外泌体miRNAs在前列腺癌中的研究进展

前列腺癌（PCa）是世界男性最常见恶性肿瘤之一。在PCa临床诊断中,前列腺特异性抗原（PSA）仍旧是最常用的生物标志物,但缺乏特异性,存在假阳性结果导致过度诊断和过度治疗的问题。因此,需要新的生物标志物来提高对PCa诊断的效能并指导治疗决策。已有许多研究发现外泌体miRNAs在PCa患者中表达异常,并与 PCa 的发生、发展密切相关。此外,尿液外泌体miRNAs检测是鉴定新生物标志物的一种非侵入性的方式。本文总结了外泌体miRNAs在PCa诊断及预后方面的最新进展。     

外泌体参与调节高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的:探究外泌体在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）钙化中的调节作用。方法:体外培养VSMC（A7r5细胞）,随机分为正常磷组（0.9 mmol/L）、高磷组（2.6 mmol/L）及高磷外泌体诱导组（即高磷组细胞提取的外泌体加入正常培养的VSMC中）。至...     

YWHAZ对肾小管上皮细胞增殖的影响

目的探索调节蛋白酪氨酸/色氨酸羟化酶激活蛋白ζ(YWHAZ)对正常氧条件以及缺氧复氧处理的肾小管上皮细胞增殖的影响。 方法利用人近端肾小管上皮细胞系(HK－2)通过RNAi技术以及质粒转染的方式建立YWHAZ低表达和过表达的细胞模型,观察干预YWHAZ表达后细胞的一般情况,检测细胞增殖活性;而后给予细胞缺氧复氧处理,检测细胞增殖情况的改变。 结果成功建立YWHAZ低表达和过表达的细胞模型,低表达YWHAZ后细胞的增殖能力较对照组下降,在缺氧复氧条件下增殖能力下降更为显著,过表达YWHAZ则缓解了缺氧复氧造成的细胞增殖抑制。 结论YWHAZ可能为维持近端肾小管上皮细胞增殖活性的重要因子。     

模拟缺血缺氧时肾小管上皮细胞-基底膜粘附力的改变

以微管吸吮技术对正常及模拟缺血、缺氧时肾小管上皮细胞人工基底膜（ｍａｔｒｉｇｅｌ）粘附力进行直接测定和对比,报告如下。材料与方法　依本室方法行大鼠肾小管上皮细胞原代培养及传代［１］。取第８代细胞,分别同时加入培养瓶（Ｍ）和特制密封仓（Ｒ）中以玻璃为底面的圆形小室（Ｃ′）。按模拟情况分为四组：Ｏ（正常组）：培养液为含１０％新生小牛血清的ＲＰＭＩ１６４０;Ａ（单纯缺氧组）：培养液为ＲＰＭＩ１６４０,排出Ｍ／Ｒ内空气,同时充入混合气（９３％Ｎ２、５％ＣＯ２、２％Ｈ２,１Ｌ／ｍｉｎ×５ｍｉｎ）并密封Ｍ…     

RNA结合蛋白FOX1对缺氧/复氧诱导的肾小管上皮细胞氧化应激的影响

目的:探究RNA结合蛋白FOX1(RBFOX1)在人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧(H/R)模型中对细胞氧化应激及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路的影响。方法:构建HK-2细胞缺氧/复氧(缺氧16 h,复氧4 h)模型,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测RB...     

外泌体非编码RNAs在骨质疏松症中的研究进展

外泌体是大多数细胞能够释放的一种细胞外囊泡,广泛参与细胞间物质运输和信息传递。非编码RNAs主要包括微小RNAs、长链非编码RNAs和环状RNAs,被鉴定为外泌体中的重要成分,可以被外泌体选择性地摄取并递送到受体细胞,从而调节受体细胞的生理活动和功能。近年来的研究逐渐关注到外泌体非编码RNAs与骨质疏松症之间的密切关系。基于此,该文回顾了外泌体非编码RNAs在骨质疏松症中的新发现,分析了它们在调控骨髓间充质干细胞成骨分化、成骨细胞骨基质矿化、破骨细胞介导的骨吸收、骨相关细胞的活性和凋亡以及血管生成中的作用,旨在确定它们作为骨质疏松症新型生物标志物和治疗靶点所具有的潜力和面临的挑战。     

