人脐血CD34^ 内皮祖细胞的体外分化

目的：研究人脐血CD34^ 细胞群体中内皮祖细胞在体外分化为内皮细胞的过程中,干细胞标志以及内皮细胞表型随时间的变化。方法：将免疫磁珠细胞分选法（MACS）得到的CD34^ 细胞体外培养于纤连蛋白和无纤连蛋白处理的培养皿中,以免疫细胞化学鉴定贴壁细胞的内皮标志Flk-1和vWF,并以流式细胞仪分析其干细胞标志AC133。结果：贴壁细胞的内皮标志Flk-1和vWF是逐步出现的,d3时有27.0%贴壁细胞表达Flk-1,vWF不表达,d7时已100%表达vWF和Flk-1,纤连蛋白促进贴壁细胞内皮标志Flk-1和vWF的表达,d3时的表达百分率分别为34.0%和47.0%,d7时Flk-1和vWF的表达均为100%,在培养过程中,AC133阳性细胞的比例迅速下降,但纤连蛋白对AC133的表达无显著影响。结论：在内皮祖细胞分化的过程中,干细胞标志迅速消失,向内皮细胞分化,内皮细胞的表型是逐步出现的,纤连蛋白促进内皮祖细胞的分化。     

转HOXB4基因人骨髓MSC促进脐血CD34~+细胞体外扩增

目的 研究转HOXB4基因的人骨髓间充质干细胞(MSC)对脐血CD34~+细胞体外扩增的支持作用.方法 用病毒载体质粒转染包装细胞293T,收获病毒上清(VCM)感染MSC后,用潮霉素筛选获得转HOXB4的MSC(MSC-HOX).分别将MSC(对照组)与MSC-HOX细胞(实验组)作为CD34~+细胞体外扩增的饲养层细胞,结合细胞因子Fh3/Flk3配体(FL)、促血小板生成素(TPO)、干细胞因子(SCF)和粒细胞-集落生长因子(G-CSF)体外扩增脐血CD34~+细胞10 d,收集所有脐血细胞,检测细胞总数、CD34~+细胞总数,集落细胞形成单位(CFU)数.结果 生产重组逆转录病毒可有效将HOXB4基因转入靶细胞内并表达.脐血CD34~+细胞经体外扩增10 d后,细胞总数和CFU数两组间差异无统计学意义(P>0.05),脐血CD34~+细胞总数和比例高于对照组(P<0.05).结论 转HOXB4基因的人骨髓MSC在脐血CD34~+细胞体外扩增中,可保持CD34~+细胞未分化状态,有潜在的应用价值.     

替代微量脐血CD34+造血干细胞含量公认检测方法的分析

脐血CD34^＋造血干细胞含量的测定一般采用流式细胞仪进行检测,而同一份脐血采用不同的实验方法可能得出不同的结果。ISHAGE方法是一种公认的准确性高、重复性好的检测造血干细胞含量的方法，但是所需费用较高，国内使用这种方法的实验室还不多。因此，文献另外选择4种检测方法对同一样品的检测结果与ISHAGE方法进行比较，     

人参皂甙对脐血细胞凋亡的影响及其与PKC传导途径的关系

目的：探讨人参皂甙对脐血细胞凋亡的抑制作用及其与细胞内蛋白激酶C(PKC)信号传导系统的关系。方法：采用流式细胞仪测定不同刺激条件下的脐血单个核细胞凋亡率。结果：人参皂甙对脐血单个核细胞的凋亡有抑制作用，且凋亡率与其浓度呈负相关，PKC激活剂佛波酯(PMA)单独作用也可抑制细胞凋亡作用，人参皂甙抑制脐血细胞凋亡的作用可被PKC抑制剂H7抑制，此作用随H7浓度增加而增大。结论：人参皂甙具有类似造血生长因子的作用，可以抑制脐血细胞的凋亡，此作用与PKC信号传导途径激活有关。     

异基因移植CD56+CD16+量对移植物抗宿主病影响

目的 探讨异基因外周血干细胞移植供者CD56^＋CDl6^＋细胞的量对移植物抗宿主病（GVHD）的影响。方法 对16例白血病患者应用HIA配型完全相合同胞供者进行了外周血干细胞移植，并观察了输注CDl6^＋、CD56^＋量与GVHD的关系。结果 16例患者均早期获得了造血功能恢复，4例发生了Ⅰ度aGVHD，5例发生了Ⅱ度aGVHD，输注CDl6^＋、CD56^＋细胞的绝对量与Ⅱ度aGVHD发生呈负相关，相关系统为-0．67，Ⅱ度aGVHD所输注CD3^＋细胞绝对值、CD34^＋细胞绝对值无明显相关性。结论 异基因外周血干细胞移植GVHD的发生与输注CDl6^＋、CD56^＋细胞的绝对量相关。     

