雷公藤多甙减少Aβ诱导的大鼠星形胶质细胞数

目的探讨雷公藤多甙对大鼠大脑皮质内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)后星形胶质细胞的反应作用。方法采用GFAP免疫组织化学方法观察大脑皮质内注射凝聚态Aβ1-40后星形胶质细胞GFAP阳性细胞数。结果大脑皮质注射Aβ1-40后,GFAP阳性细胞数量明显增多,胞体截面积明显增大;给予雷公藤多甙治疗后,GFAP阳性细胞数量明显减少,胞体截面积明显减小。结论将凝聚态Aβ1-40注射入大鼠大脑皮质后可导致星形胶质细胞的激活,雷公藤多甙对Aβ诱导的星形胶质细胞的活化有抑制作用。     

雷公藤内酯醇对大鼠大脑皮质内注射β-淀粉样蛋白后星形胶质细胞及胆碱能纤维的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(TP)对大鼠大脑皮质内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)后星形胶质细胞及胆碱能纤维的影响.方法:采用GFAP免疫组织化学方法、AChE组织化学方法检测各组大鼠大脑皮质星形胶质细胞和胆碱能纤维的表达.结果:Aβ组大鼠大脑皮质GFAP阳性星形胶质细胞数量、平均面积和平均光密度明显高于对照组,用药组大鼠大脑皮质GFAP阳性星形胶质细胞数量、平均面积和平均光密度较Aβ组明显减少;Aβ组大鼠大脑皮质胆碱能纤维密度明显低于对照组,用药组大鼠大脑皮质胆碱能纤维密度较Aβ组明显升高.结论:TP能抑制Aβ诱导的星形胶质细胞的活化,减轻Aβ所致的胆碱能纤维损害.     

雷公藤多甙对大鼠海马内注射β-淀粉样蛋白后小胶质细胞反应的影响

老年性痴呆(Alzheimer‘s disease,AD)的病因和发病机理至今尚未完全明了,亦缺乏公认有效的治疗方法。近年来,AD的免疫炎症学说受到了越来越多的关注。β-淀粉样蛋白(beta—amyloid protein,Aβ)的沉积激活小胶质细胞是这一学说的核心病理机制,激活的小胶质细胞可释放炎性介质引起神经毒作用。雷公藤多甙具有抗炎与免疫抑制作用,是我国独创的新型抗炎中药,其对Aβ所致的小胶质细胞激活是否有影响,尚未见报道。     

蝎毒耐热蛋白对外源性Aβ活化星形胶质细胞的作用

目的观察蝎毒耐热蛋白(SVHRP)对Aβ_(1-40)活化星形胶质细胞(AST)作用的影响。方法应用Aβ_(1-40)进行大鼠海马内定位注射后腹腔给予SVHRP进行干预,16d后应用免疫组化法进行海马内GFAP免疫反应强度检测。结果Aβ_(1-40)注射点周围GFAP免疫反应明显增强,而经SVHRP干预后GFAP免疫反应显著减弱,接近正常对照水平。结论腹腔注射SVHRP可抑制外源性Aβ_(1-40)引起的大鼠海马内AST活化。     

小胶质细胞和外周血T细胞对大鼠海马内β-淀粉样蛋白沉积的应答反应

目的观察海马内β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积对外周血T细胞穿过血脑屏障及脑内小胶质活化的影响。方法通过立体定位技术将Aβ1-42合成肽注射至大鼠双侧海马,对照组注射反序列Aβ42-1或PBS。分别于注射后7天,用免疫荧光和免疫组织化学法检测CD3、CD11b及MHCⅡ类分子的表达。结果海马内注射Aβ1-42后7天大脑皮质深部和海马区出现大量CD3阳性T细胞,比对照组明显增多(P<0.01);CD11b和MHCⅡ类分子阳性小胶质细胞数量也显著高于对照组(P<0.01),表现为明显激活状态。结论大鼠海马内Aβ沉积引起外周血T细胞穿过血脑屏障进入脑内增多,并影响了小胶质细胞增生、活化。     

