一规模化猪场断奶仔猪腹泻大肠杆菌毒力因子的检测

从疑似断奶仔猪腹泻的仔猪中分离、鉴定出15株病原性大肠杆菌。经O血清型鉴定,11株为0131、4株未定型,所有O131血清型菌株呈β溶血。多重PCR检测毒素基因(STa、STb、LT、SLT-2e)和大肠杆菌粘附素单抗(F4、F5、F6、F41、F18)检测菌毛,O131菌株的毒素为STa、STb、SLT-2e,表达F18粘附素,未定型菌株的毒素为STa,共表达F6和F18粘附素。对15株大肠杆菌用16种抗生素进行药敏试验,结果表明:分离株对阿米卡星、痢特灵、新霉素敏感,而对多种抗生素产生了不同程度的耐药性。运用本场大肠杆菌分离株灭活苗免疫猪群,取得良好效果。     

上海地区猪源大肠杆菌血清型及其毒力因子分布调查

对上海地区分离的199株猪源大肠杆菌分离株进行血清型鉴定和毒力因子检测,使用大肠杆菌标准抗O因子血清进行玻片凝集试验;采用普通和多重PCR方法,对分离株进行STa、STb、LT、Stx2e等4种肠毒素和K88、K99、987P、F18、F41等5种黏附素检测。结果:199株猪源大肠杆菌分离株有110株鉴定出血清型,占检测菌株的55.28%,覆盖了30种血清型,优势血清型为O8、O45、O64、O78、O138、O157、O163、O7+O8,占定型菌株的60%。共有32株大肠杆菌检测到毒力因子,阳性率为16.08%,检测出9种毒力因子。其中有21株单独检测到肠毒素,占65.63%,STa和STb+LT阳性的菌株分别为14和4;6株单独检测到黏附素,3株菌株K99阳性;5株同时检测到肠毒素和黏附素。在32株毒力基因阳性的大肠杆菌中,有15株血清型定型,覆盖7种血清型,其中O138、O7+O8与肠毒素STa相关,O8、O45与STb+LT相关。研究表明,上海地区猪源大肠杆菌分离株优势血清型至少覆盖了包括O8、O45、O64、O78、O138、O163等在内的8种血清型;大肠杆菌分离株以产肠毒素为主,主要毒力因子包括黏附素K99和肠毒素STa、STb+LT等。     

湖北省仔猪致病性大肠杆菌血清型鉴定

从湖北省27个猪场典型病例中采集了152份病料，分离并鉴定其中132份病料的病原为致病性大肠杆菌。通过22种主要致病性大肠埃希氏菌O抗原的血清型鉴定，132株致病性大肠杆菌中定型了120种，共有15种血清型，其中O107、O101、O93、O9、O139、O141和O157为优势血清型。O107、O93作为猪致病性大肠杆菌优势血清型在我国少见报道，尚有12株未能定型。     

西藏林芝地区仔猪白痢血清型及毒力基因检测

为探究西藏林芝地区仔猪白痢大肠杆菌优势血清型和毒力基因间的相关性,采用玻片凝集试验测定与仔猪白痢有关的血清型,PCR方法调查11种毒力基因。结果显示,在分离的81株藏猪源大肠杆菌里有72株检测到毒力基因,其中黏附素K88和CS31A分别检测到1(1.39%)和34(47.22%)株;肠毒素STa、STb和EAST1分别检测到10(13.89%),16(22.22%)和38(52.78%)株;毒力岛eaeA、irp2和ETT2分别检测到12(16.57%),44(61.11%)和56(77.78%)株。72株中有59株鉴定出9种血清型,其中有15株定型为O8(20.99%),11株定型为O64(16.05%),10株定型为O138(13.58%)。研究表明:O8、O64、O138为优势血清型,且O8与STa+STb相关,O107与肠毒素STa相关,O64与毒力岛eaeA+ETT2有关,毒力基因以EAST1+CS31A+irp2+ETT2组合检出率最高为18(25%)株。     

皖北地区仔猪源大肠杆菌毒力因子及HPI毒力岛的检测

我国皖北地区哺乳仔猪腹泻频发,临床直肠棉拭子培养物有34例符合大肠杆菌特征,并进行产肠毒素大肠杆菌(ETEC)毒力因子(STa、STb、LT、SLT-2e)和HPI毒力岛的PCR快速检测。结果,仅有10例表达STa和STb(29.41%),其中3例表达STa基因(8.82%),2例表达STb基因(5.88%),2例表达STa和STb基因,1例表达STa和irp2基因(2.94%),2例表达STa和STb及irp2基因,揭示HPI+大肠杆菌与ETEC混合感染共有3例(8.82%);未检测到LT和STL-2e毒力因子。有10例表达irp2基因(29.41%),其中7例独立表达irp2基因(20.59%)。STa、STb和Irp2的PCR产物测序结果分别与GenBank检索的目标序列比对,其同源性均达到100%。结果初步揭示了皖北地区致哺乳仔猪腹泻ETEC毒力因子及HPI毒力岛的分布情况。     

