大质粒DNA提纯方法的改进

本文报道了一种源于Kado-Liu法经系列改进后产生的大质粒DNA检测与提取方法。改进之处主要是:裂解液组成中的Tris度为500mM,pH值为12.8～13.0;蛋白质的抽提除了酚—氯仿外同时使用了适量的醋酸钠(3M pH4.8)溶液;以异丙醇室温静置30分钟左右,取代冷乙醇较长时间的低温处理,进行DNA浓缩。该方法在肠道菌方面的应用中,显示了其简易、快速和较好的重复性。另外,用930～950μl新鲜10N NaOH液使裂解液pH值为最佳的经验值,既可避免因不同类型pH计产生不同结果的麻烦,亦为该方法能在普通实验室推广应用提供了方便。     

溶菌酶的提取和应用

从溶菌酶的研究历史、理化特性及其自然分布、抑菌机理及其抑茵谱几方面叙述了溶菌酶，介绍了现阶段溶菌酶的一些提取方法、应用及其开发前景。     

华癸中生根瘤菌质粒消除方法研究进展

结合对华癸中生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)质粒功能的研究,介绍了高温和吖啶橙处理法、标记质粒消除法和质粒的不相容性消除质粒法在华癸中生根瘤菌质粒消除中的应用,并比较了各方法的优缺点.     

堆肥微生物总DNA的提取与纯化方法

申请(专利权)人:湖南大学申请日期:2005.09.06申请(专利)号:CN200510032111.1主分类号:C07H21/04(2006.01)I本发明涉及堆肥中微生物总DNA的提取和纯化。本发明用磷酸盐缓冲液洗涤样品,用溶菌酶溶液和SDS溶液裂解堆肥微生物细胞,粗提的     

登革病毒Ⅰ型拷贝数标准质粒和检测体系的建立及其应用

目的建立登革病毒Ⅰ型(dengue virus-Ⅰ,DENV-Ⅰ)拷贝数标准质粒及其检测体系。方法将DENV-Ⅰ的前膜蛋白基因克隆至pMD19-T载体,建立DENV-Ⅰ标准质粒,采用实时荧光定量PCR法进行扩增,获得Ct值与病毒拷贝数的关系,绘制标准曲线,得到相应的标准曲线方程。采用建立的标准质粒及检测体系对3份2017年云南西双版纳DENV-Ⅰ患者的血清进行检测。结果经双酶切及测序鉴定,DENV-Ⅰ拷贝数标准质粒构建正确。实时荧光定量PCR得到的标准曲线方程为y=-0. 300 5 x+12. 133,R~2=0. 991 9。3份血清样品原液的病毒拷贝数分别为9 417 703. 12、21 949 591. 01及19 027 096. 91 copies/μL。结论成功建立了DENV-Ⅰ拷贝数标准质粒及其检测体系,且准确性较好,灵敏度较高,可用于血清样品中DENV-Ⅰ拷贝数的检测。     

谷胱甘肽的提取方法

谷胱甘肽具有重要的生理功能和医用保健价值,文章介绍了谷胱甘肽的常用生产方法;着重对从发酵液中提取GSH的5种方法进行了阐述与比较。对六种常用的谷胱甘肽检测方法进行了介绍。     

质粒DNA的大规模制备

质粒ＤＮＡ有重要的基因调节性能,直接注射裸露或用脂质体包埋的质粒ＤＮＡ常需要大量的质粒ＤＮＡ。当前广泛被采用的碱溶从细胞中提取质粒的方法有不少问题,其中纯化工艺产量较低是质粒大规模生产的主要瓶颈,因此设计和开发新型质粒生产方法具有重要的意义。     

由草炭提取黄腐植酸—提取方法及提取剂选择试验

本文研究了由草炭中提取黄腐酸的方法。对三种提取法(酸法、离子交换法和碱法)进行比较,其中碱法提取率达50.39％。本试验并对碱性提取剂进行选择,认为以NaOH为代表的提取剂为最佳。     

乳酸菌能量代谢的蛋白质组学研究进展

乳酸茵凭借其悠久的历史、显明的特征及与人类生活紧密相关的特点受到了生物界和医学界的广泛关注。近年来,利用蛋白质组学对其进行研究的成果层出不穷。概述了乳酸菌能量代谢的蛋白质组学研究进展,并讨论了代谢路径之间的相互关系。     

