甜米酒酒曲微生物分离和菌种鉴定

甜米酒传统酿制工艺中对微生物多样性的研究较为不足。对不同来源的酒曲微生物进行分离和初步分类鉴定。从12种甜米酒酒曲分离纯化细菌和真菌微生物,分别利用细菌16S rRNA基因和真菌内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列为目的基因进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增和测序,通过序列相似性比对和构建系统发育树,并分别进行细菌和真菌初步菌种鉴定。结果显示,从12种不同来源的酒曲筛选和分离到46株细菌和54株真菌;通过分子生物学方法鉴定出41株细菌和16株真菌的种属;酒曲微生物中含有大量芽孢杆菌(Bacillus),少量病原菌和腐败菌,表明酒曲仍需要严格的制作工艺和标准;真菌除酿酒酵母外,还鉴定出毕赤酵母和扣囊复膜酵母等非酿酒酵母及米根霉、小孢根霉、印度毛霉和卷枝毛霉等丝状真菌。     

一株产凝乳酶细菌的分离与鉴定

利用酪蛋白和麸皮培养基从奶牛场土壤中分离出高凝乳活力,低蛋白水解力的细菌.获得22株产凝乳酶细菌,其中菌株BB-23产凝乳酶活力高而蛋白水解活力低,经形态观察、生理生化和16S rRNA鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subalis),该菌株在麸皮培养基发酵72h后产凝乳酶活力达73.80SU/mL,蛋白水解力为16.01U.     

一株产凝乳酶解淀粉芽孢杆菌的筛选、鉴定及酶学性质

采用酪蛋白培养基,从甘南牦牛放牧区分离筛选产凝乳酶细菌。通过形态学、生理生化特征和16SrDNA序列同源分析对菌株进行鉴定,并对该菌株所产凝乳酶的特性进行了研究。从牧区采集的56个样品中共筛选得到6株产凝乳酶细菌,复筛得到一株凝乳活力高、蛋白水解力低的菌株GN4.1,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),在麸皮培养基中发酵48h,凝乳活力可达1011.56SU/mL,蛋白水解力为14.61U/mL。凝乳酶的最适作用温度为60℃,65℃加热10min后凝乳活力丧失;最适作用pH为5.5,在pH3.5～8.5内稳定性较好。预期该菌株所产凝乳酶有用于乳品加工业的潜力。     

抗青霉芽孢杆菌优良菌株的分离、筛选及鉴定

为了获得一株对青霉有强烈拮抗作用的芽孢杆菌以应用于食品的防腐保鲜中,从木瓜、柑橘、葡萄、全麦面包、太子参、陈皮等食品及中草药共计30个样品中分离得到132株芽孢杆菌。通过平板对峙法,筛选出18株对青霉有较强拮抗作用的芽孢杆菌。对其中3株抑菌效果显著的芽孢杆菌利用杯碟法测定其发酵液的抑菌效果,最终筛选出一株芽孢杆菌LPL40,其发酵上清液对青霉的抑菌圈直径达到(13.94±1.90)mm。通过形态学、生理生化及16S rDNA鉴定,最终将该菌株命名为解淀粉芽孢杆菌LPL40(Bacillus amyloliquefaciens LPL40)。     

酱香型白酒酿造酒醅中产香芽孢杆菌的分离鉴定

为了改善并增强酱香型白酒香气,使其具有独特的风味特征,本研究从七轮次混合酒醅中分离到的7株菌中筛选到一株产香性能较优的菌株DAI bj-1。通过观察该菌株在肉汤琼脂培养基上的菌落形态及细胞形态特征（革兰氏染色为阳性）,初步判断该菌为革兰氏阳性菌。通过革兰氏阳性菌鉴定卡（GP）、芽孢菌鉴定卡（BCL）等生理生化实验结果,PCR扩增、上机测序以及系统发育树的构建分析,该菌株与标准菌株序列的相似性为99.93%,即酒醅中分离筛选到的菌株DAI bj-1为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。     

