细胞周期相关因子cdt1和geminin在急性白血病患者中的表达(英文)

本研究旨在检测geminin和cdt1在初诊急性白血病(AL)患者外周血或骨髓细胞中的表达水平,并进一步探讨其在AL发病机制中的作用。采用SYBR Green实时定量逆转录聚合酶链反应(SYBR-RT-PCR)技术,检测初诊AL患者外周血或骨髓细胞geminin和cdt1mRNA的表达。结果表明:13例ALL初诊患者外周血中有10例孪蛋白(geminin)和cdt1mRNA表达阳性,阳性率为76.92%;14例AML初诊患者外周血中有9例表达阳性,阳性率为64.29%;而正常对照组中无阳性表达(0/10)。ALL和AML初诊患者骨髓细胞中geminin和cdt1mRNA表达(ALL:108.06±67.34,52.37±35.16;AML;62.66±58.69,26.68±22.29)均高于对照组(11.81±2.83,7.32±5.77),差异有统计学意义(p<0.01,p<0.05);34例初诊AL患者骨髓细胞中geminin和cdt1mRNA的表达呈明显的正相关(r=0.55,p<0.01)。结论 :geminin与cdt1在初诊AL患者中表达增高,且两者在AL骨髓细胞呈正相关,其过度表达可能在AL的...     

急性白血病病人骨髓细胞BAALC基因表达及意义

目的通过检测脑和急性白血病胞质（BAALC）mRNA在急性白血病（AL）病人表达,探讨其与AL病情进展及预后关系。方法应用逆转录聚合酶链反应技术,检测20例急性髓系白血病（AML）、8例急性淋巴细胞白血病（ALL）及11例特发性血小板减少性紫癜（ITP）、缺铁性贫血（IDA）等非恶性血液病病人（对照组）骨髓单个核细胞BAALC mRNA表达水平。结果初治组AL病人BAALC mRNA表达水平较对照组显著升高（F=8.59,q=5.62,P〈0.05）;经治疗获完全缓解后,与初治组比较,其表达水平显著下降,两组比较差异有显著性（q=3.99,P〈0.05）。BAALC mRNA表达水平与AL病人外周血白细胞计数及骨髓原始细胞比例无明显相关性（P〉0.05）。结论 BAALC mRNA表达与AL疾病进展及预后密切相关,可作为AL预后判断的有意义指标。     

白血病患者WT1基因表达的研究

目的：探讨WT1基因与白血病发病的关系和临床意义。方法：采用逆转录－巢式聚合酶链反应（RT－巢式PCR）方法检测了K562和HL－60两个白血病细胞系、49例急性白血病（AL）患者、33例慢性髓系白血病（CML）患者和25例正常对照的WT1基因表达。结果：K562和HL－60两个白血病细胞系、29例初治或复发AL患者中有21例、20例完全缓解（CR）期AL中有1例、18例CML急变期中有15例、5例CML加速期中有1例、10例CML慢性期患者中有1例表达WT1基因。WT1基因表达见于所有AL亚型，其相对水平与急性白血病的CR率有相关性。≥1．0的患者CR率低及生存期短。在CML中WT1基因表达表现出明显的阶段性，与慢性粒细胞白血病临床阶段及病情进展有关。结论：WT1基因表达与白血病发生有关，WT1基因高表达的患者CR率低、无病生存期短，可作为判断急性白血病预后和监测微量残留病的一项指标，也可作为CML急变的一项诊断指标。     

儿童急性白血病WT1和bcl-2基因的表达及意义

目的研究急性白血病患儿WT1和bcl-2基因表达情况及其相关性，探讨两者与儿童急性白血病发病机制和预后的关系。方法应用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定56例急性白血病患儿及12例对照患儿的WT1基因表达，同时采用免疫荧光流式细胞术观察40例急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿抗凋亡基因bcl-2的表达。结果56例急性白血病患儿中38例WT1基因表达阳性，较对照组明显为高（P＜0．01）；在ALL和急性髓系白血病（AML）患儿WT1基因表达阳性率分别为65．96％和77．78％，差别没有统计学意义（P＞0．05）；WT1表达阳性患儿的完全缓解率（CR）低于表达阴性患儿（P＜0．05）。40例ALL患儿中bcl-2高表达28例，较对照组明显为高（P＜0．01）；AML患儿的bcl-2表达与WT1基因表达正相关（Pearson相关系数为0．262）；bcl-2高表达患儿CR低于低表达患儿（P＜0．05）；联合WT1及bcl-2表达情况将ALL患儿分为高危、中危和低危三组，其CR率分别为33．33％、72．73％和100％，三组间差异有显著性（P＜0．05）。结论WT1基因和bcl-2表达与儿童急性白血病的发病和预后密切相关；WT1基因及bcl-2的共同表达情况可作为预测ALL患儿预后的重要指标。     

