五子衍宗丸含药血清对活性氧致大鼠精子鞭毛超微结构损伤的保护作用

目的：观察五子衍宗丸含药血清对活性氧致大鼠精子鞭毛超微结构损伤的保护作用。方法：采用次黄嘌呤（0.6mM）-黄嘌呤氧化酶（0.05U/mL）活性氧发生体系,收集大鼠附睾精子,体外与活性氧及五子衍宗丸含药血清（低、中、高剂量）共孵育15min和60min,采用环境扫描电镜观察精子鞭毛超微结构的变化。结果：与活性氧组共孵育60min后,部分精子鞭毛质膜连续性中断,部分膜脱落,鞭毛暴露。各浓度五子衍宗丸含药血清（低、中、高剂量组）组精子鞭毛质膜完整。结论：五子衍宗丸含药血清体外对活性氧造成的精子鞭毛质膜损伤具有一定的保护作用。     

大鼠山仙颗粒含药血清对S-180肉瘤细胞bcl-2基因表达的影响

目的探讨山仙颗粒(SXG)含药血清对S-180肉瘤细胞中bcl-2基因表达的影响。方法以不同浓度的山仙颗粒含药血清作用于体外培养的S-180肉瘤细胞,待24 h,48 h,72 h后制备细胞涂片,分别用免疫细胞化学(SABC)和免疫荧光化学(FITC)法,检测不同浓度、不同作用时间的含药血清对S-180肉瘤细胞中bcl-2基因表达的影响。结果山仙颗粒含药血清对bcl-2基因表达有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。结论大鼠山仙颗粒含药血清能显著降低S-180肉瘤细胞中bcl-2基因表达,从而促进S-180肉瘤细胞凋亡。     

不同性别大鼠中药含药血清对成骨细胞增殖的影响

[目的]观察不同性别大鼠的中药续断含药血清对成骨细胞增殖的影响.[方法]1)制备大鼠含药血清:取雌性与雄性Wistar大鼠各12只,按性别随机分为4组,分别为:雄性给药组,雄性对照组,雌性给药组,雌性对照组,每组各6只,给药组按体质量(4.5g/kg)分别给予续断水提液灌胃、对照组按体质量分别给予等量生理盐水.灌胃1周后取血,离心提取血清.2)分离、培养大鼠的原代成骨细胞.3)将各组大鼠血清稀释为2.5%,5%和10%3个浓度分别培养大鼠成骨样细胞,采用噻唑蓝法(MTT)检测细胞增殖能力.[结果]血清浓度为2.5%时,雌性给药组(0.569 0±0.029 5)与雄性给药组(0.361 3±0.098 3)比较,有显著性差异(P<0.05),雌性给药组与雌性对照组(0.378 7±0.047 6)比较,也有显著性差异(P<0.01);当血清浓度为5%时,雌性给药组(0.879 3±0.100 7)与雄性给药组(O.356 0±0.048 2)比较,有显著性差异(P<0.01),雌性给药组与雌性对照组(0.386 3±0.018 0)比较,也存在显著性差异(P<0.01);当血清浓度为10%时,雌性给药组(0.856 0±0.017 5)与雌性对照组(0.381 7±0.198 6)比较,存在显著性差异(P<0.05).在各浓度的血清中,雄性给药组与雄性对照组之间均无显著性差异.[结论]大鼠的续断含药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用.这种作用在雌性大鼠的血清中表达强于雄性大鼠.     

白背叶根含药血清对脂多糖诱导下RAW264.7细胞分泌的影响

目的:观察不同浓度的白背叶根含药血清对脂多糖(lipopolysac-charide,LPS)诱导下RAW264.7细胞分泌的影响。方法:制作高、中、低浓度白背叶根含药血清,以CCK-8法检测不同浓度白背叶根含药血清对RAW264.7细胞活力的影响。以脂多糖刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型,检测白背叶根含药血清对细胞上清液中炎症介质一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、白三烯B4(LTB4)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响。结果:不同浓度的白背叶根含药血清均对RAW264.7细胞活力无影响;与模型组比较,10%、5%的白背叶根含药血清可显著抑制NO的释放(P<0.05或P<0.01),10%白背叶根含药血清可显著抑制LTB4的分泌(P<0.05),2.5%白背叶根含药血清可显著抑制IL-1β的分泌(P<0.05);但不同浓度的白背叶根含药血清对PGE2、TNF-α的分泌无显著影响。结论:白背叶根的抗炎机制可能是通过抑制炎症反应中NO,LTB4,IL-1β的释放而实现。     

