CML细胞诱导自体和脐血T细胞TCR Vβ谱系和杀伤性分析

目的 了解慢性粒细胞白血病(CML)细胞诱导T细胞的TCR Vβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况，及其对CML细胞的杀伤活性。方法 采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)方法，利用CML细胞体外诱导脐血或患者的T细胞增殖，用RT-PCR和基因扫描分析MLTC前后T细胞的24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区(CDR3)，了解各Vβ亚家族的利用和T细胞克隆性特点。并利用LDH方法检测MLTC后T细胞的细胞毒性。结果 脐血T细胞表达8～11个TCR Vβ亚家族，经MLTC后，2～3个Vβ亚家族呈克隆性增殖，CML细胞诱导的自体T细胞的TCR Vβ亚家族也类似。经MLTC后T细胞对原诱导细胞有较强的杀伤活性。结论 CML细胞可诱导脐血T细胞和自体T细胞TCR Vβ优势利用和克隆性增殖，诱导后T细胞具有特异性杀伤CML细胞的作用。     

McAb共刺激PBLs介导肝癌细胞凋亡与CPP32基因表达的关系

1994年Teresa等克隆出人的CPP32(caspase-3)cDNA,并证实CPP32基因与细胞凋亡有密切关系[1];CD28和CD80 McAb共刺激PBLs作用于培养的肝癌细胞能引起肝癌细胞凋亡[2];为了探讨其机制,本文进行了相关的研究.     

抗CD28＋B7.1单抗共刺激PBLs诱导肝癌细胞凋亡的蛋白激酶信号转导

目的 研究Ｔ淋巴细胞活化、增殖、介导肝癌细胞凋亡过程中其蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）和酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）的活性变化。方法 用抗ＣＤ２８＋Ｂ７．１（ＣＤ８０）单克隆抗体共刺激正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬｓ）后作用于肝癌细胞（ＢＥＬ－７４０２）。结果 激活的Ｔ细胞中ＰＫＣ、ＴＰＫ活性明显增强,并与肝癌细胞凋亡程度呈正相关。结论 ＰＫＣ、ＴＰＫ在Ｔ细胞活化、增殖及诱导肝癌细胞凋亡的信号转导中起重要作用。     

肿瘤相关TCR Vβ亚家族克隆性增殖T细胞研究进展

利用RT-PCR和基因扫描分析T细胞受体(TCR)Vβ 24个亚家族基因CDR3长度,可确定T细胞的克隆性.对多种实体瘤和白血病等患者T细胞的分析显示病人的TCR Vβ T细胞出现倾斜性分布和克隆性生长的情况.肿瘤相关抗原诱导正常人T细胞同样可出TCR Vβ T细胞亚家族分布的改变和克隆性增殖.这些克隆性增殖T细胞主要是肿瘤相关抗原诱导增殖的,对肿瘤细胞具有特异性杀伤作用,探讨如何利用这种特异性克隆性T细胞作为过继性细胞免疫治疗,清除肿瘤患者微小残留病变,具有重要的意义.     

脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的增殖特点

目的了解脐血T细胞体外诱导后TCR Vβ亚家族的分布和克隆性增殖特点. 方法利用T淋巴细胞液体培养法,在不同刺激源(rhIL-2、抗CD3单抗、PHA、AML-M5细胞和bcr-abl多肽)条件下诱导脐血T细胞扩增,并利用RT-PCR分别扩增培养前后脐血T细胞的TCR Vβ 24个亚家族基因的CDR3片段,了解各Vβ亚家族的表达情况.阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性. 结果脐血T细胞仅表达部分Vβ亚家族,但经体外培养后,可检测到绝大多数TCR Vβ亚家族T细胞,而经AML-M5细胞和bcr-abl多肽诱导后,TCR Vβ亚家族T细胞呈限制性表达和Vβ亚家族克隆性增殖. 结论脐血T细胞具备产生各TCR Vβ亚家族T细胞的潜能,在白血病相关抗原诱导下,具有限制性和克隆性增殖的能力.     

脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的增殖特点

目的：了解脐血T细胞体外诱导后TCR Vβ亚家族的分布和克隆性增殖特点。方法：利用T淋巴细胞液体培养法，在不同刺激源（rhIL-2、抗CD3单抗、PHA、AML-M5细胞和bcr-abl多肽）条件下诱导脐血T细胞扩增，并利用RT-PCR分别扩增培养前后脐血T细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3片段，了解各Vβ亚家族的表达情况，阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度，了解T细胞克隆性。结果：脐血T细胞仅表达部分Vβ亚家族，但经体外培养后，可检测到绝大多数TCR Vβ亚家族T细胞，而经AML-M5细胞和bcr-abl多肽诱导后，TCR Vβ亚家族T细胞呈限制性表达和Vβ亚家族克隆性增殖。结论：脐血T细胞具备产生各TCR Vβ亚家族T细胞的潜能，在白血病相关抗原诱导下，具有限制性和克隆性增殖的能力。     

肿瘤相关TCR Vβ亚家族克隆性增殖T细胞研究进展

利用RT-PCR和基因扫描分析T细胞受体（TCR）Vβ24个亚家族基因CDR3长度，可确定T细胞的克隆性。对多种实体瘤和白血病等患者T细胞的分析显示病人的TCR VβT细胞出现倾斜性分布和克隆生长的情况。肿瘤相关抗原诱导正常人T细胞同样可出TCR VβT细胞亚家族分布的改变和克隆性增殖，这些克隆性增殖T细胞主要是肿瘤相关抗原诱导增殖的，对肿瘤细胞具有特异性杀伤作用，探讨如何利用这种特异性克隆性T细胞作为过继性细胞免疫治疗，清除肿瘤患者微小残留病变，具有重要的意义。     

McAb共激活T细胞介导肝癌细胞前后的膜分子与TCR Vβ基因的 …

Ｔ淋巴细胞活化是一个涉及多种膜表面分子和受体以及一系列相关多肽的复杂过程，为了使Ｔ细胞发挥更好的识别和杀伤癌细胞的功能，采用抗ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ２、ＣＤ５８ＭｃＡｂ分别刺激健康人ＰＢＬｓ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬｓ用ＦＡＣＳ进行表型分析，结果发现：作用后ＣＤ３和ＣＤ８分子表达比作用前明显增高，而ＣＤ４分子无显著变化，同时基因家族采用ＲＴ－ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹     

TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在正常人胸腺、脐血和外周血中的检测情况

目的建立检测TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的方法,分析其在胸腺细胞、脐血和正常人外周血T细胞中的存在情况,从而了解近期胸腺输出相应的TCR Vβ亚家族naive T细胞的情况。方法利用半巢式PCR分别扩增3例正常胸腺细胞、10例脐血和10例正常人外周血单个核细胞DNA中的Vβ2、Vβ5和Vβ17与Dβ1基因片段重排时产生的sjTRECs。结果在正常胸腺细胞、脐血和正常人外周血单个核细胞中均可检测到Vβ2、Vβ5和Vβ17与Dβ1片段形成的sjTRECs,其中胸腺细胞和脐血单个核细胞DNA中3种删除环的检出率均为100％,正常人外周血3种删除环的检出率分别为50％、70％和40％。结论成功地建立检测3种Vβ-Dβ1 sjTRECs的方法,并提供了Vβ2、Vβ5和Vβ17亚家族sjTRECs在胸腺、脐血和外周血中的检测情况。     

T-ALL及T细胞株相关TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的了解T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者外周血中的T细胞及T细胞株的TCR Vβ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法利用RT-PCR方法扩增6个不同的T细胞株和6例初发未治T-ALL病人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3)，PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性，部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析。结果与正常人外周血表达全部24个Vβ亚家族不同，6例T-ALL病人分别表达5～12个Vβ亚家族。6例病人均存在1个或多个Vβ亚家族的寡克隆或双克隆增殖T细胞，另外，还有一些Vβ亚家族多克隆模式发生改变，呈现寡克隆性增殖的趋势。T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞，不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同。结论T-ALL患者外周血T细胞的TCR Vβ谱系出现限制性改变，均可检测到克隆性增殖T细胞，尚需进一步鉴定其性质(肿瘤性或抗原特异性增殖)，对于检测微小残留病变和设计抗白血病独特型疫苗均有一定的意义。     

DLI治疗CML病人的克隆性增殖TCR Vβ细胞分析

目的：了解供者淋巴细胞输注（DLI）后,产生GVL效应的克隆性TCR Vβ亚家族T细胞的情况。方法：利用RT－PCR分别扩增2例CML经allo-BMT后复发病人DIL治疗前后不同时间外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性。结果：DLI治疗前病人外周血仅表达4－11个Vβ亚家族,而DL1治疗后缓解期则可检测到12－21个Vβ亚家族。基因扫描显示DLI后病人外周出血某些新的Vβ亚家族克隆性增殖T细胞。结论：病人的TCR Vβ亚家族T细胞存在倾斜性分布现象,该倾斜现象在完全缓解时逐步恢复正常。DLI治疗病人时,可能通过某些克隆性增殖TCR Vβ亚家族T细胞而发挥GVL作用。     

