ras基因产物p21和C—erbB—2基因产物p185在膀胱癌中表达研究

应用免疫组织化学方法对正常膀胱组织和膀胱癌组织中Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因产物ｐ１８５和ｒａｓ基因产物ｐ２１蛋白的表达水平进行检测。结果在５例正常膀胱组织中未见这两种蛋白表达，５８例膀胱癌中ｐ１８５和ｐ２１蛋白阳性表达率分别为６５．５％和６２．１％，阳生表达的ｐ２１和ｐ１８５蛋白均定位地膀胱癌细胞膜上，ｐ２１和ｐ１８５蛋白阳性表达率与膀胱癌的病理分级，临床分期及患者术后生存期有关，提示ｐ１８５和ｐ２１     

体内转导逆转录病毒HSVtk基因对鼠膀胱癌生长的影响

目的:观测瘤体和腹腔内注射逆转录病毒载体HSVtk基因对膀胱癌的作用.方法:用鼠膀胱癌细胞(T739)分别建立鼠背部和腹腔肿瘤模型.含HSVtk基因的病毒上清瘤体和腹腔内注射,联合丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)治疗观察肿瘤大小及动物存活时间.结果:接种后约1周所有动物长出肿瘤.HSVtk/GCV处理后,组织原位杂交显示瘤细胞内HSVtk基因mRNA表达.背部和腹腔肿瘤生长明显受到抑制,动物平均存活时间延长(P＜0.05)结论:瘤体和腹腔内注射逆转录病毒载体能将HSVtk基因导入膀胱癌细胞,联合GCV治疗显示出较强的抑瘤效应.     

野生型p53基因抑制胆囊癌细胞裸鼠体内生长的实验研究

目的：研究转染野生型p53（wtp53）基因对胆囊癌细胞裸鼠体内生长的影响。方法：在脂质体介导下将含有wtp53的真核表达质粒pCMV—p53，导入GBC—SD细胞中。用G418筛选，建立转染克隆细胞系。以PCR、RT—PCR和蛋白质印迹法证实外源p53基因的整合与表达。用裸鼠移植瘤试验检测体内致瘤性的影响。结果：野生型p53基因成功的导入胆囊癌细胞系，转染细胞中存在外源p53基因及蛋白的稳定表达。表达外源wtp53的GBC—SD—wtp53细胞，裸鼠体内致瘤性受到显著抑制。结论：野生型p53基因可有效抑制胆囊癌细胞在裸鼠体内的生长。     

ras基因产物p21和C－erbB－2基因产物p185在膀胱癌中表达研究

应用免疫组织化学方法对正常膀胱组织和膀胱癌组织中Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因产物ｐ１８５和ｒａｓ基因产物ｐ２１蛋白的表达水平进行检测。结果在５例正常膀胱组织中未见这两种蛋白表达。５８例膀胱癌中ｐ１８５和ｐ２１蛋白阳性表达率分别为６５；５％和６２．１％。阳性表达的ｐ２１和ｐ８５蛋白均定位于膀胱癌细胞膜上，ｐ２１和ｐ１８５蛋白阳性表达率与膀胱癌的病理分级，临床分期及患者术后生存期有关。提示ｐ１８５和ｐ２１蛋白阳性表达，膀胱癌的发生和发展有关，并且有可能成为膀胱癌预后的客观指标。     

增殖抑制基因 HSG 和抑癌基因 p16在膀胱癌中的表达及意义

目的：探讨增殖抑制基因 HSG 和抑癌基因 p16在膀胱癌中的表达及意义。方法应用原位杂交法检测65例膀胱癌组织标本 HSG mRNA 和 p16 mRNA 的表达情况,其病理分期：Ⅰ级29例、Ⅱ级25例、Ⅲ级8例、Ⅳ级3例,另选正常膀胱组织、良性膀胱肿瘤组织各15例标本作为对照。结果 HSG mRNA 在65例膀胱癌组织中的阳性表达率为69.23%,正常及良性膀胱肿瘤组织 HSG mRNA 表达与膀胱癌组织比较差异有统计学意义（P ＜0.05）,膀胱癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ级组织 HSG mRNA 的阳性表达率分别为79.31%、72.00%、36.36%,膀胱癌HSG mRNA 的表达与肿瘤分化程度和病理分期有关;32.31%膀胱癌细胞内有 p16 mRNA 的阳性表达,p16 mRNA在正常和良性膀胱肿瘤组织中的阳性表达率明显高于膀胱癌组织,差异有统计学意义（ P ＜0.05）,随肿瘤分级的增加,p16 mRNA 的阳性表达率显著降低,失表达率显著升高（P ＜0.05）。结论 HSG 和 p16表达可能成为判断膀胱癌生物学行为的重要指标之一。     