AML1/ETO9a异构体在M2型急性髓系白血病中表达的研究

目的研究AML1／ETO9a异构体在急性髓系白血病M2型（AML—M2）中的表达。方法应用R带染色体核型分析，结合RT—PCR技术检测各型白血病、骨髓增生异常综合征（MDS）、白血病细胞系及正常人骨髓中AML1／ETO融合基因和AML1／ETO9a异构体的表达。结果在30例初诊AML-M2中有15例AML1／ETO9a异构体表达阳性，同时在20例AML—M2完全缓解患者、18例非M2型急性白血病患者、5例慢性粒细胞白血病（CML）患者、3例MDS患者、3个白血病细胞系（NB4、KG-1、K562）及5份正常骨髓标本中均未检测到AML1／ETO9a异构体。15例AML1／ETO9a异构体阳性患者中有13例同时具有AML1／ETO融合基因及t（8；21），2例仅表达AML1／ETO9a异构体，AML1／ETO融合基因及t（8；21）均未检测到。结论AML1／ETO9a异构体可能与AML—M2相关，并可能与AMLI／ETO融合基因共同参与白血病的发生。     

实时定量RT-PCR检测白血病细胞B7-H1基因表达及其临床意义

目的 检测白血病患者骨髓单个核细胞（BMMNC）B7-H1基因的表达情况，并探讨B7-H1基因表达的临床意义。方法 应用SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR法（RQ-PCR）检测74例初治白血病患者及10名正常人BMMNCB7-H1mRNA表达情况，并跟踪检测12例化疗后获得完全缓解（CR）和5例复发患者B7-H1mRNA表达情况。对74例白血病患者的临床特征与B7-H1基因表达水平进行相关性分析。结果 初治白血病患者BMMNCB7-H1mRNA表达阳性，但表达水平低于正常人，两组基因定量比较值RQ为0．125。诱导化疗获得CR后B7-H1mRNA表达水平较治疗前升高，治疗前后两者定量比较值RQ为69．070，差异具有统计学意义（P=0．001）；复发时B7-H1mRNA表达水平较治疗前亦升高，复发与治疗前比较为4．00。B7-H1基因表达水平与患者性别、年龄、外周血白细胞计数、骨髓中幼稚细胞比例、CD34抗原阳性与否均无相关性，与治疗反应有显著相关性。诱导化疗后未获CR的患者，其治疗前B7-H1mRNA表达水平明显高于化疗后获得CR的患者，两组定量比较值为26．91（P=0．005）。结论 初治白血病患者BMMNCB7-H1基因呈低水平表达，诱导化疗获得CR后B7-H1mRNA表达水平较治疗前升高。B7-H1基因表达水平与患者的治疗反应有显著相关性。     

脑膜瘤1基因在急性白血病中的表达及意义

目的 探讨急性白血病(acute leukemia, AL)患者细胞中脑膜瘤1基因(meningioma 1, MN1)的表达情况及意义.方法 将76例AL分为新近诊断AL组57例,AL复发组10例,AL持续完全缓解(CCR)组9例.新近诊断的AL组治疗后按效果分为AL完全缓解(CR)组42例,未完全缓解组15例.选择 20例健康者作为正常对照组.均采用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)法检测细胞中MN1 mRNA表达情况.结果 新近诊断AL组 MN1 mRNA表达水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05).AL复发组MN1 mRNA表达水平高于新近诊断AL组,差异无统计学意义(P>0.05);与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).CCR组MN1 mRNA表达水平较正常对照组高,差异无统计学意义(P>0.05);低于新近诊断AL组,差异有统计学意义(P<0.05).CR时间短于3年的患者MN1 mRNA表达水平较正常对照组高,差异无统计学意义(P>0.05);低于新近诊断AL组,差异有统计学意义(P＜0.05);高于CCR组,差异无统计学意义(P>0.05).MN1 mRNA在新近诊断急性髓系白血病M2、M3、M4、M5、M6各亚型间表达水平不一,但差异无统计学意义(P>0.05).M3亚型中MN1 mRNA表达水平最低,高于正常对照组,但差异无统计学意义(P>0.05).MN1 mRNA在新近诊断急性淋巴细胞白血病L1、L2、L3各亚型间表达水平不一,差异亦无统计学意义(P>0.05).结论 MN1可能参与AL的发病及病情演变,随病情缓解,MN1表达水平减低或转为阴性,病情复发时MN1表达转为阳性或表达增高.     

