禽脑脊髓炎病毒的分离鉴定

通过ＳＰＦ鸡胚连续、快速传代，从自然发病雏鸡脑组织中分离出一株禽脑脊髓炎病毒，暂命名为ＡＥＶ－ＮＨ９３７株，该病毒在发病鸡胚的肠上皮细胞、胰岛细胞和大脑神经细胞的胞浆中呈颗粒状，直径２５－３０ｎｍ，对盐酸、氯仿、胰蛋白酶具有抵抗力，在二价镁离子保护下可抵抗热效应，病毒滴度６．１６，中和指数２４５。     

对新城疫CS2株与4株疫苗毒株有关性能的比较

对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）中等毒力毒株ＣＳ２株、ＮＤⅠ系、Ｒｏｋｉｎ、Ｋｏｍｅｒｏｖ和低毒力ＬａＳｏｔａ株病毒的脑内致病指数（ＩＣＰＩ）、鸡胚的半数感染量（ＥＩＤ５０）等指标进行了测定,结果是ＩＣＰＩ分别为１．２７～１．５２、１．６６～１．７０、１．４６、１．４３和０．２９～０．５;ＥＩＤ５０分别为１０＾７．５、１０＾７．５≥１０＾８．５、１０＾＾７．９和≥１０＾８．５／０．１ｍｌ。用１０倍剂量的ＣＳ２株病毒注射１月龄和１．５月龄ＳＰＥ雏鸡,均安全无不良反应,测定ＣＳ２株病毒保存期,结果在－２０℃保存６年的鸡胚２代（Ｅ２）、鸡胚６代（Ｅ６）、鸡胚１０代（Ｅ１０）毒的ＥＩＤ５０均≥１０＾７．５／０．１ｍｌ。ＮＤＣＳ２株病毒的各项指标均在中等毒力范围内,对鸡胚的半数感染量仍保持原毒（Ⅰ系）的特性,ＩＣＰＩ比原毒有所下     

乙型脑炎病毒HW1克隆纯化株的鉴定及外源性污染的鉴定

应用病毒蚀斑技术，将乙型脑炎病毒ＨＷ１株在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层培养上连续挑斑纯化３次，对纯化后的克隆株进行血清学，免疫生物学鉴定及外源性污染检定。毒株对ＢＨＤ－２１细胞感染滴度≥１０＾６．１５ＴＣＩＤ５０；对８－９ｇ小鼠脑内感染的毒力≥１０＾７．１０ＬＤ５０／０．０４ｍＬ；与ＪＥＶＰ３株阳性参考血清的中和指数≥２０００；克隆株对猪有较好的的性，无外源性污染。     

鸡传染性支气管炎肾型致病株的分离与鉴定

肾病变为主要特征的病雏中，采集典型病科，通过鸡胚接种、传代，分离到四株肾传支病毒（ＨＮ—Ｍ，ＨＮ—Ｚ，ＨＮ—Ｇ，ＨＮ—Ｃ）。该四株病毒均能适应鸡胚生长，并致鸡胚呈明显的卷曲胚和侏儒胚；其鸡胚适应毒能感用鸡胚肾细胞（ＣＥＫ），并致细胞病变（ＣＰＥ）；应用鸡脓毒或细胞毒回归雏鸡，可复制出与自然发病雏同样的特征性病变；每株无血凝性，以胰酶处理后可出现凝集价；经与７４国际标准毒单抗作细胞交叉中和试验及用克隆和标记的ＩＢＶ非编码区、非Ｓ１片段１０ｋｂ核酸探针作斑点杂交鉴定，确认ＨＮ－Ｍ株为澳大利亚Ｔ抹，另三株为Ｎ—１１５株。应用该四株分离毒制备的油乳剂灭活苗对河南近几年流行的肾型支气管炎起到了十分理想的防制效果．     

