拮抗葡萄灰霉病贝莱斯芽孢杆菌的生长特征及对相关防御酶活性的影响

为了明确贝莱斯芽孢杆菌TP-1对葡萄灰霉病的抗病机制,通过抗生素标记法筛选抗性标记菌株,成功获得能抗300μg/mL利福平的标记菌株TP-1R,研究了标记菌株的抗性遗传稳定性及其对葡萄灰霉病的拮抗作用,并分析其在葡萄中的定殖情况以及对葡萄果实内防御酶活性的影响。结果表明,标记菌株在经15次传代培养后,仍能在含利福平的培养基中稳定生长,且标记菌株对灰霉病的拮抗作用与原始菌株无明显差异。检测到标记菌株在葡萄上的定殖量于贮藏(20℃)第15 d达到峰值,为4.32×10⁶ CFU/g,在贮藏第30 d菌株定殖数量仍可达到3.11×10⁶ CFU/g,菌株TP-1能在葡萄上稳定定殖;接种菌株TP-1发酵液能有效抑制灰霉病的发生,降低葡萄采后腐烂率。在贮藏期间,葡萄防御酶PAL、PPO、APX活性均呈先上升后下降的趋势,拮抗菌TP-1处理组的3种酶活性显著高于CK(P<0.05),在第15 d时,拮抗菌处理组PAL、PPO、APX活性是CK的1.23、1.19、2.01倍。菌株TP-1在葡萄上的定殖可诱导葡萄PAL、PPO、APX活性的提高,在一...     

贝莱斯芽孢杆菌发酵液对樱桃番茄贮藏品质的影响

樱桃番茄富含营养,在采后贮藏过程中其品质受到各种因素的影响而下降,为提高采后果实品质并延长货架期,亟待寻求一种安全有效的保鲜措施。以综合性评价、感官属性及风味与营养3个方面为评价指标,探究贝莱斯芽孢杆菌A4发酵液对樱桃番茄的保鲜效果。结果表明贝莱斯芽孢杆菌A4发酵液明显降低樱桃番茄的腐烂率和失重率,贮藏第12天,对照组腐烂率为27.97%,而发酵液处理组腐烂率为6.38%,且处理组的失重率显著低于对照组。贝莱斯芽孢杆菌A4发酵液可保持樱桃番茄的硬度、脆性、紧实度,延缓可滴定酸、可溶性固形物、类黄酮、番茄红素、酚类物质的损失,具有显著的保鲜效果。进一步探究发现贝莱斯芽孢杆菌A4发酵液可提高樱桃番茄超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化物酶（peroxidase,POD）、丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia lyase,PAL）3种抗性酶的活性,并能够抑制丙二醛（malondialdehyde,MDA）的积累,从而保持樱桃番茄的贮藏品质。     

贝莱斯芽孢杆菌zk1对鹰嘴桃果肉组织的影响及酶学特性

目的:通过研究病原菌的酶学特性间接了解病原菌在不同条件下对宿主的致病能力.方法:结合鹰嘴桃被菌株Bacillus velezensis zk1侵染前后的成分检测和透射电镜观察,并通过单一底物诱导该菌株产生淀粉酶、纤维素酶、果胶酶和木聚糖酶,研究温度、pH和金属离子对其酶活力的影响.结果:鹰嘴桃被该菌侵染后果肉组织细胞受...     

2株樱桃腐败真菌的鉴定及贝莱斯芽孢杆菌对其抑制作用

为了获得绿色、安全的樱桃天然防腐保鲜剂,从腐败的樱桃上分别分离出2株主要的腐败菌,经菌落形态和分子生物学鉴定,初步鉴定为链格孢菌(Alternaria alternata)和总状毛霉(Mucor racemosus),分明命名为BC-1和SC-1。从实验室保存的菌种库中筛选出两株对樱桃腐败菌抑菌效果较好的芽孢杆菌,通过形态学及分子生物学鉴定,初步确定均为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),分别命名为KA-2和XK-5。采用LB和landy培养基发酵两株菌,用贝莱斯芽孢杆菌的两种培养基发酵液酸沉后浸泡的方法研究其对樱桃的防腐保鲜作用,发现贝莱斯芽孢杆菌XK-5 landy发酵液酸沉提取物具有更好的防腐保鲜作用。该贝莱斯芽孢杆菌菌株有望作为生产新型绿色、安全的生物防腐保鲜剂的优良菌种。     

