靶向PI3Kp85α的siRNA抑制人卵巢癌细胞系生长的实验研究

  目的  探讨siRNA靶向抑制卵巢癌细胞磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基p85α(phosphoinositide 3-kinase regulatory subunitp85 alpha, P13Kp85α)表达后, 对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。  方法  应用siRNA靶向PI3Kp85α转染人卵巢癌细胞系SKOV3, Re-altime PCR检测目的基因mRNA表达, Western blot和免疫荧光技术检测PI3Kp85α、AKT1、AKT2和Ki67的表达变化; M_rr法和an-nexin V标记评价细胞的增殖活性和凋亡, 流式细胞法分析细胞周期.Transwell法分析侵袭能力。  结果  转染PI3Kp85αsiRNA后PI3Kp85αmRNA表达下降; PI3Kp85α、AKT1、AKT2和Ki67的蛋白表达水平均明显降低(P < 0.01)。卵巢癌细胞增殖活性明显受到抑制, 细胞周期在G₀/G₁期有明显的阻滞, 早期凋亡的细胞教明显增多, 细胞的运动迁移能力降低(P < 0.01), 侵袭能力减弱(P < 0.01)。  结论  靶向PI3Kp85α的siRNA技术可抑制卵巢癌细胞PI3Kp85α的表达, 进而抑制肿瘤细胞的生长, 这可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。      

RNAi抑制PI3Kp85α蛋白活性对人乳腺癌细胞系MCF-7生长抑制的体外研究

目的:探讨敲低PI3Kp85α表达对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长的影响和机制.方法:用靶向PI3Kp85α的siRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7,使用Real-time PCR法鉴定转染PI3Kp85α表达水平;MTT法评价PI3Kp85α siRNA对乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响;流式细胞术检测转染后细胞周期分布和凋亡;采用免疫荧光染色及Western blot方法观察IA型PI3K/AKT通路主要成员的表达.结果:Real-timePCR结果显示PI3Kp85α siR-NA转染导致PI3Kp85α表达下调;MTT结果显示PI3Kp85α siRNA转染抑制肿瘤细胞生长;流式细胞术检测可见PI3Kp85α siRNA转染组细胞周期存在G_0/G_1期阻滞而且凋亡率显著高于对照组与空载体组(F=19.255,P=0.002).结论:应用PI3Kp85α siRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7细胞,可抑制其增殖和诱导细胞凋亡,因此PI3Kp85α可以作为人乳腺癌基因治疗的候选靶点.     

RNA干扰靶向抑制PIK3CB基因表达对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰靶向抑制PIK3CB基因(编码PI3Kp110β蛋白)的表达对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响。方法:设计3条针对PIK3CB基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段及1条阴性对照siRNA,分别瞬时转染结肠癌HCT116细胞。用Real time PCR及Western印迹法筛选出1条抑制效率最高的PIK3CB-siRNA序列,然后进行CCK-8细胞增殖实验,并采用JC-1染色法检测线粒体膜电位(Δψm)的变化。结果:经转染PIK3CB-siRNA-179序列的HCT116细胞中PI3Kp110βmRNA及蛋白表达降低最为明显,抑制率达80%,选择该条siRNA作为有效干扰组进行后续实验。CCK-8细胞增殖实验显示,瞬时转染24、48及72h后,PIK3CB-siRNA-179组细胞的相对存活率较阴性对照组细胞明显降低,其中以24h及48h降低最为明显(P<0.05)。JC-1染色结果显示,瞬时转染48h后PIK3CB-siRNA-179组细胞的线粒体膜电位较阴性对照组细胞明显降低。结论:抑制PI3Kp110β蛋白表达可降低结肠癌HCT116细胞的增殖速度,诱导细胞的凋亡,推测PIK3CB基因可能成为结肠癌基因治疗的一个新靶点。     