反义cubilin RNA对白蛋白刺激肾小管上皮细胞分泌趋化因子的影响

目的观察反义cubilinRNA对白蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞(HK-2)表达单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、RANTES的影响。方法应用基因克隆技术构建反义及正义cubilin真核表达载体(pcDNA-ACUB、pcDNA-CUB),酶切鉴定及序列测定证实插入序列是否正确。脂质体DOTAP将其转染至HK-2细胞,流式细胞仪(FCM)检测反义cubilinRNA对HK-2细胞重吸收白蛋白的抑制作用。细胞转染72h后给予高浓度白蛋白(10g/L)刺激24h,细胞ELISA、Western印迹法检测HK-2细胞表达MCP-1、RANTES的变化。结果pcDNA-ACUB转染组白蛋白摄取率较DOTAP组显著降低(P<0.01)。与DOTAP组比较,pcDNA-ACUB转染组HK-2细胞MCP-1、RANTES的表达显著降低(P<0.001)。结论反义cubilinRNA可抑制肾小管上皮细胞对白蛋白的摄取,并能拮抗白蛋白刺激肾小管上皮细胞趋化因子的表达,提示cubilin在白蛋白介导的肾小管上皮细胞分泌趋化因子中起重要作用。     

乙肝相关性肝细胞癌患者血清外泌体miR-1290 水平的变化及其诊断价值

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞癌(HCC)患者血清外泌体miR-1290水平的变化及其诊断价值。方法:收集31例HBV相关HCC患者,20例HBV携带患者,20例乙型肝炎肝硬化患者以及19例健康体检者的血液样本,分离纯化血清外泌体并鉴定,用RT-PCR检测外泌体miR-1290水平。利用ROC曲线评价外泌体miR-1290对HBV相关HCC的诊断效能。结果:纯化提取的样品中含有大量外泌体颗粒,并且具备外泌体的典型特性。与健康个体比较,外泌体miR-1290水平在HBV携带患者中未见明显差异(P0.05)在HBV相关HCC患者中明显升高(P0.001),且晚期HCC患者高于早期HCC患者(P=0.036),而在乙型肝炎肝硬化患者中明显降低(P=0.006)。外泌体miR-1290的ROC曲线的曲线下面积(AUC)为0.82(95%CI=0.73～0.91),具有较好的特异性(88.1%),且其诊断效能优于AFP(AUC=0.792)。结论:血清外泌体miR-1290在HBV相关HCC患者中升高,对HBV相关HCC具有较好的诊断效能,并有望成为诊断HBV相关HCC的血清学标志物。     

外泌体携载微小RNA治疗骨关节炎的研究

骨关节炎(osteoarthritis,OA)因其致残率高、社会危害严重,已成为困扰全球的卫生健康问题之一。既往的常规治疗常因效果不理想,引发临床及科研层面寻求新的治疗方式。外泌体（exosome）因来源广、稳定性高等特点,逐渐成为骨科退行性疾病等的潜在应用靶点。研究发现,骨髓间充质干细胞、软骨细胞、滑膜细胞、胚胎间充质干细胞等多种细胞来源的外泌体通过携载微小RNA(microRNA , miRNA),靶向作用于某些信号通路,进而在治疗骨关节炎等疾病中发挥重要作用。此外,制备富含特定成分的工程化外泌体,还可以提高外泌体作用的靶向性及作用浓度等。本文综述了近几年外泌体及miRNA在骨关节炎诊疗中的研究及应用,为骨关节炎诊疗方面的新策略提供参考,进而推动骨关节炎的诊疗进程。     

骨细胞及干细胞分泌的外泌体在骨重塑中的作用

外泌体是由多泡体与细胞膜融合后,以外分泌的形式释放到细胞外的直径为30~100 nm的细胞外囊泡,目前大量研究发现其广泛参与骨相关疾病及骨重塑过程,具有较好的生物学活性。由于成骨细胞和破骨细胞之间的动态平衡在骨重塑过程中起关键作用,而且干细胞在骨重塑方面已显示了巨大的前景,因此,本文就骨细胞及干细胞分泌的外泌体在骨重塑中的作用进行综述,希望能为骨科相关疾病的防治提供研究思路。     

