细胞凋亡,增殖状态及bcl—2,Bax基因表达与大肠癌的预后

探讨大肠组织原位凋亡及其抑制或促进基因ｂｃｌ－２及Ｂａｘ有砂水平与肿瘤生物学行为及预后的关系。方法用脱氧核酸末端转移酶介导的ＴＵＮＥＬ法缺口末端标记技术和组化方法，检测７７例大肠癌组织细胞的原位凋亡，原位增殖及ｂｃｌ－２、Ｂａｘ基因蛋白表达。结果大肠癌组织中ＡＩ与ＫＩ相关，有随肿瘤的进展趋势；ｂｃｌ－２在高分化癌和早期癌中高表达：Ｃｏｘ模型多因素分析结果表明，ＫＩ指数及ｂｘｌ－２可作为临床和早期癌     

细胞凋亡,增殖状态及bcl—2,Bax基因表达与大肠癌的预后

探讨大肠组织原位凋亡及其抑制或促进基因ｂｃｌ－２及Ｂａｘ有砂水平与肿瘤生物学行为及预后的关系。方法用脱氧核酸末端转移酶介导的ＴＵＮＥＬ法缺口末端标记技术和组化方法，检测７７例大肠癌组织细胞的原位凋亡，原位增殖及ｂｃｌ－２、Ｂａｘ基因蛋白表达。结果大肠癌组织中ＡＩ与ＫＩ相关，有随肿瘤的进展趋势；ｂｃｌ－２在高分化癌和早期癌中高表达：Ｃｏｘ模型多因素分析结果表明，ＫＩ指数及ｂｘｌ－２可作为临床和早期癌     

前列腺癌存活素基因表达与其临床病理特点、增殖活性及细胞凋亡的关系

为了解存活素 (survivin)在前列腺癌中的临床意义 ,作者检测了前列腺癌中存活素mRNA的表达水平 ,并对其与前列腺癌临床病理特点、增殖活性及细胞凋亡等因素的相关性进行分析。前列腺癌及对照组织标本来自1998年 7月至 2 0 0 2年 12月间行根治性前列腺切除的 15 0例患者。经病理证实并提取RNA的 16 2例标本中 ,前列腺癌82例 ,正常前列腺 80例。以G3PDH基因作对照 ,对前列腺组织存活素基因行PCR扩增。对 5 0例患者的PSA水平采用线性回归分析 ,计算术前PSA倍增时间 (PSA DT)。增殖细胞核抗原的免疫组化染色情况作为增殖活性的指标 ,…     

胰腺癌细胞中抗凋亡蛋白BAG-3的过度表达

目的 本文通过检测和比较人胰腺癌组织、正常胰腺组织和胰腺癌细胞株中BAG-3基因的mRNA转录和蛋白表达水平，揭示抗凋亡蛋白BAG-3与胰腺癌的关系。方法 采用Northern blot和Western blot的方法定性检测BAG-3在胰腺癌中的表达，采用原位杂交和免疫组织化学的方法定位检测BAG-3在胰腺癌中的表达。结果 在mRNA和蛋白水平BAG-3在所有的胰腺癌标本和胰腺癌细胞株中存在中度到高度表达，而在正常胰腺组织中呈低水平表达。原位杂交和免疫组织化学分析发现，BAG-3主要在胰腺癌组织中的肿瘤细胞表达。结论 胰腺癌细胞中抗凋亡蛋白BAG-3表达水平增高，可能与胰腺癌浸润性生长的生物学行为及体内治疗反应性差有关。     