miR-101-3p在胃癌中的表达及其靶向STC-1基因调控PI3K/AKT信号通路对癌细胞侵袭转移和血管生成的影响

目的 探究miR-101-3p在胃癌中的表达及其靶向STC-1基因调控PI3K/AKT信号通路对癌细胞侵袭转移、血管生成的作用机制。方法 qRT-PCR检测胃癌组织及BGC-823细胞中miR-101-3p和STC-1 mRNA的表达,并分析miR-101-3p表达与患者临床病理因素的关系;通过LipofectamineTM 2000将miRNA模拟物和质粒分别或者联合转染细胞;TargetScanHuman预测及双荧光素酶报告验证miR-101-3p对STC-1的靶向调控关系;划痕实验、Transwell小室实验、Matrigel体外成管实验及Westernblot检测验证miR-101-3p靶向STC-1基因对癌细胞的侵袭转移和血管生成的影响及可能的机制,并通过裸鼠致瘤实验检测移植瘤的发展。结果 胃癌组织中STC-1的表达水平高于正常组织。与正常胃组织和GES-1细胞相比,胃癌组织和BGC-823细胞中miR-101-3p下调,STC-1 mRNA上调,且miR-101-3p水平与STC-1水平负相关,miR-101-3p水平与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移显著相关（P<0.05）;过表达miR-101-3p可抑制STC-1的表达,下调p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、MMP-2、MMP-9、VEGF、Ang2水平,抑制肿瘤细胞的侵袭转移和血管生成,降低移植瘤体积和重量（P<0.05）。结论 miR-101-3p在胃癌中表达下调,能够靶向STC-1基因调控PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞BGC-823的侵袭转移和血管生成及体内移植瘤的进展。     

趋化因子受体CCR7与PI3K/Akt通路在胃癌组织中的表达及意义

目的 观察趋化因子受体CCR7和磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（PKB或Akt）在胃癌组织中的表达情况,探讨CCR7与PI3K/Akt通路的关系。方法 采用RT-PCR法检测32例胃癌及相应癌旁对照组织中CCR7mRNA、PI3KmRNA、AktmRNA的表达;Western Blotting法检测CCR7、p-Akt蛋白的表达。结果 胃癌组织中CCR7mRNA、PI3KmRNA、AktmRNA与癌旁对照组织的表达水平相比,差异均有显著性（P〈0.001）,且CCR7mRNA与PI3KmRNA、AktmRNA表达呈正相关（P〈0.05）。CCR7、P-Akt蛋白在胃癌组织中的表达水平明显高于癌旁对照组织（P〈0.05）,两者表达与肿瘤TNM分期、浸润深度、分化程度、淋巴结转移与远处转移有关（P〈0.05）,并且CCR7、P-Akt表达水平呈正相关（P〈0.05）。结论 胃癌组织中高表达的CCR7可能通过PI3K/Akt通路促进胃癌的侵袭转移。     

siRNA沉默PI3K基因激活FoxO3a基因并抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤生长的实验研究

目的：探讨应用小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）沉默磷酸肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3 kinase，PI3K）基因对人乳腺癌细胞MCF-7中抑癌基因FoxO3a的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响。方法：构建PI3K基因siRNA质粒Psilencer1.0-U6-PI3K-siRNA；乳腺癌细胞株MCF-7裸鼠背部皮下接种，建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型，成瘤后将实验动物分3组，每组9只。1组注射Psilencer1.0-U6-PI3K-siRNA质粒、另2组分别注射Psilencer1．0-U6空质粒或0．9％的氯化钠溶液作为对照。观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间；并用Western印迹法检测瘤组织中FoxO3a和PI3K的表达。结果：PI3K-siRNA质粒治疗组裸鼠的肿瘤体积明显缩小（P〈0．01），平均生存时间显著延长（P〈0．01）；肿瘤内PI3K基因表达水平明显下降，而FoxO3a基因的表达水平明显升高。结论：PI3K基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的PI3K基因的表达，上调抑癌基因FoxO3a的表达，抑制肿瘤生长，延长荷瘤鼠的生存时间。     