广东省仔猪腹泻大肠杆菌血清型鉴定

从广东省１２个猪场的１０７头腹泻仔猪的直肠和肠系膜淋巴结以及４个猪场的２２头母猪的泌尿生殖器官分别分离出１１８株和４０株大肠杆菌。分离菌的８６．０８％（１３６／１５８）对昆明系小鼠有毒力,２４．５％（２５／１０２）产生耐热肠毒素（ＳＴ）。经３４种大肠杆菌单价Ｏ抗原血清鉴定,１３４株分离菌中有２６种血清型,其中Ｏ１１９、Ｏ６０、Ｏ７５、Ｏ１４１、Ｏ２０、Ｏ８和Ｏ１０１为优势血清型。Ｏ１１９和Ｏ７５作为猪源致病性大肠杆菌优势血清型在我国较少报道。尚有２４株未能定型,占分离菌株的１５．２％（２４／１５８）。     

共和县地区猪场仔猪致病性大肠杆菌血清型鉴定

采集青海省共和县不同地区4个猪场仔猪粪样316份,并采用玻板凝集法进行了O抗原血清型鉴定。结果发现:316份仔猪粪样经分离鉴定出致病性大肠杆菌176株,155株鉴定出抗O血清型。该地区流行优势血清型为O11(13株)、O60(12株)、O119(10株)、O137(9株)、O141(10株)、O144(12株)、O147(12株)和O149(8株),分别占8.38%、7.74%、6.45%、5.81%、6.45%、7.74%、7.74%和5.16%。8种优势血清型占总定型菌株的53.5%(83/155)。     

鸭源致病性大肠杆菌的血清型鉴定及其相关毒力基因分析

自规模化养鸭场患典型大肠杆菌败血症雏鸭分离的282株致病性大肠杆菌（E.coli）中鉴定出210株（包含37种血清型）,其中O93、O78、O92、O76占43.8%（92/210）为优势血清型,O46、O32＆O93混合型、O60＆O93混合型为首次从鸭群中分离到。应用PCR结合核酸序列测定对210株致病性E.coli（鸭大肠杆菌病分离株）和28株自健康雏鸭泄殖腔拭子分离的E.coli（临床健康鸭大肠杆菌分离株）进行包括强毒力岛（HPI）中的鼠疫菌素受体基因（fyuA）和铁调节蛋白基因（irp2）、Ⅰ型菌毛必需蛋白基因（fimC）、P型菌毛结构基因（papA）和血清耐受基因（iss）检测,结果表明：fyuAi、rp2、fimC、papA和iss基因在鸭大肠杆菌病分离株的携带率分别为41.0%、43.3%、92.9%、97.6%和96.7%,在临床健康鸭大肠杆菌分离株的携带率分别为21.4%、25.0%、92.9%、100%和92.9%,患病鸭和临床健康鸭大肠杆菌分离株iss、fimC和papA携带率差异不显著（P〉0.05）,但papA的携带率均显著高于其他宿主（鸡、猪和人）源E.coli;HPI毒力岛在鸭源E.coli中分布较广,其携带率表现为鸭大肠杆菌病分离株极显著高于临床健康鸭大肠杆菌分离株。HPI毒力岛的携带率与菌株的致病性呈明显的正相关,与O78等特定的血清型有一定的关系。鸭大肠杆菌病分离株有37.6%（79/210）同时携带fyuAi、rp2、fimCi、ss和papA基因,极显著高于健康鸭大肠杆菌分离株的14.3%（4/28）（P〈0.01）。     