生存素基因表达与脑胶质瘤恶性增殖及凋亡关系的研究

目的探讨凋亡蛋白抑制因子生存素(Survivin)基因在脑胶质瘤中的表达水平以及在脑胶质瘤恶性增殖和抗细胞凋亡中的作用。方法选择83例脑胶质瘤标本,采用免疫组化链霉卵白素生物素复合物(SABC)方法检测Survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达,分别计算Survivin免疫反应评分(IRS)和增殖指数(PI);采用TUNEL方法检测脑胶质瘤凋亡细胞,计算凋亡指数(AI)。结果脑胶质瘤SurvivinIRS、PI及AI分别为3.8±3.9、(28.4±19.5)%和(1.0±0.8)%,三者均随脑胶质瘤病理级别的增高而升高(P均<0.01)。Survivin阳性组PI明显高于阴性组PI(P<0.01),PI与SurvivinIRS呈显著正相关(r=0.740,P<0.01)。Survivin阳性组与阴性组之间AI差异无统计学意义(P>0.05),但AI与SurvivinIRS呈显著负相关(r=-0.307,P<0.01)。结论Survivin在脑胶质瘤中高表达,并在脑胶质瘤恶性增殖和抗细胞凋亡过程中发挥重要作用。     

VP-16诱导PC-3细胞凋亡和p53基因表达的研究

目的 研究ＶＰ－１６诱导雄激素非依赖型前列腺癌细胞ＰＣ－３凋亡和抑癌基因ｐ５３表达的关系。方法 以末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和流式细胞术（ＦＣＭ）研究ＰＣ－３细胞凋亡及细胞周期分布;以免疫组化方法研究ｐ５３蛋白的表达。结果 末端标记法显示凋亡的ＰＣ－３细胞呈明显的形态学改变,流式细胞术和免疫组化检测结果表明,随ＶＰ－１６作用浓度的增加利用和作用时间的延长,ＰＣ－３细胞的凋亡率和其ｐ５３基因表达阳性的     

奥曲肽抑制人肝癌细胞的生长及诱导其凋亡的研究

奥曲肽 (ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ)为人工合成的生长抑素八肽 ,同天然生长抑素十四肽相比 ,具有血浆半衰期长 ,作用更强大、作用时间持久等特点〔1〕。它对肿瘤的抑制作用日益受到人们的重视 ,大量的研究表明 ,奥曲肽不仅能抑制神经内分泌肿瘤的生长 ,对普通的实体性肿瘤如乳癌、胃癌、结直肠癌及胰腺癌也具有抑制作用〔2〕。对原发性肝癌作用的报道尚属罕见。本研究旨在探讨奥曲肽对原发性肝癌有无生长抑制作用 ,能否诱导其发生凋亡 ,以便从凋亡的角度阐明其作用机制。材料与方法1.细胞培养及实验分组 :人肝癌细胞株ＢＥＬ 74 0 2用含高糖的Ｄ…     

前列腺癌细胞凋亡与bcl-2蛋白表达及其意义

目的：探讨细胞凋亡及ｂｃｌ－２蛋白表达在前列腺癌（ＰＣａ）中的意义及前二者之间的相互关系。方法：采用原位细胞凋亡标记及免疫组织化学法对２５例ＰＣａ、１８例前列腺增生症 （ＢＰＨ）及１０例正常列腺的前列腺组织石蜡切片行ｂｃｌ－２蛋白及细胞凋亡检测。结果：ＰＣａ组的细胞凋亡充显著高于ＢＰＨ组及正常组,且ＰＣａ的细胞凋亡率与其分化程度呈显著负相关。ｂｃｌ－２蛋白在ＰＣａ组中表达率为３２％,与分化程度无关     

抗凋亡基因bag 1的表达及其与肝内胆管细胞癌分化的关系

目的　探讨抗凋亡基因bag 1在原发性肝内胆管细胞癌 (ICC )中的表达及其与肿瘤分化的关系。方法　采用免疫组织化学的方法 ,检测bag 1基因在ICC组织 (n =48)及肝细胞肝癌癌旁胆管上皮 (对照组 ,n =2 5 )中的表达情况。结果　ICC组的bag 1基因表达强于对照组 (P <0 .0 1)。在ICC组内 ,2 7例中低分化胆管细胞癌中bag 1基因的表达强于 2 1例高分化胆管细胞癌 (P <0 .0 1)。结论　bag 1的表达在分化越低的胆管细胞癌中越强 ,提示bag 1基因可能与其肿瘤的分化相关。     