脐血与成人外周血成份的比较

我们将脐血与健康成人外周血的红细胞 (RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白 (Hb)、血小板 (PTL)以及CD34 细胞进行了比较 ,现报道如下。1资料与方法1.1脐血标本50份 :由我院妇产科提供。正常足月顺产新生儿 ,脐静脉无菌穿刺采集、ACD保养液 (1:4)抗凝。1.2成人外周血标本50份 :均采自     

21例重型再生障碍性贫血患者CD34^＋细胞检测及临床意义

目的：检测重型再生障碍性贫血（SAA）患者CD34^＋细胞骨髓单个核细胞比例,了解再生障碍性贫血发病与造血干细胞、祖细胞的关系。方法：应用流式细胞仪检测21例重型再生障碍性贫血患者CD34^＋细胞表达水平。并与对照组比较。结果：再生障碍性贫血组21例患者CD34^＋细胞比例为（0．196±0．164）％,对照组10例患者CD34^＋细胞比例为（1．129±0．570）％,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：再生障碍性贫血患者CD34^＋细胞表达明显减少,支持再生障碍性贫血造血干细胞内在缺陷的发病学说。此检测有助于再生障碍性贫血诊断,值得临床推广。     

不同时期移植人脐血 CD34+细胞对大鼠脊髓损伤修复的对比研究

目的 研究不同时期移植人脐血 CD34⁺细胞修复大鼠脊髓损伤的效果和机制。方法 免疫磁珠法从人新鲜脐血中分离得到 CD34⁺细胞。雌性 Wistar 大鼠 96 只, 以 IMPACTOR MODEL-Ⅱ脊髓损伤打击器建立 T10 脊髓损伤模型, 随机均分为免疫抑制剂应用组、 损伤后急性期移植组和损伤后亚急性期移植组, 对各组后肢功能恢复情况进行 BBB 评分, 损伤中心行双重免疫荧光染色、 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色和血管明胶墨汁灌注观察。结果 损伤后第 8～56 天, 细胞急性期移植组的 BBB 评分高于其余 2 组(P < 0.05); TTC 染色示组织活力降低区域比例小于其余 2 组(P < 0.01); 明胶墨汁灌注示脊髓损伤中心血管密度大于其余 2 组(P < 0.01); 亚急性期移植组的细胞存活密度大于急性期移植组（个/视野： 7.51±1.00 vs 5.51±0.89, t=6.051, P < 0.01）, 2 组均未观察到移植细胞的神经分化。结论 人脐血 CD34⁺细胞急性期移植可通过提高脊髓损伤中心血管密度促进微循环恢复, 增加组织活力,促进大鼠脊髓损伤后肢体功能恢复。     

人参茎叶总甙及Rb_1等单体对病毒感染细胞的保护作用

利用细胞培养技术观察人参茎叶皂甙(GNS)及Rb_1等单体对病毒感染细胞的保护作用。结果表明:GNS有明显的抑制HSV—I、HSV—Ⅱ、ADV—Ⅲ及VSV病毒在细胞内复制的作用,使细胞受到保护;其有效单体以Rb族为主。用含GNS霜剂对31例HSV—Ⅰ感染的口唇疱疹和口腔溃疡患者进行涂敷治疗,治愈27例(占87.10％)。本实验结果为临床应用GNS治疗某些病毒性疾病提供了一定的实验依据。     

Effects of the Ginsenosides Rg1 and Rb1 on Morphine-induced Hyperactivity and Reinforcement in Mice

