松材线虫纤维素酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用PCR技术克隆了松材线虫纤维素酶的编码基因BXC46,克隆基因与已报道的纤维素酶基因BXC10（GenBank登录号：FJ598020.1）的同源性高达99%,将其克隆到表达载体pET-15b上构建了表达载体pET-15b-BXC。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）菌株构建工程菌,SDS-PAGE分析表明,IPTG诱导了纤维素酶在工程菌中表达。采用Ni2＋-NTA树脂亲和层析部分纯化了重组松材线虫纤维素酶,DNS法进行的活性测定表明,部分纯化的重组蛋白具有纤维素酶的活性,其最适温度为45℃,最适pH为4.0。     

大肠杆菌SOD高产菌的诱变选育及产酶条件优化

以大肠杆菌为出发菌株,通过紫外线诱变处理,选育出一株SOD高产菌株(编号为ECM3).其SOD酶活达4 098.1 U/g,为实验出发菌株的2.1倍.经连续传代5次后仍稳定产酶.同时还对该目的菌株的产酶条件进行了优化,其最佳产酶条件为:250 mL三角瓶装液量60 mL,接种量2.5%(体积分数),培养基起始pH值为7.2,培养温度37℃,时间16 h.在此条件下,SOD酶活力为4 435.5 U/g.     

哈茨木霉Cu-ZnSOD的克隆表达及活性鉴定

为研究哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的生物防治机制并获得与生物防治相关基因,通过构建哈茨木霉菌丝生长期的cDNA文库及对部分表达序列标签序列的测定与生物信息学分析,成功获得了哈茨木霉超氧化物歧化酶(Cu-Zn SOD)基因的全长cDNA序列.该基因的编码框长度为465 bp,编码154个氨基酸,理论分子量为15.7 ku.将该基因构建到表达载体pET28上,转化到大肠杆菌BL21菌株中,通过诱导表达条件的优化后,经裂解菌体取上清进行酶活鉴定,确定在蛋白水平上得到了表达.蛋白质表达的最佳条件为:IPTG浓度为0.125 mmol/L,OD600为0.600,培养温度37℃,诱导时间为4 h.目的蛋白SOD的粗酶活为26.69 U/mL.该研究结果为进一步研究哈茨木霉的抗逆境胁迫分子生物学机制奠定基础.     

非营养条件对普通念珠藻生物量和胞外多糖分泌的影响

本文探讨了非营养条件pH、装液量、光照强度、摇床速度的变化对普通念珠藻生物量和胞外多糖分泌的影响。以普通念珠藻生物量和胞外多糖的含量为指标,单因素实验的最佳条件是:pH 7.5、装液量200 mL、光照强度50μmol/(m2·s)、摇床速度90 r/min;正交实验结果是:培养条件为pH 7.5、装液量150 mL、光照强度50μmol/(m2·s)、摇床速度120 r/min时,生物量和胞外多糖的含量最高,其中最佳摇床速度和最佳光照强度分别对生物量和胞外多糖含量的提高有着显著的效果。     

AFP调控的携带Mn-SOD基因的腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用

利用改造后的溶瘤腺病毒Ad.enAFP-E1A-△E1B55Kd作为载体携带治疗基因Mn- SOD,得到目的病毒Ad.enAFP-E1 A-△E1B55Kd-MnSOD;通过PCR方法鉴定病毒构建正确;MTT法检测病毒对肝癌细胞的特异杀伤能力和对肝正常细胞的安全性;Hoechst33342染色实验观察细胞凋亡的现象.结...     

耻垢分枝杆菌海藻糖合成酶基因TreS的克隆及其在大肠杆菌中的表达

耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis）在环境胁迫下具有合成海藻糖的能力。实验采用PCR的方法，克隆了来源于耻垢分枝杆菌的一段核苷酸序列，与已报道的海藻糖合成酶有60％以上同源性，推测该基因的编码产物具有海藻糖合成酶的活性，为进行其功能验证而在大肠杆菌中进行了表达。目的蛋白以可溶性蛋白为主，约占细胞可溶性总蛋白48％，为目前相关报道的最高值。经活性测定，表达的重组酶无需复性，能够催化麦芽糖生成海藻糖，在20℃反应20h对麦芽糖的转化率可达61％，具有较高的应用价值。     

从活性干酵母中直接提取SOD的研究

采用甲苯破壁法从耐高温酒精活性干酵母 (TH AADY)中直接提取SOD ,并对酶的热稳定性和双水相提纯技术作了探讨 .结果表明 :在初步优化的提取条件下SOD产量可达 1 0 97U/gAADY ;该SOD耐热性良好 ;双水相萃取对酶的提纯有一定效果 .     

重组仿刺参超氧化物歧化酶在大肠杆菌中表达条件的优化及分离纯化

利用基因工程菌BL21(DE3)/pET30a(+)-SOD1,优化表达重组仿刺参超氧化物歧化酶蛋白(rAj-SOD1)。采用摇瓶发酵优化rAj-SOD1可溶性表达的条件,提高蛋白的表达产量。结果表明,在温度30℃、转速200 r/min、0.1 mmol/L IPTG诱导8 h条件下,菌体中rAj-SOD1蛋白表达量最大,达到315.59 mg/L。电泳检测结果表明,rAj-SOD1的纯度为96.7%,符合后续酶活要求。纯化后rAj-SOD1质量浓度为98.73 mg/L,收率为31.28%。邻苯三酚法对rAj-SOD1蛋白进行活性分析,结果表明,纯化的rAj-SOD1蛋白具有明显的抗氧化活性。     