白细胞介素12通过抑制survivin表达加强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导的肝癌细胞凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肝细胞癌(HCC)的治疗作用,以及TRAIL耐药的可能机制和逆转耐药方案。方法 采用原位杂交方法观察HCC与正常肝组织中TRAIL的表达差异。采用不同浓度的sTRAIL(可溶性)处理HCC细胞株及真核表达质粒pIRES-EGFP-sTRAIL转染HCC细胞株,观察sTRAIL的抑癌疗效。建立裸鼠肝癌模型,观察sTRAIL的体内抑癌作用。进一步,检测HCC中survivin的表达并采用反义寡核苷酸封闭治疗。最后,观测sTRAIL和IL-12联合抗癌效果。结果 肝癌组织DR表达量显著强于正常肝组织DR表达量。60例肝癌组织中54例不表达诱捕受体DcRl,25例不表达DcR2,而20例正常肝组织均表达DcR。两种．HCC细胞株中DcR1表达缺失。经sTRAIL(100ng/ml)处理24h,HCC细胞凋亡发生率约10％,而Jurkat细胞凋亡率达70％以上。体外pIRES-EGFP-sTRAIL转染对肝癌细胞杀伤作用不敏感。体内直接瘤体注射pIRES-EGFP-sTRAIL可对裸鼠肝癌无明显抑制作用。HCC高表达survivin,反义寡核苷酸封闭可部分逆转TRAIL耐药。IL-12使survivin表达明显下调,显著加强TRAIL对HCC细胞的杀伤作用。结论 HCC对TRAIL诱导的凋亡有耐药现象。survivin参与HCC对TRAIL的耐药机制,反义寡核苷酸封闭可部分逆转TRAIL耐药。IL-12可通过抑制siurvivin表达增强TRAIL对HCC杀癌作用。联合基因治疗(如TRAIL和IL-12基因)可能成为一种有前途HCC治疗方案。     

维甲酸诱导肝癌细胞株凋亡及其与midkine基因表达关系的研究

探讨在肝癌细胞凋亡过程中维甲酸 (retinoicacid ,RA )与midkine基因 (MK )的关系。笔者采用肝癌细胞株HepG2 ,用含不同浓度的全反式维甲酸 (ATRA )的培养基处理。以Annexin V FITC双标记流式细胞仪 (FCM )法测定凋亡率 ,逆转录 -多聚酶链反应 (RT PCR)法检测MKmRNA的表达变化。结果示经ATRA作用的肝癌细胞凋亡率较对照组升高 ,MKmRNA表达增加 ,且随培养基中外源性RA的浓度递升而增加 ,肿瘤细胞凋亡率及MKmRNA的表达也逐渐增高。提示ATRA可诱导肝癌细胞凋亡并促进肝癌细胞中MK的表达     

Survivin表达与脑胶质瘤增殖、凋亡及血管生成的关系

Survivin是凋亡蛋白抑制因子（IAP）家族的一个新成员，具有强大的抗细胞凋亡、促有丝分裂以及促血管生成作用，并与人类多种肿瘤的形成密切相关。本研究检测了Survivin蛋白在脑胶质瘤中的表达水平，进一步分析了其与脑胶质瘤恶性增殖、凋亡以及血管生成的关系。     

门静脉高压症患者肝外血管平增肌细胞凋亡及其相关基因表达的研究

目的 观察门静脉高压症患者肝外血管平滑肌细胞凋亡及相关基因表达,探讨其对门静脉高压症时内脏高动力循环形成的作用。方法 采用原位DNA片断末端标记(TUNEL)法和免疫组织化学法,检测28例门静脉高压症患者脾静脉和12例正常血管的平滑肌细胞凋亡及其相关基因bax、bcl-2的表达。结果 门静脉高压症患者脾静脉平滑肌细胞TUNEL阳性细胞数为(24.3±2.6)％,正常对照组仅为(0.8±0.2)％,差异有非常显著性(P<0.01),bax与bcl-2阳性表达率分别为(22.06±3.20)％和(18.61±2.00)％,与对照组比较差异有非常显著性(P<0.01)。结论 门静脉高压症患者肝外血管平滑肌细胞可产生凋亡,bax和bcl-2蛋白参与血管平滑肌细胞凋亡的调节,凋亡与增殖失衡导致血管结构重塑,促进门静脉高压症时内脏高动力循环的形成和发展。     