清毒栓含药血清对宫颈癌SiHa细胞MDM2基因的影响

目的研究中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用,从细胞生物学及分子生物学水平探讨清毒栓对抑制宫颈癌SiHa细胞生长的作用机制。方法以不同浓度清毒栓含药血清培养液作用于SiHa细胞,并设立空白血清及含中、西药阳性对照药血清为对照,通过MTT法检测清毒栓对细胞生长增殖的影响;用流式细胞分析技术进行细胞周期及细胞凋亡检测,并用RT—PCR法半定量检测原癌基因MDM2表达。结果经清毒栓含药8％的血清培养液作用后细胞数量减少,其中以血清作用72h时对细胞抑制作用最强,与空白组比较,差异有显著性（P〈0．01）;细胞周期各时相中,清毒栓含药血清S期细胞所占的比例明显减少,对细胞凋亡有影响,但未见明显规律性,RT—PCR结果示清毒栓含药血清细胞中MDM2表达明显减少。结论清毒栓含药血清不仅可直接抑制宫颈癌细胞的生长,并可能通过下调MDM2基因表达的分子机制,达到抑制肿瘤的目的。     

细辛含药血清对大鼠心肌细胞钠通道的影响

目的研究中药细辛舍药血清对大鼠心肌细胞钠通道的影响,在离子通道水平揭示细辛抗缓慢型心律失常作用的可能机制。方法用原代培养的方法获得单个心肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录心肌细胞钠通道电流加入含药血清前后的变化。结果25％细辛舍药血清对钠通道的激活曲线、1-V曲线均有影响。结论细辛含药血清对心肌细胞钠通道电流有增强作用。     

西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞生长的影响

目的研究西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞系(MCF-7)生长及其细胞周期分布的影响。方法应用MTT比色法检测肿瘤细胞活性,流式细胞仪分析细胞周期相对分布。结果西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞系(MCF-7)有较强的抑制作用,其抑制率与含药血清浓度呈直线相关。流式细胞仪周期分析结果显示含药血清处理24 h,S期细胞比例增加,G2/M期细胞减少;处理48 h后,G0/1期细胞增多,S期细胞减少。结论西黄丸含药血清可抑制人乳癌细胞系(MCF-7)细胞生长,并可干扰其细胞周期。     

黄芪含药血清对人乳腺癌MCF-7细胞的实验研究

目的:研究不同浓度黄芪含药血清对雌激素受体阳性的人乳腺癌MCF-7细胞增殖和细胞周期的作用以及Bcl-2蛋白表达的影响,初步探讨黄芪的植物雌激素效应情况.方法:采取MTT法观察不同含药血清组对人乳腺癌MCF-7细胞在不同时间段(24h,48h,72h)的增殖活性,检测细胞周期及细胞凋亡率,检测细胞凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达.结果:黄芪含药血清可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,并且呈现不同剂量的梯度性;不同浓度黄芪含药血清均不能诱导细胞的凋亡;但黄芪高剂量组可以明显的增加G0/G1期比例;黄芪含药血清可以上调Bcl-2蛋白的表达.结论:黄芪含药血清可以抑制MCF-7细胞的增殖;高剂量组可以使MCF-7固定在G0/G1期;可部分上调Bcl-2蛋白的表达,抑制细胞凋亡.     

大鼠山仙颗粒含药血清对S-180肉瘤细胞Bax基因表达的影响

目的 探讨山仙颗粒(SXG)含药血清对S-180肉瘤细胞的抑制作用及对凋亡相关基因Bax表达的影响,以揭示其临床抗肿瘤的分子机制.方法 将10％及100％的SXG含药血清作用于体外培养的S-180肉瘤细胞,分别用MTT比色法和免疫细胞化学(SABC)法检测在24,48,72 h后,含药血清对S-180肉瘤细胞的增殖抑制和对Bax表达的影响.结果 MTT法表明,与空白对照组比较,SXG含药血清能显著抑制S-180肉瘤细胞的增殖(P＜0.01),其中100％ SXG含药血清组在24,48,72 h增殖抑制率分别为31.61％,41.44％,46.69％.SABC法表明,SXG含药血清可使Bax表达高于空白对照组(P＜0.05),其中100％ SXG含药血清组在24,48,72 h Bax表达率分别为59.26％,64.28％,68.19％,具有明显的量-效与时-效关系.结论 大鼠SXG含药血清能显著抑制体外培养的S-180肉瘤细胞的增殖,其机制可能与抑制肿瘤细胞增殖、增强Bax基因表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

