感染性休克下调大鼠血管内皮和血小板L-精氨酸/一氧化氮通路

目的：观察感染性休克对大鼠血小板及血管L-精氨酸(L-Arg)/一氧化氮合酶(NOS) /一氧化氮(NO)通路的影响及其相互联系,探讨感染性休克损伤的机制。方法:利用盲肠结扎并穿孔复制早期和晚期感染性休克大鼠模型,采用Greiss法测定血管各层及血小板孵育液亚硝酸盐(NO^-₂/NO^-₃)含量;以同位素示踪法检测其NOS活性及L -Arg转运。结果:早、晚期感染性休克大鼠血小板和主动脉内膜NO-2/NO-3水平、NOS 活性及低亲合L-Arg 转运量均显著低于假手术组(高亲合L- Arg 转运量在早期休克增加、晚期休克降低);而中膜和外膜的NO^-₂/NO^-₃水平、NOS 活性及L-Arg 转运量则显著高于假手术组,均以休克晚期改变为显著。血小板和主动脉内膜NO^-₂/NO^-₃生成、NOS 活性及高、低亲合L-Arg 转运的改变均呈正相关(均P< 0. 01)。结论:感染性休克下调血管内膜和血小板的L-Arg/NO通路,上调血管中膜和外膜L-Arg/ NO通路。提示检测血小板L-Arg/NO通路的变化可能反映休克时血管内皮功能的损伤。     

败血症休克大鼠血管外膜L-精氨酸/一氧化氮合酶/一氧化氮通路的变化

目的：观察败血症休克大鼠主动脉外膜L-精氨酸（L-Arg）转运，一氧化氮合酶（NOS）活性和一氧化氮(NO)生成的变化。方法:雄性Wistar大鼠盲肠结扎并穿孔复制败血症休克模型。测定大鼠主动脉外膜亚硝酸盐(NOx)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及L-精氨酸(L-Arg)转运；RT-PCR方法测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA水平。结果:严重感染休克大鼠呈现严重的血流动力学紊乱, 心功能抑制。败血症休克大鼠表现为严重的低血糖和高乳酸血症。血管外膜iNOS的mRNA水平均明显高于假手术组（均P<0.01），主动脉外膜NOx生成、NOS活性及L-Arg转运速率显著高于假手术组（P<0.01）。结论:败血症休克时血管外膜L-Arg/NOS/NO系统激活在败血症休克发病中可能起重要作用。     

氨基胍等对严重烧伤大鼠一氧化氮表达及烧伤休克的影响

目的:研究一氧化氮合酶(NOS)抑制剂与严重烧伤大鼠体内NO产量、NOS表达以及平均动脉压(MAP)变化的关系。方法:复制大鼠重症烧伤模型,检测应用非选择性NOS抑制剂L-NAME和选择性诱生型NOS(iNOS)抑制剂氨基胍(AG)后大鼠血液中NO代谢产物(NO₂^-／NO₃^-)以及肺和十二指肠组织中神经型NOS(nNOS)mRNA的表达水平,同时测定各组大鼠的MAP。结果:烧伤后大鼠血液中NO₂^-／NO₃^-含量显著增高,L-NAME和AG都能抑制NO₂^-／NO₃^-的升高,P<0.01;烧伤后nNOS的mRNA表达在肺和十二指肠中均有不同程度升高,AG和L-NAME使nNOS表达增加,L-NAME作用更为显著,P<0.01;烧伤后大鼠MAP略有上升,然后进行性下降,L-NAME组大鼠MAP显著升高,但于3h后急剧下降,AG组大鼠MAP下降速度明显低于对照组。结论:结构型NOS(cNOS)与iNOS在烧伤休克病理生理过程中的作用明显不同,iNOS活性过度增高与烧伤休克发病关系密切。     