羊源大肠杆菌血清型鉴定、毒力基因检测及耐药性分析

为分析内蒙古扎兰屯地区羊源大肠杆菌血清型分布、毒力基因及耐药性流行情况,采集患羊鼻腔拭子150份,分离大肠杆菌,并采用O血清型玻板凝集试验、PCR法和K-B药敏纸片法对分离的大肠杆菌致病菌株进行血清型、毒力基因及耐药性检测。结果显示, 45株大肠杆菌致病菌株分属10种血清型,以O111、O127、 O38为流行的优势血清型,分别占致病菌株的26.7%、22.2%和17.8%;分离菌株毒力基因irp2、fyuA、hlyA、hlyE、Ler、eaeA、Ehly检出率在33.3%以上,其他毒力基因检出率在4.4%～14.3%之间;分离菌株对氨苄西林、阿莫西林、新霉素9种药物耐药率在53.3%以上,对其他药物的耐药率在13.3%～26.7%之间。研究表明,内蒙古扎兰屯地区羊源大肠杆菌血清型复杂,携带多种毒力基因,耐药性严重。     

苏中地区猪大肠杆菌病血清型鉴定及毒力基因的调查

无菌采集苏中地区兽医站、养殖场、动物医院疑似大肠杆菌感染的病死猪的有明显病变的肝、心、脾、肺等病料413份。通过细菌的分离培养,并进行生化试验和血清型鉴定,共分离到208株大肠杆菌,共鉴定出145株的的血清型,63株未能定型,定型菌株分别属于19种不同的血清型,同时对签定出的145株猪源大肠杆菌进行毒力基因检测,发现苏中地区猪大肠杆菌所含的毒力基因为含estⅡ的占50.3%,含estⅠ的占39.3%,含LT的占30.3%,含毒力基因Stx-2e的为20.7%,含Intimin的占15.9%。其中estⅠ和estⅡ较为流行。     

Detection of Serotypes and Virulence Factors of Escherichia coli from Piglets in Beijing

To investigate the cause of piglets diarrhea, and the distribution of the serotype and virulence factors of swine Escherichia coli in Beijing, 400 diarrhea samples were collected. TSA serum agar culture method was used to isolate Escherichia coli, serotype identification test and virulence factor genes test were used to verify the presence of O-antigen. 64 strains of E.coli were isolated from 400 diarrhea samples, among which 42 strains of E.coli were classified as 8 serotypes:O101(18.7%),O64(12.5%),O8(10.9%),O20(10.9%),O45(4.7%),O149(4.7%),O2(1.6%) and O89(1.6%), and the major virulence factors were STa, Stx2e, astA and eaeA. There were 8 mainly serotypes that caused piglets diarrhea in Beijing area, among which O101 serotype accounted for the highest proportion. The major virulence factors were astA and eaeA, accounted for more than 50% of all strains, STa and Stx2e accounted for more than 30% of all strains. These data would provide effective data to support the prevention and control of piglet diarrhea in Beijing.     

Serotypes,Virulence Factors and Antibiotic Resistance of Duck Pathogenic Escherichia coli in Jiangsu Province and Its Surrounding Areas

In this study,191 strains of avian pathogenic Escherichia coli (APEC) were isolated from duck farms in and around Jiangsu province.The serotype,virulence gene distribution and drug resistance of 21 strains (one from each farm) were detected,and the correlation between serotype,virulence gene distribution and drug resistance was analyzed,in order to provide reference for the prevention and control of APEC.The serotypes of 21 APEC strains showed that there were 12 strains of O65,accounting for 57.14% of all strains.The results of virulence gene detection showed that 5 virulence genes had a high distribution rate,among which the positive rate of fimA gene was 100%,and the positive rates of ECs3737,ECs3703,tsh and irp2 genes were 90.5%,85.7%,57.1% and 42.9%,respectively.There were 6 strains (28.57%) with five virulence genes.The results of drug sensitivity test showed that 21 APEC strains had multiple drug resistance,and 100% strains were resistant to enrofloxacin,doxycycline,vancomycin and erythromycin.Among all the strains,85.71% and 14.29% were resistant to more than 10 and 21 kinds of drugs,respectively.The relationship among serotypes,virulence gene distribution and drug resistance showed that there were 13 strains with more than 4 virulence genes,9 of which were O65 serotypes.Among the 13 strains with more than 4 virulence genes,9 strains (69.23%) were resistant to more than 15 drugs,and 3 strains (23.08%) were resistant to more than 20 drugs.The results showed that the serotypes of Escherichia coli isolated from ducks in Jiangsu province and its surrounding areas were complex,carrying a variety of virulence genes,and the drug resistance was serious.     