不同处理方式对厚皮甜瓜的贮藏保鲜效果研究

以陕西省阎良区厚皮甜瓜为试材,采用1-甲基环丙烯（1-MCP）、焦亚硫酸钠（Na2S2O5）、噻苯咪唑（TBZ）结合气调等处理方法,研究了厚皮甜瓜的采后生理变化及贮藏品质,得出了厚皮甜瓜的贮藏方法。结果表明,采用1-MCP结合Na2S2O5处理,能抑制苯丙氨酸解氨酶（PAL）和过氧化物酶（POD）的活性,使过氧化氢酶（CAT）和超氧化物岐化酶（SOD）活性处于较高水平,明显延缓厚皮甜瓜硬度的下降,抑制可溶性固形物含量快速上升,有效地减少果实腐烂,用该处理贮藏80d,果实腐烂指数0.37,商品果率80%。另外,厚皮甜瓜在TBZ结合气调的方式下贮藏也具有较好的贮藏保鲜效果。      

不同处理方式对厚皮甜瓜的贮藏保鲜效果研究

以陕西省阎良区厚皮甜瓜为试材,采用1-甲基环丙烯(1-MCP)、焦亚硫酸钠(Na2S2O5)、噻苯咪唑(TBZ)结合气调等处理方法,研究了厚皮甜瓜的采后生理变化及贮藏品质,得出了厚皮甜瓜的贮藏方法。结果表明,采用1-MCP结合Na2S2O5处理,能抑制苯丙氨酸解氨酶(PAL)和过氧化物酶(POD)的活性,使过氧化氢酶(CAT)和超氧化物岐化酶(SOD)活性处于较高水平,明显延缓厚皮甜瓜硬度的下降,抑制可溶性固形物含量快速上升,有效地减少果实腐烂,用该处理贮藏80d,果实腐烂指数0.37,商品果率80%。另外,厚皮甜瓜在TBZ结合气调的方式下贮藏也具有较好的贮藏保鲜效果。     

贝莱斯芽孢杆菌粗提物对金黄色葡萄球菌的抑菌机制

本研究旨在探究贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)粗提物对食源性病原菌-金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,PJ-1)的抑菌机制.以贝莱斯芽孢杆菌为原材料,用不同极性的有机溶剂萃取得到不同组分,采用牛津杯法筛选对PJ-1有良好抑菌活性的组分,运用气相色谱-质谱(GC-MS)对...     

贝莱斯芽孢杆菌F85对烟草炭疽病的生防作用研究

为明确贝莱斯芽孢杆菌对烟草炭疽病的生防作用,通过贝莱斯芽孢杆菌BacillusvelezensisF85和烟草炭疽病菌Colletotrichum fructicola共培养试验,测定了不同浓度的F85无菌发酵滤液（0.5%～20%）对C. fructicola的菌丝生长、分生孢子萌发及附着胞形成的影响,评价了F85对活体叶片的烟草炭疽病的防治效果。结果表明：（1）贝莱斯芽孢杆菌F85对C. fructicola、C. kahawae、C. karstii、C. siamense均表现出较好的拮抗作用,具有广谱抑菌效果。（2）贝莱斯芽孢杆菌F85可有效抑制烟草炭疽菌C. fructicola菌丝的生长,同时抑制炭疽菌分生孢子的萌发和附着孢形成。随F85无菌发酵滤液浓度升高,对C. fructicola的抑制作用更明显。20%F85无菌发酵滤液处理C. fructicola菌丝干质量抑制率和分生孢子芽管畸形率均达100%。（3）5%浓度以上的贝莱斯芽孢杆菌F85无菌发酵滤液对活体烟草炭疽病的防效高于70%。本研究丰富了烟草炭疽病生防菌资源,为开展烟草炭疽病的生物防治提供了理论依据。     

