烟草内生细菌对烟草病害的拮抗和防治作用

利用烟草内生细菌进行了防治烟草黑胫病的试验,获得了对烟草黑胫病有较好防效的内生细菌菌株118、57、93等,其防效分别达69.23%、61.53%和65.38%。其中118菌株具有较广的抗菌谱,对几种主要的烟草病害的病原菌均有拮抗作用,对烟草疫霉菌有明显的拮抗作用,而且对烟草有促生效果,鲜重增产率为13.10%。     

烟草细菌性青枯病防治方法研究

研究了烟草细菌性青枯病的生物防治和化学防治相结合的方法。通过盆栽试验结果表明：产细菌素的烟草青枯细菌无致病力菌株抗链霉素突变体ｒＡ３－５和农用链霉素联合作用，对烟草青枯病防效最佳。先加致病菌再加拮抗菌和先加拮抗菌再加致病菌的防病效果分别为９３．８％和１００％，推迟发病期８天和３０天，而ｒＡ３－５和农用链霉素单一作用的防病效果分别为５６．３％、６５．３％和４１．７％、５８．４％。     

烟草内生青枯病拮抗细菌的筛选和初步鉴定

为了获得防治烟草青枯病新途径,从湖南桂阳烟草青枯病重病区采集的健株上,共分离到内生菌株160个。经对峙培养法测定,32个菌株对烟草青枯菌有拮抗作用,其中H-1、H-9和H-11有强拮抗作用,抑菌圈分别为3.0、3.0、4.5 mm。根据其形态特征和生理生化性状,初步鉴定内生菌H-1为枯草芽孢杆菌,H-9和H-11为短芽孢杆菌。     

烟草青枯病颉颃细菌的筛选及其防病效果研究

从安徽、浙江等地的烟草、蕃茄和辣椒等茄科作物根标、根围土壤和病、健植株组织中,分离纯化到168个细菌菌株,通过室内异步培养法和平板扩散法,筛选出17个对烟草青枯病菌具有一定颉颃作用的菌株,其中,AQB-46和AQB-33两菌株抑菌能力最强,抑菌圈直径分别为33.7mm和30.6mm。盆栽防病结果表明,这2个菌株对青枯病的防治效果在接种青枯菌后的30d内一直维持在54.2%~64.7%。菌株AQB-62室内抑菌试验效果明显低于AQB-46和AQB-33,但盆栽防病的效果在接种后的20d内也一直维持在49.9%~53.0%的水平。接种前3d喷施颉颃菌的各处理,其防病效果远高于接种后3d喷施颉颃菌的各处理,前者防效最高为64.7%,而后者最高仅为15.0%,说明颉颃菌对烟草青枯病的防治主要表现为预防。此外,颉颃菌的防病作用主要表现为减轻发病程度,而对发病率没有影响。颉颃菌除具有直接的抑制青枯菌定殖、繁衍、扩展外,有的菌株如AQB-62还具有一定的诱导抗性作用。AQB-46,AQB-33和AQB-62等3个菌株可望研制成生物农药,使之更有效地防治烟草青枯病。      

烟草青枯病拮抗内生菌的发酵条件

研究了发酵时间、发酵温度、菌龄、接种量、摇瓶转速、溶氧量对菌量的影响,以及烟草青枯病拮抗菌湘2-3发酵条件与菌量之间的关系,并运用正交试验确定了最佳发酵条件。结果表明:当发酵时间24h,发酵温度28℃,菌龄18h~22h,接种量4%,摇瓶转速210 r/min,溶氧量100mL/150mL时,湘2-3菌的发酵最好。     

烟草内生细菌分离方法的优化研究

用研磨组织稀释分离法与表面消毒有效性评价相结合的方法确定了适宜烟草组织的表面消毒方法以及内生细菌分离培养基。采用1%次氯酸钠浸泡5分钟,再用75%酒精浸泡2分钟能够100%去除表面附生菌,并且分离得到更多的内生细菌。研究比较了TSA、NA、PDA、LB 四种常用的细菌分离培养基在分离烟草内生细菌中的差异,其中TSA和NA培养基分离得到的内生细菌数量较高,TSA培养基从烟草根、茎、叶中分离出的内生细菌数量分别为5.18 log cfu/g.fw、2.17 log cfu/g.fw、4.69 log cfu/g.fw;NA培养基分别为5.01 log cfu/g.fw、1.81 log cfu/g.fw、4.93 log cfu/g.fw。对分离得到的127株内生细菌进行16S rDNA序列测定表明,TSA和NA培养基分离得到的内生细菌种类最多,其中TSA培养基分别从根、茎、叶中分离到9、7、13种内生细菌;其次是NA培养基,分别从根、茎、叶中分离到8、6、10种内生细菌。结果表明,采用TSA和NA培养基分离烟草内生细菌,可以达到较为理想的分离效果。      