KLK7 siRNA对胃癌AGS细胞的抑制作用

目的： 体外合成4条靶向人组织激肽释放酶7（kallikrein-related peptidase 7, KLK7 ）基因的片段,并筛选最有效siRNA片段,观察沉默 KLK7 表达对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响。 方法： 设计4条靶向 KLK7 的siRNA片段（KLK7-siRNA-416、KLK7-siRNA-596、KLK7-siRNA-474、KLK7-siRNA-795）,瞬时转染AGS细胞,qRT-PCR检测各干扰组 KLK7 mRNA表达的变化,Western blotting检测AGS细胞中HK7蛋白（由 KLK7 基因编码）的表达,MTT法检测转染后AGS细胞的增殖,流式细胞术检测AGS细胞的细胞周期及凋亡。 结果： 4条KLK7-siRNA片段中以KLK7-siRNA-416的干扰效率最高,KLK7-siRNA-416组 KLK7 mRNA表达率显著低于NC组\[(0.32±0.049）% vs (0.93±0.071)%, P<0.01\],KLK7-siRNA-416组转染48 h后AGS细胞HK7蛋白的表达水平显著降低\[（1.18±0.198） vs（0.52±0.096）,P<0.01\]。KLK7-siRNA-416转染72 h后对AGS细胞增殖的抑制率达（37.70±0.12）%（P<0.05）,该转染阻滞AGS细胞于G0/G1期但不影响AGS细胞的凋亡。 结论： KLK7-siRNA沉默 KLK7 的表达可抑制AGS细胞的增殖,可阻滞细胞于G0/G1期,对细胞凋亡的作用不明显。     

PI3K/Akt信号转导通路与胃癌关系的研究进展

真核生物对诸如生长因子受体、激素、细胞因子等刺激产生应答,激活细胞内不同信号传导通路,其中PI3K／Akt是与细胞增殖和细胞凋亡关系最密切的信号传导通路之一。随着研究的不断深入,该通路在多种常见肿瘤的发生发展中凸现出日益重要的作用,并为肿瘤的治疗提供了新的靶点。     

血管内皮生长因子受体3与PI3K/AKT在胃癌组织中的表达及意义

 目的 观察血管内皮生长因子受体3（VEGFR-3）和磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B (PKB或Akt)在胃癌组织及相应癌旁组织中的表达情况。 方法 采用RT-PCR法检测36例胃癌及相应癌旁对照组织中VEGFR-3、PI3K、Akt mRNA 的表达;免疫组织化学法检测VEGFR-3、P-Akt蛋白的表达,并用图像分析方法测定平均吸光度值。 结果 1. RT-PCR 胃癌组织中VEGFR-3mRNA、PI3KmRNA、AktmRNA与癌旁对照组织的表达水平相比,差异有统计学意义(P<0.05),且VEGFR-3mRNA与PI3KmRNA、AktmRNA表达呈正相关 (P<0.05)。VEGFR-3 mRNA表达与TNM分期、浸润深度、淋巴结转移与远处转移有关(P<0.05)。2. 免疫组织化学 VEGFR-3、P-Akt蛋白在胃癌组织中的表达水平明显高于癌旁对照组织(P<0.05),且VEGFR-3、P-Akt蛋白表达水平呈正相关(P<0.05)。 结论 VEGFR-3阳性表达的胃癌患者可能更易发生淋巴结转移,VEGFR-3可作为评估患者预后的重要指标。VEGFR-3与PI3K/Akt的表达具有一定的相关性。     

MFAP3L在胃癌中的表达及与PI3K/AKT信号转导通路的关系

 目的：了解微纤维关联样蛋白-3（MFAP3L）基因在胃癌组织中的表达情况并分析其与 PI3K/AKT信号转导通路相关基因间的关系。方法:采用半定量RT-PCR和组织微阵列免疫组化的方法分别检测MFAP3L、磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚基α（PIK3CA）、蛋白激酶B-β（AKT2）及β-半乳糖凝集素-3（Glaectin-3）基因在胃癌组织中mRNA及蛋白表达情况,并通过生物信息学方法预测分析MFAP3L蛋白结构特点。结果:（1）在同一组胃癌组织中,MFAP3L、Glaectin-3及PIK3CA蛋白均表达上调（17/24,70.8%,P=0.022;16/25,64.0%,P=0.017及14/25,56.0%,P=0.045）;PIK3CA与AKT2基因mRNA均表达上调（19/29,65.5％,P=0.001与14/25,56％, P=0.001）。并且MFAP3L与Glaectin-3及PIK3CA间存在共表达。(2) MFAP3L蛋白含有多个磷酸 化位点, 且在胞内区聚集成簇,并具有1个与PI3K的SH3调节区高度同源的蛋白模序。结论: MFAP3L基因在胃癌组织中的表达变化可能与胃癌的发生有密切关系,并可能通过参与PI3K/AKT 通路来参与肿瘤侵袭和转移。     