CML中TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17亚家族sjTRECs的检测情况

目的检测慢性粒细胞白血病（CML）患者外周血TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的存在情况．从而了解相应3种Vβ亚家族naiveT细胞的近期胸腺输出情况．方法利用半巢式PCR扩增9例CML患者外周血单个核细胞（PBMC）、CD^4＋细胞和CD8^＋细胞DNA的Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs，13例正常人外周血作为对照．结果TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在部分正常人和1例CML患者CD4^＋或CD8^＋细胞可以检测到，而在CML患者PBMC中则未能检测到．结论在CML患者Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs检出率低，与其胸腺输出相应的TCR Vβ亚家族naiveT细胞水平低下有关．     

NOD/SCID小鼠人源化TCR Vβ亚家族T细胞分布与克隆性分析

目的 应用脐血CD34 细胞移植NOD/SCID鼠所建立的人源化SCID模型,分析人源化TCR Vβ亚家族T淋巴细胞分布与克隆性.方法 磁珠分选法分离脐血中CD34 细胞,分别经尾静脉输入亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠.第6周处死小鼠提取外周血、骨髓、胸腺的RNA,RT-PCR扩增人TCR Vβ亚家族基因,并用基因扫描进行T细胞克隆性分析.结果 采用RT-PCR技术在模型小鼠骨髓中检测到部分人TCR Vβ亚家族基因Vβ1、2、9、13、19.经进一步基因扫描分析,发现部分TCR Vβ亚家族基因Vβ9、13、19呈寡克隆表达.结论 在NOD/SCID模型可重建分化成熟的TCR Vβ亚家族T细胞.未能检测到全部人TCR VβT细胞的原因可能与免疫重建不完全或存在移植物抗宿主的反应有关.人源T淋巴细胞在模型鼠骨髓中分化成熟.     

AML-M1相关TCR Vβ克隆性增殖T细胞的研究

目的：了解急性髓细胞白血病M1亚型（AML－M1）患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞的克隆性分布特点。方法：采用RT－PCR扩增9例M1患者外 周血的单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因，分析其TCR Vβ亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析，了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果：不同标本中可检测到2－5个Vβ亚家族T细胞，以Vβ2、Vβ3、Vβ17和Vβ19为常见，并在Vβ2、Vβ3、Vβ5、Vβ8、Vβ9和Vβ19中发现克隆性生长T细胞。结论：M1病人外周血TCR Vβ亚家族T细胞表达呈现明显的选择性和克隆性增殖情况，这可能与M1细胞相关抗原有关，且克隆性增殖Vβ亚家族分布以个体特异性为主。     

正常人外周血和脐血中TCR Vβ亚家族sjTRECs的检测情况

目的:检测TCR23个Vβ亚家族sjTRECs在正常人外周血中的存在特点,从而进一步了解正常人胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况。方法:采用半巢式PCR对4例胸腺、10例脐血和10例正常人外周血分别在2×105、5×104、1×104和1×103个单个核细胞中的23个Vβ亚家族sjTRECs进行扩增。结果:在细胞数相同的情况下,各Vβ-Dβ1sjTRECs的检出率胸腺细胞最高,其次是脐血,正常人最低。当细胞数为2×105、5×104和1×104时,正常人Vβ2、Vβ4、Vβ7、Vβ11和Vβ19亚家族sjTRECs的检出率以及检出sjTRECs的亚家族数量均显著低于脐血。当细胞数为2×105和5×104时,正常人可检测到绝大多数Vβ亚家族的sjTRECs,随着细胞数的降低,部分Vβ亚家族的sjTRECs则检测不到,而少部分Vβ亚家族的sjTRECs则在1000个细胞时仍能检测到。结论:成功建立了半定量检测23个Vβ亚家族sjTRECs的检测方法;在2×105细胞中约可以检测到80%左右的Vβ亚家族初始T细胞,而在5×104细胞中约有半数的Vβ亚家族初始T细胞可检测到,提示不同Vβ亚家族初始T细胞的出现频率有所差异。     

苯中毒工人外周血TCR Vβ克隆性T细胞利用特点

目的:分析苯中毒工人外周血中克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点.方法:利用RT-PCR方法扩增11例苯中毒工人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的CDR3, 阳性产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而了解其克隆性.结果:健康者外周血中可检测到24个Vβ亚家族, 11例苯中毒工人仅检测到2～10个Vβ亚家族.11例苯中毒工人均存在1个或多个Vβ亚家族T细胞出现寡克隆及寡克隆趋势.Vβ2、4、5、6和Vβ21的寡克隆T细胞出现频率较高.结论:苯中毒工人外周血TCR Vβ亚家族T细胞出现倾斜性分布和克隆性增殖, 这可能是机体苯中毒后所引起的特异性免疫反应.     