大鼠严重烧伤后体内一氧化氮水平变化与预后的关系

目的:研究一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)在严重烧伤早期大鼠体内的变化规律及其与预后的可能联系。方法:检测严重烧伤前后大鼠血液中NO代谢产物NO^-₂/NO^-₃及脑、肺脏和十二指肠组织中神经型(nNOS)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的水平,同时统计各组大鼠的存活率。结果:烧伤后大鼠血液中NO^-₂/NO^-₃水平显著增高,非选择性NOS抑制剂L-NAME和选择性iNOS抑制剂氨基胍(AG)对其均有抑制作用,以L-NAME为甚;nNOS蛋白在伤后部分升高,L-NAME和AG均轻度上调nNOS水平;iNOS在正常组织中不表达,烧伤后表达异常增高,L-NAME和AG对此均无影响;与对照组比较,AG组大鼠存活时间延长,L-NAME组存活时间缩短。结论:严重烧伤后的血管扩张、血压降低和血管反应性低下与iNOS蛋白水平过度增高及其释放的大量NO关系密切。     

一氧化氮在失血性休克再灌注损伤中的作用及牛磺酸的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)在失血性休克再灌注损伤中的作用及牛磺酸的影响。方法:新西兰种兔24只随机分为3组(n=8):对照组、休克组、牛磺酸治疗组。采用失血性休克-再灌注损伤模型。连续观察休克前、休克1.5h、再灌注1h、2h、3h时血浆一氧化氮合酶(NOS)活性、一氧化氮代谢产物(NO^-₂／NO^-₃)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活性的动态变化。结果:①休克组再灌注各时限血浆NOS活性、NO^-₂／NO^-₃含量、MDA含量、LDH活性显著高于休克前及休克1.5h;SOD活性显著低于休克前及休克1.5h。②休克组再灌注3h时心、肺组织NOS活性、NO^-₂／NO^-₃含量、MDA含量显著高于对照组;SOD活性显著低于对照组。③牛磺酸(40mg·kg^-1, iv)可减轻再灌注各时限上述指标的变化。④血浆、心肺组织中NO^-₂／NO^-₃含量与MDA含量均呈正相关。结论:NO介导了休克再灌注损伤, 大量释放的NO参与休克再灌注损伤的脂质过氧化反应, 牛磺酸的拮抗作用可能与减少NO的生成、抗脂质过氧化有关。     

自发性高血压大鼠肾脏L-精氨酸/一氧化氮系统与红细胞L-精氨酸转运

目的:研究自发性高血压大鼠(SHR)肾脏(L-精氨酸／一氧化氮)L-Arg／NO系统的改变及其与红细胞L-Arg转运的关系。方法:检测16周龄SHR、卡托普利治疗4周的16周龄SHR(CAP)和16周龄WKY大鼠肾脏L-Arg转运、NOS活性、NO₂^-和cGMP含量,红细胞L-Arg转运。结果: SHR肾脏高低亲和L-Arg转运体的Vmax均低于WKY组(P＜0.01,P＜0.05),Km值则无明显差异。NOS活性、NO₂^-、cGMP含量分别较WKY组低35.4%、36.2%和85.2%(P＜0.05或P＜0.01)。CAP组高亲和L-Arg转运体的Vmax、NOS活性均高于SHR组(+90%,P＜0.01;+58.6%,P＜0.05)。NOS活性与高亲和L-Arg转运体的Vmax呈正相关,r=0.585,P＜0.05。红细胞L-Arg转运的改 变与肾脏相似, SHR组的Vmax低于WKY组(－30%,P＜0.01),CAP组高于SHR组(+26.5%,P＜0.01),Km值组间比较无明显差异。红细胞L-Arg转运的Vmax与肾脏高或低亲和L-Arg转运体的Vmax均呈正相关,r=0.8434,P＜0.01(高亲和)和r=0.5255,P＜0.05(低亲和)。 结论:SHR肾脏L-Arg/NO系统活动抑制,卡托普利治疗明显解除此抑制状态。肾脏L-Arg转运的改变与红细胞L-Arg转运的改变基本一致。     

