三氧化二砷诱导恶性黑色素瘤A375和B16细胞凋亡的研究

目的: 研究不同浓度的三氧化二砷(As-2O-3)对恶性黑色素瘤人A-{375}细胞和小鼠B-{16}细胞的凋亡诱导作用,为As-2O-3治疗恶性黑色素瘤提供新的理论和实验依据.方法:用流式细胞术(FCM)检测A-{375}细胞和B-{16}细胞的凋亡诱导及杀伤作用:用不同剂量的As-2O-3(0.1 mmol*L{-1}、0.25 mmol*L{-1}和0.5 mmol/L{-1}),对小鼠进行腹腔注射(10 ml*kg{-1},连续注射10 d后,检测小鼠血清与心、肝、肾有关的生化指标.结果:As-2O-3浓度分别为5 μmol*L{-1}、10 μmol*L{-1}和20 μmol*L{-1}时,A-{375}和B-{16}细胞的凋亡率分别为11.85 %、55.51 %、54.90 %和9.81 %、26.45 %、9.93 %:As-2O-3诱导A-{375}和B-{16}细胞总的凋亡和坏死率分别为11.90 %、55.71 %、57.40 %和12.96 %、26.99 %、87.13 %;不同剂量的As-2O-3(0.1 mmol*L{-1}～0.5 mmol*L{-1})对小鼠肝、肾和心肌等功能无明显影响,与对照组各项指标无显著性差异(P>0.05).结论:不同浓度的As-2O-3能明显诱导恶性黑色素瘤A-{375}及B-{16}细胞凋亡和坏死,对A-{375}细胞的凋亡诱导作用强于B-{16}细胞.As-2O-3(0.1 mmol*L{-1}～0.5 mmol*L{-1})对小鼠肝、肾和心肌等功能无明显损伤.     

三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中ROS、NF-κB和C-IAP2的变化

背景与目的:探讨As2O3(arsenic trioxide,ATO)对HL-60细胞凋亡过程中细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、NF-κB(nuclear factor kappa B),及C-IAP2(cellular inhibitor of apoptosis proteins 2)的影响。材料与方法:以7.5μmol/L As2O3单独应用及与500μmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)联合作用于HL-60细胞12、24 h后,流式细胞术检测HL-60细胞ROS的产生量;Western blot法检测NF-κB P65核蛋白的变化情况;半定量RT-PCR法检测C-IAP2的相对表达量。结果:7.5μmol/L的As2O3作用HL-60细胞12、24 h后细胞内ROS的生成增加,与阴性对照比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。NF-κBP65核蛋白的相对含量分别为49.3%±4.4%和23.1%±2.1%,C-IAP2的相对表达分别为72.9%±5.8%和59.3%±4.4%,较对照组均明显降低(P<0.05)。500μmol/L NAC和7.5μmol/L As2O3共同作用HL-60细胞12、24 h后细胞ROS生成量相对减少,与AS2O3单独作用组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);NF-κB P65核蛋白的相对含量分别为65.4%±4.9%和37.1%±3.4%,C-IAP2的相对表达量分别为81.1%±5.8%和73.7%±4.9%。较AS2O3单独作用组均明显增加(P<0.05)。结论:As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中,细胞内ROS生成增加,抑制NF-κB活性,同时下调其靶基因C-IAP2等的表达;NAC能阻断As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中ROS的生成,部分阻断了NF-κB活性的抑制。     

辣椒素诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的研究

目的研究辣椒素对人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的诱导作用,探讨其抗癌作用机制。方法采用噻唑蓝（MTT）法观察辣椒素对细胞生长的抑制作用,荧光显微镜下观察细胞的形态学变化,通过DNA凝胶电泳进行DNA片段化分析,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法分析DNA酶抑制剂（ICAD）蛋白的表达。结果辣椒素可诱导A375-S2细胞凋亡,呈剂量、时间依赖性。250μmol／L辣椒素处理24h,A375-S2细胞出现明娩的亚二倍体峰;处理36h,Hoechst 33258荧光染色有明显的凋亡小体出现,DNA电泳出现阶梯状图谱。在辣椒素作用下,caspase激活的ICAD蛋白表达量随时间延长而减少。结论辣椒素对A375-S2细胞的杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现,降低ICAD蛋白的表达为其诱发A375-S2细胞凋亡的机制之一。     

