补锌糖尿病大鼠差异显示新基因片段的克隆鉴定及组织表达

目的克隆补锌糖尿病大鼠差异显示的新基因片段并检测其在各组织中的表达分布。方法对前期研究中分离到的与补锌有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序,同源性分析,对发现的2条新基因(2#差异显示片段及6#差异显示片段)设计特异性引物,进行RT-PCR检测,以观察新基因在各组大鼠肝脏中的表达变化,并检测新基因在不同组织中的表达情况。结果经克隆、测序、同源性分析,在GenBank中未找到与2#差异显示片段及6#差异显示片段高同源性的序列,确定2#及6#差异显示片段为新的基因片段;2#及6#新基因片段在糖尿病对照组、糖尿病补锌组的表达量均低于正常对照组,糖尿病补锌组的表达量高于糖尿病对照组(P<0.05);2#新基因片段在大脑及胰腺中表达量较高,在肾脏中表达量较低,在心肌、骨骼肌、胸腺中无表达。6#新基因片段在心肌、骨骼肌、大脑、肾脏、胰腺中均有表达,但在胸腺中无表达;2#及6#新基因片段被GenBank收录,接收号分别为AY952968、AY952970。结论分离并克隆了2条与补锌有关的糖尿病大鼠差异显示的新基因片段,经RT-PCR检测其在各组大鼠肝脏及其它各组织中表达分布后,在GenBank上成功登录。     

补硒糖尿病大鼠新基因片段的鉴定及组织表达

目的:克隆补硒糖尿病大鼠差异显示的新基因片段并检测其在各组织中的表达水平。方法:对前期研究中分离到的补硒糖尿病大鼠与糖尿病对照组之间差异显示的基因片段进行克隆、测序、同源性分析,对发现的5条新基因(Se-2、Se-6、Se-10、Se-14、Se-18)设计特异性引物,进行RT-PCR检测,以排除假阳性并观察其在各组大鼠肝脏中的表达水平及在不同组织中的表达分布。结果:经克隆、测序、同源性分析,发现有5个基因片段(Se-2、Se-6、Se-10、Se-14、Se-18)在GenBank中未找到高同源性的序列,为新的EST片段。其中4个基因片段(Se-2、Se-10、Se-14、Se-18)在糖尿病对照组、糖尿病补硒组肝脏中的表达量均低于正常对照组,糖尿病补硒组的表达量高于糖尿病对照组(P<0.05);在大鼠多种组织中表达水平也不甚相同。4个新基因片段被GenBank收录,接收号分别为AY952968、DQ351839、DQ351838、DQ351840。结论:分离并克隆的4条与补硒有关的糖尿病大鼠差异显示的新基因片段,可能与硒改善糖尿病糖脂代谢紊乱有一定关系。     

补锌糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢相关基因表达

目的探讨补锌对糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢相关基因蛋白磷酸酶2A(PP2A)和磷脂酶D(PLD)表达的调控。方法对补锌糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序及同源性分析;设计基因序列引物,RT-PCR检测观察各组大鼠肝脏中基因表达的变化。结果结果显示,片段Zn-4、Zn-8的碱基序列分别与PLD、PP2A同源性为100%,99%。糖尿病对照组PP2A mRNA表达量(0.5072±0.0574)低于正常对照组(1.3303±0.1855),P<0.05;糖尿病补锌组PP2A mRNA的表达量(0.7005±0.1563)与糖尿病对照组比较有所恢复(P<0.05)。糖尿病对照组PLD mRNA表达量(1.0754±0.0312)和糖尿病补锌组PLD mRNA的表达量(1.0130±0.0992)均高于正常对照组(0.7995±0.1040),P<0.05;糖尿病补锌组PLD mRNA的表达量与糖尿病对照组比较无变化(P>0.05)。结论补锌对糖尿病大鼠肝脏PP2A mRNA表达有上调作用,这可能是锌改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。     