习酒酒曲中产淀粉酶细菌分离及性质研究

从习酒酒曲中分离筛选出16株产α-淀粉酶菌株,镜检及生理生化试验初步鉴定均为革兰氏阳性芽孢杆菌;菌株产酶最适宜温度在45-80℃之间,除一株高温型α-淀粉酶菌株外,其余均为中温型α-淀粉酶菌株;酶解产物纸层析分析,既有液化型α-淀粉酶,也有糖化型α-淀粉酶。     

贵州黑糯米酒曲优良酵母菌分离筛选与鉴定

从贵州黑糯米酒曲中分离出酵母菌312株。通过菌落形态菌体形态观察及生理生化实验将其初步鉴定至5个属。酵母属57株、假丝酵母属14株、复膜孢酵母属28株、毕赤酵母属212株、德巴利氏酵母属1株。经TTC法、杜氏管法、发酵法及玉米糖化醪法逐级筛选,最终筛选出1株产酒量高产香好的菌株,编号为Q3～J8。并提取菌株Q3-M8ITS序列进行分子生物学鉴定,Q3-J8为布拉酵母（Saccharomyces boulardii）。     

产凝乳酶解淀粉芽孢杆菌的诱变选育

为了获得高产凝乳酶菌株,以产凝乳酶解淀粉芽孢杆菌为出发菌株,采用紫外线和硫酸二乙酯进行诱变。诱变后筛选得了一个突变株L-6,凝乳活力为1419.7 SU/m L,比原始菌株提高了40.2%;水解活力降低了22.39%,凝乳活力与蛋白水解活力的比值为125.64,比出发菌株提高了81.32%。传代实验表明,该菌株具有良好的遗传稳定性。      

1株高产凝乳酶菌株的鉴定及N~+注入诱变选育

为获得高产凝乳酶的菌株,以市售干酪为原料,从中分离得到1株具有高凝乳活力的菌株XC-1。通过生理生化实验、16S rDNA同源性序列分析,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。采用N+注入法对筛选出的菌株进行诱变,确定最佳诱变条件为能量20 keV、剂量2.08×1015ions/cm2,获得1株特性优良的诱变菌株XCYB-6,其凝乳活力达到2 181.82 SU/mL,比出发菌株提高65.63%,蛋白水解活力为2.53 U/mL,凝乳活力与蛋白水解活力的比值高达862.38。传代(6代)实验表明,诱变菌株具有良好的遗传稳定性。     

产聚γ-谷氨酸菌株的筛选及鉴定

从高温处理过的豆瓣酱等样品中分离获得1株细菌菌株L536,其产物经纸层析分析及氨基酸组成分析鉴定,确定是聚谷氨酸。菌株L536通过形态特征、生理生化特征及16S rRNA基因序列分析,初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolique faciens)。该菌株在37℃,180 r/min振荡培养48h,产γ-PGA可达15 g/L。     

Characteristics of Miniature Cheddar‐Type Cheese Made by Microbial Rennet from Bacillus amyloliquefaciens: A Comparison with Commercial Calf Rennet

Miniature Cheddar‐type cheeses were produced using microbial rennet from Bacillus amyloliquefaciens (milk‐clotting enzyme [MCE]) or calf rennet (CAR). With the exception of pH, there were no significant differences in gross composition between MCE‐cheese (MCE‐C) and CAR‐cheese (CAR‐C). The pH value of CAR‐C was significantly higher than that of MCE‐C at 40 and 60 d of ripening. The total nitrogen content of the pH 4.6‐soluble fraction obtained from MCE‐C was higher than that obtained from CAR‐C. However, nitrogen content of the 12% TCA‐soluble fraction was similar between CAR‐C and MCE‐C. The extent of α_s1‐casein and β‐casein hydrolysis, measured by urea‐PAGE, was similar in both cheese samples. The hydrolysis of β‐casein was lower than that of α_s1‐casein. Different reverse phase‐high‐performance liquid chromatography peptide profiles of ethanol‐soluble and ethanol‐insoluble fractions were obtained from CAR‐C and MCE‐C. The peptide content in the 2 cheese samples increased throughout ripening; the ratio of hydrophobic to hydrophilic peptides was lower in MCE‐C than in CAR‐C. Compared with CAR‐C, MCE‐C was softer as a result of higher protein hydrolysis. Microbial rennet from B. amyloliquefaciens contributed to higher proteolytic rates, which reduced ripening time.     