乙型脑炎病毒HW_1克隆纯化株的鉴定及外源性污染的检定

应用病毒蚀斑技术，将乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）ＨＷ１株在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层培养上连续挑斑纯化３次，对纯化后的克隆株进行血清学、免疫生物学鉴定及外源性污染检定。毒株对ＢＨＫ－２１细胞感染滴度≥１０６．１５ＴＣＩＤ５０；对８～９ｇ小鼠脑内感染的毒力≥１０７．１０ＬＤ５０／０．０４ｍＬ；与ＪＥＶＰ３株阳性参考血清的中和指数≥２０００；克隆株对猪有较好的免疫原性，无外源性污染。     

鸡产蛋下降综合症灭活疫苗研究──EDS_（76）—NE_（4）株病毒的培养与鉴

在对ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒进行血清学鉴定之后，于鸭胚（ＤＥ）、鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）、鸡胚（ＣＥ）、鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚肝细胞（ＣＥＬ）上适应培养。结果表明，ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒为鸡产蛋下降综合症病毒，该病毒能在ＤＥ、ＤＥＦ、ＣＥＬ上增殖，在ＤＥ上增殖，尿囊液的血凝价（ＨＡ）可达１∶２０４８０─１∶３２７６８０倍。     

鸡病毒性关节炎病毒适应Vero细胞的研究

５株已适应鸡胚细胞的ＡＶＡＶ在Ｖｅｒｏ细胞上传２～５代后各毒株均能产生明显的ＣＰＥ和较高的病毒滴度，而２株非鸡胚细胞适应株（分别为鸡胚毒和野外组织毒）在Ｖｅｒｏ细胞上盲传７代，仍无明显的ＣＰＥ出现。这一结果初步表明Ｖｅｒｏ细胞能用于已适应鸡胚细胞的毒株的增殖。而不能用于病毒的分离。吸附时间与冻融次数明显影响病毒的适应进程，以吸附１小时、冻融２次以上为佳。ＡＶＡＶＪＮ－１株能在Ｖｅｒｏ细胞上产生蚀斑，大小为２．７～４．４ｍｍ，出斑时间为接种后４～５天，Ｖｅｒｏ细胞用于中和试验，测得Ｓ（１１３３）株免疫鸡血清的小和效价为１：８０。     

鸡新城疫,支气管炎,法氏囊病三联细胞弱毒的培育及免疫原性研究

根据某些不同类型的病毒能感染同一宿主细胞不同部位，并产生各自特征性病变和独立复制的原理＾⑴，笔者将鸡新城疫（ＮＤ）、支气管炎（ＩＢ）、法氏囊病（ＩＢＤ）三株弱毒以不同的接种剂量、接种比较和接种程序，成功地共同感染鸡全胚细胞（ＣＥ），达到了在同一宿主细胞上同时增殖三株弱毒的目的。三联细胞毒中三株弱毒的半数感染价：新城疫病毒（ＮＤＶ）鸡胚半数感染价（ＥＩＤ５０）为１０＾７．２３／０．１ｍｌ，细数半数感     

鸡新城疫／传染性支气管炎二联油乳剂灭活疫苗试验研究报告（Ⅱ）：疫苗…

根据ＮＤＶ、ＩＢＶ二各病毒混合毒种的最适稀释比例，将混合毒种接种９－１０龄鸡胚尿囊腔内（简称同胚培养），使接种鸡胚９６ｈ二种病毒毒价同时达到高峰，０．０１ｍｌ尿囊液含：ＮＤＶ≥１０＾８ＥＩＤ５０、ＩＢＶ≥１０＾７ＥＩＤ５０。收获同胚培养的胚毒，制备同胚培养的胚毒，制备油乳剂灭活疫苗。用三批疫苗分别免疫１８日龄雏鸡，免疫后４周二联疫苗的有效抗体分别为：ＮＤ血凝抑制抗体（ＨＩ）≥１：１６、ＩＢ中和抗体     

