角朊细胞培养技术最新进展

角朊细胞的培养在组织工程化人工皮肤的构件中是重要的研究内容之一。近年来 ,人们对角朊细胞的几种主要培养方法进行了不同程度的改进。本文综述了角朊细胞的几种主要培养方法 ,以及培养过程中各种细胞生长因子和物质影响研究的最新进展     

两种不同培养体系培养人角朊细胞的特征

目的对比有饲养层的有血清培养体系(feeder layer，serum-containing medium，FSCM)和无血清培养体系(serum free medium，SFM)培养人角朊细胞(keratinocyte，KC)的特征。方法以两种不同培养体系培养人KC，比较24h细胞贴壁数、完全汇合时间和最终分化形式。结果KC在两种不同培养体系中的形态、24h细胞贴壁数和完全汇合时间无统计学差异。FSCM体系能促使角朊细胞发生终末分化；SFM体系内角朊细胞增殖较FSCM体系快，但未发生终末分化。结论有饲养层的有血清培养体系培养人角朊细胞形成复层膜片，适合临床应用；无血清培养体系培养人角朊细胞形成单层细胞，适合KC生物学性征的实验研究。     

分散人绒毛膜滋养层细胞及细胞培养

目的获取人绒毛膜滋养层细胞.方法应用胰酶/DNA酶法进行消化后进行培养.经光镜和电镜观察.结果我们获取了人绒毛滋养层细胞并成功培养.结论取人妊娠45～55D刮宫术后的绒毛组织,经胰酶、DNA酶消化可得绒毛滋养层细胞.     

适用于亲本瘤细胞和杂交瘤细胞生长的无血清培养基

以RPMI1640和DMEM-F12按1:1混合组成基础培养基(BM),再添加胰岛素等12种因子制成一种无血清培养基(SFM)。SP2/0等多种亲本瘤细胞以及异种、同种杂交瘤细胞均能在此SFM中适应生长,其细胞密度相当于含15%小牛血清的普通培养基的33%～120%。所有瘤细胞均能在SFM中长期传代培养,但贴壁性能有所降低,杂交瘤细胞能持续保持分泌单克隆抗体的能力。     

小鼠肝细胞分离技术及无血清培养方法的介绍

本工作改良了小鼠肝细胞的分离技术，并建立了小鼠肝细胞的无血清培养方法，采用二步原位灌流分离的小鼠肝细胞，其活率及产量分别为８６．９±１．０％和２．３±０．３×１０＾７，能够满足实验的要求，肝细胞在无血清培养条件下，２４小时可完全贴壁，在继续培养的２４－４８小时期间，属入培养中的ＧＰＴ和ＧＯＴ可稳定于低水平，贴壁细胞数量（以贴壁细胞ＤＮＡ含量为指标）与培养前的活细胞数基本相同并保持稳定，肝细胞形态正     

CHO细胞无血清培养研究

目的:用无血清培养基培养中华仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞。方法:应用无血清培养基采用小方瓶培养CHO细胞,观察细胞维持时间、培养过程的形态变化。结果:应用无血清培养基培养CHO细胞可维持细胞正常生长。结论:无血清培养基可以完全取代含血清培养基用于培养CHO细胞。     

用无血清培养基体外扩增CIK细胞的研究

ＣＩＫ (ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒ)细胞是一类细胞因子诱导的杀伤细胞。ＣＩＫ细胞能大量扩增 ,而且具有比ＬＡＫ细胞更强的肿瘤杀伤活性。为了获得临床应用的ＣＩＫ细胞 ,必须用自身血浆或无血清培养取代传统的牛血清培养方式 ,以减少病人意外感染的机会。本实验对有血清和无血清培养条件下ＣＩＫ细胞的生物活性进行了研究。将人脐血用Ｆｉｃｏｌｌ密度梯度分离后得单个核细胞 (ＭＮＣ) ,ＭＮＣ分别用含胎牛血清或自身血浆的ＲＰＭＩ 16 40培养基、或ＡＩＭ Ⅴ无血清培养基进行培养。培养ＣＩＫ细胞时 ,先加ＩＦＮ γ …     