靶向survivin的siRNA联合凋亡相关配体对肝癌细胞的影响

目的探讨靶向survivin的siRNA联合肿瘤坏死因子诱导凋亡相关配体(tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)对肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法构建靶向survivin基因的siRNA真核表达载体,观察可溶性TRAIL对肝癌细胞增殖与凋亡的影响。结果采用RT-PCR检测显示,siRNA在mRNA水平抑制survivin基因表达为73％。MTT法检测到可溶性TRAIL对HepG2、HepG2／Silence(-)细胞增殖无明显的抑制作用(P>0．05),通过抑制survivin表达,可使HepG2／Silence(+)细胞的12 h存活率明显降低,48 h降至最低[HepG2／Silence(+)0．518±0．017,对照组0．741±0．005,P<0．01]。荧光显微镜检测HepG2／Silence(+)细胞12 h、24 h、48 h的细胞凋亡率分别为:11．85％±0．72％、28．97％±0．43％、41．80％±0．90％,与对照组相比差异有统计学意义(F=22．37,P<0．05)。结论靶向survivin的siRNA在抑制肝癌细胞中survivin表达的同时可增强TRAIL作用的敏感性。     

抑制乙肝病毒X蛋白表达对肝癌细胞上皮-间质转化和凋亡的影响

目的 探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)对肝癌细胞转移能力的影响及其机制.方法 采用siRNA干扰技术抑制MHCC97H细胞的HBx表达.通过Transwell小室和裸鼠肺转移模型实验比较HBx抑制前后MHCC97H细胞转移能力的变化.应用Western blotting技术检测肝癌细胞上皮间质转化(EMT)和凋亡相关基因的表达变化.结果 将HBx-siRNA导人MHCC97H细胞可以抑制HBx的表达及其转移能力,可下调EMT相关分子Twist和N-cadherin的表达,并上调E-cad-herin表达而抑制EMT,同时还可通过Twist-P53途径诱发细胞的凋亡.结论 抑制HBx表达可以通过改变上皮-间质转化和诱发凋亡而减弱高侵袭肝癌细胞MHCC7H的转移能力.

Abstract：

Objective To investigate the effects and possible mechanism of action of inhibiting hepatitis B virus X protein (HBx) expression on liver cancer metastasis. Methods The suppression of HBx expression in MHCC97H cells was performed by siRNA interference technique, and the effects of HBx suppression on the metastasis of MHCC97H cells were detected by Matrigel invasion assays and in a lung-metastasis mouse model. The expression levels of related epithelial-mesenchymal transition (EMT) and apoptosis proteins were examined by Western blotting. Results Introduction of HBx-siRNA into MHCC97H cells inhibited the expression of HBx and the ability to metastasize,downregulated the expression of Twist and N-cadherin, and upregulated E-cadherin expression. These changes resulted in inhibiting EMT of MHCC97H cells. Meanwhile, apoptosis involved in the Twist-P53 pathway was also found. Conclusions Inhibiting expression of HBx can decrease the metastatic a-bility of MHCC97H cells by changing EMT and inducing apoptosis.     