外源性Aβ活化星形胶质细胞的超微结构表现和SVHRP的抑制作用

目的观察淀粉样β蛋白(Aβ1-40)诱导星形胶质细胞活化的超微结构改变和蝎毒耐热蛋白(SVHRP)在超微结构水平对胶质活化的抑制作用。方法应用Aβ1-40进行大鼠海马内定位注射,同时腹腔给予SVHRP进行干预。通过免疫组化染色和透射电镜观察星形胶质细胞的变化。结果 Aβ注射16天后,注射点周围GFAP免疫阳性细胞较对照组增多、肥大;电镜下星形胶质细胞核异染色质减少,核周体明显,胶质丝增生,线粒体、粗面内质网等细胞器丰富,胞内见吞噬物。SVHRP干预后,GFAP免疫反应水平下降与对照组相近,电镜下仍然可见核周体明显的星形胶质细胞,但胶质丝较少。结论外源性Aβ引起星形胶质细胞出现明显的超微结构改变,SVHRP抑制这一反应。     

大鼠束缚后脑内星形胶质细胞的反应

为了探讨束缚后大鼠脑内星形胶质细胞的反应,本实验将大鼠束缚于小的塑料桶内1、3或6 h,于解束后30 min处死,正常大鼠不被束缚作为对照。脑组织进行抗glial fibrillary acidic-protein(GFAP)免疫组织化学染色。结果显示:在正常大鼠脑内有少数散在静止状态的星形胶质细胞,表现为胞体小、突起细、GFAP淡染,缺乏机能定位分布特点;束缚后脑内星形胶质细胞表现为胞体肥大、突起变粗、GFAP深染、形成激活状态,其分布有明显的机能定位特点,表达于与应激反应调节相关的核团,主要有(1)端脑:扣带回、新皮质(尤其是第Ⅲ和V层)、隔外侧核、杏仁中央核;(2)间脑:丘脑室旁核、外侧膝状体、内侧膝状体、下丘脑的视上核、室旁核、第三脑室室周区、弓状核;(3)脑干:中脑的上丘浅层、中脑导水管周围灰质、下丘的皮质部;脑桥的臂旁外侧核、蓝斑、A5区;延髓的耳蜗核、延髓内脏带(MVZ)等处。反应性星形胶质细胞表达的时程变化是束缚1 h最高,3 h次之,6 h最少。本文结果表明,大鼠被束缚后全脑多处核团的星形胶质细胞发生不同程度的改变,随着束缚时间的延长,动物产生适应性,星形胶质细胞表达减少。     

戊四氮慢性致痫大鼠海马星形胶质细胞的激活

目的：研究慢性癫痫大鼠点燃时海马星形胶质细胞的激活情况。方法：采用免疫组化和双重免疫荧光标记法观察戊四氮慢性癫痫大鼠点燃后海马NF-kBp65和胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的变化。结果：癫痫发作1 h,CA1区出现NF-kBp65-IR阳性细胞,4 h胶质细胞p65-IR维持在高水平,并持续至发作后12 h;发作1 h,CA1区GFAP-IR开始增强,4～8 h观察到明显浓染和突起增多的GFAP-IR阳性细胞,并持续至24 h;GFAP/p65一IR阳性细胞发作后1 h可观察到,4 h达最高峰,24 h恢复至对照组水平。结论：戊四氮致痫大鼠点燃时,星形胶质细胞的这种早期而持续的激活提示该细胞在慢性癫痫的复发中可能起到重要作用。     