Gambogic Acid通过影响NF-κB信号通路诱导A549细胞凋亡

目的:研究Gambogic Acid（GA）对人非小细胞肺癌A549细胞系中NF-κB信号通路的影响及其对细胞凋亡的促进作用。方法:Western blot法和共聚焦显微镜成像技术检测GA对NF-κB的信号通路的影响,MTT及流式细胞（FCM）术检测GA对A549细胞的促凋亡作用。结果:Western blot发现GA能显著抵抗TNF-α诱导导致的IκB磷酸化水平上升及IκB的降解;共聚焦显微镜成像进一步发现GA有效阻止了NF-κB入核;MTT结果显示GA能显著抑制A549细胞的增殖,当药物浓度为5.0μmol/L时抑制率可达到（93.5±6.5）％（P<0.05),IC50值为1.2±0.4 μmol/L;凋亡检测结果显示A549细胞在0.0、0.5、1.0、2.0、3.0及5.0 μmol/L药物处理下细胞凋亡率分别是（6.0±0.7）%、（15.5±2.3）%、（35.0±3.6）%、（43.5±2.7）%、（43.0±3.8）%及（53.7±2.6）%（P<0.05);结论:实验表明,GA能有效地抑制A549细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能是通过影响NF-κB信号通路而发生作用。     

三氧化二砷诱导人骨髓瘤细胞RPMI 8226凋亡的机制探讨

目的:探讨三氧化二砷（As2O3）诱导人骨髓瘤细胞RPMI 8226凋亡的机制。方法:不同浓度As2O3作用RPMI 8226细胞48h后,用MTT法计算细胞增殖抑制率。流式细胞仪检测1.0、2.0、5.0μmol/L As2O3干预RPMI 8226细胞48h后的凋亡率;透射电镜观察As2O3作用前后RPMI 8226细胞超微结构的变化;RT-PCR、Western Blot法检测As2O3作用前后Bcl-2及Caspase-3表达的变化。结果:不同浓度的As2O3对RPMI 8226细胞均有增殖抑制作用(P<0.05）。1.0、2.0、5.0μmol/L As2O3干预RPMI 8226细胞48h后,细胞凋亡率随As2O3浓度的增加而呈上升趋势,与对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）;As2O3干预RPMI 8226细胞48h后,电镜下可见典型的凋亡小体;RT-PCR、Western Blot结果均显示上述浓度的As2O3干预RPMI 8226细胞48h后,Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调（P<0.05）,Caspase-3 mRNA及蛋白表达上调（P<0.05）。结论:As2O3可能通过激活Caspase-3、下调Bcl-2的表达从而诱导RPMI 8226细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞凋亡机制研究

目的 了解三氧化二砷（As2O3)诱导多发性骨髓瘤细胞（MM）凋亡的可能机制及其与维甲酸和干扰素的相互作用。方法 联合应用As2O3和巯基还原剂（DTT）、谷胱甘肽耗褐剂（BSO）、全反式维甲酸（ATRA）或干扰素（ＩＦＮ－α）处理MM细胞系RPM18226和U266细胞;应用台盼蓝拒染法计数细胞活力,经细胞形态学和流式细胞仪等判定细胞凋亡的程度;通过测定细胞内荧光染料Rhodamine123的色强度分析线粒体跨膜电位（△ψm)。结果 BSO可加强As2O3诱导的RPM18226和U266细胞线粒体△ψm下降和凋亡,而DTT则有部分拮抗的作用,ATRA诱导RPMI8226细胞闻过则喜亡,但它和As2O3之间无协同效尖,ATRA并不诱导U266细胞凋亡。此外,INF-α,既不抑制RPMIS226和U266细胞的生长和活力,也不改变As2O3对这些细胞的作用。结论 As2O3诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡和巯基有关,但ATRA干扰素和As2O3无协同效应。     

赖氨匹林诱导人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的研究

[目的]研究赖氨匹林（aspis01）对人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的诱导作用,并初步探讨其诱导A375细胞凋亡的可能机制。[方法]采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测赖氨匹林对A375细胞增殖的抑制作用：采用吖啶橙（AO）／溴化乙啶（EB）双染法进行A375细胞形态学观察：流式细胞仪（FCM）检测不同浓度的赖氨匹林诱导A375细胞的早期凋亡率：应用Westernblot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。[结果]（1）不同浓度的赖氨匹林对A375细胞均有明显的生长抑制作用,且其作用具有时间和浓度相关性（P〈0．01）。（2）AO／EB双染后可见：给药组早期凋亡细胞多于对照组．并且随着赖氨匹林浓度的增加．早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞均增多。（3）不同浓度的赖氨匹林对A375细胞作用24h后．均可诱导其发生早期凋亡．并且呈浓度相关性。（4）赖氨匹林可上调Bax蛋白的表达,下调Bel-2蛋白的表达。[结论]赖氨匹林可以抑制A375细胞的增殖,诱导其凋亡．此作用可能与调节Bax／Bcl-2蛋白的表达水平有关．     

