EGFL7和VEGF在肾透明细胞癌血管生成及转移中的相关性研究及临床意义

目的：探讨表皮生长因子样结构域7（EGF_1ikedomain7,EGFL7）、血管表皮生长因子（vascularen—dothelialgrowthfactor,VEGF）在肾透明细胞癌中的表达及其与肾癌血管生成和转移的关系。方法：选取87例行根治性肾切除的肾透明细胞癌患者癌及癌旁组织标本,采用免疫化学SP法检测EGFL7、VEGF的表达,并计数血管内皮细胞表面抗原（CD34）标记的血管密度（MVD）;同时选取46例癌及癌旁组织标本,采用RT—PCR检测EGFL7mRNA的表达。结果：EGFL7和VEGF阳性表达率及MVD值在癌组明显高于癌旁组（P〈O．05）,且EGFL7、VEGF与MVD在肾透明细胞癌组织中的表达呈正相关,并与肿瘤分级、分期显著相关（P〈0．05）;EG—FL7mRNA阳性表达率明显高于癌旁组织（P〈O．05）,并与肿瘤分级、分期相关（P〈O．05）。结论：肾透明细胞癌组织中EGFL7、VEGF的表达与肾癌血管生成有关,两者可能协同肿瘤新生血管的生成。     

Dicer表达与肾透明细胞癌发生及转移的关系

目的：探讨Dicer在肾透明细胞癌发生及转移中的作用。方法：选取正常肾小管上皮细胞株HKC、非转移性肾透明细胞癌细胞株769P、转移性肾透明细胞癌细胞株Caki-1以及36例肾透明细胞癌手术标本（其中11例已发生远处转移）和相应癌旁正常肾组织,应用实时定量PCR和Western blot方法检测Dicer在肾透明细胞癌细胞株和组织中mRNA和蛋白的表达情况,并分析Dicer的mRNA水平与临床病理资料的关系。结果：和正常肾小管上皮细胞株HKC相比;Dicer的mRNA水平在肾透明细胞癌细胞株769-P和Caki-1中均降低（P〈0．001）,而转移性肾透明细胞癌细胞株Caki-1比非转移性肾透明细胞癌细胞株769-P表达水平更低（P〈0．001）;和癌旁正常肾组织相比,Dicer的mRNA水平在‘肾透明细胞癌手术标本中明显降低（P〈0．001）,且已发生远处转移的。肾癌标本比未发生远处转移的肾癌标本表达水平更低（P=0．04）;Dicer在细胞株和组织中的蛋白水平的变化与mRNA水平的变化一致（P〈0．001）;Dicer的mRNA水平在不同年龄、性别、组织学分级、肿瘤大小及T分期组间无统计学差异（P〉0．05）。结论：Dicer表达降低可能在。肾透明细胞癌的肿瘤发生中发挥作用,且其表达的进一步下降可能与肾透明细胞癌的远处转移有关。     

肾母细胞瘤过表达基因和WT1基因在肾癌组织中转录水平的定量研究

目的 研究肾癌组织中肾母细胞瘤过表达基因（NOV）及WT1基因mRNA定量表达水平及意义。方法 肾癌组织标本57例。男40例，女17例，平均年龄65岁。T139例、T213例、T3a5例；G114例、G223例、G320例。应用实时RT—PCR方法定量检测癌组织及36例癌旁正常肾组织中NOV和WT1的mRNA表达，并对2种基因表达水平进行相关性分析。结果 肾癌组织NOVmRNA表达水平中位值（1．17）显著低于癌旁正常组织（4．32，P〈0．05），乳头状肾癌组织表达量（2．67）显著高于透明细胞癌（1．06，P〈0．05），G．肿瘤表达量（4．61）显著高于G2～G3肿瘤（1．11，P〈0．05）。NOV表达与肿瘤分期、大小等无显著相关。WT1mRNA在肾癌组织中的表达水平中位值（0．13）显著低于癌旁正常组织（1．93，P〈0．05），WT1表达与肿瘤分期、分级、组织类型等均无关。NOVmRNA与WT1mRNA表达水平无明显相关。结论 NOV基因与肾癌的发生和分化相关。WT1在肾癌组织中表现为低表达。NOV表达是否受WT1的调节尚需进一步研究。     