吸烟大鼠一氧化氮合酶和一氧化氮的变化

目的:观察吸烟对大鼠肺组织iNOS、eNOSmRNA和蛋白表达以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中NO的影响, 探讨不同类型的NOS在吸烟所致慢性气道炎症中的作用。方法:选用Wistar大鼠80只随机分为对照组, 被动吸烟组, iNOS抑制剂L-NIL干预组及NOS抑制剂L-NAME干预组。用免疫组化法检测iNOS及eNOS的蛋白表达, 用RT-PCR检测iNOS及eNOSmRNA的表达, 用Griess法测定BALF中的NO^-₂/NO^-₃含量。结果:吸烟大鼠肺组织中iNOSmRNA及其蛋白表达增加, eNOSmRNA及蛋白表达下降, BALF中细胞总数及NO^-₂/NO^-₃显著增加(P＜0.05)。在体实验发现, L-NIL使BALF中细胞总数及NO^-₂/NO^-₃下降(P＜0.05);L-NAME对BALF中细胞总数及NO^-₂/NO^-₃无显著影响(P＞0.05)。结论:吸烟大鼠肺组织iNOSmRNA和蛋白表达增加, eNOSmRNA和蛋白表达减少。活化的iNOS产生大量NO促进炎症发展。     

一氧化氮和过氧亚硝基阴离子在肢体缺血再灌注致肺损伤中的作用

目的:观察肢体缺血再灌注致肺损伤时肺组织中一氧化氮(NO)及过氧亚硝基阴离子(ONOO^-)的变化,以探讨二者在此种损伤中的作用。方法:采用夹闭大鼠腹主动脉下段造成双下肢缺血和再灌注后肺损伤模型,分别测定假手术组、缺血4h组、缺血4h再灌注1h组及再灌注4h组肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、NO₂^-/NO₃^-含量变化;应用免疫组化方法测定上述各组肺组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及ONOO^-体内生成标志物硝基酪氨酸(NT)的变化。结果:肢体缺血再灌注后1h和4h肺组织中MDA和NO₂^-/NO₃^-的含量显著高于对照组和单纯缺血组(P＜0.05),而SOD活性则显著低于此两组(P＜0.05),并出现大量iNOS及NT阳性信号。结论:肢体缺血再灌注致肺损伤时肺组织中有大量NO和ONOO^-产生,脂质过氧化增强,提示ONOO^-参与介导此种肺损伤。     

一氧化氮与脑血管痉挛性神经元损伤和L-精氨酸的作用

目的:探讨一氧化氮(NO)与蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)所致神经元损伤的关系及L-精氨酸(L-Arg)的保护作用。方法: 应用血管内穿刺法建立大鼠SAH模型,将动物随机分为假手术组(SO组)、SAH组和SAH+L-Arg组。动态检测24 h内大脑顶叶皮层局部脑血流量(rCBF),测量基底动脉(BA)管径变化,测定不同时点血清NO(NO^-₂/NO^-₃)水平和血浆ET-1含量,并行海马神经元形态学观察。 结果: 假手术对各项指标无显著影响。SAH组术后rCBF迅速降低,1 h达最低值,并持续24 h;SAH后BA管径明显缩小;血清NO^-₂／NO^-₃含量明显减少,血浆ET-1含量逐渐增加,海马神经元显著损伤。与SAH组比较,SAH+L-Arg组rCBF下降的速度减慢、程度减轻;BA管径缩小的程度减轻;血清NO^-₂／NO^-₃水平降低和血浆ET-1含量增高的变化减轻;海马神经元损伤的程度减轻。结论: 血清NO浓度的降低参与了CVS性神经元损伤,L-Arg对之具有一定减轻作用。     