酪氨酸激酶受体C在膀胱癌SCaBER细胞裸鼠种植瘤中的作用

【目的】通过酪氨酸激酶受体C(tyrosine receptor kinase,TrkC)siRNA干涉质粒下调膀胱癌细胞SCaBER裸鼠种植瘤中TrkC的表达,分析TrkC在膀胱癌中的作用。【方法】采用构建SCaBER细胞裸鼠种植瘤模型,以脂质体Lipofect Amine 2000为介质,采用瘤内注射的方法,用TrkCsiRNA干涉质粒实现下调SCaBER细胞中TrkC的表达,以空载体pSilencer作为阴性对照,干涉过程中记录裸鼠种植瘤的体积变化,绘制种植瘤生长曲线,干涉结束后处死裸鼠,剥除肿瘤,拍照,称重,并提取蛋白,western blotting检测干涉效果。【结果】Western blotting检测发现,构建的TrkCsiRNA干涉质粒顺利实现了在SCaBER细胞裸鼠种植瘤中对TrkC的表达的下调(F=7.46,P<0.05),种植瘤生长曲线表明下调TrkC的表达可以抑制SCaBER细胞在裸鼠活体内的增殖,实验组肿瘤肿瘤体积(F=11.50,P<0.05)和重量(F=19.32,P<0.01)明显低于对照组。【结论】下调TrkC表达可抑制膀胱癌细胞SCaBER在活体内增殖,TrkC可能参与膀胱癌发生发展过程。     

抑癌基因p16和p53在膀胱癌中的表达及意义

目的研究膀胱癌中抑癌基因p16和p53的表达及其与临床病理特征及预后的关系.方法应用免疫组织化学ABC法和微波炉抗原修复法对69例膀胱移行细胞癌标本中抑癌基因p16和突变型p53蛋白产物进行检测.结果69例膀胱癌标本中37例p16检测阳性(53.62%),30例p53检测阳性(43.48%).p16阳性率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为69.57%、56.25%和21.43%,在Tis～T1期和T2～T4期肿瘤中分别为70.59%和37.14%.p53阳性率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为26.09%、46.88%和64.29%,在Tis～T1期和T2～T4期肿瘤中分别为29.41%和57.14%.随着膀胱癌病理分级、临床分期的上升,p16表达阳性率逐渐下降,p53阳性率逐渐上升.p16阴性或p53阳性患者的肿瘤复发率和病死率分别高于p16阳性或p53阴性患者.结论p16和p53的表达状况与膀胱癌生物学行为密切相关.p16和p53的免疫组化检测具有评估膀胱癌预后的价值,可作为膀胱癌的生物学瘤标.     

外源性p53基因转导对食管癌细胞株Eca109的生长抑制

本文首扶报道了逆转录病毒载体介导的外源性p53基因导入对食管癌细胞株Eca 109的生长抑制敢应。我们将野生型p53基因全长编码医克隆进逆转录病毒载休pDOR-Neo中，构建了重组病毒pDORp53．转染Eta 109细胞后，获得G418抗性细胞克隆Eca-p53。细胞生物学行为研究显示：生长曲线压低42%；GO／G1期细胞比侧显著增加；细胞增殖指数(PI)降低36.3%；软琼脂中集落形成能力受抑；对裸鼠的致瘤性丧失，结果证明，外源性野生型p53基因转导，对抑制食管癌细胞的恶性行为具有显著的生物学意义。     

N-ras和C-myc反义寡核苷酸与p53和p16基因联合抑制人肝癌细胞生长的实验研究

目的 :研究反义癌基因与抑癌基因联合抑制肝癌细胞生长的效果。方法 :利用基因重组方法构建携带 p1 6基因、p53基因的融合表达载体 (pc DNA1 6～ 53) ,利用基因合成仪体外合成 N- ras、C- myc反义寡核苷酸 ,并将 N- ras、C- myc反义寡核苷酸与 pc DNA1 6～ 53融合表达载体转染到人肝癌细胞系 SMMC772 1细胞中 ,观察肝癌细胞生长情况及软琼脂集落形成能力。结果 :联合治疗组肝癌细胞增殖速度最慢 ,软琼脂集落形成个数最少 ,只有 2个。结论 :利用相关基因联合治疗效果明显优于利用个别基因的治疗效果。     

浅表型膀胱癌p53基因过度表达的预后价值

用抗ｐ５３单克隆抗体ＤＯ－７检测４９例浅表型膀胱癌病理蜡块，获总阳性率２８．６％（１４／４９）。其中血管浸润组阳性率６０％（６／１０），显著高于无血管浸润组的２０．３０％（８／２９，Ｐ〈０．０５）。病理分级Ｇ１阳性率１３．６％（３／２２），Ｇ２３８．９％（９／２１），Ｇ３５０％（４／６），总体构成比无统计学意义。初步随访结果表明，除病理分级外，ｐ５３阳性及血管浸润与否均与疾病进展无相关性。但ｐ５３     