番荔枝种子内酯提取物含药血清对人肝癌细胞株HepG2的作用

目的:研究番荔枝种子内酯提取物对人肝癌细胞株HepG2的作用。方法:以血清药理学方法考察不同剂量的番荔枝种子内酯提取物含药血清对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用,用MTT法进行评价。结果:内酯提取物含药血清作用于HepG2细胞的抑制率呈现出时间和剂量依赖性,高剂量组作用72h时抑制率可达54.16%。结论:番荔枝种子内酯提取物对体外培养的人肝癌HepG2细胞的生长增殖具有显著的抑制作用。     

附子含药血清对大鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

目的:研究附子含药血清对大鼠心肌细胞L型钙通道的影响,探讨附子抗缓慢型心律失常的作用机制。方法:附子水煎后水浴浓缩成1∶1,给予大鼠灌胃,每次15.6 g·kg-1,7 d后制备含药血清;细胞密度20个/m L,药物血清体积分数为10%。作用时间:从加药物血清20 min后开始记录,到1 h逐渐结束,各组样本数均为8;采用急性酶解法获得大鼠的心室肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录L型钙通道电流,观察附子含药血清对单个心室肌细胞L型钙通道电流(Ica-t)幅度及动力学特性的影响。结果:10%空白血清组和10%附子含药血清组给药后的平均峰电流密度和平均激活率分别为:(-3.59±1.06)p A/p F(单位细胞膜面积的电流大小),12.87%(n=8,P0.05)和(-4.01±0.88)p A/p F,51.17%(n=8,P0.01);附子含药血清激活曲线用药前和用药后的V1/2和K(稳态半数激活电压和斜率因子)分别为(-12.66±0.44)m V和(5.70±0.35),(-14.71±0.88)m V和(5.68±0.72),(P0.05,n=8);附子含药血清失活曲线用药前和用药后的V1/2和K分别为(-28.10±0.20)m V和(6.31±0.18),(-37.55±0.11)m V和(5.94±0.09),(P0.05,n=8);附子含药血清恢复曲线用药前和用药后的τ为(171.01±11.13)ms和(160.15±4.97)ms(n=8),差异无统计学意义;附子含药血清可增加L型钙通道电流密度、激活曲线左移,失活曲线右移,对恢复曲线没有影响。结论:附子含药血清能增加心室肌细胞钙通道电流。     

六味地黄丸含药血清对树突状细胞增殖的影响

目的：研究六味地黄丸含药血清对SD大鼠骨髓源性树突状细胞（bone marrow-derived dendritic cells,BMDC）增殖的影响。方法：制备六味地黄丸含药血清,观察含药血清作用下的细胞生长情况,进行细胞计数及细胞活力测定;用四甲基偶氮唑盐（MTT）法,检测不同浓度、不同时间六味地黄丸含药血清作用下的细胞增殖变化,寻找最佳六味地黄丸浓度和作用时间;ELISA法检测细胞上清中树突状细胞分泌细胞因子IL-12的浓度;混合淋巴细胞反应（MLR）检测其刺激T淋巴细胞活化和增殖能力。结果：与空白对照组比较,成熟型DC含药血清组显著促进DC细胞增殖,且这种增殖在含药浓度15%,作用时间48 h时最为显著。其IL-12分泌量显著提高（P<0.05）。六味地黄丸含药血清培养的成熟型DC对异基因T淋巴细胞具有增殖刺激作用,且随着细胞数量的增加作用增强（P<0.05）,呈量效关系。结论：六味地黄丸含药血清具有诱导大鼠骨髓源性树突状细胞增殖的作用。     