急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因实时定量RT-PCR标化法和常规法计算的比较

目的 改进实时定量RT-PCR的检测计算方法,提高定量RT-PCR在急性早幼粒细胞白血病(APL)微量残留病变监测的临床应用价值.方法 采用实时定量RT-PCR和常规定性RT-PCR检测31例APL患者在治疗前后融合基因PML-RARα的表达水平,对两种计算方法进行比较:常规按照患者治疗前后自身比较计算(常规法)和治疗前标准化基线水平计算(标化法).结果31例患者采用两种定量计算方法结果近似,标化法计算结果示患者在治疗缓解、巩固治疗和维持治疗期间融合基因PML-RARα转录本对数下降值分别为(2.0±1.9)、(4.9±1.4)和(5.7±0.1),常规法计算结果为(1.9±1.9)、(4.8±1.3)和(5.7±0.4).在维持治疗阶段标化法定量RT-PCR的结果显示患者个体差异更小.按照标化法计算结果,次要分子生物反应(对数值≥3)和主要分子生物反应(对数值≥5)标准仍然适用.结论 采用标化法计算实时定量RT-PCR结果能较好的对APL患者的微量残留病变进行监测,一定程度上降低了患者个体差异对检测结果的影响,同时适用于治疗前标本缺如的患者.     

实时定量RT-PCR检测急性白血病患者骨髓细胞WT1基因表达

目的探讨急性白血病 (AL)患者骨髓细胞WT1基因表达水平。方法建立实时定量RT PCR方法 ,检测了 10 8例AL患者和 2 3例非白血病患者骨髓细胞WT1基因及内参照 β 胆色原脱氢酶 (GAPDH)基因的表达水平。结果初诊与复发AL患者骨髓细胞WT1基因中位表达水平经GAPDH校正后分别为 75 .10和 89.5 6 ,明显高于完全缓解组和对照组 (分别为 2 .0 7和 1.5 1) ,对照组与完全缓解组之间及初诊与复发组之间无统计学差异 ;70例初诊AL中急性淋巴细胞白血病、M1、M2 、M3 亚型WT1基因表达水平明显高于M5,即粒系表达明显高于单核系 ,且WT1基因表达水平与白细胞计数、骨髓原始细胞比例、mdr1基因表达无相关性 ,但与染色体核型有关。对其中 2例患者动态检测WT1基因表达可提示白血病复发情况。结论WT1基因在AL患者骨髓细胞高表达 ,可作为白血病疗效评价及监测残留病灶的指标。     

荧光定量PCR检测急性髓细胞白血病患者BAALC基因及临床意义

目的研究急性髓细胞白血病（AML）患者BAALC（brain and acute leukemia cytoplasmic）基因的表达水平及其临床意义。方法构建实时定量PCR检测BAALC基因表达的技术，并定量检测63例初治AML患者BAALC基因的表达水平及分析其与临床疗效的关系。结果建立的实时定量PCR方法的标准曲线相关系数大于0．99。49例（78％）初治AML患者存在BAALC基因表达；BAALC基因高表达患者发病时外周血WBC计数、Hb浓度、PLT计数及骨髓白血病细胞比例分别为：（26．3±18．1）×10^9／L、（78．3±21．8）g／L、（76．9±64．5）×10^9／L和（61．2±22．3）％，低表达患者发病时外周血WBC计数、Hb浓度、PLT计数及骨髓自血病细胞比例分别为：（30．2±21．7）×10^9／L、（81．6±30．9）g／L、（73．9±57．2）×10^9／L和（54．3±16．3）％，两组间差异无统计学意义（P〉0．05）；正常核型初治AML患者中BAALC高表达率为68％（25／37），高于非正常核型AML患者[23％（6／26）]，差异有统计学意义（Х^2=12．093，P=0．001）；正常核型初治AML患者中BAALC基因高表达患者化疗的完全缓解率（CR）为65％（20／31），低于低表达患者[84％（27／32）]，差异有统计学意义（Х^2=6．573，P=0．013）。结论BAALC基因高表达是正常核型AML患者一个重要不良预后因素。     