紫杉醇诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的分子机制

目的:探索紫杉醇对A375细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测紫杉醇对细胞增殖能力及细胞生长的影响;流式细胞仪分析及细胞形态学观察检测细胞周期和细胞凋亡;Westernblot方法检测bcl2、Bax和Caspase3蛋白表达。结果:0.001～1.000μmol/L紫杉醇以时间和剂量依赖方式抑制A375细胞生长和诱导细胞凋亡,0.000～1.000μmol/L紫杉醇作用24h时,早期细胞凋亡率由(0.5±0.1)%增至(32.4±1.1)%,P<0.05,0.100μmol/L紫杉醇作用24和48h时,早期细胞凋亡率由(20.9±0.9)%增至(52.6±1.0)%,t=28.89,P=0.001;不同浓度紫杉醇诱导A375细胞凋亡的机制不同,0.001μmol/L时不影响细胞周期,0.010μmol/L时使G0/G1期细胞含量明显减少,0.100和1.000μmol/L时使细胞发生G2/M期阻滞。紫杉醇作用24h后,Caspase3被激活,同时bcl2和Bax蛋白表达分别被下调和上调。结论:紫杉醇可诱导A375细胞凋亡,bcl2/Bax蛋白比值的下降及Caspase3的激活参与了该细胞凋亡过程,但高浓度紫杉醇通过作用微管,低浓度紫杉醇则通过尚不清楚途径实现细胞凋亡过程。     

三氧化二砷诱导恶性肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

三氧化二砷已广泛应用于白血病和各种实体瘤化学治疗的基础研究和临床实践中。近年来国内外多项研究证实三氧化二砷诱导凋亡是其杀伤肿瘤的主要机制,其分子机制尚未得到系统阐明,本文就其抗凋亡作用机制的研究进展作一综述。     

FoxO3a在三氧化二砷诱导的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的表达和意义

目的 探讨FoxO3a在三氧化二砷(As2O3)诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡过程中的表达变化及其可能的机制。方法 将不同浓度的As2O3(2.0、4.0、8.0μmol/L)与MCF-7细胞共同培养24h后,采用流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡;采用免疫细胞化学及Western blot技术检测FoxO3a和Caspase 3蛋白的表达,各实验均设相应的阴性对照组。结果 经不同浓度As2O3作用后,MCF-7细胞凋亡率逐渐增加,分别为(6.26±0.94)%、(9.30±1.63)%和(13.02±3.82)%,且呈剂量依赖关系(rs=0.949, P<0.01);免疫细胞化学染色显示FoxO3a蛋白胞核表达增强,且Caspase-3蛋白表达增强（P<0.05);Western blot条带显示FoxO3a蛋白表达水平逐渐升高,且激活型Caspase-3蛋白表达水平逐渐升高（P<0.05)。结论 As2O3可通过增强FoxO3a蛋白的活性,激活Caspase-3蛋白的表达而诱导MCF-7细胞凋亡。     

氧化砷诱导结肠癌细胞凋亡及其分子机制

 目的　观察不同浓度As2O3对结肠癌Lovo、LS-174T细胞株生长的影响。方法　0.125～2μ mo1/L的As2O3与结肠癌细胞株Lovo、LS-174T共同孵育,观察不同浓度As2O3作用不同时间对结肠癌细胞的生长抑制作用、细胞形态学改变、DNA的变化。结果　1～2μ mol/L As2O3作用的结肠癌细胞呈凋亡特征性改变：细胞膜不发生破裂,细胞核出现核浓缩、核碎裂和凋亡小体形成;流式细胞仪检测在G1期前出现亚二倍体凋亡峰;细胞DNA抽提琼脂糖凝胶电泳呈凋亡特征性条带。结论　1～2μ mol/L As2O3可诱导结肠癌细胞凋亡,肿瘤细胞凋亡与Fas、Fas-L表达有关。     