小檗碱预先给药对缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨小檗碱预先给药对缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡的影响.方法 培养人肾小管上皮细胞(HK-2),以1×106个/ml密度接种于培养皿(2 ml/皿)和96孔培养板(200μl/孔),采用随机数字表法,将其分为4组(n=30):正常对照组(C组)、小檗碱组(B组)、缺氧/复氧组(H/R组)和缺氧/复氧+小檗碱组(H/R+B组).B组和H/R+B组加入10 μmol/L小檗碱孵育2h,随后H/R组和H/R+B组进行缺氧24h复氧3h.测定细胞活力、细胞凋亡率、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、caspase-3、活化caspase-3、细胞色素c、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)表达,并计算Bax表达与Bcl-2表达的比值(Bax/Bcl-2).结果 与C组比较,H/R组和H/R+B组细胞活力、SOD活性和caspase-3表达降低,细胞凋亡率、MDA浓度和Bax/Bcl-2升高,活化caspase-3、细胞色素c、GRP78和CHOP表达上调(P＜0.05),B组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与H/R组比较,H/R+B组细胞活力、SOD活性和caspase-3表达升高,细胞凋亡率、MDA浓度和Bax /Bcl-2降低,活化caspase-3、细胞色素c、GRP78和CHOP表达下调(P＜0.05).结论 小檗碱预先给药可抑制缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡,其机制与抑制线粒体应激通路和内质网应激通路有关.     

二甲基乙二酰基甘氨酸对缺氧复氧诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的 通过脯氨酸羟化酶抑制剂二甲基乙二酰基甘氨酸（DMOG）稳定缺氧诱导因子1α（HIF-1α）表达,探讨其对缺氧复氧诱导的肾小管上皮细胞（HKC）损伤的保护作用及其机制。 方法 制作无糖缺氧复氧细胞损伤模型,用不同浓度的DMOG预处理,锥虫蓝染色和乳酸脱氢酶（LDH）活性方法检测细胞活力及损伤;Annexin V和PI染色流式细胞仪技术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR方法检测红细胞生成素（EPO）、热休克蛋白70（HSP70）和血红素氧合酶1（HO-1） mRNA的表达;Western印迹法检测HIF-1α、活性caspase-3和Bcl-2蛋白表达。 结果 正常情况下HKC细胞内几乎无HIF-1α蛋白表达,DMOG刺激6 h后HIF-1α蛋白及其靶基因EPO、HSP70和HO-1 mRNA表达均显著上调（均P ＜ 0.01）,且呈浓度依赖性。500 μmol/L或1 mmol/L DMOG预处理可明显改善缺氧复氧诱导的细胞损伤,表现为细胞存活率升高（95.6%±1.8%、96.1%±1.0%比 83.3%±3.1%）;培养上清液中LDH 活性下降;细胞凋亡减少（8.6%±2.7%、6.1%±2.3%比19.2%±4.0%）（均P ＜ 0.05）。另外,细胞内活性caspase-3蛋白表达显著下调,而Bcl-2蛋白表达则显著上调（均P ＜ 0.05）。 结论 DMOG预处理可稳定肾小管上皮细胞内HIF-1α表达,对缺氧复氧诱导的肾小管上皮细胞损伤具有一定保护作用。其机制可能与促进EPO、HSP70和HO-1表达,抑制caspase-3活化,上调Bcl-2表达有关。     

Effect of cyclosporine A on autophagy-lysosomal pathway in tubular epithelial cells

Objective To investigate the effect of cyclosporine A (CsA) on autophagy-lysosomal pathway in tubular epithelial cells. Methods Human renal tubular epithelial cell line (HK-2 cell) was treated with different concentrations (3, 5 and 10 μmol/L) of CsA for 24 h. Then the viability and apoptosis of cells were measured by MTT assay or AnnexinV-PI staining followed by flow cytometry analysis, respectively. Autophagy-related protein LC3-Ⅱ and p62 were detected by immunofluorescence assay. Autophagic flux was analyzed in HK-2 cells transfected with a tandem mRFP-GFP fluorescent-tagged LC3 (tfLC3) plasmid by laser confocal microscope. The lysosomal degradation was evaluated by DQ-ovalbumin staining followed by flow cytometry analysis. Results The viability of HK-2 cells was significantly decreased with CsA stimulation when compared with control group (P＜0.01), but the number of apoptotic cells was markedly increased by CsA treatment (P＜0.05). Compared with the control group, different doses of CsA dramatically increased the expressions of LC3-Ⅱ(P＜0.01) and p62 (P＜0.05) in HK-2 cells. Moreover, HK-2 cells treated with CsA displayed a significant increase in autophagosomes but a marked decrease in autolysosomes. In HK-2 cells, exposured to CsA caused a decrease in lysosomal degradation by DQ-ovalbumin staining when compared with control group (P＜0.01). Conclusion Blockade of autophagy via disrupting lysosome degradation may represent a novel mechanism of CsA-induced tubular epithelial cells injury.     