产骨胶原蛋白酶菌种的筛选与鉴定

从堆积骨骼的土样中经初筛、复筛和牛骨粉发酵实验,筛选出高产骨胶原蛋白酶的菌种MBL13(酶活36.80±1.93 U/mL).经形态学观察、生理生化特性、16S rDNA序列分析和傅里叶红外测定细胞结构,鉴定该菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),并经牛骨胶原蛋白的酶解对比实验表明,MBL13所产的酶酶...     

不同来源酒曲酿制米酒中乳酸菌的分离与鉴定

为了研究湖北孝感和四川成都地区米酒曲中乳酸菌的多样性,该研究利用孝感凤窝米酒曲和成都农家自制米酒曲制作米酒, 并采用改良MRS固体培养基和分子生物学技术对米酒中的乳酸菌进行分离、鉴定。结果表明,从孝感米酒中共分离出42株乳酸菌,隶属于7个种,分别为戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）、融合魏斯氏乳酸菌（Weissella confusa）、植物乳杆菌（Lactobacillus plan- tarum）、发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）、能动乳杆菌（Lactobacillus agilis）、屎肠球菌（Enterococcus faecium）和乳酸乳球菌（Lac- tococcus lactis）;从成都米酒中共分离出35株乳酸菌,隶属于7个种,分别为P. pentosaceus、W. confusa、L. plantarum、E. faecium、食窦魏 斯氏乳酸菌（Weissella cibaria）、约汉逊氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）和短乳杆菌（Lactobacillus brevis）。两种米酒中分离出的相同菌种为P. pentosaceus、W. confusa、L. plantarum和E. faecium。其中,P. pentosaceus为两种米酒的优势菌株。     

浆水中微生物的分离与鉴定

以浆水为实验材料,在多种培养基平板上分离纯化其中的微生物,共得到24 株菌,其中细菌20 株,丝状真菌3 株,酵母菌1 株。对纯化后的各菌株进行菌落形态观察、革兰氏染色、生化特性研究以及分子生物学鉴定,结果表明：浆水中存在多种微生物,其细菌以乳杆菌属或双歧杆菌属等益生菌为主,酵母菌为酿酒酵母,丝状真菌为变灰青霉和橘青霉。结果说明浆水微生物组成优良,具有开发利用潜力,但其中还存在杂菌和有害菌,应在生产中引起进一步重视。     

传统发酵牦牛酸奶中马克斯克鲁维酵母菌的分离鉴定及系统发育分析

对川西北部分牧区的10 份传统发酵牦牛酸奶样品进行酵母菌的分离,通过常规形态特征和26S rRNA基因测序分析鉴定出16 株马克斯克鲁维酵母菌（Kluyveromyces marxianus）。同源性分析显示16 株分离菌与已知马克斯克鲁维酵母的同源性高达99.3%～100%。16 株分离菌中形成明显的两种序列类型,其中10 株分离菌与另外6 株分离菌相比在扩增片段的第537位点上发生碱基缺失、第554位点上碱基由G突变为A、第564位点上碱基由A突变为T。系统进化分析显示两种序列类型的分离株也形成两个独立进化分支。     

传统米发糕发酵剂中乳酸菌和酵母菌的分离鉴定

对米发糕发酵所用的传统发酵剂中的乳酸菌和酵母菌进行分离培养和初步鉴定,从中分离纯化出3 株乳酸菌和5 株酵母菌,通过菌落形态观察及生物学特性的研究,初步鉴定3 株乳酸菌均属于干酪乳杆菌属,5 株酵母菌均属于酒香酵母属。     