CCNB1基因通过调控PI3K/Akt信号通路对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨细胞周期蛋白B1(CCNB1)基因对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常口腔上皮细胞系HOK和人口腔鳞癌细胞系SCC-15、SCC-4、Cal-27中CCNB1基因的表达量,将CCNB1 siRNA(si-CCNB1)和阴性对照(si-NC)转染至SCC-15细胞,同时设置空白对照(Control),qRT-PCR和Western blot检测各组SCC-15细胞中CCNB1的表达,MTT实验、Transwell实验和划痕实验分别检测沉默CCNB1对SCC-15细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9、PI3K、Akt和p-Akt蛋白的表达。结果 CCNB1在口腔鳞癌细胞系中的表达显著高于正常口腔上皮细胞(P＜0.05),si-NC组SCC-15细胞中CCNB1 mRNA和蛋白的表达与Control组无统计学差异(P＞0.05);si-CCNB1组中CCNB1 mRNA和蛋白的表达明显低于si-NC组和Control组(P＜0.05),si-NC组SCC-15细胞增殖、侵袭和迁移能力及MMP-2、MMP-9、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达与Control组无统计学差异(P＞0.05);si-CCNB1组细胞增殖、侵袭和迁移能力及MMP-2、MMP-9、PI3K、p-Akt蛋白表达均明显低于si-NC组和Control组(P＜0.05),两组间Akt蛋白表达无统计学差异(P＞0.05)。结论 CCNB1在口腔鳞癌细胞系中呈高表达,沉默CCNB1基因能够抑制人口腔鳞癌SCC-15细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

RNAi下调AKT1、PI3K P85表达抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖

目的：探讨RNAi（RNA interference）技术抑制乳腺癌MCF7细胞中AKT1和PI3K P85亚基的表达对MCF7细胞增殖和侵袭等的影响。方法：将包含AKT1、PI3K P85两种siRNA开放阅读框的短发夹RNA（shRNA）重组腺病毒质粒表达载体rAd5siAKT1siPI3K转染至乳腺癌MCF7细胞。应用realtime PCR和Western blotting检测转染后目的基因mRNA和蛋白的表达水平,并用Western blotting检测目的基因被沉默后PCNA、cyclin D1和P53的表达情况。应用MTT法、流式细胞术、2D和3D Matrigel实验检测MCF7细胞转染前后的细胞增殖周期和侵袭能力。结果：重组腺病毒质粒表达载体rAd5siAKT1siPI3K介导的靶向〖STBX〗AKT1, PI3K P85 shRNA可以有效抑制目的基因AKT1和PI3 Kp85的mRNA和蛋白表达;下游相关因子PCNA、cyclin D1的表达亦下调,P53表达则上调。MTT法结果显示rAd5siAKT1siPI3K组细胞生长抑制率>50%,与未转染组和rAd5siCtrl转染组比较,出现明显的G1/G0细胞周期阻滞;2D和3D Matrigel实验显示,未转染组和rAd5siCtrl转染组细胞呈正常形态,而rAd5siAKT1siPI3K 转染组细胞贴壁生长能力明显减低,细胞团块明显缩小。结论：靶向AKT1、PI3K P85亚基的shRNA技术可以抑制MCF7细胞中AKT1、PI3K P85亚基的表达,抑制MCF7细胞的体外增殖。     

miR-1271-5p在胃癌组织的表达及对胃癌AGS细胞生物学行为的影响

目的 探讨miR-1271-5p在胃癌组织和细胞中的表达及其对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 收集2011年6月至2014年6月广西医科大学附属肿瘤医院90例手术切除胃癌组织及相应癌旁组织。采用qRT-PCR法检测胃癌组织及相应癌旁组织,人胃癌细胞系（SGC-7901、MGC-803、AGS）和人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miR-1271-5p的表达情况。利用瞬时转染法将miR-1271-5p mimics（过表达miR-1271-5p组）和miR-NC（阴性对照组）分别转染胃癌AGS细胞,建立过表达miR-1271-5p的胃癌AGS细胞系,然后采用CCK-8法检测转染后的胃癌AGS细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果 miR-1271-5p在胃癌组织和胃癌细胞（SGC-7901、MGC-803、AGS）中的表达均低于相应癌旁组织及人正常胃黏膜上皮GES1细胞（均P<0.01）。与阴性对照组相比,过表达miR-1271-5p组胃癌AGS细胞增殖活力降低（P<0.01）,细胞集落形成数减少（P<0.01）,迁移和侵袭细胞数量亦减少（P<0.01）。结论 miR-1271-5p在胃癌组织和细胞中低表达,上调miR-1271-5p可抑制胃癌AGS细胞的增殖、迁移和侵袭。     