补锌对糖尿病患者脂代谢紊乱的效应

作者检测了61例糖尿病患者血清TC、FC、TG、HDL-C等的含量,发现糖尿病合并大血管病变者TC、FC、TG、LDL-C及AI高于无大血管病变者;而HDL-C低于无大血管病变者。糖尿病大血管病变与TC、FC、LDL-C及AI呈正相关,与HDL-C呈负相关。糖尿病患者补锌治疗后TC、FC、TG、LDL-C、AI下降幅度与HDL-C上升幅度均明显优于未补锌的糖尿病患者。提示补锌有利于改善糖尿病患者脂代谢紊乱。     

补锌对糖尿病患者脂代谢紊乱的效应

检测61例糖尿病患者血清TC、FC、TG、HDL-C等的含量,发现糖尿病合并大血管病变者TC、FC、TG、LDL-C及AI高于无大血管病变者;而HDL-C低于无大血管病变者。糖尿病大血管病变与TC、FC、LDL-C及AI呈正相关,与HDL-C呈负相关。糖尿病患者补锌治疗后TC、FC、TG、LDL-C、AI下降幅度与HDL-C上升幅度均明显优于未补锌的糖尿病患者。提示补锌有利于改善糖尿病患者脂代谢紊乱。     

人胰岛素基因在糖尿病大鼠体内的表达

目的研究人胰岛素基因表达质粒在体外转染鼠成纤维细胞(NIH3T3)后对糖尿病大鼠血糖的影响。方法采用壳聚糖转染法将重组的人胰岛素基因表达质粒转染鼠成纤维细胞(NIH3T3),转染后72h,经G418抗性筛选出阳性克隆并培养到第24d,用免疫组织化学方法检测胰岛素的表达,同时用ELASA法监测转染后24d的细胞培养液的胰岛素水平。并将阳性克隆大量扩增,注射至糖尿病大鼠腹腔内,并与转染空载体的对照细胞比较,观察在糖尿病大鼠体内的胰岛素表达及对血糖等变化的影响。结果转染PCMV.INS的NIH3T3细胞培养液的胰岛素水平明显高于未转染组(P<0.01)及PCMV转染组(P<0.01),未转染组与PCMV转染组细胞培养液的胰岛素水平无明显变化(P>0.05)。接受胰岛素表达载体细胞的糖尿病大鼠,血糖明显下降,体重逐渐恢复。结论人胰岛素基因能成功转染非胰岛β细胞,并表达目的基因使血糖水平下降说明基因治疗有望成为1型糖尿病的重要治疗手段,壳聚糖是一种很有前途的胰岛素基因载体。     

2型糖尿病大鼠肾脏组织氧化应激相关基因的表达

[目的]比较2型糖尿病大鼠与正常大鼠肾脏组织中氧化应激相关基因表达的差异,探讨糖尿病肾病的发病机制。[方法]取雄性SD大鼠22只,其中正常对照组lO只;经小剂量链脲佐菌素(STZ)注射和高脂饮食喂养后,诱导成2型糖尿病组12只;分别抽取2组大鼠的肾脏组织,抽取总RNA并逆转录为cDNA,用Cy5标记实验组,Cy3标记对照组,获得两组动物来源的cDNA探针;cDNA探针与基因表达谱芯片杂交,用扫描仪扫描后分析统计。[结果]某些抗氧化相关基因在糖尿病大鼠肾脏中的表达明显降低。[结论]肾脏抗氧化防御机能减退,氧化应激作用增强在糖尿病肾病中起重要作用。     

硒对糖尿病大鼠肝脏蛋白磷酸酶基因表达影响

目的研究补硒对糖尿病大鼠肝脏代谢相关基因表达的影响。方法通过对前期研究分离到的与补硒有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序,并进行同源性分析。根据待检测的基因序列设计引物,进行RT-PCR检测,以观察各组大鼠之间肝脏中基因表达的变化。结果经过克隆、测序、同源性比较,差异显示片段Se-8的碱基序列与蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)的同源性为99%。糖尿病对照组(0.507 2±0.057 4)、糖尿病补硒组(0.698 2±0.039 6)PP2A表达量低于正常对照组(1.330 3±0.185 5)(P<0.05);糖尿病补硒组PP2A的表达量(0.698 2±0.039 6)高于糖尿病对照组(0.507 2±0.057 4)(P<0.05)。结论补硒对糖尿病大鼠肝脏PP2AmRNA表达有上调作用,这可能是硒改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。     