AML病人MN1和PTEN基因表达及临床意义

目的探讨脑膜瘤1（MN1）基因和PTEN基因表达与急性髓系白血病（AML）病情发展及预后的关系。方法采用RT-PCR技术检测38例AML病人（初治组16例,缓解组12例,复发组10例）骨髓单个核细胞中MN1和PTEN mRNA的表达水平,另取非恶性血液病病人及正常人骨髓共13例作正常对照组。结果 MN1和PTEN mRNA在AML病人骨髓单个核细胞中阳性表达率分别为76.3%和60.5%。初治组MN1 mRNA表达水平较正常对照组显著升高,PTEN mRNA表达水平较正常对照组显著下降（F=2.385、2.054,q=2.305、2.867,P〈0.01）;缓解组MN1 mRNA表达水平下降,PTEN mRNA表达水平上升,与初治组比较差异均有统计学意义（q=2.121、2.756,P〈0.05）;在复发组中MN1 mRNA的表达水平复又升高,PTEN mRNA的表达水平复又下降,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（q=2.361、2.723,P〈0.05）。MN1和PTEN基因在AML中的表达水平呈负相关（r=-0.321,P〈0.05）。结论 MN1和PTEN基因的表达与AML发病及预后密切相关,可作为AML发病、复发及预后判断的有意义指标。     

急性白血病病人黏着斑激酶的表达及临床意义

目的观察黏着斑激酶（FAK）在急性白血病（AL）病人白血病细胞中的表达及临床意义。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测50例AL病人白血病细胞FAK mRNA的表达水平,以10例健康人作为正常对照。收集病人骨髓细胞,用24h常规培养方法制备染色体,采用R显带技术分析其染色体核型。结果正常对照组FAK mRNA阳性表达率为20.0%,AL病人为66.0%,差异有显著性（χ2=5.49,P〈0.05）。其中急性淋巴细胞白血病（ALL）和急性非淋巴细胞白血病（ANLL）病人FAK mRNA阳性表达率和表达水平均高于正常对照组（P=0.04,χ2=4.44,t=7.98、5.60,P〈0.05）,但ALL和ANLL比较差异无显著性（P〉0.05）。初诊和复发AL病人白血病细胞FAK mRNA阳性表达率和表达水平比较差异无显著性（P〉0.05）,但均高于正常对照组（χ2=9.38,P=0.02,t=8.79、7.58,P〈0.05）。缓解组病人FAK mRNA阳性表达率和表达水平明显低于初诊组和复发组（χ2=10.26,P=0.02,t=4.43、7.82,P〈0.05）,与正常对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。AL病人异常核型检出组FAK mRNA的表达率和表达水平均明显高于未检出组（χ2=5.82,t=6.72,P〈0.05）。结论 FAK mRNA在AL中存在较高的表达,且与疾病的转归相关,可能为白血病的治疗提供新靶点。     

急性白血病病人XIAP表达及其临床意义

目的探讨急性白血病（AL）病人X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）的表达及临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应技术检测了46例不同类型、不同阶段AL病人白血病细胞中XIAP的表达情况,以11例健康人作为对照。结果 AL病人白血病细胞XIAP表达水平比对照组明显增高（t=13.96,P〈0.01）。初治组、缓解组和复发组AL病人白血病细胞XIAP表达水平均明显高于对照组（F=204.27,q=8.88～32.69,P〈0.01）,其中缓解组明显低于初治组和复发组（q=12.44、26.02,P〈0.01）,复发组明显高于初治组（q=17.55,P〈0.01）。结论 XIAP表达可能参与了AL的发生和发展过程,XIAP高表达的病人完全缓解率低,预后不良。XIAP高表达可能是导致白血病细胞对化疗药物不敏感的原因之一,XIAP有望成为白血病基因治疗的新靶点。     