肾癌患者外周血中survivin mRNA的表达

目的探讨肾透明细胞癌患者外周血中survivin mRNA的表达及其临床意义。方法用RT-PCR方法检测30例肾透明细胞癌患者、10例正常健康人外周血中survivin mRNA的表达。结果30例肾透明细胞癌患者中有23例外周血中survivin mRNA表达阳性，阳性率为76．7％，与正常健康人（0％）相比差异有统计学意义（P〈0．001）；survivin mRNA的表达与临床分期密切相关（P〈0．01）；随肿瘤组织分化程度的降低，survivin阳性率有增加的趋势，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论肾透明细胞癌患者外周血中survivin mRNA可作为肾透明细胞癌微转移的一个监测指标。     

透明质酸合成酶2在肾癌中的表达及临床意义

目的：研究透明质酸合成酶2在肾癌中的表达,并探讨其潜在的临床意义。方法：运用实时定量聚合酶链反应（qPCR）方法检测五种肾癌细胞（ACHN、Caki-1、OS-RC-2、786-O、SN12PM6）透明质酸合成酶三种亚型（HAs1、HAS2、HAs3）mRNA的表达,运用Westernblot方法进一步检测mRNA表达含量高的HAS亚型在五种肾癌细胞系及肾透明细胞癌（ccRCC）组织中的蛋白表达。结果：在五种肾癌细胞系中HAS2mRNA表达水平均明显高于正常肾小管上皮细胞（HK-2）,其中在。肾癌SN12PM6细胞系中表达水平最高（均P〈0．05）,HAS1mRNA的表达水平均明显低于正常肾小管上皮细胞（均P〉0．05）,而HAS3mRNA表达水平除肾癌Caki-1细胞系外均低于正常肾小管上皮细胞（P〉0．05）。在五种肾癌细胞系中HAS2蛋白均明显表达,而正常‘肾小管上皮细胞无明显表达。在肾透明细胞癌组织中HAs2蛋白表达也明显高于相应癌旁组织。结论：透明质酸合成酶2在多种肾癌细胞系和肾透明细胞癌组织中均明显表达,提示透明质酸合成酶2可能在肾癌尤其在肾透明细胞癌发生发展过程中起着至关重要的某种作用,并可能成为新的肾透明细胞癌分子标志物。     

肾癌患者外周血中碳酸酐酶9 mRNA表达的临床意义

目的：探讨肾细胞癌患者外周血中碳酸酐酶9（MN）mRNA表达的临床意义。方法：应用RT－PCR技术，对30例肾细胞癌患者及30例非肾细胞癌患者外周血中肾癌细胞标志物MN mRNA进行检测。结果：非肾癌组外周血中均不表达MN mRNA。肾癌患者外周血MN mRNA阳性表达13例（43％），其中肾癌转移8例，局限性肾癌5例；肾透明细胞癌12例，混合型癌1例。外周血MN mRNA表达与肾癌的临床分期无相关性（P＞0．05）；而肾透明细胞癌阳性率（12／22）明显高于其他组织类型（P＜0．05）。结论：RT－PCR技术可较敏感地检测到血液中肾癌细胞，有助于早期诊断肾癌微小转移。MN可被视为透明细胞癌特异的相关蛋白。     

