斑马鱼基因组DNA提取方法在蜜蜂上的尝试

基因组DNA的提取是分子生物学研究中不可缺少的一项内容.随着蜜蜂分子生物学的发展,快速高效地提取适合于实验操作的蜜蜂基因组DNA成为各项研究的基础.介绍了一种简便快速提取蜜蜂基因组DNA的方法,可满足基本的分子生物学实验要求.     

鸡基因组DNA不同提取方法的比较

为选择适合鸡全血DNA提取的方法,满足鸡育种中基因检测对DNA的要求,试验研究了酚-氯仿、试剂盒和优化盐析法提取鸡全血DNA。优化盐析法提取鸡血液基因组DNA,经核酸蛋白定量仪检测,优化盐析法所得DNA的纯度OD_(260)/OD_(280)达1.855±0.036,所提DNA质量较好,利用DNA样本为模板进行PCR扩增,可以得到满意的扩增效果。与酚-氯仿、试剂盒的方法相比,优化盐析法节约了时间和成本,所需仪器简单,是一种较好的提取鸡全血DNA的方法,适合生产中大批量鸡血液基因组DNA提取。     

东北林蛙基因组DNA不同提取方法的比较

为了研究不同方法提取东北林蛙基因组DNA的纯度差异,试验以东北林蛙为研究对象,采用高盐浓度抽提法、苯酚/氯仿抽提法、十六烷基三甲基溴化铵法(CTAB法)、十二烷基磺酸钠法(SDS法)提取基因组DNA,进行PCR验证。结果表明:4种提取方法均能获得完整的基因组DNA,可以用于PCR扩增。高盐浓度抽提法提取的DNA纯度和制得率最高,成本低,安全系数高,操作简单,能够满足提取大量DNA的需求;其他3种方法需使用有毒、有害的有机试剂且时间较长。     

两种桑树基因组DNA提取方法的比较研究

以8份广西桑树种质资源为材料,比较了改良的CTAB法和植物基因组DNA试剂盒法(离心柱)提取桑树基因组DNA的效果.结果表明:两种方法都能得到桑树样品清晰的DNA电泳条带,DNA纯度高,改良的CTAB法提取的DNA浓度在308.70μg/mL～384.30μg/mL之间,平均值是331.45μg/mL;植物基因组DNA...     

不同品系西方蜜蜂基因组DNA多态性图谱构建及杂交分析

本研究应用随机引物K（5'-CGGCCCCTGT-3'）对不同品系西蜂的基因组DNA扩增，获得了能区分不同品系西蜂的多态性DNA图谱，从多态性图谱中选取一个共同片段K1680bp，标记成探针，探针K1680bp与不同品系西蜂的基因组DNA匀有杂交，从而证明片段K1680bp是西蜂蜂种的共性，为西蜂的鉴定提供了直接依据。     

乙醇浸泡蜜蜂标本DNA的提取纯化

利用ＲＡＰＤ、ＰＣＲ、ＲＦＬＰ、分子杂交等分子生物学技术研究生物的遗传变异、遗传多态、分子进化等,必须以ＤＮＡ作为模板,目前所见有关ＤＮＡ提取纯化的报道均用活体或冰冻蜜蜂,这给样品采集、保存带来不便。本实验以采自云南不同地区以及马来西亚的蜜蜂乙醇(75%)浸泡标本为材料,参照王文(1994年)的蛋白酶Ｋ提取法并加以改进,对ＤＮＡ进行提取纯化。1实验仪器眼科剪刀　ｅｐｐｅｎｄｏｆｆ管　恒温箱　旋转架或脱色摇床　微量加样器　高速冰冻离心机　电泳仪　紫外凝胶成像系统2实验步骤21　全基因组ＤＮＡ的提取211　乙醇浸泡的蜜蜂…     

蜜蜂线粒体DNA碱变性提取法

一、前言线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）已被广泛应用于动植物群体遗传学和进化生物学的研究中，并为分子系统学提供了有价值的比较生物学的数据，取得了许多非常有意义的结果。有效的ｍｔＤＮＡ提取方法，无疑是开展这方面研究的前提。而ｍｔＤＮＡ提取实验成功的标志是把染色体ＤＮＡ（即核ＤＮＡ）、蛋白质与ＲＮＡ尽量去除干净，从而获得一定得率和纯度的ｍｔＤＮＡ，以满足ｍｔＤＮＡ用于限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析中的酶切及聚合酶链式反应（ＰＣＲ）中酶切、拷贝和连接的需要。本试验用碱变性提取法，ＣｓＣｌ超速离心法和蛋…     