格列卫对慢性粒细胞白血病病人Foxo3a和bcr-abl融合基因表达影响

目的探讨初发及格列卫治疗的慢性粒细胞白血病（CML）病人骨髓中转录因子Foxo3a和bcr-abl融合基因的表达及其临床意义。方法采用SYBR GreenⅠ建立的实时荧光RT-PCR的方法,检测18例初发及10例格列卫治疗的CML病人骨髓样本中Foxo3a和bcr-abl融合基因的表达,以GAPDH为内参基因,以行骨髓穿刺排除诊断的非血液病病人的骨髓为对照组;各实验组基因表达水平的差异采用ΔΔCT相对定量法计算。结果初发CML病人骨髓bcr-abl融合基因的表达水平与格列卫治疗组比较差异有显著性（χ2=4.25,P〈0.05）;3组骨髓样本中Foxo3a的表达水平比较差异均有显著性（χ2=5.73～13.73,P〈0.01）;且初发CML病人的bcr-abl融合基因的高表达与转录因子Foxo3a的低表达呈明显负相关（r=-0.674,P〈0.01）。结论格列卫降低CML病人bcr-abl融合基因表达的同时可以增加Foxo3a的表达;转录因子Foxo3a的低表达与bcr-abl融合基因的高表达密切相关,二者可能共同参与CML的发生。     

慢性粒细胞白血病病人Mcl-1和Bcr/Abl基因表达

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）病人Mcl-1基因和Bcr/Abl融合基因的表达水平及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术检测了41例CML病人（包括慢性期15例、加速期6例、急变期6例、伊马替尼治疗后遗传学完全缓解8例及非伊马替尼治疗的未缓解的CML病人6例）骨髓标本Mcl-1基因、Bcr/Abl融合基因的表达水平,以10例正常人作为对照。结果 CML各组Mcl-1和Bcr/Abl mRNA的表达水平差异均有显著性（χ2=19.12～36.08,P〈0.05）。伊马替尼治疗组与正常对照组Mcl-1 mRNA的表达明显低于其他各组（Z=2.547～3.254,P〈0.05）;加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间Mcl-1 mRNA的表达水平差异无显著性（Z=0.481～1.922,P〉0.05）,但均明显高于慢性期（Z=2.650～3.465,P〈0.05）。Bcr/Abl mRNA在慢性期、加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间表达差异无显著性（Z=0.480～1.196,P〉0.05）。CML病人Mcl-1与Bcr/AblmRNA的表达水平呈正相关（r=0.68,P〈0.05）。结论 Mcl-1和Bcr/Abl与CML的病情密切相关,参与CML的发生和发展,是判断病情进展及预后的分子标记物。     

急性B淋巴细胞白血病病儿miR-21表达及意义

目的了解microRNA-21（miR-21）在急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）骨髓单个核细胞（BMMCs）中的表达水平及其意义。方法收集36例B-ALL病儿（其中高危型13例,标危型23例）化疗前后及12例骨髓常规正常非造血系统疾病病儿（对照组）的骨髓标本,采用实时荧光定量PCR方法检测BMMCs中miR-21表达。结果化疗前B-ALL组miR-21表达水平明显高于对照组,高危型组miR-21表达水平明显高于标危型组,差异有统计学意义（t=20.75、23.23,P〈0.05）。化疗后B-ALL病儿miR-21表达水平较化疗前明显减低（t′=10.56,P〈0.05）,其中以化疗敏感组减低最为明显（t=13.57,P〈0.05）;化疗耐药组miR-21表达水平化疗前后无明显变化（P〉0.05）。结论 miR-21过表达在B-ALL发病中发挥着重要作用,可作为判断儿童B-ALL预后指标之一。     

伴有t(11;20)(p15;q11)易位急性单核细胞白血病患者的细胞遗传学和分子遗传学研究

目的 :报道 1例伴有t(11;2 0 ) (p15 ;q11)易位的急性单核细胞白血病 (AML -M 5 )病例及其染色体涂染、逆转录-聚合酶链反应 (RT -PCR)的研究结果。方法 :骨髓细胞经直接法或 2 4h培养法常规制备染色体标本 ,以R显带技术进行核型分析 ;以 11号和 2 0号整条染色体涂染探针进行染色体涂染 ;采用RT -PCR技术检测NUP98-TOP1融合基因的转录本。结果 :R显带和全染色体涂染的结果证实该患者染色体异常为t(11;2 0 ) (p15 ;q11) ;RT -PCR检测到NUP98-TOP1融合基因的转录本。结论 :染色体涂染和RT -PCT技术的应用有利于检出t(11;2 0 ) (p15 ;q11)。     

白血病患者血管内皮生长因子血浆水平的评价

目的探讨急性、慢性白血病患者血管内皮生长因子(VEGF)血浆水平与白血病之间关系。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测32例急性、慢性白血病患者和20例对照组血浆VEGF含量。结果白血病患者化疗前、后血浆VEGF含量均明显高于对照组(P<0.01)。结论急性、慢性白血病存在肿瘤性血管新生。