成纤维细胞饲养层饲养人角朊细胞的机制研究

目的 探讨人成纤维细胞(HFB)是否可作为饲养层支持人角朊细胞(KC)的生长.方法 分离培养人真皮FB,用丝裂霉素C处理制成饲养层,应用RT-PCR、免疫细胞化学染色方法检测Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原蛋白的表达;在FB饲养层上接种人KC,观察其促进KC贴壁、生长、移行及分化的作用;并设置NIH3T3细胞饲养层为对照组,在其上接种人KC,观察KC贴壁数和膜片完全融合时间.结果 FB饲养层Ⅰ型前胶原mRNA的表达有所增加(P＜0.05)、Ⅲ型前胶原mRNA的表达无明显变化,抗Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白抗体阳性;以适宜密度接种的成纤维细胞饲养层,KC贴壁、生长和分化良好;二种饲养层KC贴壁数和膜片完全融合时间无差异.结论 人真皮FB饲养层能够分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原,促进人KC生长并形成复层细胞.     

角朊细胞生长因子与创面愈合

角朊细胞生长因子（ＫＧＦ）属于成纤维细胞生长因子家族，由成纤维细胞等产生。ＫＧＦ刺激角朊细胞增生、分化、移行，促进上皮细胞再生、增厚，促进创面愈合。ＫＧＦ对肺泡Ⅱ型上皮细胞、胃肠道和胰腺上皮细胞、乳腺上皮细胞、肝细胞等，也有促进增生作用     

角朊细胞激活及其角蛋白表达

皮肤角朊细胞的生长有 2条通路 :分化通路和激活通路。正常情况下 ,角朊细胞进入分化通路。伤口愈合及多种皮肤病理情况下 ,角朊细胞被激活 ,成为能够迁移的、具有高度增殖能力的细胞 ,分泌大量的细胞外基质和信号肽 ,同时角蛋白表达也发生改变。皮肤损伤后 ,角朊细胞经历一个周期性的激活过程 ,此过程受大量细胞因子作用及调节。激活后的角朊细胞能够表达特异角蛋白K6 ,K16和K17,其可以作为区分基底细胞是正常分化还是激活的标志物     

Corning® hybrigro SF™培养基对提高杂交瘤细胞培养密度和抗体产量的研究

近几年,抗体作为生物类治疗药物的需求显著增长。因此,提高抗体生产效率并且降低生产成本愈发必要。而康宁hybrigro SFTM培养基的开发,正是致力于在不使用昂贵血清的情况下仍能够高效培养杂交瘤细胞,提高抗体产量。我们使用两种不同的杂交瘤细胞株,并通过与两种商业化生产的无血清培养基以及一种被广泛使用的含血清培养基对比,验证hybrigro SFTM培养基在高密度杂交瘤细胞培养及蛋白产量方面的优越性。     

人表皮角朊细胞和表皮的培养

人表皮角朊细胞和表皮的培养张道荣刘小兵张丽红一、材料和方法１．培养液、试剂及材料：ＤＭＥＭ培养液（Ｓｉｇｍａ），ＭＥＭ洗液（Ｓｉｇｍａ），３Ｔ３细胞（Ｇｉｏａｎｎｉ教授惠赠），胎牛血清，表皮生长因子（Ｓｉｇｍａ），霍乱毒素（Ｓｉｇｍａ），非必需氨基酸...     

用含有特定细胞因子的无血清培养基培养慢性乙型肝炎病人的树突状细胞

目的　体外扩增慢性乙肝病人的树突状细胞 (dendriticcell,DC) ,从细胞表型和功能上鉴定和研究。方法　用含GM CSF和IL 4的无血清培养基AIM V体外培养慢性乙肝病人外周血单个核细胞 ,获得树突状细胞。流式细胞仪检测细胞表型 ,IL 1 2ELISA试剂盒检测DC分泌IL 1 2的水平 ,并观察加入细胞因子TNF α后对DC培养的影响。结果　慢性乙肝病人的外周血单个核细胞用AIM V培养及细胞因子诱导后 ,经贴壁法纯化 1 0 0mL可获得 0 .5× 1 0 7～ 1 .5× 1 0 7成熟的具有典型形态的DC ,加入TNF α后 ,CD83阳性占 60 .80 % ,明显高于未加组 (P <0 .0 5) ,IL 1 2分泌较未加TNF α组增高近 1 0倍。结论　①慢性乙肝病人的DC可用AIM V无血清培养基及特定的细胞因子诱导在体外大量获得 ,TNF α是诱导DC成熟的重要的细胞因子。②典型的细胞形态和CD1 4 -、HLA DRhigh+、CD86high+的细胞表面分子特征可作为临床上快速鉴定培养DC的标志。     