转基因乳酸菌的安全性探讨

乳酸菌(Lactic Acid Bacteria, LAB)在食品工业中的应用具有悠久的历史。其中所用到的一些物种是人类微生物群中的一部分,对人类健康具有有益作用。基于其长期使用和巨大的生物技术潜力,催生出了包括基因修饰在内的可对其进行各种改造的系统工具。然而,转基因乳酸菌仍然遭受反对并且受到严格的监管要求。本文介绍了乳酸菌获得“公认安全”状态的前景数据。讨论了乳酸菌的基因修饰及其可能产生的问题,并介绍了允许使用转基因乳酸菌的可能解决方案等,以便为进一步安全、合理使用转基因乳酸菌提供参考。     

支撑液膜萃取乳酸传质模型

本文对使用支撑液膜(Supported Liquid Membrane)从水溶液中革取乳酸(HL)的过程进行了理论分析,经过适当的简化,推导出支撑液膜革取乳酸的传质模型。对模型进行了实验验证,测得了膜的弯曲因子及过程的促进因子,模型计算值与实验值相吻合,同时得出膜内载体三烷基氧磷(TRPO)与乳酸形成的萃合物分子式为HL·TRPO。     

TRPO－磺化煤油萃取乳酸的影响因素

报导了萃取发酵Ｌ－乳酸中的萃取和反萃取行为的研究。结果表明，在萃取过程中，无机盐（ＭｇＳＯ４、ＺｎＳＯ４、ＫＨ２ＰＯ４）、乳酸钙、葡萄糖和溶液初始乳酸的浓度均对分配比ＤＬａ有明显的影响；并对９０℃热水的反萃取进行了研究。反分配比Ｄ′Ｌａ随有机相初始酸浓的增加而逐渐下降；还对萃取和反萃取机理作了初步的探索     

乳酸的乳化液膜萃取与有机溶剂萃取的比较

在乳酸发酵与分离耦合过程中,可以采用乳化液膜萃取法或有机溶剂萃取法提取发酵液中的乳酸。本文比较了这两种方法的传质机理和操作过程,并实验分别研究了它们的最佳工艺条件,提出：在最佳操作条件下,提取相同量的乳酸,有机溶剂萃取有机相的消耗量为乳化液膜法的３－４倍,乳化液膜法萃取率高,而且能得到浓缩的乳酸。     

Injury Mechanisms of Lactic Acid Bacteria Starter Cultures During Spray Drying: A Review

Lactic acid bacteria (LAB) starter cultures can be processed by many drying techniques, among which spray drying has great potential. However, injuries of LAB during spray drying lead to a low survival rate. The microbial injuries of LAB during spray drying are specifically induced by dehydration inactivation, thermal inactivation, and balance between the two. To reduce the drying temperature, new drying techniques based on spray drying were tried; that is, low-temperature vacuum–spray drying and spray–freeze drying.     

发酵液中乳酸的电渗析法分离

采用电渗法分离发酵液中低浓度乳酸,考察了电渗析器的操作条件对极限电流密度和乳酸电年速率的影响,并分别用修正的Ｗｉｌｓｏｎ公式和乳酸电渗析速率方程描述了它们之间的关系。     

双氧水催化氧化乳酸合成丙酮酸

本文研究了以乳酸为原料，用双氧水催化氧化合成丙酮酸，并探讨了催化剂，温度，原料配比，反应时间等因素对合成反应的影响，确定了最佳合成条件。     

由乳酸菌制备维生素B类化合物的研究进展

维生素B类化合物是人体必需物质,主要通过外源性的食物或药物来补充。选育得到的乳酸菌能产生天然的人体易于吸收的不同类型维生素B。介绍了近年来通过乳酸菌生物合成维生素B类化合物的研究进展,为进一步研究产维生素B类化合物乳酸菌菌种选育和代谢工程改造提供参考。     

基因治疗用质粒DNA的制备工艺

目的探索基因治疗用质粒DNA的制备工艺。方法以CaCl2沉淀法去除大分子RNA,Q-Sepharose和SOURCE两步离子交换层析法去除染色体DNA、小分子RNA、蛋白质等杂质,并对各步骤样品进行检测。结果质粒pIRVP3HNIL18终产品的产量为1.638mg质粒DNA/g细菌,纯度为1.839,相对回收率为12.55%,蛋白质含量为0.0028mg/ml,未检测到RNA和染色体DNA。结论此工艺可有效去除质粒DNA制备过程中产生的杂质,可应用于药剂水平质粒DNA的制备。