小窝蛋白-1与血小板反应蛋白在肾透明细胞癌中的表达及其意义

目的研究小窝蛋白-1（CAV-1）和血小板反应蛋白（TSP）在肾透明细胞癌、癌旁组织、正常组织中的表达并探讨二者关系。方法应用免疫组织化学SP法对38例肾透明细胞癌、癌旁、正常组织中的CAV-1和TSP进行检测。结果CAV-1在肾透明细胞癌组织中表达明显高于其在癌旁、正常组织肾小管和肾小球中表达,三者呈递减关系,其差异有统计学意义（P〈0．001）;TSP在肾透明细胞癌中呈低表达,在正常组织肾小管中则呈高表达。CAV-1在肾透明细胞癌组织中的高表达,与肾透明细胞癌的组织学分级、临床分期密切相关,与TSP的低表达恰好相反,但两者之间的相关性无统计学意义（P〉0．05）,可能是两个独立的指标。结论CAV-1可能是促进肾透明细胞癌侵袭、生长及导致不良预后的一个潜在的因子。     

SFRP1和SFRP2在肾细胞癌组织中的表达及其意义

目的：探讨wnt信号通路拮抗剂分泌型卷曲相关蛋白1（SFRPl）和分泌型卷曲相关蛋白2（SFRP2）在肾细胞癌组织中的表达及其意义。方法：采用免疫组织化学方法对55例肾细胞癌组织及15例癌旁正常肾组织的SFRPl、SFRP2表达情况进行检测,初步探讨两者与肾细胞癌生物学特性的关系。结果：SFRPI和SFRP2在癌旁肾组织中较肾细胞癌组织明显增高（P〈0．01）。SFRPl和SFRP2阳性表达率在不同组织学类型的肾细胞癌中差异无统计学意义（P〉0．05）。SFRPl和SFRP2表达主要与病理分期、肿瘤细胞分级有关（P〈0．05）,而与患者年龄、性别、肿瘤直径及临床表现无关（P〉O．05）。在肾细胞癌中,SFRPl与SFRP2表达具有相关性。应用Spearman相关检验分析得出：SFRPl表达与SFRP2表达呈正相关（r=0．392,P=0．003）。结论：wnt信号通路拮抗剂SFRPl和SFRP2在RCC中表达下调或减弱,SFRPl、SFRP2可能为预防RCC及RCC早期诊断和预后评估提供新思路。     

Caveolin-1和E-cadherin在肾细表达及其意义胞癌中的

目的：探讨Caveolin-1、E—cadherin在肾细胞癌中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学EnVision法检测41例肾细胞癌切除标本中Caveolin-1和E—cadherin的表达，并分析表达情况与肿瘤的生物学行为的关系。结果：Caveolin-1在肾细胞癌中的表达阳性率为41．5％，与肿瘤分期、Fuhrman分级及患者年龄呈正相关（P〈0．05）；E-cadherin表达阳性率为24．4％，低于癌旁肾组织（50％），E—cadherin表达与肿瘤细胞核分级相关（P〈0.05），与其他临床病理参数之间无相关性。Caveolin-1和E-cadherin两者之间表达无相关性。结论：Caveolin-1过表达及E-cadherin的异常表达，可能在肾细胞癌的生长、分化中发挥重要作用。     

SOX2在肝细胞肝癌组织中的表达及其临床意义

目的：研究SOX2在肝细胞肝癌和癌旁肝组织的表达及其意义,探讨其表达水平与临床病理因素的联系。方法：收集42例肝细胞肝癌患者的临床资料,采用RT—PCR和Westernblot方法检测SOX2在42例肝细胞肝癌和癌旁肝组织的表达,并分析其表达水平与临床病理因素的联系。结果：PCR结果显示SOX2mRNA在肝细胞肝癌组织中的表达水平为0．7136±0．1556,明显高于癌旁肝组织（O4429±0．1215）,差异有统计学意义（f=8．8864．P〈0．001）;Westernblot结果显示,SOX2蛋白在肝细胞肝癌的表达水平为0．4638±0．1600,高于癌旁肝组织（0．3130±0．1554）,差异有统计学意义（t=3．8839,P〈0．05）;SOX2mRNA表达水平与患者的性别、年龄、血清AFP水平、肿瘤大小无明显相关性（P〉O．05）,而与临床TNM分期有明显相关性（P〈0．05）。Westernblot显示SOX2蛋白在TNMI期中的表达明显低于Ⅱ、Ⅲ期中的表达。结论：SOX2在肝细胞肝癌组织中的表达高于癌旁肝组织中的表达,其表达水平与临床TMN分期密切有关。     