抑癌基因联合转染对膀胱癌细胞的生长抑制作用研究

目的　探讨抑癌基因 p5 3和 Rb对膀胱癌细胞的生长抑制作用。方法　利用逆转录病毒和电穿孔法将 p5 3、Rb单独或联合导入膀胱癌细胞株 T2 4中 ,Northern杂交等证实外源目的基因的表达后 ,观测并比较不同转染后细胞的生长、增殖水平和成瘤性等。结果　获得 p5 3、Rb单独和联合转染的 T2 4细胞 ,Northern杂交等证实 T2 4细胞中 p5 3失活而 Rb正常 ,转入的外源野生型 p5 3基因和 Rb基因均被表达。与未转染的对照组 T2 4细胞相比 ,转入 p5 3的细胞其生长速率明显降低 ,细胞增殖受抑制 ,软琼脂克隆形成能力丧失 ;而只转染 Rb的细胞除软琼脂克隆形成能力有所降低外 ,细胞生长和增殖未受明显抑制。结论　外源野生型 p5 3能抑制 T2 4生长并降低其成瘤性 ,增加 Rb的表达对细胞生长无明显抑制作用。p5 3对 T2 4细胞的生长抑制作用与外源 Rb基因导入与否无明显关系 ,Rb表达水平正常的膀胱癌细胞其异常增殖可能与 Rb蛋白磷酸化状态的关系更为密切。     

人喉癌裸鼠移植瘤模型的建立及部分生物学特性研究

用人喉癌手术切除标本建立了裸鼠移植瘤模型,已传至13代。原代移植成功率为66.7％,潜伏期30～70d;鼠间传代移植成功率为100％,潜伏期14～19d,生长稳定。经光学显微镜检查,各代移植瘤组织结构与原人喉癌组织基本一致。电镜检查证明,具有人喉癌特征,癌细胞间有大量桥粒,细胞浆中可见张力原纤维,有的张力原纤维与桥粒相连。细胞表面有较大的指状突,核膜较规则,胞浆中线粒体较多。     

BALB/c小鼠乳糖酶基因Lac的克隆及其cDNA探针的制备

目的 提取、克隆BALB／c小鼠乳糖酶基因Lac,了解其序列及所编码蛋白的属性,并制备Lac cDAN探针,为进一步研究乳糖不耐受奠定基础。方法 取4周龄BALB／c小鼠小肠组织,用Trizol试剂盒提取总RNA,经RT—PCR、梯度PCR获取Lac cDNA。测序鉴定后将序列提交NCBI GenBank,同时利用生物信息学,对其编码产物进行预测。探针的制备采用随机引物法以地高辛标记。结果 所获得的Lac cDNA编码区有912bp,编码303个氨基酸残基,在其二级结构中存在一个糖苷键水解酶基序,C-末端有一疏水螺旋区。标记后的探针经检测,灵敏度达到1pg／μl。结论 所获得的Lac基因经鉴定确为乳糖酶基因,由它编码的蛋白产物是乳糖酶。标记的探针灵敏度很高,可以用于原位杂交实验。     

裸鼠肾包膜下人癌模型在抗癌药物个体化疗中的应用

目的 通过临床病人肿瘤组织抗肿瘤药物敏感试验,为临床个体化治疗提供重要依据。方法 应用裸鼠肾包膜下人癌模型抗肿瘤药物敏感试验测试12种临床常用的抗肿瘤药物,确定出每例肿瘤最敏感药物,并向临床医生推荐使用。结果 共测试了临床肿瘤标本35例,包括肺腺癌、口腔鳞癌、结肠腺癌、乳腺癌和脑星形细胞瘤等。各个病例的最敏感药物不尽相同。结论 不同类型肿瘤以及相同类型肿瘤不同个体对肿瘤药物敏感度不同。该试验可能提高临床个体化疗效果。     

抑癌基因p16对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制

目的　观察不同途径给予抑癌基因 p16对人肺腺癌裸鼠移植瘤的治疗效果。 方法　分别将转染和未转染p16基因的肺腺癌细胞系H4 6 0接种于裸鼠背部皮下 (p16治疗B组和模型组 ) ,再将模型组裸鼠 18只随机分为空白对照组 ,脂质体对照组及p16基因治疗A组。瘤内分别注射生理盐水、脂质体以及脂质体 p16混合物 ,定期测量瘤体体积 ,连续观察 6周 ,免疫组化检测荷瘤组织 p16蛋白的表达。结果　p16基因治疗A、B组其瘤体生长速度明显减缓 ,与对照组相比 ,差异有显著性意义 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,p16基因治疗B组生长受抑作用更为显著。免疫组化结果提示两治疗组 p16蛋白表达阳性率高于两对照组。结论　脂质体介导的 p16基因转染可抑制人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长。但与瘤体内直接转染比较 ,先转染再致瘤的抑制作用更强。     