江苏及周边地区鸭致病性大肠杆菌血清型、毒力因子及耐药研究

本研究旨在明确江苏及周边地区鸭禽致病性大肠杆菌（avian pathogenic Escherichia coli,APEC）的血清型、毒力基因分布和耐药性之间的相关性,以期为APEC的防控提供依据。从江苏省及周边养鸭场分离了191株APEC,并对其中21株（每个养殖场选取1株）的O抗原血清型、毒力基因分布和耐药性进行检测。对21株APEC的血清型检测结果表明,O65血清型12株,占全部菌株的57.14%,O5、O28、O42、O87、O93、O138、O147血清型均为1株,其他血清型2株;毒力基因检测结果表明,5个毒力基因有较高的分布率,其中fimA基因的阳性率为100%,ECs3737、ECs3703、tsh和irp2基因的阳性率分别为90.5%、85.7%、57.1%和42.9%,含有5个毒力基因的菌株共有6株（28.57%）;药敏试验结果表明,21株APEC均存在多重耐药性,100%的分离菌株对恩诺沙星、强力霉素、万古霉素和红霉素耐药,85.71%的分离株对10种以上抗生素耐药,14.29%的菌株对21种药物都耐药;对血清型、毒力基因分布和耐药性之间的关系分析表明,含有4种以上毒力基因的菌株有13株,其中9株是O65血清型。在13株含有4种以上毒力基因的菌株中,耐15种药物以上的有9株（69.23%）,耐20种以上药物的有3株（23.08%）,表明含有4种以上毒力基因的菌株多重耐药现象严重。研究表明,江苏及周边地区鸭源大肠杆菌血清型复杂,携带多种毒力基因,耐药性严重。     

仔猪腹泻致病性大肠杆菌分型鉴定及耐药性分析

为了解贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌流行情况及耐药性变化,本研究运用凝集试验、PCR和药敏纸片琼脂扩散法等方法对分离的78株致病性大肠杆菌进行血清型、毒力基因及耐药性分析。结果显示,78株致病性大肠杆菌以O138、O87血清型为主,占定型菌株的60.8%;其中62株致病性大肠杆菌检出毒力基因,检出率为79.5%,可分为8种毒力基因类型,分属肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠产毒性大肠杆菌（ETEC）和肠聚集性大肠杆菌（EAEC）,毒力基因eaeA、elt和escV检出率较高,分别为38.5%、28.2%和21.8%;分离到的致病性大肠杆菌对β-内酰胺类药物高度耐药,均为多重耐药株,耐药种类可达8种以上。结果表明,当前贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌的毒力基因检出率较高且基因型复杂,耐药性严重。本试验结果可为规模化养猪场防控仔猪腹泻提供基础资料及理论依据。     

猪大肠埃希菌分离鉴定及毒力因子PCR检测

为了解陕西省宁强县部分地区引起仔猪黄白痢的致病性大肠埃希菌的主要血清型及其主要毒力因子,用细菌分离培养方法,从宁强县5个猪场采集的60份有疑似黄白痢症状仔猪的肛门拭子中分离出20个大肠埃希菌菌株。经菌落形态观察、革兰染色镜检、培养特性、生化试验、血清型鉴定,确定分离菌株均为致病性大肠埃希菌。血清分型表明,20个分离菌株中有18株能确定血清型,分布在7个血清型中,其中优势血清型为O8(8株),占总数的40%。药物敏感性试验表明,分离菌株对临床常用药物具有抗药性。毒力因子的PCR检测结果表明,分离菌株均不携带STa、STb、LT和SLT-2e四个毒力基因。     

广西猪源产肠毒素大肠杆菌毒力因子及多重耐药性分析

本研究旨在探究广西某猪场可能存在的病原菌及其致病的主要原因。试验采用细菌分离纯化、形态学鉴定、生长曲线测定、生化分析及药敏试验等进行细菌的分离鉴定,应用PCR技术对菌株16S rRNA、毒力基因及耐药基因进行检测。结果表明,该由病料分离的菌株为无芽孢、有菌毛、两端钝圆的粗短杆状的革兰氏阴性菌,其繁殖能力强、生长迅速,疑似为大肠杆菌。16S rRNA扩增结果显示,出现大小为1 474 bp的条带,测序结果表明其与大肠杆菌的同源性可达99%。该菌株对31种常见抗菌药物表现出极强的耐药性,对庆大霉素、替米考星、四环素、恩诺沙星、青霉素、林可霉素、磺胺甲噁唑等均呈现较高的耐药水平,耐药率高达87.10%(27/32),仅对阿米卡星、黏菌素2种药物敏感。毒力因子检测共鉴定致病岛FyuA、肠毒素STb和LT及黏附素F41和K88共5种毒力因子,检出率为35.70%(5/14)。扩增出β-内酰胺酶类bla_TEM和bla_OXA、四环素类tet(A)、磺胺类Sul2、氨基糖苷类aadA1和aac(3′)-Ⅱa、喹诺酮类GyrA、GyrB和ParC及氯霉素floR共10种耐药基因,检出率为66.70%(10/15),且耐药基因的检出与耐药表型呈正相关。综上,该菌株含多种毒力因子,耐药型复杂,多重耐药性情况严重,需采取相应的预防措施,防止蔓延和传播。     