SH7对烟草青枯病的抑菌、防病作用及其抑菌物质的初步研究

研究了生防细菌菌株SH7及其除菌发酵液对烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)的抑菌和防病作用,并对其产生的抑菌物质进行了粗提。结果显示,该菌株对R.solanacearum有很强的抑菌作用,且其除菌体发酵液对烟草青枯病的防效较好。将SH7无菌发酵液、无菌发酵液与青枯病菌混合30 min施入土壤29 d后,两种处理与对照相比,防效分别达到65.99%和53.2%;SH7菌株产生的抑菌物质是SH7除菌发酵液防病的主要机制;SH7分泌的抑菌物质可以被硫酸铵沉淀,初步认为该抑菌物质是蛋白类物质。     

烟草内生细菌种群特征分析

采用研磨组织稀释分离法分离不同品种、不同器官、不同生长期的烟草内生细菌,以各菌群出现与否为指标,用类平均法对数据进行系统聚类分析,对内生细菌的种类组成,分布特征进行了研究。结果表明,烟草内生细菌种类分布存在品种差异、生长期差异和组织部位差异;优势菌群的组成随分离组织部位和生长时期的不同而变化。Bacillus sp.和Rhizobium sp.是四个品种烟草叶片共有的优势类群,从苗期到团棵期,内生细菌的种类在增加,B. pumilus广泛存在于成熟期烟草根、茎、叶中,且为主要菌群。部分内生细菌具有组织偏好性,Micrococcus sp.和Staphylococcus sp.对烟草的茎部具有偏好性,B. cereus对烟草叶片具有偏好性。对烟草这一重要经济作物内生细菌的种类组成、分布特征进行研究,可为科学认知和利用这类微生物资源奠定基础。      

广西烟草内生细菌的动态分布及其对烟草疫霉的拮抗作用

从广西百色市的9个烟草品种中分离出470株内生细菌菌株,经常规细菌鉴定方法和16S rDNA序列分析,获得的菌株分别属于肠杆菌属(Enterobacter)、沙雷氏菌属(Serratia)、芽孢杆菌属(Bacillus)、土壤杆菌属(Agrobacterium)、寡养单胞菌属(Stenotro-phomnas)和假单胞菌属(Pseudomonas),其中土壤杆菌属和肠杆菌属为烟草内生细菌中的优势种群。烟草内生细菌的类群和数量随烟草种植地点、品种、器官和生育期的不同而不同。烟草内生细菌在根部数量最多,其次是茎和叶。内生细菌的总量从缓苗期到旺长期增加,之后显著下降。从470株烟草内生细菌菌株中筛选出对烟草疫霉有拮抗作用的菌株56株,其中芽孢杆菌菌株Y10的抑制效果最好,抑制率达91.48%,室内盆栽防治效果为68.72%。     

烟草青枯病的综合防治

详细介绍了烟草青枯病的分布、为害、症状、发病条件及综合防治措施 :①农业栽培措施防病 ;②种植抗病品种 ;③化学药剂防病等。     

两株防治烟草青枯病的烟草根际拮抗菌

  目的  进一步丰富烟草青枯病的生防资源。  方法  采用抑菌圈法和盆栽试验测定分离自烟草根际的细菌菌株GZYCT-4和GZYCT-9对青枯病菌的拮抗活性;运用PCR技术检测拮抗细菌的生防标记基因,利用趋化性试验研究烟草根系分泌物及其所含的各种有机酸对拮抗菌根部定殖的影响。  结果  （1）GZYCT-4和GZYCT-9对烟草青枯病菌均具有较好的抑菌效果,培养48 h的抑菌圈直径分别为16.64 mm和18.90 mm,盆栽试验表明灌根接种施用GZYCT-4和GZYCT-9可有效防治烟草青枯病。（2）GZYCT-4和GZYCT-9菌株均检测到8个枯草芽孢杆菌生防标记基因,其脂肽类粗提物对烟草青枯病菌的抑菌圈直径分别达到16.24 mm和20.71 mm。（3）GZYCT-4对红花大金元根系分泌物有较强的趋化反应,且红花大金元根系分泌物含有的草酸对GZYCT-4吸引作用较大,而GZYCT-9则对K326根系分泌物有较好的趋化反应,K326根系分泌物所含的柠檬酸对GZYCT-9有较好的吸引作用。  结论  GZYCT-4和GZYCT-9菌株均可有效地防控烟草青枯病,且对不同品种的烟草根系分泌物及其所含的各种有机酸有趋化差异。      