补体C5b-9抗血清对抗胸腺细胞血清性肾炎大鼠肾组织一氧化氮合成及其病变的影响

目的: 探讨抗鼠补体C5b-9复合物抗血清对系膜增生性肾炎大鼠肾组织合成一氧化氮 (NO)及其病变的作用。方法: 复制大鼠系膜增生性肾小球肾炎即抗胸腺细胞血清性肾炎 (ATSN)模型 ,用抗大鼠C5b-9复合物抗血清处理 ,观察其对ATSN大鼠NO相关指标及其病变的影响。结果: 抗鼠C5b-9复合物抗血清既能减少ATSN大鼠肾组织诱生性NO合酶 (iNOS)mRNA的表达和大鼠尿液中硝酸盐 /亚硝酸盐 (NO₃^- /NO₂^- )排泄量 ,还能减低大鼠肾组织病变的程度。NOS抑制剂L -NAME也可降低尿NO₃^- /NO₃^- 排泄量 ,同时减轻肾组织病变程度。结论: 抗鼠C5b-9复合物抗血清能够抑制肾细胞NO的合成及其肾小球系膜细胞的增生。     

Inducible and endothelial nitric oxide synthase expression during development of transplant arteriosclerosis in rat aortic grafts.

In the vascular system, distinct isoforms of nitric oxide synthase (NOS) generate nitric oxide (NO), which acts as a biological messenger. Its role in the development of transplant arteriosclerosis (TA) is still unclear. To investigate whether NO is involved in TA, we studied the expression of NOS isoforms, inducible NOS (iNOS) and endothelial NOS (eNOS), by immunohistochemistry and in situ hybridization during the first two post-transplantation months and their relation with cold ischemia (1 to 24 hours) and reperfusion injury using an aortic transplantation model in the rat. We found an increased iNOS expression in the intima and adventitia and a decreased expression in the media, whereas eNOS expression was not significantly altered during the development of TA. Co-localization studies suggested that iNOS-positive cells were vascular smooth muscle cells, monocyte-derived macrophages, and endothelial cells. Prolonged ischemic storage time resulted in an increase in eNOS expression in the neointima. In situ hybridization showed iNOS mRNA expression by vascular cells in the neointima and media. NO produced by iNOS and eNOS may be involved, at least in part, in the pathogenesis of TA in aortic grafts. Additional studies are needed to confirm the modulatory mechanism of NO during the development of TA.     

肠淋巴途径在二次打击致大鼠MODS的发病学作用

目的：探讨淋巴途径在二次打击致大鼠MODS的发病学作用。 方法： 结扎肠系膜淋巴管致肠淋巴液断流，以二次打击方法复制MODS模型。Wistar大鼠45只均分为结扎组、未结扎组、假手术组3组，术前及创伤后24 h取血，制备肾、肝、肺、心、肠组织10%匀浆，检测TNFα、NO、MDA、SOD等指标。 结果： 成功复制了MODS大鼠模型。二次打击后，未结扎组大鼠血清TNFα、NO2-/NO3-、NOS、iNOS、MDA均显著高于实验前及假手术组，SOD显著下降（P<0.01，P<0.05）；结扎组大鼠血清NO2-/NO3-、NOS、MDA高于假手术组（P<0.01），TNFα、NO2-/NO3-、iNOS、MDA显著低于未结扎组，SOD显著高于未结扎组（P<0.01）。未结扎组肠匀浆TNFα、NO2-/NO3-、NOS、iNOS、MDA，肾匀浆NO2-/NO3-、NOS、MDA，肝匀浆NO2-/NO3-、MDA及肺、心匀浆NO2-/NO3-均显著高于假手术组，肠匀浆SOD显著低于假手术组（P<0.01，P<0.05）；结扎组肾匀浆NO2-/NO3-、MDA及肝匀浆MDA显著高于假手术组（P<0.01，P<0.05）。结扎组肠、肾、肝匀浆NO2-/NO3-显著低于未结扎组，肠、心匀浆SOD显著高于未结扎组（P<0.01）。 结论： 肠系膜淋巴管结扎阻断了二次打击所致内毒素经淋巴流的移位，抑制TNFα释放，使iNOS生成减少，NO形成降低，减少自由基释放与SOD消耗，MODS的淋巴机制值得重视。     