DIAPH3对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制

背景与目的：胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,但其发病机制尚不清楚。Diaphanous相关成蛋白3（diaphanous-related formin 3,DIAPH3）对多种肿瘤的发生、发展具有重要作用,但其在胃癌中的作用未见报道。探讨DIAPH3在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法：利用基因表达谱分析（gene expression profiling interactive analysis,GEPIA）数据库在线分析DIAPH3在胃癌组织中的表达;收集2020年1月—2020年12月年新乡医学院第四临床学院病理科保存的62例胃癌患者的石蜡包埋组织及配对癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色方法检测胃癌组织中DIAPH3的表达,并进行临床病理学相关性分析;采用蛋白质印迹法（Western blot）检测敲低或过表达DIAPH3后对DIAPH3、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）及N-钙黏蛋白（N-cadherin）蛋白质水平的变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测敲低或过表达DIAPH3后对DIAPH3转录水平表达的影响。利用细胞计数试剂盒-8（cellcounting kit-8,CCK-8）实验检测细胞增殖;利用划痕愈合实验检测细胞迁移;利用transwell小室实验检测细胞侵袭。结果：GEPIA数据库在线分析显示,与胃癌癌旁组织相比,DIAPH3 mRNA在胃癌组织中表达升高（P ＜ 0.05）;胃癌组织中DIAPH3的阳性表达率为70.97%（44/62）,高于胃癌癌旁组织16.13%（10/62）,差异有统计学意义（P ＜ 0.01）;与高中分化组比较,低分化组DIAPH3表达升高（P ＜ 0.05）;与无淋巴结转移组相比,有淋巴结转移组DIAPH3表达升高（P ＜ 0.05）。干扰DIAPH3组细胞增殖活力、细胞迁移率和细胞侵袭数均低于阴性对照组（P ＜ 0.05）;过表达DIAPH3组细胞增殖活力、细胞迁移率和细胞侵袭数均高于过表达对照组（P ＜ 0.05）。过表达DIAPH3后干扰cyclin D1,胃癌细胞株的增殖活力低于过表达DIAPH3组,高于过表达对照组（P ＜ 0.05）。过表达DIAPH3后干扰vimentin,胃癌细胞株的细胞迁移率和细胞侵袭数低于过表达DIAPH3组,高于过表达对照组（P ＜ 0.05）。与干扰对照组相比,干扰DIAPH3组E-cadherin蛋白质表达增加,DIAPH3、cyclin D1、vimentin和N-cadherin蛋白质表达降低（P ＜ 0.05）;与过表达对照组相比,过表达DIAPH3组中E-cadherin蛋白质表达降低,DIAPH3、cyclin D1、vimentin和N-cadherin蛋白质表达增加（P ＜ 0.05）。在敲低或过表达DIAPH3胃癌细胞株中,DIAPH3在mRNA水平均显著降低或升高（P ＜ 0.05）。结论：DIAPH3可促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用与上调cyclin D1、促进上皮-间充质转化有关。     

红花多糖抑制PI3K/Akt信号通路诱导人胃癌细胞凋亡的研究

目的 探讨红花多糖通过抑制PI3K/Akt信号通路调控胃癌细胞凋亡的机制。方法 MTT比色法观察SPS对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖的抑制作用,流式细胞仪(FCM)分析细胞凋亡,实时荧光定量RT-PCR法和Western Blot法检测蛋白激酶B(Akt)基因及蛋白的表达情况。结果 红花多糖在一定范围内以剂量依赖方式和时间依赖方式抑制SGC-7901胃癌细胞生长。流式细胞仪检测,SGC-7901细胞经红花多糖处理24 h,其早期凋亡率、细胞坏死或晚期凋亡率显著增加,呈现明显的剂量依赖性。Real-time PCR和Western Blot检测发现,SPS处理的细胞Akt基因及蛋白表达量明显下降。结论 红花多糖对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖具有明显的抑制作用,该抑制作用具有一定的时间依赖性和剂量依赖性;红花多糖能够下调Akt mRNA表达,降低Akt和p-Akt蛋白的表达量,抑制Akt通路发挥抗肿瘤作用。     

