慢性前列腺炎患者前列腺液细菌16SrRNA基因的检测

目的通过采用聚合酶链反应（PCR）技术对慢性前列腺炎患者前列腺液中细菌16SrRNA基因检测,探讨PCR方法诊断慢性前列腺炎细菌学病因的价值。方法收集102例慢性前列腺炎患者的前列腺液进行细菌培养,同时采用PCR法检测前列腺液中细菌16SrRNA基因,并测定和分析所得片段的DNA序列。对培养结果与PCR法检测结果进行了比较。结果102份前列腺液标本中,细菌培养法18例阳性,84例阴性,阳性率17．7％;PCR法71例阳性,31例阴性,阳性率69．6％。细菌培养法与PCR法检测结果比较,其差异有统计学意义（P〈0．05）。测序结果显示DNA序列与GenBank公布的16SrRNA基因序列具有很高的同源性。结论PCR技术对慢性前列腺炎的临床诊断具有重要意义。     

重症急性胰腺炎合并细菌感染的快速诊断——附17例检测分析

目的:探讨以16S rRNA基因为基础的细菌PCR法诊断重症急性胰腺炎早期合并细菌感染的价值.方法:17例疑有细菌感染的重症急性胰腺炎病人,术前B超引导下行胰周渗液细针穿刺检查,分别行以16S rRNA基因为基础的细菌PCR法检测和细菌培养.比较细菌PCR法检测结果和细菌培养结果.结果:17例中,PCR检测9例阳性,细菌培养10例阳性,该10例病人行手术治疗,术中所取胰周渗液行细菌培养证实为阳性.PCR检测重症急性胰腺炎合并细菌感染的敏感度为90%,特异度为100%.PCR法和细菌培养法分别需时5 h和3 d.结论:以16S rRNA基因为基础的细菌PCR法能快速、准确地诊断重症急性胰腺炎早期合并细菌感染,为手术治疗提供可靠依据.     

16SrRNA基因在诊断慢性非细菌性前列腺炎中的应用

目的探索快速可靠的检测慢性非细菌性前列腺炎细菌感染的新方法。方法应用PCR方法检测70例慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液和尿道拭子中细菌16SrRNA基因。用PCR技术扩增实验室保留株10株的16SrRNA基因，以人类基因组DNA、HBV-DNA和白色念珠菌为对照，检测该方法的特异性；采用倍比稀释法进行该方法的灵敏度检测。结果细菌16SrRNA基因的检出率在前列腺液中和尿道拭子中分别为54．3％和7．1％，差异有显著意义（P＜0．01）。对所测细菌株均获得920bp扩增产物，而与人基因组DNA、HBV-DNA和白色念珠菌无交叉反应；PCR最低能检测1．5^＊10^6／L大肠杆菌DNA。结论慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液中有细菌16SrRNA基因的检出。其病因可能与细菌感染有关。PCR具有快速，特异性和敏感性高的特点。     

前列腺液涂片细菌检查和细菌培养的相关性

对146例疑为前列腺炎的患者进行前列腺液常规涂片细菌检查和细菌培养。结果细菌培养查到细菌67例;79例未检查出细菌,其中5例细菌涂片阳性,而细菌培养则为阴性。细菌培养阳性率高于细菌涂片检查。     

中性粒细胞CD64在慢性前列腺炎诊断中的临床研究

目的研究中性粒细胞CD64在慢性前列腺炎诊断中的临床价值。方法选取76例患者作为疾病组,另取健康体检者58例为对照组,流式细胞术检测前列腺液中中性粒细胞CD64表达水平,同时使用PCR检测沙眼衣原体(CT)和解脲脲原体(UU),并行前列腺液培养及显微镜镜检。结果细菌性感染标本中的中性粒细胞CD64表达水平均比正常组显著升高,感染细菌中以模仿葡萄球菌和耳葡萄球菌阳性标本CD64表达水平最高,差异有统计学意义(P0.05)。结论中性粒细胞CD64表达水平可作为慢性前列腺炎细菌感染的诊断及判断病情的高效及时检测指标,优于细菌培养;常规PCR仅可用于诊断CT及UU型慢性前列腺炎,对细菌型慢性前列腺炎无诊断价值。     