成纤维细胞及角朊细胞生长因子对HCE16/3细胞的趋化作用

众所周知，伤口愈合时白细胞、成纤维细胞和内皮细胞在某些趋化物作用下可向伤口迁移，而对影响上皮细胞迁移的趋化物却了解甚少。最近有研究显示某些生长因子可刺激角朊细胞迁移。角朊细胞生长因子(keratinocyte growth factor，KGF)是成纤维细胞分泌的生长因子，能特异刺激上皮细胞生长。作者最近的研究工作显示KGF能刺激HPV     

乳鼠角朊细胞分离表达共刺激分子CD80/CD86

以往研究认为角朊细胞不表达共刺激分子CD80／CD86，无法提供淋巴细胞增殖过程中关键的共刺激信号，但培养的角朊细胞膜片移植后，最终供者细胞被完全排斥，具体机理不明。本实验使用近交系小鼠，有和无血清两种体系培养角朊细胞1、4、7d，采用流式细胞技术、激光共聚焦技术，RT-PCR方法检测角朊细胞在培养过程中MHCⅠ类、Ⅱ类抗原，及CD80、CD86的表达。证实培养的细胞中不含郎格罕氏细胞，首次发现乳鼠角朊细胞在培养过程中表达CD80，但不表达CD86，可刺激异基因淋巴细胞增殖，执行抗原递呈细胞功能。本研究结果为角朊细胞膜片移植排斥提出另一种可能的解释：MHCⅠ／Ⅱ类分子和CD80的表达，使培养的异体角朊细胞兼具外来抗原和抗原递呈细胞的功能，刺激受体淋巴细胞增殖，参与排斥反应。     

人胰腺癌细胞培养上清对树突状细胞TIM-3表达及其功能的影响

 目的: 研究人胰腺癌微环境对树突状细胞(DCs)T细胞免疫球蛋白及黏蛋白-3(TIM-3)表达及其功能的影响,初步探讨肿瘤微环境调节DCs上TIM-3表达的可能机制。方法: 流式细胞术检测肿瘤浸润树突状细胞(TIDC)以及癌旁组织、胰腺癌患者和健康人外周血诱导DCs上TIM-3的表达;观察人胰腺癌细胞培养液上清对健康人外周血单个核细胞经rhGM-CSF和rhIL-4诱导扩增制备DCs上TIM-3表达的影响;酶联免疫吸附法(ELISA)检测TIM-3⁺DCs组和对照组的DCs分别与凋亡胰腺癌细胞Capan-2共培养上清中细胞因子IFN-β和IL-12水平。结果: 胰腺癌组织中TIDC上TIM-3的表达明显高于癌旁组织及患者和健康人外周血的DCs(P<0.01)。人胰腺癌细胞株Canpan-2、SW1990和Panc-1的上清液较人皮肤成纤维细胞Hs27显著上调DCs上TIM-3表达(P<0.05),联合阻断VEGF、IL-10和PGE₂可明显降低Canpan-2细胞上清对DCs上TIM-3的上调作用(P<0.05)。TIM-3高表达DCs组较低表达组分泌的IL-12和IFN-β水平低,而阻断TIM-3后,IFN-β和IL-12水平均升高(P<0.01)。而这种升高趋势可在加入DNase和RNase后消失。结论: 人胰腺癌TIDC上TIM-3表达升高导致其固有免疫功能受损;肿瘤细胞分泌的VEGF、IL-10和PGE₂可能参与TIM-3的表达调控。     

IL—15研究的最新进展

最近发现，除经典的单核巨噬细胞外，Ｔ，Ｂ淋巴细胞和角化细胞等数种细胞可表达ＩＬ－１５的ｍＲＮＡ和／或蛋白：某些细胞因子对单核巨噬细胞ＩＬ－１５的ｍＲＮＡ及其蛋白的表达有诱导或抑制作用；其些疾病时，ＩＬ－１５ｍＲＮＡ及其蛋白的表达有改变，ＩＬ－１５能促进记忆型Ｔ细胞的增殖活化和ＮＫ细胞分化成熟，能活化中性粒细胞和调节单核巨噬细胞功能，ＩＬ－１５还对循环系统有独特的作用。