法舒地尔对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 观察法舒地尔对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响并探讨其机制。 方法 将实验性Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、法舒地尔治疗组。3个月后处死动物,PAS染色法观察肾小球病理变化,Masson染色法观察肾间质病理变化;免疫组化观察肾脏皮质ROCKⅠ、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E钙黏蛋白（E-cadherin）的变化和β连环蛋白（β-catenin)的细胞定位改变;Western印迹法观察肾脏皮质p-MYPT1、α-SMA、E-cadherin、胞膜β-catenin蛋白的变化;实时定量PCR法观察ROCKⅠ、E-cadherin和总β-catenin的mRNA变化。 结果 法舒地尔治疗可改善肾间质纤维化状况。与正常对照组相比,糖尿病组大鼠肾皮质内p-MYPT1、α-SMA蛋白表达增强（均P < 0.01）;E-cadherin、胞膜β-catenin的蛋白表达减弱（均P < 0.01）;ROCK1、总β-catenin mRNA表达增强（均P < 0.01）;E-cadherin mRNA表达减弱（P < 0.01）。与糖尿病组相比,治疗组p-MYPT1、α-SMA蛋白表达减弱 （均P < 0.01）;E-cadherin、胞膜β-catenin的蛋白表达增强（均P < 0.05）;ROCK1、β-catenin mRNA表达减弱（均P < 0.01）;E-cadherin mRNA表达增强（P < 0.01）。 结论 法舒地尔可能通过抑制Rho激酶活性减轻糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化和肾间质纤维化,该作用可能与法舒地尔恢复肾小管上皮细胞的黏附特性与紧密连接复合体有关。     

甲状旁腺素对人肾小管上皮细胞细胞外基质合成与降解的影响

目的 研究甲状旁腺素（PTH）对人肾小管上皮细胞（HK-2）合成分泌Ⅲ型胶原、纤连蛋白以及对纤溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）、基质金属蛋白酶1（MMP-1）、金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）基因表达的影响,以探讨PTH在肾间质纤维化发病机制中的作用。 方法 HK-2细胞培养于含5％ FBS的DMEM-F12培养液中,加入终浓度为0、10-12、10-11、10-10、10-9、10-8 mol/L PTH的培养液刺激HK-2细胞48 h,或10-8 mol/L PTH刺激HK-2细胞不同时间（0、12、24、48、72 h）。应用半定量RT-PCR法检测细胞中Ⅲ型胶原、纤连蛋白、PAI-1、MMP-1、TIMP-1基因的表达;Western印迹法检测HK-2细胞中Ⅲ型胶原的蛋白表达;ELISA法检测细胞培养上清液中纤连蛋白的含量。 结果 PTH 呈剂量和时间依赖性促进HK-2细胞中Ⅲ型胶原、纤连蛋白、PAI-1、TIMP-1 mRNA的表达,抑制MMP-1 mRNA的表达,MMP-1/TIMP-1 比值降低。PTH呈剂量和时间依赖性增加HK-2细胞中Ⅲ型胶原的蛋白表达及细胞培养上清液中纤连蛋白的含量。 结论 PTH通过促进HK-2细胞中PAI-1、TIMP-1的基因表达,抑制MMP-1的基因表达,导致细胞外基质合成增加而降解减少。     