东方蜜蜂DNA提取纯化和检测

以云南东方蜜蜂作为材料,用两种方法提取不同发育时期、不同部位、不同性别的蜜蜂的ＤＮＡ,并进行纯化和检测。为将来开展蜜蜂分子遗传学、分子进化等研究打下一定基础。     

铁路运输蜜蜂的检疫方法

蜜蜂检疫是一项特殊性很强的工作.因蜜蜂流动性很大,且受季节影响,所以蜂群之间很容易传染.又因蜜蜂患病虽都表现出共同症状,但其特征性症状不易发现.故易造成混合感染.这样就给铁路检疫带来较大困难.根据几年来对5万箱蜜蜂的检疫,摸索出既简便又快速准确的临床检疫方法,既保证了货主能够及时装车运输,又保证蜜蜂的健康和控制疾病的传染.此临床检疫方法,简单的说包括问、看、查、判几个步骤.具体如下:     

三品系西方蜜蜂基因组DNA多态性分析研究（二）

采用９种随机引物（Ｋ,５’－ＣＧＧＣＣＣＣＴＧＴ－３’;５’－ＣＡＧＣＧＧＴＡＣＣ－３’;５’－ＡＣＣＡＧＧＴＴＧＧ－３’,５’－ＧＴＣＧＧＡＡＴＴＣ－３’;５’－ＣＧＧＣＣＣＣＧＧＴ－３’;Ｘ,５’－ＧＴＡＧＴＣＡＣＡＣ－３’;Ｙ,５’－ＣＴＧＣＡＧＧＡＣＡ－３’;Ｚ,５’－ＣＧＧＣＣＣＧＧＴＡ－３’）和ＰＣＲ技术扩增不同产蜜量的三品系西峰（喀尼阿兰、平湖、美意的ＤＮＡ基因组。结果Ｋ引物在高产蜜     

不同蜂授粉对设施番茄产量和品质的影响

在番茄温室内,熊蜂和蜜蜂的授粉习性不同.熊蜂的出巢温度低,日工作时间长,趋光性差,主要采用振动方式授粉;蜜蜂的出巢温度高,日工作时间短,趋光性强,主要采用接触方式授粉.和常规生产中采用的喷施激素方法相比,利用蜜蜂为设施番茄授粉,可以改善果实品质,但在产量上和喷施激素方法没有区别;采用熊蜂为设施番茄授粉,效果比蜜蜂更为显著,熊蜂授粉不仅可以改善番茄果实的营养品质,而且还可以显著提高产量,降低畸形果的比率,果实大而充实,种子数量多,商品性好.总之,对于设施番茄,蜜蜂授粉效果优于喷施激素处理,熊蜂授粉效果优于蜜蜂授粉.     

温岭高峰牛线粒体DNA全基因组遗传多样性分析

[目的]通过测定温岭高峰牛线粒体DNA全基因组序列以分析温岭高峰牛的母系起源及遗传多样性。[方法]采用DNA提取、测序及生物信息学方法。[结果]通过对19头温岭高峰牛线粒体DNA全基因组序列分析,共发现263个变异位点,定义9种单倍型,单倍型多样度(Hd±SD)为0.778±0.096,核苷酸多样度(Pi±SD)为0.0017±0.0014,表明温岭高峰牛的遗传多样性较低。构建的NJ系统发育树和单倍型进化网络图表明温岭高峰牛有普通牛和瘤牛2种母系起源。[结论]温岭高峰牛线粒体DNA基因组的遗传多样性较低,有瘤牛和普通牛两个母系起源,但主要受瘤牛的影响。     

鹅血液基因组DNA的简单快速提取方法研究

本研究针对家禽血液红细胞有细胞核的特点,研究适合鹅血液基因组DNA的廉价、简便、快速的DNA提取方法,并为其它禽(鸟)类相关操作提供参考。通过裂解细胞,利用简便快速的操作方法将蛋白质和核酸分离,去除杂质,沉淀核酸,获得大量基因组DNA,并通过基因扩增检测其质量和效果。该方法提取的基因组DNA电泳检测条带明量,无拖尾,含量及纯度均较高,能够用于分子生物学实验研究。与传统的酚-氯仿DNA抽提方法相比,本实验建立的血液基因组DNA提取方法具有成本低、操作步骤简便和快速的特点,特别是对大量样品的提取更为实用。     

六种试剂盒提取血液基因组DNA效果比较

为筛选一种高效、快捷的血液基因组DNA提取试剂盒,采集24份新鲜西藏绵羊血液样本,选用6种市售商业化试剂盒（LifeFeng柱式试剂盒DK601和非柱式试剂盒DK602,康为世纪非柱式试剂盒CW0544和柱式试剂盒CW0546,上海生工非柱式试剂盒SK8224和柱式试剂盒SK8254）,比较所提DNA的浓度、纯度、得率以及对嗜吞噬细胞无形体16S rRNA进行巢式PCR扩增,综合评价不同试剂盒DNA提取效果.结果表明,应用LifeFeng柱式试剂盒DK601提取的DNA浓度和纯度均最高,得率较高,分别达到75.63 ng/μL、1.894（OD260/OD280）、18.91 ng/μL;且嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因的PCR扩增条带清晰度最优.因此,LifeFeng DK601可作为提取绵羊血液基因组DNA及嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum）病原鉴定的首选试剂盒.     