鸡产蛋下降综合症灭活疫苗研究：EDS76—NE4株病毒的培养与鉴定

在对ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒进行血清学鉴定之后，于鸭胚（ＤＥ）、鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）、鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚肝细胞（ＥＣＬ）上适应培养。结果表明，ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒为鸡产蛋下降综合症病毒，该病毒能在ＤＥ、ＤＥＦ、ＣＥＬ上增殖，在ＤＥ上增殖，尿囊液的血凝价（ＨＡ）可达１：２０４８０－１：３２７６８０倍。     

犬瘟热病毒的分离鉴定

本试验通过鸡胚成纤维细胞直接从犬病料中分离到一株犬瘟热病毒，定名为ＣＤＶ－ＤＬ１株。该毒株在鸡胚成纤维细胞上生长良好，产生明显的细胞病变（ＣＰＥ），在电镜下观察，病毒粒子具有囊和纤突，大小为１２０－２００ｎｍ。核酸型为ＲＮＡ，不耐乙醚。该病毒接种幼犬，可使幼犬发病，但无论考验工感染均不能使幼犬１００％的发病。     

蛋鸡非典型新城疫一例及其病原鉴定

１９９７年３月下旬，上海市郊区某蛋鸡场发生以产蛋下降为第一指征的非典型新城疫，通过临诊调查、抗体测定、病毒分离与鉴定进行了确诊。结果：感染鸡群产蛋下降的幅度可高达５０％；新城疫ＨＩ抗体滴度高达１２ｌｏｇ２或以上；用泄殖腔棉拭接种鸡胚的分离物用标准血清鉴定为新城疫病毒（ＮＤＶ），初代尿囊液的ＥＬＤ５０为１０－７．５（０．２ｍＬ），１日龄ＳＰＦ鸡胚脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄ＳＰＦ鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）分别为１．７２５和２．３２，其毒力接近标准毒株—ＮＤＶ北京株Ｆ４８Ｅ９。     

PCR检测鸡减蛋综合征病毒

根据已报道的鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒ＤＮＡ序列，设计合成了１对引物，建立了ＥＤＳ－７６病毒的双温式聚合酶链反应（ＰＣＲ）诊断方法。该方法对ＥＤＳ－７６病毒长春株、河南株和广东株扩增结果均为阳性；而对致死鸡胚孤儿病毒（ＣＥＬＯＶ）、鸡病毒性关节炎病毒（ＶＡＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）和鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）的扩增结果均为阴性。可检测ＥＤＳ－７６病毒ＤＮＡ为０．３×１０－４ｐｇ。结果表明该方法特异且敏感。此外，将常规的三温式ＰＣＲ的操作规程改为双温式，反应体积由常规５０～１００μＬ改为２０μＬ，使其更加快速、简便、经济     

鸡肾型传染性支气管炎的诊断

河南某鸡场和天津某鸡场发生以呼吸道及肾病变为主的疾病，经流行病学检查、病理剖检、病毒分离、电镜检查、生物学特性及理化特性试验、血清中和试验、动物回归等确诊为肾型传染性支气管炎．从病死鸡紧组织中分离到的两株病毒（ＨＮ（９３０１）、ＴＪ（９３０１）），经鸡胚传至６～７代后，均能使５０％以上鸡胚发生死亡或矮化；电镜下均见有典型的冠状病毒粒子，ＨＮ（９３０１）直径９０～１０５ｎｍ、ＴＪ（９３０１）直径８５～１１０ｎｍ，周围有长１８～１９．５ｎｍ的梨状突起；两株分离毒都符合ＩＢＶ的生物学及理化特性，与澳大利亚Ｔ株存在一定相关性；动物回归得到了与原发病鸡群相同的症状及病理变化。     

天津地区鸡肾型IBV的分离鉴定

用鸡胚传代方法从天津地区分离到一株主要引起雏鸡肾脏病变的病毒。经电镜观察到典型的病毒颗粒．接种鸡胚引起特征性病变；感染不同日龄雏鸡产生与临床剖检一致的大体及组织学变化，初步鉴定为肾型传染性支气管炎病毒，命名为ＴＫ６。以１０日龄鸡胚测定其半数感染量为１０６．４ＥＩＤ５０。ＴＫ６无血凝性，但以处理后的Ｍ４１毒株作为凝集抗原，可对感染ＴＫ６的鸡群进行抗体监测，证明与Ｍ４１病毒有交叉反应性．     