附子含药血清对大鼠原代肝细胞能量代谢的影响

目的:探讨附子含药血清对大鼠原代肝细胞能量代谢的影响。方法:制备含药血清,大鼠原代肝细胞随机分为空白血清组和含药血清组。干预24 h后,分光光度计检测细胞内Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性,高效液相色谱法(HPLC)检测细胞内ATP、ADP、AMP含量及细胞能荷,激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位。结果:与空白血清相比,附子含药血清可显著升高肝细胞Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性,增加细胞内ATP含量,升高线粒体膜电位。结论:热性中药附子促进细胞能量代谢,增加细胞内能量储备。     

含桂枝汤大鼠血清对病毒致细胞病变作用的影响

体外抗病毒实验发现，桂枝汤８ｍｇ生药／ｍｌ对与呼吸道感染有关的１０株病毒致细胞病变均有不同程度的抑制作用。取口饲给予桂枝汤后的大鼠血清进行体外抗病毒实验，发现该血清（１∶４）抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型等４株病毒对Ｈｅｐ－２细胞的增殖；该血清在－２０℃保存３个月，其抑制作用无明显下降；而正常大鼠血清也具有较弱的延缓病毒致细胞病变作用     

生地黄、山茱萸水提液及其含药血清对体外糖基化产物生成的影响

目的:观察生地黄,山茱萸水提液及其含药血清对体外糖基化产物生成的影响.方法:200 mmol·L-1的葡萄糖与牛血清白蛋白组成反应系统,37℃温孵,分别加入生地黄,山茱萸及其配伍水提液,含药血清,测早期糖化蛋白(果糖胺)及晚期糖基化产物(AGEs),计算抑制率(inhibitory rate,IR),及半数抑制率(IC50).结果:山茱萸,生地黄,山茱萸,生地黄配伍分煎及合煎的早期糖化产物(果糖胺)IC50分别为0.104,0.159,0.146,0.077 g·L-1;晚期糖基化产物(AGEs) IC50分别为0.175,0.221,0.143,0.076 g·L-1.提示生地黄,山茱萸水提液对早期和晚期糖化产物均有一定抑制作用.此外生地黄,山茱萸含药血清对早期糖化蛋白IC50分别为:37.9％,49.1％,52.8％,31.6％;对晚期糖基化产物IC50分别为:78.5％,92.3％,82.9％,73.2％.表明生地黄-山茱萸含药血清对果糖胺与AGEs也都具有一定的抑制作用,且生地黄-山茱萸合煎组抑制果糖胺和AGEs的IC50优于其他组.结论:生地黄山茱萸配伍对抑制果糖胺和AGEs具有协同作用.     

地鳖纤溶蛋白含药血清对人肝癌和乳腺癌抑制作用

目的研究地鳖纤溶蛋白(EFP)及含药血清对人肝癌HepG-2和人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用。方法制备EFP,并制备不同浓度EFP小鼠含药血清;采用MTT法分别将EFP和EFP含药血清加入HepG-2和MCF-7细胞悬液中,分别检测增殖抑制效果。结果 EFP直接用药各组均对HepG-2无抑制作用,而EFP含药血清各组对HepG-2细胞均有明显抑制细胞增殖作用;EFP组和EFP含药血清组均能不同程度的抑制MCF-7细胞增殖。结论 EFP有较强的体外抗肿瘤活性;血清药理学方法更能真实的反映药物作用。     

回药爱康方含药血清对肺癌A549细胞凋亡的影响

目的:探讨回药爱康方(HAKF)含药血清对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、爱康方低、中、高剂量组、环磷酰胺(CTX)组、回药爱康方低、中、高剂量分别联合环磷酰胺化疗组,药物低、中、高剂量15.0,30.0,45.0 g·kg-1,连续灌胃15 d,麻醉后心脏取血,制备含药血清。培养细胞,将细胞分为实验组和对照组,实验组分别给予含5%,10%,20%3个体积分数的相应各组含药血清,对照组给予等体积分数的对照组大鼠血清,培养24,48,72 h后采用Annexin-VFITC/PI双染法测定各组含药血清对A549细胞凋亡的影响。结果:与对照组比较,各时段5%,10%,20%浓度含药血清可提高A549的凋亡率(P<0.05),72 h时,各浓度回药爱康方低、中、高剂量含药血清对细胞的凋亡率的提高程度小于CTX(P<0.05);72 h 10%体积分数回药爱康方低剂量联合环磷酰胺血清提高细胞的凋亡率大于单纯CTX(P<0.05);各浓度爱康方中剂量和高剂量血清组,72 h与24 h比较,两组A549细胞的凋亡率均升高(P<0.05);随着血清体积分数的提高,各组细胞的凋亡率和坏死率呈增大趋势。结论:回药爱康方可诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡,且有一定的剂量和时间依赖性。     