NNMT在肾透明细胞癌的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的:研究NNMT在肾透明细胞癌中的表达情况及对肾癌细胞侵袭能力的影响。方法:采用RT-PCR和Western blot方法检测正常肾小管上皮细胞株HKC、肾癌细胞株786-O及30例肾透明细胞癌组织、相应癌旁组织中NNMT的mRNA和蛋白的表达水平,并分析NNMT的mRNA水平与临床病理参数的关系。化学合成针对NNMT特异的siRNA序列,应用脂质体Lipofectamine 2000将其转染进786-O细胞中,利用RT-PCR和Western blot法检测NNMT在786-O细胞中的表达水平,用Transwell小室法检测肾癌细胞786-O侵袭能力的变化。结果:NNMT在肾癌细胞786-O中的mRNA和蛋白表达水平显著高于正常肾小管上皮细胞株HKC(P<0.001);肾透明细胞癌组织和对应的癌旁组织中NNMT的mRNA相对表达量分别为(1.582±0.2145)、(0.1269±0.04279),两组比较P<0.001。NNMT的mRNA水平与肿瘤大小、临床分期有关(P<0.05);Tran-swell法检测结果显示降低NNMT的表达后786-O细胞的侵袭能力明显下降。结论:NNMT在肾透明细胞癌组织和细胞中表达升高,可能在肾癌发生、发展过程中发挥重要作用。     

MMP-2和CXCR4mRNA在人肾透明细胞癌中的表达及意义

目的研究人肾透明细胞癌(ccRCC)组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和CXC趋化因子受体4(CXCR4)的表达情况及相关性,探讨二者与临床病理因素的关系。方法应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测68例ccRCC组织和36例癌旁正常肾组织中MMP-2与CXCR4mRNA的表达水平。结果在ccRCC组织中MMP-2和CXCR4mRNA的半定量值分别为0.848±0.367和0.939±0.336,高于在正常肾组织中的半定量值0.379±0.138和0.418±0.146,差异有统计学意义(t=7.375、8.860,P0.05);在ccRCC中MMP-2和CXCR4mRNA的表达与肿瘤的临床分期、分化程度和淋巴结转移情况有关(t=2.169~3.852,P0.05),而与患者的年龄、性别及肿瘤大小无关(t=0.201~0.630,P0.05);在ccRCC组织中MMP-2和CXCR4mRNA的表达呈正相关(r=0.832,P0.05)。结论 MMP-2和CXCR4可能共同参与了人ccRCC的发生、发展、侵袭和转移,并且在发挥作用时具有协同作用,联合检测MMP-2和CXCR4可能有助于协助ccRCC的早期诊断和病情评估。     

肾脏特异性高表达基因SLC12A1在肾透明细胞癌中低表达的研究

目的验证肾脏特异性高表达基因SLC12A1在肾透明细胞癌中的低表达,初步研究该基因的表达与肾透明细胞癌发生发展的相关性并探讨其临床意义。方法临床收集23例肾透明细胞癌患者癌组织和癌旁正常组织样本,采用荧光定量PCR、免疫组织化学和Western blot的方法分别检测肾透明细胞癌组织和癌旁正常组织中的SLC12A1基因mRNA和蛋白质的表达水平差异。结果肾透明细胞癌组织中SLC12A1的mRNA和蛋白质表达水平明显低于癌旁正常组织(P0.01)。结论肾透明细胞癌组织中SLC12A1表达量明显降低。该结果对进一步阐明肾透明细胞癌发生、发展的分子机理具有一定的学术意义,可能为肾透明细胞癌的诊断和治疗提供一种新的思路。     