Recent studies have demonstrated that ginseng saponin inhibits the hyperactivity and conditioned place-preference response induced by psychostimulants and opiates. This seems to occur by direct or indirect modulation of dopaminergic activity. However, it is not known which components of ginseng saponin are active. These experiments were conducted to determine the effects of the ginsenosides Rb₁ and Rg₁, major components of the protopanaxadiol and protopanaxatriol fractions of ginseng saponin, on morphine-induced hyperactivity and conditioned place-preference. Morphine-induced hyperactivity, but not apomorphine-induced climbing behaviour, was inhibited by both Rb₁ and Rg₁. These findings confirm the hypothesis that ginsenosides modulate catecholaminergic activity preferentially at pre-synaptic sites. Morphine-induced conditioned place-preference was inhibited by Rg₁, but not by Rb₁. It has previously been shown that at low doses Rb₁ and Rg₁ are equally effective at inhibition of catecholamine secretion at the pre-synaptic site, but that at high doses Rg₁ is a more effective inhibitor. This observation might explain our finding that morphine-induced conditioned place-preference was inhibited by Rg₁ only. Our findings suggest that Rg₁, a component of ginseng saponin with appropriate activity, might be a useful agent for prevention and treatment of the adverse effects of morphine.     

人脐带问充质干细胞体外培养、鉴定及其诱导分化的研究

目的通过体外分离、培养及鉴定人脐带间充质干细胞（humanumbilicalcordmesenchymalstemcells,hUCMSCs）,探讨其多向分化潜能。方法取正常足月新生儿脐带,采用组织贴壁培养法分离原代hUCMSCs,观察细胞生长形态。采用流式细胞仪技术检测hUCMSCs细胞表型及细胞周期。通过成神经细胞诱导和成脂肪细胞诱导,鉴定hUCMSCs的多向诱导分化能力。结果成功分离和培养hUCMSCs原代细胞,经流式细胞仪鉴定高表达间质细胞标志CD44和CDl05,阳性率为96．73％和96．10％,整合素受体CD29阳性率为99．53％;低表达造血系标志CD34和CD45阳性率为0．80％和1．91％,人白细胞抗原HLA-DR阳性率为1．41％。细胞周期检测hUCMSCs主要处于G0／G1期。hUCMSCs成神经细胞诱导,出现神经元样细胞;免疫组化检测神经巢蛋白（Nestin）呈阳性表达。hUCMSCs成脂肪细胞诱导,出现空泡样脂肪滴,油红O染色可见脂质沉积。结论hUCMSCs具有多向分化潜能,可跨胚层诱导分化为多种组织类型的细胞。     

CS/igf-1基因复合物促骨髓基质细胞增殖及分化的研究

目的:研究壳聚糖/igf-1基因(CS/igf-1)复合物对体外培养的骨髓基质细胞(MSC)分化及增殖的影响。方法:自大鼠股骨及胫骨组织中分离培养大鼠骨髓基质细胞,以含有人igf-1基因cDNA的哺乳动物表达载体pTRacer-igf-1与壳聚糖制备成CS/igf-1复合物加入细胞培养基中进行干预;另设空白细胞组、CS/空质粒干预组及单纯CS干预组作为对照。3H-TdR掺入法、甲苯胺兰染色分别检测细胞的增殖情况及成软骨活性。结果:与空白对照细胞相比,壳聚糖可使所培养的骨髓基质细胞表现出明显的成软骨活性。igf-1基因的参与则可显著促进细胞的增殖。结论:CS/igf-1复合物可促进对体外培养的骨髓基质细胞增殖并向成软骨细胞分化。     

HPLC法测定舒筋通络胶囊中人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1的含量

目的 建立舒筋通络胶囊中多种有效成分的含量测定方法.方法 采用HPLC法对制剂中人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1等有效成分进行含量检测.结果 Rg1、Rb1和R1线性范围分别为1.48～8.88 μg,1.36～8.16 μg和0.36～2.16 μg.该方法回收率Rg1为100.96%(RSD=0.84%),Rb1为99.20%(RSD=0.76%),R1为99.31%(RSD=1.06%).结论 本测定方法简便可行、重复性好,可用于本制剂中各有效成分的含量测定.     