肠系膜淋巴管结扎对休克大鼠肾功能不全的干预机制

目的： 观察结扎肠系膜淋巴管对不同时期重症失血性休克大鼠肾组织自由基、炎症介质的影响，探讨肠淋巴途径对休克大鼠肾功能不全的干预机制。方法: 雄性Wistar大鼠78只，分为假手术组、休克组、结扎组。休克组与结扎组复制重症失血性休克模型，结扎组于休克复苏后行肠系膜淋巴管结扎术。于休克后90 min、输液复苏后0 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h等时点处死大鼠，制备肾组织匀浆，检测MDA、SOD、NO、NOS、TNF-α、IL-6以及MPO水平，RT-PCR法测定各组大鼠肾组织iNOS mRNA表达。结果: 休克组大鼠输液复苏后不同时点肾组织匀浆MDA、NO、NOS、TNF-α、IL-6水平和MPO活性以及iNOS mRNA表达均有不同程度的升高，6 h-12 h持续在较高水平，均显著高于假手术组，肾组织匀浆SOD活性显著低于假手术组（P<0.01，P<0.05）；结扎组输液复苏后6 h、12 h、24 h肾组织匀浆MDA、NO、NOS、TNF-α、IL-6水平和MPO活性以及iNOS mRNA均显著低于休克组相应时点，SOD活性高于休克组相应时点（P<0.01，P<0.05）。结论: 肠系膜淋巴管结扎干预重症失血性休克大鼠肾功能不全的机制与减少肾PMN扣押、降低TNF-α、IL-6的释放、抑制NO生成及iNOS mRNA表达、减少自由基释放与SOD消耗等因素有关。     

Remodelling of guinea-pig aorta during pregnancy: selective alteration of endothelial cells

It is known that aortic blood flow is increased during pregnancy, which may be due to a pregnancy-associated decrease in aorta sensitivity to vasoconstrictors on one side, and increased response to vasodilators on the other. Recent studies have shown that alteration of blood flow or pressure could remodel some arteries over a short time frame. However, the possibility of remodelling of aorta during pregnancy has not yet been examined. Therefore, the aim of the present study was to assess the morphometric and stereological characteristics of guinea-pig aorta during different stages of pregnancy (non-pregnant, early-pregnant, mid- pregnant, late-pregnant, n = 8-10 for each group). The cross-sectional areas of different aortic layers and of endothelial cells were measured using both light and electron microscopy. The values of external and internal diameters, wall thickness, total cross-sectional area and cross-sectional area of media and adventitia were not significantly different, regardless of the stage of pregnancy. In contrast, the cross- sectional area of intima significantly and progressively decreased during pregnancy (non-pregnant: 61 +/- 5 x 10(4) microm2, late- pregnant: 38 +/- 3 microm2, P < 0.01). The volume:surface density ratio of intima also significantly and progressively decreased during pregnancy (non-pregnant: 5.31 +/- 0.51, late-pregnant: 4.38 +/- 0.42, P < 0.01). Electron microscopy revealed that the cross-sectional area of endothelial cells was significantly decreased during different stages of pregnancy (non-pregnant: 56.8 +/- 6.2 microm2, late-pregnant: 28.9 +/- 3.8 microm2, P < 0.01). It is concluded that during pregnancy there is selective thinning of intimal layer of guinea-pig aorta, which probably reflects hypotrophy of aortic endothelial cells.      