慢性前列腺炎病原体培养药敏分析

目的评价慢性前列腺炎病原体培养药敏的分析特点,指导临床用药,減少滥用抗菌药物。方法对2011年1月1日至12月30日,深圳中山泌尿外科医院院门诊与住院的753例慢性前列腺炎患者,在排尿后使用1%苯扎溴胺对尿道口做消毒处理,并对前列腺实施按摩之后无菌收集前列腺液,第1滴用作常规检查,第2滴用作细菌培养加药敏和支原体培养。结果在753例慢性前列腺炎患者普通细菌培养共分离出262例阳性标本,为34.8%,其中两种致病菌混合感染有3例,占细菌培养阳性的1.1%。262例细菌培养阳性标本中有57例做支原体培养,其中16例解脲脲原体阳性,阳性率占28.1%,人型支原体没有发现阳性。结论慢性前列腺炎前列腺液(EPS)的病原体检测对临床诊治慢性前列腺炎具有重要意义。抗菌药物是治疗慢性前列腺炎的常用方法,但不可忽视前列腺炎细菌混合感染及其他病原体混合感染的存在。     

应用PCR技术扩增细菌16S rRNA快速诊断肝硬化SBP的分析

目的：建立PCR技术扩增细菌16S rRNA的快速诊断肝硬化自发性腹膜炎的实验方法并探讨其临床应用价值。方法以细菌16S rRNA基因为靶序列,利用计算机软件Primer Express设计一对通用引物UP1和UP2,建立快速诊断肝硬化自发性腹膜炎的PCR实验方法;同时采用该方法检测60例肝硬化患者的腹水中的细菌DNA情况,并比较PCR方法与腹水培养法的灵敏度和特异度等。结果用引物UP1、UP2对12个不同菌株进行PCR扩增,均得到996bp左右长度的DNA片段,敏感性实验表明,用UP1、UP2引物进行的PCR扩增最低可检测出10pg/ml。对60例肝硬化腹水标本进行PCR扩增,阳性率为30.0%（18/60）,明显高于同期腹水细菌培养阳性率仅为6.7%（4/60）,二者比较有显著性差异（χ2=8.625,P〈0.05）。结论 PCR法优于腹水培养,其阳性率、灵敏度、特异度均较高,具有早期、快速诊断自发性细菌性腹膜炎的重要的临床应用价值。     

基于16S rRNA的聚合酶链反应技术用于肺部感染患者痰标本中军团菌的检测

目的建立实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法,检测肺部感染患者痰液中军团菌属特异性16S rRNA基因。方法利用军团菌属特异性16S rRNA基因保守序列设计引物和探针,优化反应条件和反应体系,对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他病原菌标准菌株进行检测,验证该方法的特异性和敏感性。对150例肺部感染患者痰液标本进行检测,阳性者对基因扩增产物测序作验证试验。结果该方法检测军团菌属所有标准菌株均出现阳性信号,其他非军团菌属检测结果均为阴性,灵敏度为10 cfu/ml。150例肺部感染患者的痰液标本,经荧光定量PCR法检出军团菌阳性27例,阳性率为18.0%(27/150),经16S rRNA基因测序验证,阳性率为15.0%(22/150),经χ2检验二者差异无统计学意义(χ2=3.2,P﹥0.05),表明其较好的符合性和等效性。结论 realtime PCR法检测患者痰液标本中军团菌,具有快速、敏感、特异等特点,适用于临床军团菌感染调查及快速检测。     

舟山地区416例慢性前列腺炎微生物检测结果分析

[目的]调查舟山地区慢性前列腺炎微生物感染情况及几种主要细菌对多种抗生素的耐药性监测,为有效控制慢性前列腺炎提供实验室依据,指导临床用药。[方法]对416例慢性前列腺炎患者采用MearesStamey四段取样法作前列腺液细菌培养及药敏试验,同时检测淋球菌、解脲脲原体、人支原体和沙眼衣原体,对长期使用抗生素及原因不明的感染患者加做L型细菌培养及药敏试验。[结果]在416例慢性前列腺炎患者病原体阳性253例,普通细菌培养共分离出196例阳性标本（L型细菌7例）,阳性率为47．1％。葡萄球菌感染139例,占70．9％（其中凝固酶阴性葡萄球菌感染91例;凝固酶阳性葡萄球菌感染47例）。由支原体感染引起的34例,衣原体感染引起15例,淋球菌感染8例。[结论]慢性前列腺炎的细菌感染分布以革兰阳性球菌为主,其中葡萄球菌所占的比例最高;分离出来的普通细菌对临床常用抗生素耐药率均较高。对于长期大量使用抗生素而普通培养阴性的患者加做L型细菌培养,支原体和衣原体,淋球菌的检测对提高慢性前列腺炎细菌感染检出率有重要的意义。     

TaqMan探针法荧光定量PCR检测脑脊液细菌方法的建立及应用

目的 建立TaqMan探针法荧光定量PCR检测方法,用于脑脊液标本细菌的快速检测.方法 针对细菌的16S rRNA基因,设计合成细菌的通用引物和革兰阳性菌、革兰阴性菌分型探针,通过构建质粒和制作脑脊液模拟标本来研究引物和探针的检测特异度和敏感度.结果 两种革兰分型探针只对相应的细菌可以检测到荧光信号,乙肝病毒DNA、白色念珠菌及人基因组DNA检测结果均为阴性,此方法最低可以检测到10个拷贝的质粒DNA以及102CFU/ml的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌.结论 TaqMan探针法荧光定量PCR检测细菌的特异度和敏感度高,检测快速,对脑脊液细菌的早期诊断有重要意义.     