斯钙素2对口腔鳞癌细胞的作用及机制研究

背景与目的：口腔颌面部恶性肿瘤中约80%以上为口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC),虽过去的几十年诊断及治疗技术不断改进,其存活率却没有得到明显改善,5年生存率仍小于50%。该研究旨在探讨斯钙素2(stanniocalcin 2,STC2)对口腔鳞癌细胞KB的增殖、凋亡及侵袭迁移的影响。方法：构建STC2的RNA干扰载体,将其转染KB细胞使STC2基因沉默后,采用CCK8实验检测STC2对KB细胞增殖的影响,通过APC Annexin V/7-AAD染色、流式细胞术检测细胞凋亡情况,分析STC2对细胞凋亡的影响。细胞划痕和细胞小室(Transwell)试验分析比较STC2基因沉默后对口腔鳞癌细胞侵袭和迁移的差异。最后用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测凋亡、转移相关蛋白。结果：成功构建KB细胞STC2敲除细胞系,CCK8增殖实验结果显示,STC2沉默后,细胞增殖被明显抑制,其生长速度低于对照组(P<0.001)。在顺铂诱导细胞凋亡过程中,STC2沉默后KB细胞凋亡一定程度被促进。与KB细胞相比,STC2沉默后的细胞迁移和侵袭性明显减弱。Western blot检测发现,沉默STC2后Bcl-2、促细胞迁移和侵袭蛋白Caveolin-1和β-catenin表达下调,bax表达上升。结论：STC2可能参与调控口腔鳞癌细胞KB的增殖凋亡,促进KB细胞的侵袭转移能力,同时一定程度上减弱KB对化疗药物顺铂的敏感性。     

ＭＭＰ-２特异性ＲＮＡ干扰对人胰腺癌细胞粘附和侵袭的作用

探讨靶向基质金属蛋白酶-２（ＭＭＰ-２）的ＲＮＡ干扰对人胰腺癌细胞粘附和侵袭的作用。方法　设计和构建靶向ＭＭＰ-２的特异性小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）表达质粒,将质粒转染入人胰腺癌ＢｘＰＣ-３细胞系中,根据转染质粒靶序列的不同分为５组,即ｐＧＰＵ６-１、ｐＧＰＵ６-２、ｐＧＰＵ６-３、ｐＧＰＵ６-４和阴性对照组ｐＧＰＵ６（－）,并设仅加入转染剂的空白对照组。应用ＲＴ-ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测各组ＢｘＰＣ-３细胞转染后ＭＭＰ-２蛋白及ｍＲＮＡ表达水平,应用ＭＴＴ法及流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡水平,以平板粘附模型和Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室模型检测各组转染后肿瘤细胞粘附和侵袭能力,比较各组间差异。结果　与空白对照组和阴性对照组相比,ｐＧＰＵ６-１、ｐＧＰＵ６-２、ｐＧＰＵ６-３组ＭＭＰ-２ｍＲＮＡ抑制率分别为７５.３％、６４.５％、５１.６％和７４.７％、６３.７％、５０.５％,差异均有统计学意义;ＭＭＰ-２蛋白表达抑制率分别为７９.１％、６４％、５２.３％和７８％、６２.２％、５０.５％,差异均有统计学意义;粘附抑制率分别为６３.１％、４２.９％、２５.６％和６２.２％、４１.６％、２３.９％,且穿膜细胞数量明显降低,差异均有统计学意义。对照组与ｐＧＰＵ６-４组的ＭＭＰ-２蛋白及ｍＲＮＡ表达水平无明显差异,在肿瘤细胞粘附和侵袭能力方面也未见明显差异。ＭＴＴ法及流式细胞术的结果并没有提示各组间肿瘤细胞增殖和凋亡水平的差异。结论　靶向ＭＭＰ-２的ＲＮＡ干扰能够明显抑制胰腺癌ＢｘＰＣ-３细胞蛋白水平及ｍＲＮＡ水平的表达,从而抑制肿瘤细胞粘附和侵袭的能力,但并没有导致干扰后肿瘤细胞增殖和凋亡能力的改变。     