CYP2E1基因在2型糖尿病大鼠肝脏的表达

[目的]运用基因芯片技术，比较正常大鼠和糖尿病大鼠肝脏中细胞色素p4502E1(CYP2E1)基因表达的差异。[方法]对雄大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)，并予以高脂饮食制造2型糖尿病模型；从其肝脏抽提总RNA，进行反转录，并用Cy3-dUTP和Cy5-dUTP分别对正常组与实验组探针进行荧光标记，探针与基因表达谱芯片杂交，结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。[结果]糖尿病组与对照组的肝脏相比，Cy5／Cy3比值为10．082，有统计学意义，CYP2E1 mRNA表达升高。[结论]2型糖尿病可诱发肝脏CYP2E1基因表达增高。     

补硒糖尿病大鼠ABCa5基因克隆鉴定与表达

目的 克隆补硒糖尿病大鼠三磷酸腺苷(ATP)结合盒(ABC)转运蛋白A亚族的成员之一-ABCa5基因片段并检测其在肝脏中的表达水平.方法 将前期分离到与补硒有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段(简称差显片段)进行克隆、测序和同源性分析,并对ABCa5基因片段重新设计特异性引物,进行半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测,观察其在各组大鼠肝脏组织中表达的变化.结果 发现差显片段Se-12的碱基序列与ABCa5基因的同源性为99%.RT-PCR结果表明,与正常对照组(NC)(0.572 9±0.024 1)相比,糖尿病对照组(DM)(0.160 6±0.007 5)和糖尿病补硒组(DM Se)(0.385 7±0.019 4)中ABCa5基因mRNA的表达水平明显降低,但DM Se组中的该mRNA表达水平较DM组有所升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 ABCa5在糖尿病的发病及代谢过程中起着一定的调节作用;补硒可以上调糖尿病大鼠肝脏中ABCa5 mRNA的表达水平,这可能是硒改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一.     

锰中毒大鼠差异基因功能注释及代谢通路分析

目的 探讨锰中毒差异基因表达的功能分类及代谢通路,为研究锰中毒机制以及基因调控防治锰中毒提供依据。 方法 选取SPF级健康雄性SD大鼠6只,按体重随机分为对照组和实验组,每组3只。实验组大鼠给予25 mg/kg MnCl2 · 4H2O,按0.2 ml/100 g进行腹腔注射,每48 h注射1次;对照组按相同注射剂量注射PBS缓冲液。暴露1个月后,将大鼠麻醉后经心脏采血法处死,冰上取大脑纹状体,提取组织RNA并建立DNA数据文库,采用全基因组测序的方法,筛选锰中毒差异基因并分别进行GO功能富集分析、Pathway富集分析,探讨差异基因可能参与的代谢途径。 结果 大鼠大脑纹状体共检测到18 439条基因,筛选出17个锰中毒差异表达基因,其中10个基因为上调基因,7个基因为下调基因;根据基因功能分析,共筛选出富集程度较高的164条基因功能分支以及26条代谢通路。基因功能较多富集在突触信号、信号传导等功能,其中富集效果最为显著的是行为功能;代谢通路中基因富集较多的通路为胞吞途径、PI3K-Akt通路以及神经活性配体-受体相互作用通路,其中PI3K-Akt信号通路与筛选出的FoxO信号通路及mTOR信号通路有同一差异基因(29517基因)富集,神经活性配体-受体相互作用通路与谷氨酸能突触通路有同一差异基因(24415基因)富集。 结论 锰中毒差异基因可能通过PI3K-Akt信号通路、mTOR信号通路或FoxO信号通路影响锰中毒易感性,并且可能参与行为学的改变。     