三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中ROS、NF-kB和C-IAP2的变化

背景与目的:探讨As2O3(arsenic trioxide,ATO)对HL-60细胞凋亡过程中细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、NF-kB(nuclear factor kappa B).及GIAP2(cellular inhibitor of apoptosis proteins 2)的影响.材料与方法:以7.5 umol L As2O3单独应用及与500 umol L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-Lcysteine,NAC)联合作用于HL-60细胞12、24 h后,流式细胞术检测HL-60细胞ROS的产生量;Western blot法检测NF-kB P65核蛋白的变化情况;半定量RT-PCR法检测C-IAP2的相对表达量.结果:7.5 umol L的As2O3作用HL-60细胞12、24 h后细胞内ROS的生成增加,与阴性对照比较,差异具有统计学意义(P<0.05).NF-kB P65核蛋白的相对含量分别为49.3%±4.4%和23.1%±2.1%,C-IAP2的相对表达分别为72.9%±5.8%和59.3%±4.4%,较对照组均明显降低(P<0.05).500 umol L NAC和7.5 umol L As2O3共同作用HL-60细胞12、24 h后细胞ROS生成量相对减少,与AS2O3单独作用组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);NF-kB P65核蛋白的相对含量分别为65.4%±4.9%和37.1%±3.4%,C-IAP2的相对表达量分别为81.1%±5.8%和73.7%±4.9%.较As2O3单独作用组均明显增加(P<0.05).结论:As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中,细胞内ROS生成增加,抑制NF-kB活性,同时下调其靶基因C-IAP2等的表达;NAC能阻断As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中ROS的生成,部分阻断了NF-kB活性的抑制.     

三氧化二砷对恶性黑色素瘤A375细胞端粒酶活性的抑制作用

背景与目的 :研究三氧化二砷(As2O3)对人恶性黑色素瘤A375 细胞端粒酶活性的抑制作用,探讨砷及其化合物治疗恶性黑色素瘤的作用机制 ,为砷及其化合物治疗恶性黑色素瘤提供新的理论和实验依据。 材料与方法 :用TRAP_ELISA和TRAP_PAGE银染法测定A375 细胞端粒酶活性。结果 :As2O3 对人恶性黑色素瘤A375 细胞端粒酶活性抑制有明显的浓度和时间依赖关系。结论 :As2O3 对恶性黑色素瘤A375 细胞端粒酶活性抑制率随药物浓度的增加或作用时间的延长而提高     

三氧化二砷诱导乳腺癌细胞凋亡以及对Survivin、Caspase-3蛋白表达的影响

背景与目的:探讨不同浓度As2O3在诱导人乳腺癌细胞MDA_MB₂31凋亡过程中的作用,并研究其对Survivin和Caspase₃蛋白表达的影响。材料与方法:将3种不同浓度的As2O3（10.0、20.0、40.0μmol/L）与MDA_MB₂31细胞共培养不同时间后,采用流式细胞术检测MDA_MB₂31细胞凋亡;用免疫细胞化学技术及Westernblot检测Survivin和Caspase₃蛋白的表达。各实验均设相应的对照组。结果:经10.0、20.0、40.0μmol/LAs2O3作用后,MDA_MB₂31细胞凋亡率分别为（28.89±2.47）%、（46.73±3.82）%和（56.44±4.16）%,细胞凋亡率在各浓度组间的差异均具有统计学意义（P均<0.01）;免疫细胞化学染色显示Survivin蛋白表达减少,而Caspase₃蛋白被激活;Westernblot条带显示Survivin蛋白表达量降低,而Caspase₃蛋白则出现被激活的小片段。As2O3上述的3种作用均存在剂量依赖关系。结论:As2O3可能通过抑制Survivin蛋白活性,激活Caspase₃蛋白的表达而诱导MDA_MB₂31细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导肺癌细胞凋亡的体外实验研究

 目的　观察三氧化二砷体外作用于肺癌 A549细胞株所致的凋亡作用及形态学改变 ;方法　采用 MTT法、透射电镜法及 TUNEL荧光染色法观察不同浓度 As₂ O₃ 对肺癌 A549细胞株的作用效果 ;结果　 1及 2 .5μmol/ L As₂ O₃ 对肺癌 A549细胞株 2 4 h的凋亡诱导率为 :2 2 .80 %及 30 .1 5% ,48h的凋亡诱导率为 :41 .75%及 60 .0 4 % ,72 h的凋亡诱导率为 :56.38%及 73.30 % ,均分别高于相应时间点的 5- FU的作用 ,光镜下观察可见凋亡细胞体积缩小变圆 ,TUNEL染色后在免疫荧光显微镜下观察可见凋亡的细胞呈荧光染色阳性 ;结论　 As₂ O₃ 在体外可明显有效地诱导 A549细胞株凋亡.     