沉默TRIM29对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）靶向三联基序蛋白29（TRIM29）对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）法检测骨肉瘤细胞株（MG63和U2OS）的TRIM29水平,采用脂质体法将两条靶向TRIM29的siRNA片段（siTRIM29-1和siTRIM29-2）高效转染至MG63和U2OS细胞,经QPCR法检测后选取抑制效率最高的siRNA进行后续实验,并设转染siControl的MG63和U2OS细胞为对照;分别采用MTT、流式细胞术及Transwell 法检测转染后MG63和U2OS细胞的增殖、凋亡及侵袭情况。结果 QPCR检测结果显示MG63和U2OS细胞的TRIM29 mRNA水平较正常成骨细胞株hFOB1-19均升高（P＜0.05）;MG63和U2OS细胞转染siTRIM29-1和siTRIM29-2片段72 h后的TRIM29 mRNA水平均低于转染siControl的细胞,差异均有统计学意义（P＜0.05）,同时选取沉默率较高的siTRIM29-1进行后续实验;与转染siControl的MG63和U2OS细胞相比,两种细胞转染siTRIM29-1后的存活率及穿膜细胞数目减少,凋亡率升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 骨肉瘤细胞中TRIM29高表达,且靶向沉默TRIM29可抑制骨肉瘤细胞增殖及侵袭并诱导细胞凋亡,对骨肉瘤靶向治疗有一定参考价值。     

miR-513a-3p靶向鼠双微体基因2对胃癌细胞增殖迁移侵袭的影响

目的探讨miR-513a-3p靶向鼠双微体基因2(MDM2)对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法采用脂质体法将miR-NC、miR-513a-3p、anti-miR-NC、anti-miR-513a-3p、si-NC、si-MDM2、miR-513a-3p+pcDNA3.1和miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2转染至BGC-823细胞中,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-513a-3p的表达水平,采用Western blot检测cyclin D1、MMP-2、p21、E-cadherin和MDM2蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝法检测各组胃癌细胞BGC-823的活性,Transwell法检测各组胃癌细胞BGC-823的迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因检测实验检测miR-513a-3p与MDM2的靶向关系。结果胃癌细胞BGC-823、MGC-803中miR-513a-3p的表达水平分别为0.21±0.02和0.34±0.03,与胃上皮细胞GES-1(0.76±0.08)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,miR-NC组细胞的吸光度(A)值分别为0.57±0.05、1.03±0.10和1.43±0.14,miR-513a-3p组细胞的A值分别为0.36±0.03、0.48±0.05和0.63±0.06,差异均有统计学意义(均P<0.05);miR-NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(130±11.80)个和(117±10.60)个,miR-513a-3p组细胞分别为(58±5.64)个和(50±5.13)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,si-NC组细胞的A值分别为0.53±0.05、0.95±0.10和1.36±0.14,si-MDM2组细胞的A值分别为0.39±0.04、0.57±0.06和0.80±0.08;si-NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(141±12.02)个和(109±10.60)个,si-MDM2组的迁移和侵袭数分别为(66±6.67)个和(61±6.18)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,miR-513a-3p+pcDNA3.1组细胞的A值分别为0.34±0.03、0.46±0.05和0.61±0.06,miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2组细胞的A值分别为0.48±0.05、0.82±0.08和1.17±0.12,差异均有统计学意义(均P<0.05);miR-513a-3p+pcDNA3.1组细胞的迁移和侵袭数分别为(56±5.71)个和(51±5.16)个,miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2组分别为(113±10.28)个和(104±10.02)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-513a-3p可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与靶向调控MDM2的表达有关,可为胃癌的预防和治疗提供新靶点。     

siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的:探究siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:分别以10、20、30、40、50 nmol/L浓度的siRNA靶向沉默体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE的基因MALAT-1,以实时荧光定量（qRT-PCR）分别在24、48 h后检测MALAT-1 mRNA表达水平,筛选合适的siRNA作用浓度和时间。将CNE细胞分为三组:空白对照组、siRNA阴性对照组和siRNA组,siRNA处理细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用流式细胞技术检测细胞凋亡情况,Western blot 检测各组细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、caspase-3）及PI3K/AKT通路蛋白（PI3K、ATK、p-AKT）表达情况。结果:选定30 nmol/L浓度的siRNA作用于CNE细胞48 h;siRNA处理细胞后,与空白对照组相比,siRNA组细胞增殖率明显降低,凋亡率明显升高,Bax、caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;AKT蛋白表达无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。siRNA阴性对照组各指标均无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:siRNA可靶向沉默MALAT-1,抑制鼻咽癌细胞增殖,促进其凋亡,可能是通过抑制PI3K/AKT通路实现的。