16S rRNA通用引物在血小板制品细菌污染检测中的应用

目的评价16S rRNA通用引物在快速检出血小板制品中污染细菌的实用性,寻找新的能够快速、准确地检出血小板中污染细菌的方法。方法用分子生物学方法提取样本中细菌DNA,用设计合成的16S rRNA和16S—23S rRNA基因区间引物进行扩增,产物经HaeⅢ酶切,酶切片段与血小板污染常见菌的酶切图谱对比,确定有无污染及污染菌种类。结果16S rRNA通用引物法可以在4h内完成全部检测,其中在保存24h的血小板标本中未检出污染菌,保存48h的血小板标本中有2份分别检出了金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌,与全自动细菌培养仪的结果一致。结论16S rRNA通用引物是一种快速、准确检出血小板制品中污染细菌的方法,结果可靠,具有较高的临床应用价值。     

Direct detection and amplification of Helicobacter pylori ribosomal 16S gene segments from gastric endoscopic biopsies.

Helicobacter pylori is an organism thought to play an important causative role in gastritis and peptic ulcer diseases. We have designed an RNA dot blot assay for the detection of H. pylori, using as probe a synthetic oligonucleotide complementary to its 16S rRNA. We have also used oligonucleotide primers, complementary to conserved sequences within bacterial ribosomal 16S genes, to amplify a H. pylori ribosomal 16S DNA fragment via the polymerase chain reaction (PCR). After determining the DNA sequence of this amplified H. pylori fragment, primers were designed for specific PCR amplification of H. pylori ribosomal 16S DNA sequences. Samples from clinical endoscopic biopsies were PCR amplified with universal 16S ribosomal primers to detect the presence of bacteria and with H. pylori-specific primers to uniquely detect H. pylori. Finally, by comparing the H. pylori-specific PCR assay to commonly used diagnostic tests, we demonstrate that the molecular technique of PCR amplification shows promising applications for the clinical detection of H. pylori.     

定量测定慢性前列腺炎病人前列腺按摩液和血浆的内毒素水平的临床意义——附45例分析

目的：探讨测定慢性前列腺炎（ＣＰ）病人前列腺按摩液（ＥＰＳ）和血浆内毒素水平的临床价值。方法：对４５例ＣＰ病人行ＥＰＳ显微镜检查和细菌培养,测定其ＥＰＳ和血浆的内毒素含量,并与对照组比较。结果：４５例ＣＰ病人的ＥＰＳ和血浆内毒素水平显著高于对照组（Ｐ〈０．０１）;且革兰阴性菌性ＣＰ病人的ＥＰＳ和血浆的内毒素水平与革兰阳性菌性ＣＰ病人比较均显著升高。结论：测定ＣＰ病人的ＥＰＳ和血浆内毒素的水平对ＣＰ的诊断和治疗均有指导意义,并且方法简便、快速、费用低廉。     

1244例慢性前列腺炎患者病原微生物检测及耐药性分析

目的探讨慢性前列腺炎患者前列腺中病原微生物及其耐药性。方法取前段尿（VBl）及前列腺液，进行常规外观、显微镜镜检、分离培养（细菌、真菌、支原体）及衣原体检测，采用API与ATB系统鉴定细菌；K-B纸片法测定细菌的耐药性；PCR法测定葡萄球菌的MceA基因；表型确证试验检测大肠埃希菌与克雷伯菌的超广谱β-内酰胺酶（ESBL），Mycoplasma IST2试剂检测支原体及对9种抗生素的耐药性；采用chemtme^TM ehlamydia抗原检测法检测衣原体。结果1244例前列腺液中702份标本中检出病原微生物786株，最常见的病原微生物为细菌356株（45．3％）、支原体306株（38．9％）和衣原体119株（15．1％）。葡萄球菌是引起慢性细菌性前列腺炎的最主要的病原菌，203株中126株为耐甲氧西林葡萄球菌（MRS），其对除万古霉素外的其他12种抗生素均有较高的耐药率；306株支原体对9种抗生素的耐药率分别为氧氟沙星（68．3％）、环丙沙星（80．4％）、红霉素（62．7％）、阿奇霉素（58．2％）、克拉霉素（51．6％）、四环素（21．2％）、强力霉素（12．7％）、交沙霉素（12．1％）、原始霉素（5．6％）；31株大肠埃希菌和克雷伯菌中，ESBL阳性12株，阳性率38．7％；38株肠球菌中，链霉素高度耐药17株，庆大霉素高度耐药15株，链霉素＋庆大霉素均高度耐药12株，耐万古霉素肠环球菌（VRE）2株。结论慢性前列腺炎病因复杂，病原微生物种类较多，多重耐药菌感染常见，加强病原微生物及耐药性检测，对于慢性前列腺炎的诊断与治疗具有十分重要的意义。     