CTB-InsB融合基因在大肠杆菌中的表达研究

构建了一种霍乱毒素B亚基（CTB）与人胰岛素B链（InsB）的融合基因，并克隆入表达载体pGEX-4T-1中，命名为pGEX—CTB-InsB。该融合蛋白在大肠杆菌中的表达产物以包涵体形式存在，分子量约为43kDa。包涵体经溶解和复性后，使用GSTrapFF亲和层析柱纯化得到融合蛋白。经SDS-PAGE和Western免疫印迹分析证实纯化蛋白为重组目的蛋白。     

br基因的克隆及表达

细菌视紫红质(Bacteriorhodopsin,BR)是嗜盐菌细胞膜上唯一的一种光能转换色素蛋白,BR以视黄醛(retinal)作辅基,在光诱导下吸收光子后会产生一系列的光循环中间体,最后又回到原始状态．由于BR这种独特的分子结构和光循环过程,及其作为一种具有光敏特性的蛋白质生物分子,可嗵过生物学技术进行改造,正引起光子学研究及生物学研究领域的高度注意．从Genbank查询br基因的全序列,然后采用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)技术,采用DNA star软件辅助设计了上下游引物,以嗜盐菌(Halobactrium Halobium)的基因组DNA为模板克隆获得了完整的细菌视紫红质基因br,并且将经测序鉴定的br基因重组到原核高效表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌E．coli．,将阳性转化子经IPTG诱导表达获得BR与GST(谷胱苷肽转移酶)的融合蛋白后,提取蛋白进行SDS-PAGE电泳、Western印迹反应,检测表达结果为阳性,且表达蛋白的大小与预想的一致．     

假单胞菌ZL13邻苯二酚2,3-双加氧酶基因的克隆表达

寻找新型高效石油降解菌,并研究其相关基因一直是石油降解领域的热点.本文以细菌Pseudomonas sp.ZL13的降解性质粒pZL-1的DNA为模板,通过PCR扩增的方法进行基因克隆,得到邻苯二酚2,3-双加氧酶基因.序列分析结果表明,该基因大小为924bp,编码307个氨基酸;序列同源性比较结果显示,该基因与荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)和恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的基因序列的相似性较高,处于同一分支.将目的基因连接到pGEX-4T-2表达载体上,在E.coli BL21中成功表达,转化子具有原油降解能力.     

超氧化物歧化酶的研究及应用概况

超氧化物歧化酶（SOD）是一种催化超氧化物阴离子自由基发生歧化反应，生成氧和过氧化氮的金属酶，按其结合的金属离子，区分为Fe-SOD,Mn-SOD和Cu,Zn-SOD三种。本文主要概述SOD的分子结构及其理化性质，并简要介绍了SOD在医药等领域的应用情况。     

来福胶囊对小鼠药物损伤的保护与修复

研究不同剂量来福胶囊对环磷酰胺所致的小鼠损伤的保护与修复作用.给小鼠连续灌服来福胶囊45 d后,用环磷酰胺建损伤模型,再连续灌服来福胶囊45 d,然后测定血常规、超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）.结果显示低剂量组SOD和GSH值升高,MDA值最低,而高、中剂量组有时会出现相反情况.因此,连续口服低剂量来福胶囊有增强机体的抗氧化作用,对化疗药引起的损伤有一定修复作用.     

高产SOD酵母菌的筛选及其发酵条件的研究

从数株酵母菌中选出了一株细胞生物量（Ｂｉｏｍａｓｓ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）含量都较高的菌株Ｙ—２１６，研究了该菌株产ＳＯＤ较适宜的培养基组成、ｐＨ值和时间等发酵条件，同时对其ＳＯＤ破壁提取的方法也作了初步探讨。结果表明，在初步优化条件下Ｙ—２１６菌株的ＳＯＤ摇瓶发酵水平可达２．４３×１０４Ｕ／Ｌ。     

超氧化物歧化酶的制备及其临床应用

目前，超氧化物歧化酶已经从多种生物有机体中提取并纯化。本文介绍了超氧化物歧化酶的分类和活性中心分子结构，阐述了超氧化物歧化酶的制备工艺及其医学应用。     

提高碱性磷酸酶在E.coli胞内表达的可溶性及活性

以E.coli DH5a基因组为模板PCR扩增得到无信号肽的碱性磷酸酶基因片段,与胞内融合表达型T栽体连接得到重组质粒,转化表达宿主E.coli BL21(DE3)和E.coli origami(DE3),经0.1 mM IPTG诱导表达,超声破碎细胞后,SDS-PAGE分析可溶性,融合蛋白在E.coli origami(DE3)中的可溶蛋白含量比E.coli BL21(DE3)中高.融合蛋白的可溶部分经Ni2+螯合亲和纯化,纯化后E.coli origami(DE3)中蛋白活性比E.coli BL21(DE3)中明显提高,达到1 614.3U/mg蛋白.     

人参皂苷葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及包涵体的变复性

将人参皂苷葡萄糖苷酶的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中。对该基因进行诱导表达,并对包涵体进行变性和复性。结果显示,经终浓度为0.5mmol/L IPTG在30℃下诱导表达4h,进行SDS-PAGE分析,目的蛋白主要以包涵体形式存在并确定其分子质量约为75ku,与理论值基本相符,表明该基因得到了表达。包涵体经过变性和稀释复性后,经TLC活性检测,能够水解底物Rb1,表明具有人参皂苷葡萄糖苷酶的活性。