鸽新城疫病毒的分离及其生物学特性测定

用ＳＰＦ鸡胚从疑似鸽新城疫（鸽ＮＤ）病鸽群中分离到一株病毒ＱＬ株,该病毒株能凝集鸡红细胞（ＲＢＣ）,这种凝集作用能被抗新城疫病毒（ＮＤＶ）阳性血清抑制;用抗ＮＤＶ单抗ＰＥＧ夹心ＥＬＩＳＡ测定分离株为阳性。分离株经肌肉注射能使鸽发病和死亡,出现与自然发病鸽一致的症状和病变,但肌注ＳＰＦ鸡只感染,不见临床症状。对该分离株作进一步生物学特性鉴定,按照国际上规定的ＮＤＶ毒力判定标准,测定了该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间（ＭＤＴ）、１日龄雏鸡脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄雏鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）,结果ＭＤＴ为１０５小时、ＩＣＰＩ为１．３３、ＩＶＰＩ为１．０。试验结果表明本分离株为鸽新城疫病毒。     

应用兔肾原代细胞培养 兔粘液瘤病毒的研究

试用兔肾原代细胞传代；增殖兔粘液瘤病毒，呈现典型ＣＰＥ。粘液瘤病毒ＳＧ３３株在兔肾细胞上连续传３代之后，就不产生ＣＰＥ，在鸡胚上传３代再回归兔肾原代细胞，又呈现ＣＰＥ。ＳＧ＿（３３）在鸡胚上不能产生明显痘斑。维持液ｐＨ值影响ＳＧ＿（３３）在兔肾原代细胞上形成ＣＰＥ。     

鸡病毒性关节炎弱毒疫苗的研制

将鸡病毒性关节炎病毒鸡胚毒Ｊ－１株适应于鸡胚细胞和Ｖｅｒｏ细胞，经连续传代，通过４０．５℃、３７℃的交替升降培养温度培养，筛选出１株毒力较弱的克隆株，该克隆株蚀斑大小为２．７－３．１ｍｍ，以１０＾５．７２５ＴＣＩＤ５０注射于１日龄敏感雏鸡的足掌皮下和以１０４．７２５－１０＾６．７２５ＴＣＩＤ５０注射于１日龄 敏感雏鸡胸部肌肉内，对雏鸡无致病性，该克隆株在敏感雏鸡内连传３代，无毒力返强现象。这一结果     

应用鸡胚法氏囊原代细胞培养鸡IBDV的研究

试用鸡胚法氏囊原代细胞传代、增殖鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），均不同程度地产生特征性细胞病变效应。采用双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ和细胞毒回归鸡试验证实，ＩＢＤ－ＶＨ株组织毒适应于鸡胚法氏囊细胞，并随传代次数增加，病毒增殖能力增强；而在鸡胚成纤维细胞上盲传２代之后才开始出现细胞病变效应。比较了ＩＢＤＶ在鸡胚法氏囊细胞和鸡胚成纤维细胞上增殖能力的差异，讨论了培养基ＰＨ值、小牛血清浓度对鸡胚法氏囊细胞培养及病毒增殖的影响。     

球虫体外模型的建立及在生物学和生产中的应用

本研究建立了柔嫩艾美耳球虫（Ｅｉｎｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ）体外培养的鸡胚模型和细胞模型，建立了一株柔嫩艾美耳球虫鸡胚适应株和交替传代的原代鸡肾细胞培养适应株，采用细胞模型探索出Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ有４代裂殖生殖阶段，采用细胞模型培养Ｅ．ｎｅｃａｔｒｉｘ能发育至第３代裂殖阶段，完善了鸡胚筛选抗球虫剂的方法，测定出药物最小抑制浓度（ＭＩＣ）和最小毒性浓度（ＭＴＣ）并分析出与实际生产应用的关系。在熔剂的