The use of polymerase chain reaction to detect septicemia in critically ill patients.

OBJECTIVE: To describe the use of bacterial DNA amplification of conserved bacterial 16S ribosomal DNA nucleotide sequences by polymerase chain reaction (PCR) to detect the presence of septicemia in critically ill septic patients. DESIGN: Case series of blood samples from septic patients comparing the PCR results with conventional blood culture results. SETTING: A general intensive care unit in a tertiary referral hospital. PATIENTS: Two sets of samples (n = 101 and n = 55) from patients diagnosed as clinically septic and requiring blood cultures. They were classified by internationally accepted criteria into systemic inflammatory response syndrome, severe sepsis, and septic shock groups. INTERVENTIONS: Blood samples taken in a sterile fashion concurrently for blood culture, and PCR of the bacterial 16S ribosomal RNA gene in leukocytes and plasma. Two different DNA extraction techniques for PCR were tried sequentially. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: Blood culture and PCR positivity were measured in relation to the clinical classification of severity of sepsis. Using the initial extraction method (n = 101), ten patients were positive by both PCR and blood culture, eight patients were PCR positive and blood culture negative, and seven patients were blood culture positive and PCR negative. From the clinical criteria, PCR detected at least six true positives that had been missed on blood culture and missed four true Gram-positive bacteremias. When the initial code was broken, this deficiency was rectified using the improved extraction technique (n = 55), in which ten patients were positive by PCR and blood culture, 29 patients were PCR positive and blood culture negative, and two patients were PCR negative and PCR positive. CONCLUSIONS: We conclude that the use of PCR (for the 16S ribosomal DNA in the plasma) was significantly more sensitive than the use of conventional blood culturing techniques for the detection of bacteremia in seriously ill patients. This could prove to be a valuable adjunct to conventional blood cultures.     

Acute and chronic prostatitis

In summary, prostatitis is a complex syndrome that spans a spectrum from acute prostatitis with a straightforward presentation to CP-CPPS with a complex array of symptoms. The identification of prostatic or pelvic pain becomes a requirement for the diagnosis of CP-CPPS. The NIH system of prostatitis categorization is a refinement of the traditional classification of prostatitis by Drach et al, which was based on the localization test of Meares and Stamey. The NIH categorization system allows for a framework to define the disease process, and the NIH-CPSI was created to quantify the symptoms of chronic prostatitis. Integral to the classification of prostatitis is the presence or absence of inflammation, determined by looking for leukocytes in the EPS, seminal fluid, and VB3 specimens. In addition, the role of bacteria as a cause in category III prostatitis continues to be debated. Future research into using inflammatory markers (eg, tumor necrosis factor-alpha, interleukin-2) and using PCR to identify the presence of bacteria may further refine the pathophysiology of prostatitis. The mainstream treatment of chronic prostatitis involves antimicrobials, non-steroidal anti-inflammatory medications, and alpha-blockers. The potential role of asymptomatic category IV chronic prostatitis in the etiology of prostate cancer may be delineated further with future research.     

用16S rRNA基因克隆文库研究腹泻粪便中菌群分布

目的 建立16S rRNA基因克隆文库分析菌群的方法,用于临床标本菌群分布的检测.方法 临床标本直接提取核酸,用16S rRNA基因的通用引物进行PCR扩增、纯化、连接、克隆和测序,建立16s rRNA基因克隆文库,序列与数据库进行比对分析.结果 通过16S rRNA基因克隆文库分析,腹泻标本中检出4种细菌,脆弱拟杆菌为绝对优势菌,占91%;腹泻恢复后的粪便标本中菌群呈多样性,检出12种确定种属的细菌,其中脆弱拟杆菌占14%.结论 16S rRNA基因克隆文库是一种较好地研究粪便标本菌群的方法,可直接进行粪便标本的菌群分析和研究各种细菌在腹泻中的作用.