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨金合欢素对糖尿病肾病（DN）大鼠肾损伤及Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）信号通路的影响。方法 通过高脂高糖饲料喂养及ip链脲佐菌素（STZ）建立DN大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,金合欢素低、高剂量（40、80 mg ·kg^-1）组,金合欢素（80 mg ·kg^-1）＋脂多糖（LPS,0.1 mg ·kg^-1）组,缬沙坦（20 mg ·kg^-1）组,每组10只,并以正常喂养且不ip STZ的10只大鼠作为对照组。干预结束后,尾静脉取血,检测大鼠空腹血糖含量;收集大鼠24 h尿液,分析尿蛋白含量;腹部主动脉取血,ELISA法检测血清中血肌酐、血尿素氮水平及肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;分离双肾组织,透射电镜及HE染色检测肾组织损伤情况;Western blotting检测Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组肾组织严重受损,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加（P<0.05）;与模型组比较,缬沙坦和金合欢素低、高剂量组肾组织损伤得到缓解,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著降低（P<0.05）;与金合欢素高剂量组相比,金合欢素＋LPS组肾组织损伤加剧,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加（P<0.05）。结论 金合欢素通过抑制TLR4/NF-κB信号通路改善DN大鼠肾损伤。     

阻断p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对高糖培养肾小球系膜NF-κB信号通路调控影响

目的:探讨阻断p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases,p38MAPK)信号通路对高糖培养肾小球系膜NF-κB信号通路调控影响。方法:大鼠系膜细胞株分别培养在正常糖浓度(5.5 mmol/L,对照组),高糖浓度(25 mmol/L,高糖组)及25 mmol/L葡萄糖+10μmol/L p38 MAPK特异性抑制剂SB203580(SB组)。CCK-8测定系膜细胞增殖;Phospho-ELISA法分别检测胞浆及胞核内p38MAPK、磷酸化p38 MAPK蛋白和总NF-κBp65、活性NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(S276)表达。结果:与正常对照组比较,高糖组系膜细胞出现增殖增加;胞浆及胞核内磷酸化p38MAPK蛋白表达上调;胞核内NLS-NF-κB、Ser276-NF-κB的表达增加;SB203580干预则能逆转这一变化。结论:阻断p38 MAPK信号通路能下调高糖培养的系膜细胞NF-κB信号通路的活化,进而抑制系膜细胞的异常增殖。     

汉黄芩素调控TLR4/MAPK/NF-κB信号通路对糖尿病肾病大鼠肾纤维化的影响

目的研究汉黄芩素对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾纤维化的保护作用及其作用机制。方法构建DN大鼠模型。将大鼠随机分为对照组、模型组、汉黄芩素低剂量组、汉黄芩素中剂量组、汉黄芩素高剂量组、二甲双胍组,每组各10只。除对照组外,其余各组大鼠均采用腹腔注射链脲佐菌素65 mg·kg^-1联合高脂高糖喂养12周的方法构建DN大鼠模型。造模完成后,各组分别连续28 d灌胃给予相应药物或生理盐水,每天1次。给药前和给药后间隔1周分别检测各组大鼠空腹血糖(FBG)含量;28 d后,称大鼠体质量,生化分析法检测24 h尿蛋白量(24 h-Pro)和血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)含量,HE染色法观察肾组织病理学改变,Masson染色法观察肾组织纤维化状况,免疫组化检测各组大鼠肾组织相关蛋白表达,Western blot法检测肾组织蛋白TLR4、MAPK、NF-κB、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Col-Ⅲ)表达。结果与对照组相比,模型组大鼠FBG含量、24 h-Pro和血清BUN、SCr含量均明显升高(P<0.01),体质量明显降低(P<0.01);肾组织出现肌束紊乱、炎性细胞浸润、弥漫性水肿、肾小球体积增大、系膜增生,肾小管扩张,肾间质大量炎性细胞浸润等病理学改变及肾小球、肾小管间质纤维化,胶原容积分数(CVF)升高(P<0.01);TLR4、MAPK、NF-κB、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白表达明显上调(P<0.01);与模型组相比,汉黄芩素各剂量组和二甲双胍组大鼠FBG含量、24 h-Pro和血清BUN、SCr含量均明显降低(P<0.01),体质量明显升高(P<0.01);肾组织纤维化明显改善,CVF明显降低(P<0.01);TLR4、MAPK、NF-κB、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论汉黄芩素可对DN大鼠肾纤维化有明显保护作用,其作用机制可能与TLR4/MAPK/NF-κB信号通路有关。