生防菌使用方式对烟草青枯病的防效及根际土壤细菌群落的影响

采用大田试验和扩增子测序技术,探索了生防菌兑水灌根（GG）、生防菌拌土围根（WG）、米糠+生防菌拌土围根（MK+WG）对烟草青枯病的防效及调节土壤细菌群落的作用。结果表明:（1）不同施用方式对青枯病的防效表现为MK+WG（59.32%）> WG（55.93%）> GG（49.72%）。（2）WG和MK+WG均可显著提高烟株根际土壤细菌群落的多样性和丰富度,且MK+WG增幅最大。（3）WG和MK+WG提高了土壤中放线菌门的相对丰度,促使土壤中Gaiella、Gemmatimonas和Bradyrhizobium等一些有益微生物比例上升。综合来看,MK+WG更有利于恢复土壤健康、减轻青枯病对烟株的为害。      

贝莱斯芽胞杆菌F10促生作用及对烟草青枯病的防治效果

为明确植物根际促生细菌（Plant growth-promoting rhizobacteria,PGPR）对烤烟促生和抗病作用,以前期试验分离获得的贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）F10为材料,通过盆栽和田间小区试验考察其对烟草的促生作用和对烟草青枯病的防治效果。结果表明,生防菌F10处理后,烟草根系和地上部生长显著优于对照,烟草叶片过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性提高。盆栽和田间小区试验中生防菌F10对烟草青枯病的防治效果分别为60.49%和54.91%,大田烟叶产量、上等烟比例和上中等烟比例比对照分别提高11.82%、31.46%和13.17%。生防菌F10对烟草生长具有促进作用,对烟草青枯病具有较好的防治效果,烤烟经济效益显著提高。      

烟草青枯病流行动态监测

利用K326、云烟85、翠碧1号和红花大金元等不同抗性的烤烟品种，观察青枯病的流行趋势，并测定20cm土温。当2．0cm土温稳定通过20℃后5-10d高感品种红花大金元即出现轻微症状，在此之后10d左右，低抗品种K326亦出现凋萎症状。若利用此规律，对青枯病进行预测预报，当红花大金元出现轻微症状之时。就是田间青枯病的最早防治时期。     

生物炭对根际土壤微生态的调控及对烟草青枯病的防控作用

  目的  探究不同用量的生物炭对根际土壤微生态的调控及对烟草青枯病的防控作用  方法  采用稀释平板法,研究生物炭对青枯菌的吸附作用及对其生长和运动性的影响;盆栽试验研究生物炭对烟草生长及青枯病发病情况和土壤基本理化性质的影响;利用高通量测序技术,比较各处理土壤细菌群落差异。  结果  （1）生物炭对青枯菌具有抑制作用,可吸附青枯菌、抑制其生长及运动性,用量超过1.5%时效果显著;（2）生物炭提高了土壤pH、有机质、速效磷和速效钾含量,利于烟草的生长。相关性分析发现,生物炭对土壤pH和化学性质的改善,是抑制烟草青枯病发生的主要原因;（3）生物炭提高了根际土壤微生物群落的Alpha多样性和放线菌门中链霉菌属的相对丰度;（4）根际土壤细菌结构的多样性与土壤理化性质有一定的相关性,其中有效钾影响最大。  结论  生物炭通过对青枯菌的抑制作用和对土壤微生态的改善,创造了利于烟草生长的环境条件,减少了烟草青枯病的发生。      

烟草种质抗青枯病鉴定及其抗性分类

分别于2008年、2009年在安徽省皖南烟区烟草青枯病病圃,选择国内外文献中标注为抗青枯病的部分烟草种质及安徽省尚未鉴定抗性的地方种质共138份,田间采用高密度栽培方式、随机区组设计,鉴定其青枯病抗性。结果表明:(1)以感病对照长脖黄病情指数达到100时的抗性进行划分评价,部分烟草种质的抗性与文献标注的抗性表现有差异;本试验中没有免疫烟草种质;Coker298、K346、NC86、Coker86、K399、LMAFC34、歙圆四号为高抗品种;G28等13份种质为中抗品种;其它种质在中感以上。(2)依据大田病情指数变化对烟草种质抗性分为四类:感病型、慢病型、抗病型及免疫型,并对其进行数据规范;分类结果表明免疫型种质0份,抗病型种质3份为Coker298、NC86、歙圆四号,慢病型种质有DB101等16份;其它为感病种质。     

黑曲霉泡腾片对烟草青枯病防效及烟株生长的影响

以云烟87为试材,研究黑曲霉（Aspergillus niger）泡腾片生防菌剂对烟草农艺性状的影响和对烟草青枯病的防治效果。盆栽 试验表明,黑曲霉泡腾片稀释800倍时,对烟草青枯病的防治效果可达92.9%,显著高于稀释1 200倍的多粘类芽孢杆菌（Peanibacillus ploymyxa）（42.9%）的防效（P＜0.05）。大田试验表明,黑曲霉泡腾片在提高烟草叶片数、叶长、叶宽、直径、株高等农艺性状方面优于 清水对照,表现出良好的促生效果;对采收的烤烟进行送检,结果表明,施用泡腾片的烟叶呈现出良好的评吸效果。