阿尔茨海默病发病机制中β淀粉样蛋白对星形胶质细胞和神经细胞α7尼古丁受体的影响

目的 探讨阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease,AD）患者脑组织和高表达β淀粉样蛋白前质蛋白（APP）转基因小鼠脑组织中α7尼古丁受体亚型的改变,以及β淀粉样蛋白（Aβ）对体外培养的星形胶质细胞和神经细胞中α7尼古丁受体亚型蛋白表达的影响。方法 选取尸解后AD患者脑组织和高表达APP转基因小鼠脑组织,用免疫组织化学方法（ABC法）检测人脑组织中胶质细胞和神经细胞α7尼古丁受体的表达,用Westernblot方法测定小鼠脑组织中α7尼古丁受体蛋白含量;体外培养星形胶质细胞和神经细胞,用不同浓度的A1325-35进行处理,然后用Westernblot方法测定细胞中α7尼古丁受体蛋白水平。结果 AD患者脑组织中星形胶质细胞数量增多,并密集于老年斑周围;AD患者脑组织表达d7尼古丁受体的星形胶质细胞增多,而表达α7尼古丁受体的神经元减少;高表达APP转基因小鼠脑组织中胡尼古丁受体蛋白水平升高49％;用不同浓度的Aβ25-35处理培养细胞后,星形胶质细胞中胡尼古丁受体蛋白水平增高（达38％）,而神经细胞中胡尼古丁受体蛋白水平减少可达32％。结论 神经元α7尼古丁受体减少可能与AD患者智力障碍的发生有关,而过多Aβ刺激星形胶质细胞后所引起的胶质细胞胡尼古丁受体表达增多则可能是一种神经保护性代偿方式。     

白藜芦醇对β淀粉样蛋白诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用

目的研究白藜芦醇对β淀粉样蛋白诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用,从而探索其对中枢神经保护作用的可能机制。方法采用不同浓度的白藜芦醇预处理星形胶质细胞12h,继之用25μmol/L浓度的β淀粉样蛋白进行损伤,然后检测细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）以及采用DHE探针测定荧光强度间接反映胞内活性氧（ROS）含量,以评价白藜芦醇对细胞氧化损伤的保护作用。结果受β淀粉样损伤的细胞存活率明显下降（P〈0.05）,而用10、100μmol/L白藜芦醇预处理则能提高该细胞的存活率（P〈0.05）,但1μmol/L白藜芦醇预处理的细胞存活率并无明显变化;荧光检测显示,蛋白损伤使得荧光强度增高（P〈0.05）,1μmol/L白藜芦醇处理组荧光强度大于阳性对照组,其余各组荧光强度均小于阳性对照组（P〈0.05）;蛋白损伤可导致细胞LDH漏出量增加（P〈0.05）,1μmol/L白藜芦醇使得LDH漏出增加（P〈0.05）,而10、100μmol/L白藜芦醇处理组,细胞LDH漏出量明显减少（P〈0.05）。结论星形胶质细胞受到β淀粉样蛋白损伤后,白藜芦醇能减少LDH的漏出及有效降低胞内ROS水平,从而显示对星形胶质细胞具有保护作用。     

卡马西平对大鼠海马星形胶质细胞形态和GFAP表达的影响

目的观察治疗剂量卡马西平对SD大鼠海马星形胶质细胞形态和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法治疗剂量卡马西平每24 h单次灌胃给药后,于不同时间点经心脏灌注,取脑;GFAP免疫组化染色测量海马GFAP阳性细胞数量及形态。结果1周组海马CA1区星形胶质细胞的形态及GFAP表达无变化,1个月组星形胶质细胞数量及GFAP表达量无明显增加,3个月组GFAP阳性细胞数显著增加,达对照组的1.74倍(P<0.05);并伴细胞体积增大,侧支增多。结论治疗剂量的卡马西平对星形胶质细胞形态和GFAP表达的影响呈时间依赖性。     