BALB/c裸小鼠人宫颈癌模型的建立

目的采用在裸鼠腹部皮下移植人原代宫颈癌组织的方法,研究其在裸鼠体内的成瘤性,并初步探讨此动物模型腹部肿瘤的生物学特性。方法将人宫颈癌组织接种于裸鼠腹部皮下建立人宫颈癌裸鼠模型,观察荷瘤鼠成瘤、一般特性和移植瘤生长情况。80d后处死裸鼠,取肿瘤块做病理切片;用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测肿瘤组织、外周血和肝、脾等脏器HPV DNA表达情况。结果接种后第42天在接种部位可见结节,第80天后肿瘤块平均表面积为(50.0±5.1)mm2,肿瘤移植平均成功率为90.5%。移植瘤生长以局部浸润为主,未见转移瘤。组织学检查结果示所有移植瘤与种植前肿瘤组织病理检查结果一致,HPV DNA呈阳性,且为高危型人乳头瘤病毒HPV16型阳性。而外周血与肝、脾等脏器HPV DNA呈阴性。结论本研究所建立裸鼠人宫颈癌组织模型成瘤率较高,操作简便,可保持人宫颈癌生物学特性,为进一步研究宫颈癌的发病机制提供了重要的科研工具。     

运用人癌裸小鼠移植瘤模型进行抗癌新药评价—NCI和EORTC临床前体内药效学研究方法和原则

人癌裸小鼠移植瘤模型是抗癌新药评价的必要工具,本文综述了人癌移植瘤模型的建立标准和NCI、EORTC运用这些模型进行抗癌新物质体内评价的原则、方法和注意点。     

人肝癌细胞HepG2接种于BALB/C裸小鼠移植瘤的性别差异

目的 研究性别对人肝癌细胞HepG2接种于BALB/C裸小鼠成瘤及移植瘤生长趋势的影响.方法 18只4~6周龄BALB/C裸小鼠雌雄各半,按照性别分成雌雄两组,每组9只,将全部裸小鼠肩胛部接种处于对数生长期且浓度为1.0×107/mL的HepG2细胞0.2 mL,10 d后观察两组的成瘤情况并测量肿瘤体积.结果 雌性组成瘤模型4只,成瘤率为44.44%;雄性组成瘤模型9只,成瘤率为100.00%,差异有统计学意义(P=0.029);造模成功的移植瘤体积走势图显示移植瘤生长速度雄性组大于雌性组.结论 人肝癌细胞HepG2接种于BALB/C裸小鼠成瘤率及移植瘤生长速度有明显的性别差异.     

苦参素对裸鼠胃癌移植瘤组织中BIP表达的影响

目的通过研究苦参素对裸鼠胃癌移植瘤组织中结合免疫球蛋白(BIP)表达的影响,以探讨其诱导肿瘤凋亡的可能机制。方法运用移植瘤体积判定肿瘤生长抑制,TUNEL检测细胞凋亡率,原位杂交技术显现BIP表达状况。结果经不同浓度苦参素处理9 d后,肿瘤平均体积出现明显缩小(P0.05);各剂量组均出现细胞凋亡(P0.01);BIP表达明显下降(P0.01)。结论苦参素诱导裸鼠移植瘤凋亡的作用与调控内质网应激信号通路相关,BIP基因下调可能是其作用靶点之一。     

外源性p16基因转染对人膀胱癌细胞PCNA和P53蛋白表达影响的研究

目的：探讨复制缺陷型腺病毒介导的p16基因转染，对人膀胱癌细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和P53蛋白表达的影响。方法：将p16基因重组腺病毒(Ad—p16)感染P16蛋白表达缺失的人膀胱癌124细胞株，流式细胞术评估Ad-p16对T24细胞中PCNA和P53蛋白表达的影响。结果：PCNA主要在S期和G2-M期高表达，Ad—p16转染T24细胞后，PCNA阳性细胞百分率降低，PCNA表达的荧光强度减弱；Ad—p16转染未能使T24细胞表达P53蛋白。结论：PCNA在Ad—p16转染后其含量减少，PCNA的表达与细胞的增殖能力密切相关，PCNA可作为评估肿瘤细胞恶性增殖能力的指标；Ad—p16转染不能使T24细胞表达P53蛋白。