抑制消减杂交技术克隆晕船易感大鼠脑干差异表达基因

目的　筛选晕船易感大鼠脑干组织差异表达基因。方法　利用抑制消减杂交(SSH)技术构建晕船易感大鼠脑干组织差异表达基因 cDNA文库,斑点杂交筛选含有插入片段的阳性克隆。结果　文库中442个克隆含有插入片段,斑点杂交获得的阳性克隆测序,获得39条差异基因片段和2条全长序列基因。其中高表达16条,含未知功能基因片段3条;低表达25条,含未知功能基因片段5条。结论　SSH技术是一种高效的筛选差异表达基因的方法,本实验结果为深入研究晕船易感性机制提供了重要的线索。     

子宫肌瘤中差异表达基因的研究

子宫肌瘤是妇女最常见的盆腔肿瘤之一 ,但其发病机制以及发生发展的分子生物学基础迄今未明。差异表达基因分析技术mRNA差异显示、代表性差异分析、抑制性消减杂交、DNA微阵列等可确定并克隆子宫肌瘤与正常肌层差异表达的基因 ,不仅有助于揭示子宫肌瘤的发病机制 ,而且为临床诊断和治疗提供新的思路。该文就差异表达基因分析技术在子宫肌瘤的应用进行综述     

晕船适应大鼠脑干差异表达基因的克隆

目的　分离晕船适应大鼠脑干差异表达基因片段 ,为探讨晕船适应机制提供基础。方法　采用抑制消减杂交方法将经过模拟晕船刺激获得晕船适应的大鼠与正常大鼠的脑干组织进行正、反向杂交 ,构建晕船适应大鼠脑干差减cDNA文库 ,应用点杂交进行阳性克隆的鉴定。结果　根据点杂交结果送交测序 ,获得脑干差异表达基因片段 2 5条 ,上调 14条 ,含 2条未知功能基因的部分序列 ;下调 11条 ,6条为未知功能基因的部分序列。结论　分析部分含有相关EST的已知功能基因 ,提示泛素系统、腺苷酸环化酶系统、线粒体基因组、包括胰岛素在内的神经内分泌系统在晕船及适应发生的过程中起着重要作用。     

恶性肺结节差异表达基因的生物信息学分析

目的 应用生物信息学方法挖掘恶性肺结节的相关基因,为恶性肺结节诊断和治疗提供靶点。方法 从GEO (Gene Expression Omnibus) 数据库中下载基因芯片数据集GSE108375和GSE27489,利用GEO2R筛选恶性肺结节的差异表达基因 (DEGs)。应用DAVID数据库进行GO和KEGG通路富集分析,利用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白质相互作用网络和关键基因模块,筛选恶性肺结节关键基因。运用UCSC和ONCOMINE数据库中的临床组织样本验证靶基因与肺癌的关系。结果 初筛出62个DEGs,富集分析发现差异基因在细胞粘附、细胞迁移、受体激活、信号转导等方面存在显著富集。共筛选出ITGB2、RAC2、CD44、PECAM1、HCK、DOCK2、WAS、MYO1F、AIF1 9个恶性肺结节靶基因,经临床肺癌组织样本验证靶基因在肺癌组织中存在显著高表达。结论 通过生物信息学筛选出9个靶基因,表明其可能是恶性肺结节发病机制、临床诊断和治疗的研究靶点。     

Co-localization of differentially expressed genes and shared susceptibility loci in human autoimmunity

Autoimmune diseases arise from complex interactions between environmental and genetic factors. Genetic linkage scans show that different autoimmune diseases share overlapping susceptibility loci. Lymphocytes from individuals with different autoimmune diseases, as well as unaffected first-degree relatives, also share a common gene expression profile. We sought to determine if genes within this autoimmune expression profile were nonrandomly distributed in the genome and if their distribution overlapped with shared disease susceptibility loci. We found that differentially expressed genes were distributed in a nonrandom fashion in chromosomal domains within the genome. Furthermore, positions of these domains were not statistically different from a number of shared autoimmune disease susceptibility loci. To our knowledge, this is the first study showing concordance between gene expression and genetic linkage results in common complex multifactorial human diseases.