温阳生精汤含药血清对肾阳虚大鼠睾丸间质细胞中雌激素分泌的影响

目的观察温阳生精汤含药血清对腺嘌呤致雄性肾阳虚不育大鼠睾丸间质细胞中雌二醇(es-tradiol,E2)合成以及影响其合成的芳香化酶(cytochrome P450aromatase,P450arom)活性、其编码基因CYP19表达的影响,从蛋白和mRNA水平探讨温阳生精汤含药血清治疗肾阳虚不育的机制。方法将实验大鼠随机分为4组,每组5只,即正常组及温阳生精汤高、中、低浓度组。各组大鼠分别以生理盐水和高、中、低浓度中药连续灌胃10天。末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清。从肾阳虚大鼠体内分别分离并纯化睾丸间质细胞,经鉴定后原代培养,随机分为5组,即空白对照组,模型组,中药高、中、低浓度(1.2、1.0、0.8g/mL)组,用放射免疫法测定细胞培养液中E2含量,氚水释放实验检测P450arom在细胞中的活性,同时用Western blot法和荧光定量PCR法分别测定CYP19蛋白和mRNA表达。结果与空白对照组比较,模型组中间质细胞上清中E2的含量明显减少,同时伴随P450arom活性抑制,以及CYP19蛋白和mRNA表达的显著减少(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,经温阳生精汤含药血清干预后可显著增加间质细胞中E2合成量,上调P450arom活性,同时在蛋白和mRNA水平上调细胞中CYP19表达,并具有部分剂量依赖性(P<0.01,P<0.05)。结论温阳生精汤含药血清可以有效提高肾阳虚大鼠睾丸间质细胞中E2的合成,并可能部分通过上调P450arom活性,提高CYP19基因表达实现,这可能是其治疗男性肾阳虚不育的机制之一。     

益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞成骨性的影响

目的探讨益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖及其成骨分化的影响。方法实验分为益骨汤高剂量组、益骨汤中剂量组、益骨汤低剂量组、a-D3胶丸组、空白组,先制备各组相应含药血清,然后采用酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,每组给予相应含药血清培养成骨细胞,分别检测各组成骨细胞增殖情况及碱性磷酸酶(ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量。结果益骨汤高、中、低剂量组和a-D3胶丸组成骨细胞增殖情况均明显优于空白组(P均0.05),益骨汤高、中、低剂量组间比较差异无统计学意义;成骨细胞ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量均明显高于空白组(P均0.05),而与a-D3胶丸组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。益骨汤中剂量组ALP活性、钙盐沉积量、钙素分泌量均明显高于益骨汤低剂量组。结论益骨汤含药血清可促进成骨细胞的增殖及成骨分化。     

栀子—刺五加含药血清对大鼠海马神经元发生的影响

目的观察栀子—刺五加含药血清对体外高浓度皮质酮作用下大鼠海马神经元发生的影响。方法 35只雄性Wistar大鼠按随机数字表分为栀子组(0.23g/d)、刺五加组(0.38g/d)、栀子—刺五加组(栀子0.23g/d,刺五加0.38g/d)、氟西汀组(0.51mg/d)、空白组,每组7只。连续灌胃10天后取含药血清和空白大鼠血清。体外建立高浓度皮质酮抑制大鼠海马神经元发生模型。采用MTT法测定神经元存活率,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记海马神经元增殖,神经元特异性烯醇化酶(NSE)标记海马神经元生长。结果与空白组及栀子组比较,栀子—刺五加组、刺五加组、氟西汀组海马神经元存活率明显提高(P0.05),海马神经元中BrdU及NSE阳性细胞数明显增加(P0.05)。结论栀子—刺五加含药血清和刺五加含药血清有利于海马神经元在高皮质激素环境下的存活、增殖、生长,具有促进海马神经元发生的作用。