岩藻多糖酶产生菌的筛选、鉴定及发酵条件初探

从我国厦门海域采集的样品中分离得到129株真菌,以岩藻多糖为唯一的碳源,经过初筛和复筛得到28株岩藻多糖酶产生菌,其中PZ322号菌株岩藻多糖酶产量最高为3.83IU/ml,且发酵性能较稳定,被确定为下一步研究的出发菌株。我们对该菌株进行了形态学鉴定及ITS序列分析,表明该菌为温特曲霉(Aspergillus wentii)。发酵实验结果表明,PZ322产岩藻多糖酶的较优培养基为(%):麸皮5,海带粉2,(NH4)2SO40.4,此时酶活力最高可达6.90IU/ml。     

酒曲中生香酵母的分离及生理生化鉴定

从酒曲中筛选出11株生香酵母,并对其形态及生理生化特性进行研究,确定其种属。筛出菌后进行发酵测发酵液中总酯含量,选出高产优质菌株。在11株产酯酵母中,产酯最高的菌株是X7,其发酵液总酯含量达到1.78 g/L。     

茅台大曲中酵母的分离、鉴定及其功能初探

采用可培养方法对酱香型白酒大曲中的酵母菌进行计数和筛选,通过形态学特征、生理生化实验及酵母26S rDNA分子生物学方法鉴定酵母,并分析酵母的发酵能力和风味成分。结果表明,酱香型大曲中酵母数量为103 CFU/g;共分离鉴定6种酵母,各酵母产香能力不同,编号FBKL2.0071扣囊复膜酵母(Saccharomycopsis fibuligera)固态发酵物具有浓郁的果香味,其中以乙酸乙酯、乙酸异戊酯、苯乙醇、乙酸苯乙酯、棕榈酸乙酯含量较高。编号FBKL2.0082多株伯顿丝孢毕赤酵母(Hyphopichia burtonii)固态发酵物呈浓郁的花香味,其中以乙酸乙酯、乙酸异戊酯和苯乙醇含量较高。这两株酵母固态发酵时都能产生大量的酯类和醇类等挥发性香味物质,还有少量醛、酮、酚和烷类等物质。分离得到的酵母产酒能力不同,总体产酒能力不高。     

不同生境中芽孢杆菌的分离鉴定及药敏性检测

为了给农业生产(发酵饲料、堆肥、污水处理)及微生态调节剂的制备提供前期理论依据和优良的微生物资源,本研究以土壤、饲料和肥料为材料,分离筛选出22株优良的芽孢杆菌菌株,按《伯杰氏细菌学鉴定手册》和芽孢杆菌特有的生理生化指标对其进行了初步鉴定,结果显示,其中的T-1为多粘类芽孢杆菌(Bacillu spaenibacillus polymyxa);T-2为桥石短芽孢杆菌(Bacillus choshinensis);T-6为软骨酸类芽孢杆菌(Bacillus paenibacilluschondroitinus);T-8为解淀粉类芽孢杆菌(Bacillus paenibacillus amyloyticus);S-4为饲料类芽孢杆菌(Bacilluspaenibacillus pabuli);S-6为哥本类芽孢杆菌(Bacillus paenibacillus kobensis)。其余的16株芽孢杆菌还有待于进一步鉴定。在此基础上,采用纸片琼脂扩散法测定了已鉴定出的6株芽孢杆菌对常用的12大类35种抗生素的药敏性。结果显示,分离自土壤、饲料及堆肥中的芽孢杆菌均对喹诺酮类、氨基糖甙类、大环内酯类和糖肽类抗菌素表现出敏感性,大部分对多肽类抗菌素表现出耐受性,其他抗菌素则在不同芽孢杆菌菌株间表现出差异性。