Analysis of chromosome-sized DNA and genome typing of isolated strains ofTaylorella equigenitalis

Analysis of chromosome-sized DNA and genome typing ofTaylorella equigenitalis NCTC11184, Kentucky 188, and five strains ofT. equigenitalis isolated in Japan were carried out. The three restriction enzymes used,ApaI,NaeI andNotI, cleaved the genomic DNAs of five Japanese strains ofT. equigenitalis into relatively limited numbers of restriction fragments, which were well resolved on crossed-field gel electrophoresis (CFGE). The respective profiles after CFGE of the restriction fragments from all five strains were essentially identical to each other after digestion byApaI,NaeI orNotI. Hence it appears that these strains have a common genome type with respect to these three restriction enzymes. It was also shown that the respective profiles from these strains were essentially different from those ofT. equigenitalis NCTC11184 and those of Kentucky 188 after digestion withApaI,NaeI orNotI.Abbreviations CFGE crossed-field gel electrophoresis - FIGE field inversion gel electrophoresis - PFGE pulsed-field gel electrophoresis     

DNA荧光染色和PCR技术在PRRSV冻干疫苗中支原体检测的应用

为完善猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)冻干疫苗生产各阶段的支原体检测体系,本研究分别应用DNA荧光染色法、PCR法和病毒分离培养法检测疫苗生产中的细胞、种毒、半成品、成品,分析方法的可行性和优势.结果显示,DNA荧光染色法检测PRRSV半成品抗原液的支原体污染能够于6d内得到结果,与其余半成品检验项目用时相近,适宜在生产中应用.而采用DNA荧光染色、PCR和病毒分离培养法对我们生产的10批PRRSV冻干疫苗成品的支原体检测结果显示,DNA荧光染色法与病毒分离培养法检测的结果一致,1批疫苗的PCR检测结果与培养法检测结果不符,即PCR法检测阳性,但DNA荧光染色和病毒分离培养法检测为阴性.由此证明,DNA荧光染色法和PCR法检测疫苗中支原体的结果可靠,而PCR法检出率更高.DNA荧光染色法和PCR法操作简便、快速、经济,可以作为疫苗生产质量的内控标准,提高支原体的检出率,保证疫苗质量.     

基于粪便DNA分析技术的东北马鹿种群遗传学研究

目前,栖息地的破坏是野生动物处于濒危状态的主要因素之一。东北马鹿是国家重点保护动物,近年来,人类活动的干扰使其生境明显减少并呈斑块状分布,这将使东北马鹿的种群遗传结构发生变化。然而,在野生动物遗传结构研究中,传统的取样方法直接或间接地对动物造成了伤害。因此,本文以粪便为研究材料,对来自完达山地区的9个东北马鹿样品进行mtDNA序列分析,共发现29个变异位点,定义了7个单倍型,其单倍型多样性（h）平均值为0.917、核苷酸多样性（π）平均值为2.803,种群总体遗传多样性较高。这一结果不但表明运用粪便DNA分析技术可以有效地进行马鹿遗传结构研究,而且还为野生东北马鹿的保护管理以及更加深入的研究提供基础数据资料。     

天祝白牦牛基因组DNA提取方法的试验研究

以改进的Miller盐析法为基础方法,通过优化操作规程、改进操作步骤等手段,提取纯化了白牦牛抗凝全血样品中的基因组DNA,并对其纯度、浓度进行了检测分析.结果表明:该方法简便易行,所获基因组DNA纯度高,浓度适宜,适用于RAPD、RFLP等遗传多态性的分析研究.     

不同苜蓿品种再生体系的差异性比较

以陇东野生紫花苜蓿、阿尔冈金、甘农1号、游客4个苜蓿品种的下胚轴为外植体,比较不同苜蓿品种外植体愈伤组织诱导、分化及再生能力的差异,研究不同激素浓度及配比对再生体系建立的影响。结果表明,4个苜蓿品种下胚轴诱导率依次为阿尔冈金甘农1号陇东野生紫花苜蓿游客;在愈伤组织诱导培养基MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L NAA上诱导率最高;MS+0.5 mg/L KT+0.3 mg/L NAA为最佳分化培养基,分化率在84.5%~93.5%;适宜的生根培养基为1/2 MS+0.1 mg/L NAA,附加1%蔗糖,各品种再生植株的移栽成活率为100%。     

沙拐枣DNA提取方法改进及PCR扩增检测

利用改进的提取沙拐枣Calligonum mongolicumDNA的CTAB方法,从沙拐枣当年鲜根提取总DNA,以琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测,并进行PCR扩增试验。结果显示,所提取的DNA片段大小在20 kb以上,OD260/OD280比值为1.880~1.900,OD260/OD230比值为2.000~2.040,DNA的浓度0.380~0.470μg/mL,DNA纯度较高,可直接用于随机扩增的DNA多态性(RAPD)标记,条带清晰、迁移率低而整齐。