贝莱斯芽孢杆菌角蛋白酶的克隆表达、纯化及酶学性质

为了获得更好的羽毛粉降解酶,本文从贝莱斯芽孢杆菌基因组中筛选到一个角蛋白酶基因（baker1）,对其克隆并在大肠杆菌BL21（DE3）中异源表达,最后对重组角蛋白酶（BaKer1）进行了分离纯化、表征及应用研究。实验结果表明,BaKer1的最适反应pH为9.5,最适反应温度为55℃,在中温和碱性条件下具有较好的稳定性。1 mmol/L Ca²⁺对BaKer1有显著地促进作用,5 mmol/L Mn²⁺对BaKer1有轻微地抑制作用,其他金属离子对BaKer1影响不大。PMSF对BaKer1的活性具有显著抑制作用,表明BaKer1是典型的丝氨酸蛋白酶。分别以羽毛粉、偶氮酪蛋白、酪蛋白为底物测定了BaKer1的动力学参数,K_m值分别为5.06、1.09和1.39 mmol/L,k_cat/K_m值分别为1 058.24、2 536.54和3 733.79·(s·mmol/L)。BaKer1处理羽毛粉,能达到酸水解效果的 33.51%,说明它在羽毛粉降解过程中具有潜在的应用价值。     

一株贝莱斯芽孢杆菌的分离鉴定及其益生潜力评价

贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)为芽孢杆菌属新型细菌。采用梯度稀释法及抑菌圈法进行菌株的分离和筛选,综合形态观察和16S rDNA序列比对对分离的菌株进行鉴定。通过高盐、胆盐、pH、模拟胃肠液、温度和抗生素等耐受性测定,结合体外抗氧化能力、抑菌活性以及溶血和动物饲喂试验,对分离菌株进行益生潜力评价。结果显示,从农家酱中分离出一株菌PJP10,初步鉴定为贝莱斯芽孢杆菌。该菌对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)和黑曲霉(Aspergillus niger)等拮抗效果显著,可以耐受8%NaCl、0.5%胆盐、100℃水浴、pH 2和模拟胃肠道的环境,对于头孢类、阿奇霉素等14种常用抗生素敏感。同时菌株PJP10无菌发酵液具有较好的抗氧化活性,对ABTS阳离子和DPPH自由基的清除率分别为(95.66±3.1)%和(44.84±2.2)%,Fe³⁺     

Bacillus pumilus HN-10对Trichothecium roseum的拮抗作用及菌体结构的影响

探究一株分离自腐败马铃薯湿粉条的短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus HN-10)对粉红单端孢(Trichothecium roseum)的拮抗作用及菌体结构的影响.采用体外拮抗法检测其对T.roseum菌丝体生长和孢子萌发的影响,结合甜瓜(Cucumis melo L)损伤接种试验验证其对病害控制效果,测定了供试病原菌粉红单端孢的生长曲线,电导率,胞内蛋白和核酸渗出量等生理,生化指标,并借助扫描电镜图像来进一步考察拮抗效果.结果表明:短小芽孢杆菌(B.pumilus HN-10)发酵液对T.roseum菌丝生长和孢子萌发有明显抑制效果,发酵液对接种粉红单端孢的甜瓜引起的腐烂抑制效果显著,且随发酵液浓度越大,伤口腐烂病斑直径越小;发酵液蛋白粗提物能够抑制T.roseum菌体生物量增加;电导率、吸光度(OD_(260),OD_(280))及扫描电镜结果发现,该粗提物处理改变或破坏了细胞膜结构完整性,提高了细胞膜的通透性,使胞内物质渗出.     

高压热杀菌处理对枯草杆菌芽孢皮层裂解酶活力的影响

高压热杀菌处理(HPTS)下芽孢皮层肽聚糖水解是造成细菌芽孢死亡的重要原因,芽孢自身皮层裂解酶活力变化对皮层肽聚糖水解有直接影响。本文从枯草杆菌芽孢中提取了皮层裂解酶,先研究了磷酸钠浓度、pH、温度和压力对皮层裂解酶活力的影响,在此基础上研究了HPTS对该酶活力的影响。结果发现,皮层裂解酶的最适磷酸钠浓度为0.05 mol/L,当磷酸钠浓度为0.35 mol/L 时,皮层裂解酶活力较低;当pH为7时,皮层裂解酶活力最强,偏酸或偏碱性条件下,活力均有所降低;在4~44 ℃时皮层裂解酶均具活力,酶活变化无明显规律,但当温度升至68 ℃时皮层裂解酶基本失活;在150~530 MPa压力范围内,压力对皮层裂解酶活性基本无影响,然而HPTS处理时(530 MPa、68 ℃、15 min),皮层裂解酶基本失活,而皮层裂解酶是芽孢中唯一能特异性地水解皮层肽聚糖的酶,由此可推测HPTS处理下皮层肽聚糖发生了非酶水解。     