Anti-Idiotypic Regulatory Responses Induced by Vaccination with DNA Encoding Murine TCR Vα5 and Vβ2

There is evidence suggesting that anti-idiotypic regulation against T cells plays a role in maintaining homeostasis in the immune system, although its mechanism is not fully understood. By using DNA constructs encoding the TCR Vα5.2 and Vβ2.1 chains derived from ：in ovalbumin （OVA）-specific T cdl clone （OVA-T）, we herein demonstrated that vaccination with TCR-DNA effectively induced anti-idiotypic cellular as well as humoral responses. Serum samples from the TCR-DNA-vaccinated BALB/c mice were able to stain T cells in an idiotype-specific manner. CD4^＋ T cells from the TCR-DNA-vaccinated mice proliferated in response to stimulation with irradiated syngeneic OVA-T calls and secreted interferon-y but very little IL-4. Splenocytes from the TCR-DNA-vaccinated mice showed strong idiotype-specific CTL activity against the OVA-T cdls. Furthermore, adoptive transfer of the CD4^＋ or CD8^＋ T cells from the TCR-DNA-vaccinated mice resulted in hyporesponsiveness of syngeneic recipients. These results demonstrated that vaccination with DNA encoding TCR can effectively activate anti-idiotypic regulatory responses in vivo and thus providing a useful way for immunological intervention.     

TCR Vβ7基因转染PBLs的表达及抗肝癌的作用

目的 :将TCRVβ7基因转化到淋巴细胞后研究肝癌细胞的生物学作用。 方法 :用RT PCR的方法扩增出TCRVβ7基因 ,克隆到表达载体pLXSN上 ,用脂质体转染的方法 ,将重组载体导入淋巴细胞 ,然后将淋巴细胞作用于肝癌细胞 ,淋巴细胞用流式细胞仪测表型和用激光共聚焦检测TCRVβ7 1基因的表达 ,肝癌细胞作超微结构分析。 结果 :TCRVβ7基因表达的跨膜蛋白显著增多 ,而且淋巴细胞增多 (P <0 0 5 ) ,肝癌细胞出现凋亡。结论 :TCRVβ7亚家族具有识别肝癌抗原的作用并能激活T细胞的杀伤肝癌细胞的功能。     

CML患者CD4+和CD8+T细胞的TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的：了解慢性粒细胞白血病慢性期（CML-CP）患者外周血CD4^＋和CD8^＋T细胞中TCR Vβ亚家族T细胞的基因表达和克隆性.方法：利用RT-PCR分别扩增19例CML-CP患者外周血单个核细胞（PBMCs）、CD4^＋和CD8^＋细胞TCR Vβ亚家族基因的CDR3,阳性产物进一步经基因扫描分析其克隆性.结果：CML患者外周血CD4^＋和CD8^＋细胞分别表达部分（1～21个）Vβ亚家族,均以Vβ13的表达率最高,其次为Vβ9,多数患者的一些Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖,主要出现于CD8^＋细胞中,分别以Vβ21（CD4^＋）和Vβ11（CD8^＋）亚家族的克隆性增殖多见.结论：CML患者外周血CD4^＋和CD8^＋细胞的TCR Vβ谱系均存在限制性分布,患者存在的克隆性增殖CD4^＋和CD8^＋T细胞可能与宿主抗CML抗原反应有关,它们可能在抗CML效应中起主要作用.     

基因扫描分析AML-M2a病人外周血的TCR Vβ亚家族T细胞的克隆性增殖

目的了解AML-M2a患者外周血中TCR Vβ亚家族T细胞的分布和克隆性情况.方法利用RT-PCR扩增14例AML-M2a患者外周血单个核细胞中24个TCR Vβ亚家族基因的CDR3,了解TCR Vβ亚家族T细胞的分布.阳性产物进一步经基因扫描分析了解其克隆性.结果 14例AML-M2a患者选择性表达3～10个Vβ亚家族,其中部分Vβ亚家族呈寡克隆增殖.结论 AML-M2a患者TCR Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布和克隆性增殖,可能是机体对M2a细胞刺激所产生的特异性免疫反应.