表面活性蛋白A在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达

目的 研究表面活性蛋白A（SP-A）及其亚型在人肾组织和人肾小管上皮细胞（HK-2）的表达和分布,同时分析脂多糖（LPS）对HK-2细胞中SP-A亚型的 mRNA和蛋白表达的影响。 方法 收集10例人的肾组织,以5例人的肺组织作为对照,同时培养HK-2细胞。免疫组化法检测SP-A在人肾组织的表达部位;RT-PCR法检测SP-A mRNA在人肾组织和HK-2细胞中的表达;限制性内切酶片段长度多态性（RFLP）和测序的方法分析SP-A亚型在HK-2细胞的表达;实时定量PCR法比较SP-A mRNA在人肾组织和在人肺组织中的相对含量;Western印迹法检测人肾组织和HK-2细胞中SP-A蛋白的表达;Western印迹和ELISA法检测人的尿液和HK-2细胞培养上清液中SP-A的分泌量。RT-PCR和Western印迹检测LPS在不同浓度（0、0.1、1、2、5、10 mg/L）作用8 h及5 mg/L LPS在不同时间（0、2、4、8、16、24 h）作用HK-2细胞后,SP-A mRNA和蛋白表达的变化情况。 结果 免疫组化结果显示SP-A主要表达在肾皮质的远曲和近曲小管的肾小管上皮细胞。RFLP和测序的方法均证实HK-2细胞可同时表达SP-A1和SP-A2亚型。实时定量PCR证实SP-A mRNA在人肾组织的表达量仅为肺组织的30%（n = 5）。Western印迹检测到人肾组织和HK-2细胞可表达SP-A蛋白。同时在人的尿液和HK-2细胞培养上清液中也检测到SP-A的分泌,其分泌量分别为（106.614±72.772） nmol/L（n = 30）和（85.533± 58.622） nmol/L（n = 10）。应用1、2、5、10 mg/L的 LPS刺激HK-2细胞8 h后,SP-A1和SP-A2 mRNA及SP-A蛋白表达较0、0.1 mg/L显著升高（P < 0.05）;同时,应用5 mg/L的LPS作用HK-2细胞4、8、16、24 h后, SP-A1和SP-A2 mRNA及SP-A蛋白表达较LPS作用0、2 h显著升高（P < 0.05）。 结论 HK-2细胞能同时表达SP-A1和SP-A2亚型,能产生和分泌SP-A蛋白。SP-A1和SP-A2可能在肾脏的天然免疫和炎性反应调节方面起重要作用。     

缺氧条件下大鼠肾小管上皮细胞的离体培养及相关检测

目的 探讨缺氧条件下离体培养的肾小管上皮细胞中纤维化相关标记物结缔组织生长因子(CTGF)表达的变化,以及缺氧导致肾小管上皮细胞向间充质细胞转化(EMT)的可能性.方法采用无糖培养基在无氧环境下培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E细胞)4 h,恢复含氧环境后再分别培养6、12、24、48和72 h.用实时定量聚合酶链反应和蛋白质印迹测定各时段细胞中CTGF mRNA和CTGF表达的变化.共聚焦显微镜下观察细胞形态变化.对细胞骨架蛋白--多聚体纤维状肌动蛋白(F-actin)进行标记染色,检测缺氧对其的影响.结果 缺氧后NRK-52E细胞骨架蛋白F-actin的表达增加;NRK-52E细胞的形态由立方上皮向肌纤维母细胞转变;缺氧后,细胞中CTGF mRNA和CTGF的表达明显增高,在恢复含氧环境培养48 h时达到高峰,CTGF mRNA值为29.33±0.21,CTGF的吸光度比值为1.30±0.02.结论缺氧可导致大鼠肾小管上皮细胞中CTGF的表达增加,诱导NRK- 52E细胞发生EMT,CTGF可能是NRK-52E细胞发生EMT和纤维化的关键分子.

Abstract：

Objective To explore whether anoxia can induce expression changes in connective tissue growth factor(CTGF)in renal tubular epithelial cells(TECs)and epithelial-mesenchymal transition of TECs.Methods Rat renal TECs(NRK-52E)anoxia models were established.NRK-52E cells were exposed to anoxia for 4 h.The real-time RT-PCR,Western blotting,immunohistochemical staining were used to detect the expression of CTGF at 6,12,24,48,and 72 h in NRK-52E cells.Morphological changes and cytoskeleton remodeling in NRK-52E cells under anoxia were examined by a laser confocal microscope and BODIPYFL staining respectively.Results Under anoxia,NRK-52E cells became round,enlarged and cytoskeleton was remodeled.The expression levels of CTGF mRNA and protein were up-regulated at 6 h,reached their peak at 48 h:the expression of CTGF mRNA protein was 29.33±0.21 and 1.30±0.02 respectively.Under anoxia,NRK-52E cells underwent an epithelial-mesenchymal transition process,including cytoskeleton remodeling,and morphological changes.Conclusion Anoxia can change the expression of CTGF and other fibrosis-associated genes in NRK-52E cells,and CTGF played an important role in fibrosis process and epithelial-mesenchymal transition development in NRK-52E cells.     