败血症休克大鼠组织中性内肽酶与肾上腺髓质素的相关关系研究

目的:观察败血症休克大鼠组织肾上腺髓质素(ADM)含量和中性内肽酶(NEP)的活性及其表达水平,以探讨NEP的变化在休克时组织ADM水平变化中的意义。方法:盲肠结扎穿孔方法复制大鼠败血症性休克模型,采用放射免疫方法和荧光分光光度法分别检测血浆和组织的ADM含量和NEP的活性,用半定量RT-PCR和免疫组织化学法分别检测NEP的mRNA及其蛋白的组织分布。结果: ADM和NEP广泛分布于大鼠的血浆和组织。休克早期,大鼠各组织ADM含量普遍高于对照组,NEP活性在心脏和小肠低于对照组,在血浆中高于对照组,在肺、肾和主动脉无明显变化。免疫组化结果显示,休克早期NEP在大鼠心脏、主动脉内膜和中膜的分布低于对照组。休克晚期,除大鼠小肠的ADM含量低于休克早期,血浆和其余组织的ADM含量均高于休克早期;与休克早期比较, NEP的活性除在大鼠肾脏无明显变化外,在血浆和其余组织均明显降低。NEP的免疫组化结果显示,休克晚期,NEP在大鼠心脏、主动脉内膜和中膜、肺和肾的分布弱于休克早期,在主动脉外膜无明显变化。RT-PCR结果显示,休克晚期大鼠心脏、主动脉、肺脏和小肠的NEP mRNA 表达均显著低于对照组。 结论:NEP在大鼠败血症休克的不同时期和不同组织中的变化与ADM含量的变化不一致,提示休克过程中,不同组织局部的NEP对ADM含量的影响不同。     

Expression of nitric oxide synthase and effect of substrate manipulation of the nitric oxide pathway in mouse ovarian follicles

BACKGROUND: Nitric oxide (NO) is a cell messenger with multiple actions in different biological systems, implicated in the control of follicle and oocyte function. NO is formed from L-arginine by isoforms of nitric oxide synthase (NOS) via NG-hydroxy-L-arginine, with L-citrulline as a byproduct. This study aimed to show how modulation of NO by manipulating NOS substrates would affect mouse follicle growth and ovulation in vitro, where vascular effects of NO are attenuated. METHODS: Immunohistochemistry [endothelial (eNOS) and inducible (iNOS)] and in situ hybridization (iNOS) were applied on mouse ovaries. Cultured follicles were also stained for iNOS by immunohistochemistry. For follicles cultured in the presence or absence of L-arginine, the ability of L-citrulline or NG-hydroxy-L-arginine to substitute for L-arginine was assessed in terms of follicle growth and ovulation. RESULTS: iNOS and eNOS were localized in oocytes and theca, with some staining in granulosa. iNOS mRNA occurred predominantly in granulosa and oocyte. Omission of L-arginine significantly reduced follicle survival and ovulation. Partial compensation for L-arginine withdrawal was achieved with L-citrulline and NG-hydroxy-L- arginine. Specific abnormalities of follicle growth were noted. CONCLUSIONS: NOS is present in mouse follicles, and its action is necessary at a local level for normal follicle development in vitro. Reduced growth, persistent basement membranes and reduced ovulation were associated with in vitro disruption of NO.     

束缚应激对大鼠血小板-氧化氮释放的影响

目的 观察急性应激对大鼠血小板一氧化氮(NO)释放的影响及其机制.方法 大鼠浸水-束缚应激(WRS)2、4和8 h,以胃溃疡指数(UI)作为应激损伤的标识,采用Greiss法测定血小板孵育液中亚硝酸盐(NO2-)含量;同位素法测其一氧化氮合酶(NOS)活性和L精氨酸(L-Arg)转运量.结果 WRS 2 h血小板L-Arg转运量、NOS活性和孵育液NO2-含量较对照组显著增加,但随应激时间延长,其呈下降趋势,应激8 h时均显著低于对照组,胃溃疡逐渐加重.结论 WRS应激早期阶段可上调血小板L-Arg/NO通路,促进血小板NO生成;长时间应激下调L-Arg/NO通路,减少NO释放.