ASS1在肾透明细胞癌中的低表达及临床意义

目的 验证ASS1在肾透明细胞癌中的低表达,阐明其与肾透明细胞癌发生发展的相关性。方法 临床收集肾透明细胞癌患者组织样本23例,采用荧光定量PCR和免疫组织化学的方法分别检测肾透明细胞癌患者癌组织和癌旁正常组织ASS1基因mRNA和蛋白质的表达水平差异,采用ELISA方法检测癌组织和癌旁正常组织瓜氨酸的含量。结果 肾透明细胞癌患者癌组织中ASS1的mRNA和蛋白质的表达水平明显低于癌旁正常组织,ELISA结果显示,在癌组织中有瓜氨酸的含量高于癌旁正常组织。结论 肾透明细胞癌患者癌组织中ASS1表达量明显降低,且在癌组织中发现瓜氨酸的累积。该结果对进一步阐明肾透明细胞癌发生发展的分子机理具有一定的学术意义,为肾透明细胞癌的诊断和治疗提供一种新的思路。     

Survivin和Vimentin在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨凋亡蛋白抑制因子生存素（Survivin）和波形蛋白（Vimentin）在肾透明细胞癌（clearcellrenalcellcarcinoma,ccRCC）中的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测56例ccRCC、25例癌旁组织及13例正常肾组织中Survivin和Vimentin的表达及定位情况。结果Survivin在肾透明细胞癌中高表达,而在癌旁及正常组织中未见表达;其表达与ccRCC临床分期及病理分级呈正相关,差异有统计学意义（P〈0．01）。Vimentin在正常肾组织及癌旁组织中亦未见表达,而在肾透明细胞癌中高表达,且与临床分期及病理分级呈正相关,差异有统计学意义（P〈0．01）。并且两个因子的表达呈显著正相关（r=0．566,P〈0．01）。结论Survivin和Vimentin在ccRCC组织中高表达,共同促进了ccRCC的发生、发展、侵袭与转移,联合两因子检测可为ccRCC的预后评估提供重要的信息。     

5t4在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的探讨滋养层糖蛋白5t4在肾透明细胞癌中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学技术检测72例肾透明细胞癌组织标本、17例癌旁肾组织以及14例非癌因素的肾脏组织标本中5t4的表达,并对5t4在肾透明细胞癌的表达与组织学分级的关系进行分析。结果 5t4在肾细胞癌组织中的阳性率为70.8%,癌旁肾组织中的阳性率为41.2%,两者具有差异性(P0.05)。5t4在肾癌组织学分级中低分级与高分级的表达存在显著差异(P0.01)。结论 5t4可作为判断肾透明细胞癌分化程度的标志物。     

EphA2在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

目的探讨EphA2在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义。方珐50例膀胱病理切片标本分为正常对照组、膀胱移行细胞癌Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级4组;25例新鲜组织标本分为正常组织、Ta～T1、T2～T3、T4期4组;并培养具有不同侵袭力的两种膀胱癌细胞株（BIU87和T24）。采用免疫组化和荧光实时定量PCR方法检测组织标本和细胞株EphA2在蛋白及mRNA水平的表达。结果EphA2在膀胱移行细胞癌各组表达与对照组相比均有显著差异。EphA2mRNA在正常组织细胞、T24和BIU87细胞中的相对表达量两两比较均无显著性差异（P〉0．05）。EphA2mRNA在膀胱组织中除T2～T3期与其他各分期有显著性差异（P〈O．05）外,其余各期两两比较均无显著性差异（P〉O．05）。结论EphA2的高表达与膀胱移行细胞癌的恶性程度以及患者预后有关,在临床分期中无明显相关性,且EphA2的蛋白表达与基因表达量不成比例。