金雀异黄素对HepG2细胞的生长抑制与诱导分化作用

目的 观察黄酮金雀异黄素(genistein,Gen)抑制人肝癌HepG2细胞的增殖和诱导其分化的作用。方法 体外培养HepG2细胞,以全反式维甲酸(RA)为阳性对照,MTT比色法测定Gen对HepG2细胞增殖的影响;细胞计数法测定HepG2细胞存活率;瑞氏-姬姆萨染色法和考马斯亮蓝染色法分别观察Gen对HepG2细胞形态、细胞微管蛋白排列的影响;放免法测定HepG2细胞AFP的分泌量;酶促反应试剂盒检测细胞中γ-GT、ALP;Diamondstone分光光度法测定细胞中TAT的含量。结果 MTT法和细胞计数法检测结果都表明,不同浓度(10 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1)的Gen诱导人肝癌HepG2细胞48 h,细胞增殖活力明显降低,并呈剂量依赖性下降。10 μmol·L^-1 Gen孵育HepG2细胞48 h后细胞形状由圆形转变为长梭形、细胞相互分散、细胞核变小、核仁的数目减少;微管微丝增多,排列更整齐,细胞趋向成熟分化。以10 μmol·L^-1 Gen分别处理HepG2细胞24,48,72和96 h后,显著地降低了γ-GT的活性和AFP的表达,增加了TAT和ALP的活性。结论 Gen能抑制人肝癌HepG2细胞的生长和增殖,并能诱导其向成熟细胞分化。     

人参皂苷Rb_1、Rg_1对许旺细胞NGF表达的影响

目的:研究人参皂苷Rb1和Rg1影响许旺细胞神经生长因子(NGF)的表达程度。方法:分离纯化成人新鲜离体神经许旺细胞,置于人参皂苷条件培养基孵育48h;采用间接免疫荧光法标记细胞,流式细胞仪检测许旺细胞NGF表达率。结果:人参皂苷Rb1和Rg1各实验组许旺细胞表达NGF的百分率较对照组显著升高(P<0.05);人参皂苷Rb1与Rg1组之间许旺细胞表达NGF的百分率无显著差异。结论:人参皂苷Rb1和Rg1可以通过促进许旺细胞合成分泌NGF而具有潜在加速周围神经损伤修复的作用。     

人胰岛素样生长因子-1重组腺病毒转染C17.2神经干细胞增殖及分化的影响

目的观察人胰岛素样生长因子-1重组腺病毒(Ad-IGF-1)转染对C17.2神经干细胞体外增殖和分化的影响。方法体外培养及鉴定C17.2神经干细胞,Ad-IGF-转染C17.2神经干细胞;Western-blotting法检测IGF-1蛋白的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测IGF-1蛋白的表达曲线;MTT检测C17.2神经干细胞增殖,NSE及MBP免疫组化观察C17.2神经干细胞体外分化。结果转染AdIGF-1的C17.2神经干细胞成功表达IGF-1蛋白;IGF-1蛋白在病毒转染5～7d达高峰,13d仍高于转染前,Ad-IGF-1转染后各时间C17.2神经干细胞的增殖与对照组相比有显著差异,Ad-IGF-1转染对c17.2神经干细胞向神经元细胞及神经胶质细胞的分化与对照组相比有显著差异。结论Ad-IGF-1转染c17.2神经干细胞可稳定表达IGF-1,Ad-IGF-1转染促进C17.2神经干细胞的增殖及向神经元细胞和少突胶质细胞的分化。     

茵陈素对肺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 :探讨茵陈素对肺癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法 :应用光镜、四氮甲唑蓝 (MTT)方法和流式细胞术分析茵陈素对肺癌细胞形态学、生长和细胞周期的变化。结果 :茵陈素能抑制肺癌细胞的增殖 ,呈剂量依赖性 ,以160μg/ml抑制作用最明显 ,抑制率达52 4 %。80μg/ml时 ,S期和G2/M期细胞比例开始下降 ,细胞被阻滞于G0/G1 期 ,不能进入S期及G2/M期 ,增殖指数明显下降。结论 :茵陈素在体外对肺癌细胞具有抑制作用 ,通过抑制DNA合成 ,将细胞阻滞于G0/G1 期来抑制细胞增殖。     

罗格列酮对体外培养小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1生长与分化的影响研究

目的:研究罗格列酮对体外培养小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1生长与分化的影响。方法:以小鼠MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型,分别加入1、2、5、10μmo·lL-1罗格列酮干预,MTT法测定细胞活性并计算生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫组化法分析细胞中促凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达;测定细胞中分化指标碱性磷酸酶(ALP)的活性。设立只加入培养基处理的空白对照组。结果:与空白对照组比较,罗格列酮各浓度组生长抑制率、细胞凋亡率升高(P均<0.05),Bax表达增强、Bcl-2表达减弱、ALP活性下降(P均<0.05),且呈浓度依赖性。结论:罗格列酮可抑制MC3T3-E1细胞生长及分化,并诱导其凋亡;而Bax/Bcl-2可能参与凋亡的发生,并可能起关键调控作用。