整合素信号转导通路对K562细胞凋亡的影响

目的探讨整合素介导的细胞凋亡抑制途径是否参与了慢性粒细胞白血病（CML）急变期细胞株K562细胞的凋亡耐受机制,以求为CML的治疗提供新思路。方法流式细胞术和丫啶橙双色荧光显微镜分析检测抗整合素α5β1单抗（Anti-α5β1）对K562细胞凋亡的影响,Western blot 技术和RT-PCR技术分析Anti-α5β1对K562细胞内凋亡相关因子PI3K、AKT和survivin表达的影响。结果Anti-α5β1可通过抑制K562细胞内PI3K和survivin mRNA的表达,下调AKT和PI3K蛋白表达水平及蛋白磷酸化水平诱导K562细胞凋亡。抗整合素α5β1抗体的促凋亡能力强于IFNα-2b,其原因可能与IFNα-2b不能显著降低PI3K和p-AKT表达水平有关。结论整合素α5β1介导的PI3K-AKT-survivin信号转导通路参与了K562细胞的凋亡耐受。     

砷剂诱导骨髓瘤细胞周期改变与SOCS-1基因去甲基化作用的研究

背景与目的:三氧化二砷(As2O3)在治疗多发性骨髓瘤中具有一定价值.有研究认为As2O3,的治疗作用可能与诱导细胞内抑癌基因去甲基化作用相关.本研究旨在探讨体外As2O3,诱导人骨髓瘤细胞周期改变与细胞内SOCS-1基因去甲基化之间可能存在的关系.方法:采用MTT法观察As2O3,对骨髓瘤细胞U266、RPM18226增殖情况的影响,流式细胞技术检测As2O3对骨髓瘤细胞周期的影响.甲基特异性PCR(MSP)法检测As2O3作用前后骨髓瘤细胞内SOCS-1基因甲基化状态的改变,实时PCR技术定量检测细胞用药前后SOCS-1基因mRNA的表达变化.结果:与对照组细胞相比,人骨髓瘤细胞U266、RPM18226在较大剂量As2O3(0.5umol/L、1.0 umol/L、2.0 umol/L)作用72 h后,细胞周期分布均发生G0/G1期阻滞,呈现G0/G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞周期改变与As2O3,剂量呈正相关(P均<0.05),骨髓瘤细胞内SOCS-1基因甲基化程度明显减弱(As2O3 0.5 umol/L作用72 h后)或消失(As2O3 1.0 umol/L或2.0 umol/L作用72 h后),SOCS-1基因在mRNA水平上表达明显增强,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:As2O3具有剂量依赖的诱导骨髓瘤细胞周期改变的作用,该作用可能与As2O3诱导SOCS-1基因去甲基化和SOCS-1基因再表达相关,这可能为进一步阐释As2O3,治疗多发性骨髓瘤中的可能机制提供新的思路和方向.     

三氧化二砷诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡及其作用机制的初步研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人鼻咽癌CNE2Z细胞的生物学效应及其作用机制。方法:台盼蓝计数法计算As2O3的IC50;CNE-2Z细胞经As2O3处理后,通过流式细胞仪、荧光染色及DNA电泳检测细胞凋亡;流式细胞仪测定bcl2和bax阳性细胞百分率;罗丹明123染色后进行线粒体膜电位分析。结果:As2O3在一定浓度范围内以浓度依赖的方式抑制CNE2Z细胞生长,其IC50为(1.35±0.30)μmol/L;0.5～2.0μmol/LAs2O3处理CNE2Z细胞后,流式细胞仪检测出凋亡峰,荧光显微镜下可见明显的细胞凋亡形态特征,琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带;As2O3对bcl2的表达没有影响(P>0.05),但能显著增加bax的表达(P<0.01)及降低线粒体膜电位(P<0.01)。结论:As2O3在体外可诱导鼻咽癌CNE2Z细胞凋亡,其机制可能与上调bax表达和降低线粒体膜电位有关。