环磷酰胺和雷公藤多苷对儿童性腺的远期影响

目的观察口服雷公藤多苷（GTW）和（或）静脉应用环磷酰胺（CTX）对儿童性腺的远期影响。方法回顾性收集1986年1月至2005年3月于首都儿科研究所附属儿童医院住院予GTW口服和（或）CTX静脉冲击治疗的原发性肾病综合征和过敏性紫癜肾炎患儿的资料,对停药后5年以上的患儿进行随访,内容包括开始用药时年龄,用药情况（累积剂量和疗程）,随访时年龄,随访时停药时间,婚育史,男性进行精液检测,女性随访乳房发育、初潮时间和月经史。结果符合纳入标准患儿136例,共随访到47例,其中男性21例,女性26例。①男性随访结果：单独应用GTW者12例,开始用药年龄7～14岁,累积剂量51～174mg·kg^-1,随访时停药9～17年,其中6例已婚育,子女均体健;2例女方有怀孕史;4例未婚者行精液检测示异常精子轻度升高1例,精子活动力略下降2例。单独应用CTX者6例,开始用药年龄3～14岁,累积剂量55～72mg·kg^-1,随访时停药6～17年,其中2例女方均有怀孕史;余4例行精液检测示异常精子轻度升高并精子活动力轻度下降1例。先后应用GTW和CTX者3例,应用间隔时间1d至7个月,精液检测示精子数量减少、精子活动率下降、异常精子升高或活动力下降2例。②女性随访结果：单独应用GTW者19例,开始用药年龄7～14岁,累积剂量36～190mg·kg^-1,随访时停药5～20年;单独应用CTX者6例,开始用药年龄12～15岁,累积剂量32～213mg·kg^-1,随访时停药5～9年;先后应用GTW和CTX者1例,应用间隔时间1年,累积剂量分别为87和160mg·kg^-1,随访时分别停药8和7年。已育者的子女均体健,未婚者月经和乳房发育均正常。结论单独口服GTW或CTX静脉冲击治疗累积量较低时可能对男性性腺的损害较轻,对女性生育、月经和乳房发育未见影响。GTW及CTX连续应用者,应用间隔时间较短可能对男性产生显著的性腺损害,应避免短期内连续应用GTW和CTX。     

点燃模型大鼠海马和皮层星形胶质细胞变化的动态观察

目的　探讨星形胶质细胞在戊四唑 (PTZ)化学点燃模型癫痫发病中的作用。方法　用 30只Wistar大鼠随机分为对照组和模型组。采用免疫组织化学方法和图像分析技术 ,对PTZ点燃各发作级别大鼠海马结构和颞叶皮质部位的胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的变化作动态观察。结果　GFAP值改变见于点燃后Ⅲ级组开始增加 ,Ⅴ级组达到高峰 ,Ⅴ级后 2 4h组仍有持续增加。结论　戊四唑点燃癫痫模型中 ,随着点燃级别的进展 ,GFAP免疫表达逐渐增加。提示星形胶质细胞GFAP含量的增加可能是PTZ点燃模型癫痫发病的原因之一。     

星形胶质细胞在大鼠下丘脑的分布

目的:观察星形胶质细胞在正常大鼠下丘脑的分布。方法:利用免疫组织化学技术,观察胶原纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)在下丘脑的表达。结果:GFAP阳性细胞在第三脑室室周区、视上核、下丘脑室旁核外侧大细胞部、正中隆起大量分布;下丘脑其他区域或核团,如前区、外侧区、前外侧核、视交叉上核、室旁核小细胞部、弓状核、腹内侧核等内分布稀疏。结论:星形胶质细胞在正常大鼠下丘脑的分布有明显区域性,可能与其相应区域的生理活动与调节功能有关。     

川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤后GFAP表达和脑组织水肿的影响

探讨川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤后星形胶质细胞表达胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)以及对脑组织含水量的影响。将70只SD大鼠随机分为3组:脑缺血后1、3、5、7、10d模型组(n=30,每个时间点用6只)、川芎嗪预处理组(n=30,每个时间点用6只)和假手术组(n=10,每个时间点用2只)。采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),应用免疫组化法观察星形胶质细胞GFAP的表达,干湿重法测定脑组织的含水量。结果显示:川芎嗪预处理组大鼠各时间点海马CA1区的GFAP阳性细胞数量显著增多,与缺血模型组比较均有显著性差异(P<0.05)。缺血再灌注后脑组织含水量持续性增加,到3d达到最高峰,5d时仍较高,以后逐渐降低;川芎嗪组各时间点的脑组织含水量均低于缺血模型组(P<0.05)。上述研究结果提示川芎嗪可引起星形胶质细胞活化、保护神经元、减轻脑水肿,具有防治脑缺血再灌注损伤的作用。     

A demonstration of glial filament distribution in astrocytes isolated from rat cerebral cortex