产志贺毒素大肠杆菌流行病学及主要毒力因子研究进展

产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC) 是一类能引起包括水样腹泻、出血性结肠炎、尿毒综合症等一系列人体疾病的人畜共患肠道致病菌,其感染在世界范围内包括中国都有过暴发流行。文章阐述了STEC O157血清型和非O157血清型的分布特征及流行趋势,同时还对该病的主要毒力因子进行了综述,以期为该病的防控提供科学依据。     

大肠杆菌毒力因子研究概况

致病性大肠杆菌的毒力因子主要有黏附素、毒素、外膜蛋白 ( OMP)及铁转运系统等。在大肠杆菌侵袭宿主组织并引起其发病的过程中 ,这些毒力因子相互协调、发挥作用。文章对毒力因子的致病作用、致病机理、免疫原性及其在疾病防制中的应用几个方面的研究概况作了综述 ,为防制大肠杆菌病、研制新型高效的大肠杆菌疫苗提供了理论依据。另外 ,文章还介绍了近年来已相继研制成功的全菌体疫苗、纯化菌毛疫苗、单价或多价基因工程菌毛疫苗以及重组肠毒素双价基因工程苗、OMP亚单位疫苗等。展现了新型疫苗的研制 ,给防制大肠杆菌病带来了新的前景以及大肠杆菌作为工程菌的应用对畜禽其他疾病防制的推动作用     

水貂出血性肺炎大肠杆菌毒力基因测定和H基因分型

为了分离鉴定引起水貂出血性肺炎的大肠杆菌,并对其致病性、血清型和毒力基因进行鉴定.本研究主要通过细菌分离鉴定试验对具有典型肺炎症状的死亡水貂的病原体进行分离,利用16S rRNA对进行细菌鉴定,并通过PCR方法对分离细菌的血清型和毒力基因进行检测,分析分离菌对动物的致病性.结果显示:28例水貂肺炎病例中分离出8株大肠杆...     

京津冀部分地区致犊牛腹泻大肠杆菌毒力基因、耐药基因检测及药物敏感性分析

【目的】探明京津冀地区犊牛腹泻大肠杆菌毒力基因与耐药基因流行情况,筛选敏感药物。【方法】于2020年12月至2021年7月从京津冀地区部分牛场采集146份犊牛腹泻样本,通过细菌分离纯化、革兰氏染色镜检及16S rRNA测序进行大肠杆菌分离鉴定;采用PCR方法对分离菌进行毒力基因（F17、K99、F41、STa、stx1、irp2和fyuA基因）和耐药基因（aac（6'）-Ⅰb、bla_CTX-M、bla_TEM、OqxB、tetA和sul1基因）检测;采用K-B纸片法进行药物敏感性试验。【结果】分离菌在鉴别培养基上的生长形态及革兰氏染色镜检结果均符合大肠杆菌生理生化特性,分离菌16S rRNA测序结果呈单一峰值,对拼接序列在NCBI中进行BLAST比对后发现,与大肠杆菌相似性均>96%,确定分离菌为大肠杆菌。试验共分离鉴定大肠杆菌142株,其中有88株携带毒力基因,占61.97%（88/142）,毒力基因F17、K99、F41、STa、stx1、irp2、fyuA阳性率分别为24.65%、0.70%、0、2.11%、1.41%、45.07%和21.83%,其中F17、irp2、fyuA为优势毒力因子,同时携带多重毒力因子的大肠杆菌检出率较低。aac（6'）-Ⅰb、bla_CTX-M、bla_TEM、OqxB、tetA和sul1 6种耐药基因皆被检出,bla_TEM基因检出率最高,为45.77%,aac（6'）-Ⅰb和OqxB基因检出率最低,均为9.15%,分离菌株主要携带1~3种耐药基因。药物敏感性试验结果显示,142株分离菌对诺氟沙星敏感率最高,其次为环丙沙星,对青霉素敏感率为0,耐药现象严重,耐2种以上抗菌药物的菌株达86.62%。【结论】京津冀地区犊牛腹泻大肠杆菌毒力基因与耐药基因流行广泛,耐药普遍,多重耐药现象严重。本研究可为京津冀地区犊牛腹泻的防治提供理论依据。