Numb基因在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用

目的 探讨Numb在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用。 方法 重组人转化生长因子β1（TGF-β1）刺激大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E细胞),不同浓度TGF-β1 （0、1、5、10、15、20 μg/L）作用48 h与TGF-β1 10 μg/L作用不同时间(0、24、48、72 h)后,采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光染色分别检测NRK52E细胞内E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Numb 的表达。采用RNA干扰技术下调Numb表达,Western印迹观察改变Numb水平对E-cadherin、α-SMA蛋白水平的影响。 结果 TGF-β1以剂量及时间依赖的方式诱导NRK52E细胞E-cadherin 蛋白表达下调,α-SMA 蛋白表达增高。Numb蛋白的表达随TGF-β1浓度的增加而增高,在5、10、15和20 μg/L时分别为0 μg/L时的1.33倍（P = 0.024)、1.39倍（P = 0.035）、1.45倍（P = 0.025）和1.51倍（P = 0.000)。而Numb蛋白和mRNA的表达亦随TGF-β1作用时间的延长而增高,作用24 h、48 h、72 h,Numb蛋白分别为0 h的1.48倍（P = 0.046)、1.54倍（P = 0.011）、1.79倍（P = 0.028）,Numb mRNA分别为0 h的1.56倍（P = 0.012)、1.82倍（P = 0.008）、1.82倍（P = 0.002）;同时Numb的分布也发生了改变,大量聚集在胞质中。下调Numb表达可以显著抑制TGF-β1诱导的α-SMA表达上调（为Numb表达正常时的18.1%,P = 0.004）、E-cadherin表达下调（为Numb表达正常时的2.19倍,P = 0.004）。 结论 Numb可以促进肾小管上皮细胞发生转分化。     

高糖与切应力对肾小管上皮细胞megalin及cubilin表达的影响及其意义

目的 观察高糖与切应力对肾小管上皮细胞白蛋白受体megalin、cubilin表达的影响并探讨其意义。 方法 链尿菌素（STZ）腹腔注射SD雄性大鼠制作糖尿病肾病（DN）模型，以健康SD雄性大鼠为对照。于第2、4、6周分别检测尿白蛋白量（24 h）；免疫组化法检测各组肾脏megalin、cubilin蛋白的表达。将体外培养的肾近端小管上皮细胞(NRK-52E)分为空白对照组、甘露醇组、高糖组，并以平行板流室系统提供0.5、1.0 Pa的切应力处理各组NRK-52E细胞, 分别作用1、3、6 h。以RT-PCR法检测各组细胞megalin、cubilin mRNA表达。 结果 对照组肾脏megalin、cubilin蛋白表达水平高于相应时间点DN组(P < 0.05)。肾脏megalin、cubilin表达水平与尿白蛋白量（24 h）呈负相关(r =－0.832及－0.815，均P < 0.05)。高糖抑制NRK-52E细胞megalin、cubilin mRNA的表达(P < 0.05)。切应力加载抑制细胞megalin、cubilin mRNA的表达,其抑制作用比单纯高糖更明显，且与切应力大小及作用时间有关(P < 0.05)。 结论 DN早期高滤过导致滤出液对肾近端小管上皮细胞的切应力增加，其与高糖协同作用可下调细胞megalin、cubilin mRNA的表达，减少肾小管对白蛋白的重吸收,是DN早期微量白蛋白尿发生的机制之一。     

甲状旁腺激素对人近曲小管上皮细胞转分化及分泌结缔组织生长因子的影响

目的 探讨甲状旁腺激素（PTH）对人近曲小管上皮细胞系HK-2细胞分泌结缔组织生长因子（CTGF）及细胞转分化的影响。 方法 应用实时定量PCR和Western印迹观察PTH诱导HK-2细胞CTGF mRNA和蛋白表达情况，从转录水平探讨PTH对CTGF基因启动子活性的调控作用。应用免疫荧光技术检测PTH作用下HK-2细胞中α平滑肌肌动蛋白 （α-SMA）的表达。 结果 HK-2细胞有基础水平的CTGF mRNA和蛋白表达，PTH刺激后其表达量显著增加。PTH最佳刺激浓度是10－10 mol/L，最佳刺激时间是72 h。10－10 mol/L PTH干预HK-2细胞12 h后，荧光素酶活性较对照组显著升高（1.888±0.078比0.989±0.030，P ＜ 0.01）；光镜下可见细胞由立方形铺路石样转变为梭形，随作用时间延长转分化现象更显著。PTH刺激HK-2细胞12 h后，免疫荧光检测可见细胞质中有α-SMA表达；PTH刺激24 h后，α-SMA表达明显增多，与CTGF mRNA和蛋白表达的时间效应一致。 结论 PTH可上调HK-2细胞CTGF表达，并具有促进HK-2细胞转分化的作用。