新维甲类化合物4HPR对人胆管癌细胞周期和凋亡的影响及可能机制

目的　探讨N hydroxyphenyl retinamide(4HPR)对人胆管癌细胞QBC939细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法　采用四甲基氮唑蓝实验 (MTT)、免疫组织化学染色、流式细胞术等技术 ,检测经 5× 10 -6mol/L 4HPR处理后 ,QBC939细胞生长增殖、细胞周期和凋亡的变化 ,以及对P2 1waf1、P2 7kip1、P5 3蛋白表达的影响。结果　 4HPR显著抑制人胆管癌细胞QBC939细胞的生长增殖 ,并呈时间、剂量依赖性。用 5× 10 -6mol/L 4HPR处理细胞后 ,细胞周期停滞于G1期。流式细胞术检测发现 ,4HPR处理 12h细胞凋亡率达 9 7% ,至 4 8h达 5 7 2 %。而P2 1waf1、P2 7kip1蛋白表达呈上升趋势 ,P5 3蛋白表达则无明显变化。结论　 4HPR具有抗增殖和诱导QBC939细胞发生凋亡的作用 ,并可导致细胞周期停滞于G1期。此种机制与其上调P2 1waf1、P2 7kip1蛋白表达有关 ,而与P5 3蛋白表达无关。     

淫羊藿苷对肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的影响

目的:探讨淫羊藿苷对肝癌细胞株SMMC-7721的抑增殖和促凋亡作用及其机制。方法:以不同浓度(0,6.25,12.5,25,50,100,200,400,800μg/mL)的淫羊藿苷作用于SMMC-7721细胞株不同时间(24,48,72 h)后,用MTT法检测药物对SMMC-7721细胞增殖状态;以不同浓度淫羊藿苷作用SMMC-7721细胞48 h后,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,用Western blot检测细胞PCNA,Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:与对照组(0μg/mL)比较,各浓度的淫羊藿苷均明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈明显的时间与浓度依赖性(均P<0.05);淫羊藿苷呈浓度依赖性诱导SMMC-7721细胞发生G0/G1期阻滞和凋亡,下调SMMC-7721细胞PCNA蛋白和Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白的表达(均P<0.05)。结论:淫羊藿苷可抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡。     

RMP基因对肝癌细胞稳定性及迁移能力的影响

目的 研究RMP基因对肝癌细胞稳定性及迁移能力的影响.方法 将SMMC-7721细胞等量分为对照组和实验组.合成RMP基因的小干扰RNA真核表达载体,转染到实验组肝癌SMMC-7721细胞内,用G418筛选出实验组干扰RMP基因的细胞株,RT-PCR检测两组细胞内RMP基因的表达,划痕实验法检测两组细胞的迁移能力.结果 成功构建稳定的RMP基因干扰细胞株,与未干扰细胞对照组比较,实验组细胞p21基因表达减弱,细胞迁移能力降低.结论 RMP基因有维持肝癌细胞基因组稳定的重要作用,对保持细胞的迁移能力也有作用.     

ω-3多不饱和脂肪酸对肝癌细胞生长抑制的作用及机制

目的 探讨ω-3多不饱和脂肪酸对肝癌细胞生长增殖的抑制作用及机制.方法 采用MTT法、生长曲线和PCNA免疫组织化学法观察ω-3多不饱和脂肪酸对肝癌细胞HepG2生长增殖的影响,并用荧光染色、透射电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 DHA和EPA分别在15～75μg/mL浓度范围内呈剂量-时间依赖性方式抑制HepG2细胞的生长增殖.DHA和EPA(45μg/mL)作用48 h后,荧光染色与透射电镜可见部分HepG2细胞呈典型的凋亡形态学改变.流式细胞仪检测:与对照组比较,DHA和EPA分别在浓度45 μg/mL和60μg/mL作用48 h后,细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).结论 ω-3多不饱和脂肪酸能显著抑制肝癌细胞生长,并诱导其凋亡.     

共刺激分子CD80基因转染对肝癌细胞恶性表型的影响

肝癌是一种弱免疫原性肿瘤,尽管肝癌细胞表面表达较高水平的HLA Ⅰ类分子,具有较强抗原递呈能力,但因缺乏或低水平的B7-1分子表达,其免疫原性很弱。我们通过人B7-1基因的转染建立B7-1分子高表达的肝癌细胞株,为进一步的研究奠定基础。