Astrocytes have been classically described based on morphological characteristics as either protoplasmic or fibrous. However, the appearance of astrocytes at the light microscopic level following immunoreaction with glial filament acidic protein antisera or Cajal's gold-chloride method is markedly different from the morphology of Golgi-impregnated or horseradish peroxidase-filled astrocytes. The present study combines immunohistochemistry using glial fibrillary acidic protein antisera and a cellular suspension of structurally intact astrocytes isolated from the rat cerebral cortex to demonstrate that the distribution of glial filaments is limited to major astrocytic processes. Because the sheet-like processes which decorate the major branches of protoplasmic astrocytes do not contain glial filaments, the entire protoplasmic astrocyte is not visible when viewed in situ in the gray matter of the cerebral cortex. Thus staining techniques that have a propensity for the glial filaments such as antisera to glial fibrillary acidic protein and the gold-chloride method provide only a skeletal outline of the major processes of the protoplasmic astrocyte. On the other hand, fibrous astrocytes which do not have feathery decorations on major processes are visible in the cerebral cortex in their structural entirety. The present investigation also offers additional evidence of the specificity of glial fibrillary acidic protein antisera for astrocytes.     

蛋白脂蛋白在两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达

目的:探讨蛋白脂蛋白(PLP)在分化成熟的两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达。方法:用激光共聚焦双重免疫荧光标记技术检测PLP在分化成熟的两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达情况。结果:在O-2A谱系来源的成熟2型星形胶质细胞和少突胶质细胞中PLP抗体标记为阳性,而在T1A谱系来源的成熟1型星形胶质细胞中则未检测到PLP的表达,从而在蛋白质水平验证本室研究两型星形胶质细胞基因表达谱差异基因芯片结果中PLP mRNA在T2A中高表达,而在T1A中低表达的现象。结论:PLP等脂代谢相关基因可能在O-2A谱系发生和分化过程中起重要作用,O-2A谱系与神经髓鞘发生以及脑内脂质代谢内在机制密切相关。     

孕酮对小鼠认知能力及星形胶质细胞表达的影响

目的研究孕酮对成年雌性去卵巢小鼠认知能力的影响,及其与星形胶质细胞GFAP免疫阳性细胞表达是否存在关联性。方法 60只雌性昆明小鼠随机分为5组,除假手术对照组(SHAM组)外,其余各组小鼠行双侧卵巢切除术。术后对各组小鼠分别腹腔注射不同剂量孕酮或生理盐水。用Y-型电迷宫测试系统测定小鼠的认知功能变化,免疫组化法测定星形胶质细胞(astrocytes,AC)标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫阳性细胞的表达和变化。结果小鼠认知功能测定中,去卵巢对照组(OVX组)小鼠与SHAM组小鼠相比,在第2、3时段正确反应次数显著降低(P<0.05),高孕酮剂量组(HP组)小鼠与OVX组相比,在第3时段正确反应次数显著增高(P<0.05);GFAP表达测定中,OVX组与SHAM组小鼠相比,GFAP阳性细胞AOD和阳性细胞面积表达水平增加(P<0.05),孕酮中剂量组(MP组)和HP组与OVX组小鼠相比,GFAP阳性细胞AOD和阳性细胞面积表达水平降低(P<0.05)。结论雌、孕激素的缺乏会引起成年雌性小鼠认知障碍,孕酮的长期补充治疗可以改善小鼠认知能力,其作用机制与星形胶质细胞的变化相关。     

氧糖剥夺诱导原代大鼠星形胶质细胞增殖反应中microRNA-125b的表达变化

目的研究氧糖剥夺诱导原代大鼠星形胶质细胞增殖过程中microRNA-125b的表达,探讨microRNA-125b是否参与了缺氧缺血性脑损伤后星形胶质细胞的增殖。方法原代大鼠星形胶质细胞随机分为正常组和氧糖剥夺组,分别培养3、6和9h。EdU掺入法检测各组星形胶质细胞的增殖,real-timePCR方法检测各组星形胶质细胞microRNA-125b的表达。结果氧糖剥夺组microRNA-125b的表达水平随培养时间延长呈先升高后降低的动态变化,3h开始高于对照组水平(P0.05);6h达高峰(P0.01),随后下降,9h与对照组无差异(P0.05)。氧糖剥夺不同时间星形胶质细胞增殖变化与microRNA-125b的变化趋势一致。结论 miroRNA-125b可能参与缺氧缺血性脑损伤后星形胶质细胞的增殖。