臭氧处理对金针菇保鲜效果的影响

为研究臭氧气体处理对金针菇保鲜效果的影响,本实验选用白色金针菇作为实验材料,分别用5个浓度的臭氧气体处理金针菇,然后在低温(4℃)条件下贮藏,并测定贮藏期间金针菇的感官品质、失重率、可溶性固形物、蛋白质、丙二醛(MDA)、过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性的变化,比较不同臭氧气体浓度处理对金针菇的保鲜效果。结果表明:用臭氧浓度为16.6 mg/L处理过的金针菇保鲜效果最好,臭氧处理有效地保持了金针菇的感官品质,延缓了可溶性固形物的下降,保持较高的蛋白质含量,控制了MDA含量的上升,抑制了PPO活性的增加,并能保持较高的POD活性,有效减缓了金针菇的衰老速度。     

Bacillus amyloliquefaciens MBRC1的鉴定与抗菌活性研究

从台州市剑门港海区的海底淤泥中采集样品分离得到4株具抗菌活性的微生物,其中一株具有较强的抗菌活性。对该菌作了形态学、生理生化、分子生物学、（G+C）mol%含量等研究,确定该菌株属于芽孢杆菌属,命名为Bacillus amyloliquefaciens MBRC1。采用BLAST Clustal W（V 1.83）及Mega（V 5.1）等软件对其进行了系统发育树的分析,确立了该菌株在系统发育上的地位。采用不同的培养基对该菌株进行发酵培养,利用牛津杯法对该菌胞外的抑菌活性物质的抑菌效果进行了研究,结果显示：Bacillus amyloliquefaciens MBRC1胞外具有较强的抑菌活性物质,且对金黄色葡萄球菌（S. aureus）、枯草杆菌（B. subtilis） 和大肠杆菌（E. coli） 均有较好的抑菌效果。     

贝莱斯芽胞杆菌F10促生作用及对烟草青枯病的防治效果

为明确植物根际促生细菌（Plant growth-promoting rhizobacteria,PGPR）对烤烟促生和抗病作用,以前期试验分离获得的贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）F10为材料,通过盆栽和田间小区试验考察其对烟草的促生作用和对烟草青枯病的防治效果。结果表明,生防菌F10处理后,烟草根系和地上部生长显著优于对照,烟草叶片过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性提高。盆栽和田间小区试验中生防菌F10对烟草青枯病的防治效果分别为60.49%和54.91%,大田烟叶产量、上等烟比例和上中等烟比例比对照分别提高11.82%、31.46%和13.17%。生防菌F10对烟草生长具有促进作用,对烟草青枯病具有较好的防治效果,烤烟经济效益显著提高。      

Bacillus sphaericus 2297蛋白酶基因sph在毕赤酵母中的表达及重组酶酶学性质

将Bacillus sphaericus 2297蛋白酶基因sph进行毕赤酵母密码子优化后,进行全基因合成,并构建了重组酵母菌P. pastoris X33-ppicZalphA-sph,对重组酶进行酶学性质研究。结果表明,重组酶的最适反应温度和最适反应pH为40 ℃和8.0,且其为20~30 ℃中保温10 h仍有80%以上的酶活力、在pH7.0~9.0条件下孵育24 h,仍能保持60%以上的酶活性。K+、Sr2+对酶活有明显激活作用,而Fe3+、Ba2+对酶活有明显抑制作用;重组蛋白酶SPH在极性常数为0.8~3.1的25%的正丁醇、环己烷、二甲苯中孵育6 d后,仍能保留50%以上的酶活性。本研究为B. phaericus 2297和B. phaericus DS11蛋白酶有机溶剂耐受性机制的研究奠定基础。     

阿魏酸对大肠杆菌和蜡状芽孢杆菌产组胺的影响

以产组胺的大肠杆菌(E. coli)和蜡状芽孢杆菌(B. cereus)两株菌为研究对象,通过双倍琼脂稀释法,得出阿魏酸对其最低杀菌浓度(MBC)和最低抑菌浓度(MIC);并利用高效液相色谱法(HPLC)检测不同浓度的阿魏酸对两株菌株产组胺的影响,从而明确阿魏酸对其产组胺的抑制作用。结果表明:阿魏酸对供试菌株都具有较强的抑菌活性,且抑菌效果随着阿魏酸浓度的增大而增强;阿魏酸对E. coli的MIC为0.031%,对B. cereus的MIC为0.063%;当阿魏酸的添加量为MIC时,E. coli和B. cereus的生长均受到抑制,导致组胺含量显著降低(p<0.05),E. coli和B. cereus所产组胺量较空白对照组分别降低了18.45%和25.78%。所以,阿魏酸是一种能够显著抑制组胺的优良添加物,在食品工业中具有很好的应用前景。     

枯草芽孢杆菌发酵提取物对大肠杆菌的抑制作用

为探索枯草芽孢杆菌发酵提取物对大肠杆菌的抑菌效果及作用机理,利用倍半稀释法确定其对大肠杆菌的最小抑菌浓度,通过研究枯草芽孢杆菌发酵提取物对大肠杆菌生长曲线、细胞膜通透性以及细胞超微结构的影响,探讨提取物对大肠杆菌的抑制作用机理,同时对该提取物的化合物类型进行了初步分析。结果表明,该提取物对大肠杆菌具有明显的抑制作用,其最小抑菌浓度为0.614 mg·mL^-1,在大肠杆菌生长的延滞期和对数期加入该提取物,比在稳定期加入能够显现出更好的抑菌效果。经提取物作用后的细胞表面粗糙,边缘模糊,细胞膜破裂,表明该提取物能够增加大肠杆菌细胞膜的通透性。化合物分析显示,提取物中抑菌成分主要是多烯类化合物和脂肽类化合物。     

解淀粉芽孢杆菌psd基因过表达对胞苷发酵的影响

以解淀粉芽孢杆菌BG-09(Bacillus amyloliquefaciens BG-09)为出发菌株,分析代谢途径中与细胞膜渗透性有关的基因psd,研究过表达基因psd对胞苷发酵的影响。以解淀粉芽孢杆菌BG-09基因组为模板克隆psd,构建了含psd的重组质粒pHT43-psd,通过化学转化法转入菌株大肠杆菌DH5α,验证成功后将其转入B.amyloliquefaciens BG-09,获得重组菌株B.amyloliquefaciens BG-09-psd。将B.amyloliquefaciens BG-09-psd菌株通过摇瓶发酵,研究过表达基因psd对菌体的生长、胞苷和尿苷产量积累的影响。结果显示,重组菌株B.amyloliquefaciens BG-09-psd发酵液中胞苷浓度为1.199 g/L,与对照菌株B.amyloliquefaciens BG-09相比,提高了15.51%,尿苷浓度为0.552 g/L,增加了6.56%,表明过表达基因psd可促进胞苷的积累。     

超高压对木瓜蛋白酶构象及酶活力的影响

为研究超高压对木瓜蛋白酶构象变化与酶活力的影响,本研究利用红外光谱法和荧光光谱法对木瓜蛋白酶经超高压处理后的结构变化及特定氨基酸微环境变化进行了分析。结果表明：与常压相比,超高压处理对木瓜蛋白酶活力均有显著影响（P＜0.05）。其中,200 MPa、37 ℃、20 min处理时,酶活力在所选处理范围内达到最大,较常压下的酶活力提高了6.8%;红外光谱结果表明：超高压处理后,木瓜蛋白酶二级结构变化与酶活力变化相关性较差;荧光光谱结果显示：200 MPa、37 ℃处理木瓜蛋白酶20 min,228 nm波长激发后木瓜蛋白酶的外源性荧光强度达到最低（2 023）,荧光强度变化与酶活力变化规律有良好的相关性。因此,木瓜蛋白酶活性变化与疏水性氨基酸的暴露程度有关,暴露程度越小,酶活力越大。