传统发酵食品中具有抑菌活性乳酸菌筛选及其代谢产物稳定性分析

本文以传统发酵食品中筛选的39株乳酸菌为研究对象,采用牛津杯法筛选具有优良抑菌特性的乳酸菌,分别对菌株的生长曲线、产酸能力、耐胆盐、耐渗透压、耐酸碱、抑菌谱进行检测,并研究代谢产物的稳定性。结果表明：筛选出三株具有良好抑菌特性的菌株,分别为植物乳杆菌HS011、德氏乳杆菌HS023、嗜热链球菌HS033。三株菌经培养20 h后,发酵液pH分别由5.44、5.44、5.42下降到3.55、3.54、3.57;三株乳酸菌能耐受0.1%以下的胆盐和14%的NaCl溶液;在pH 5.0~8.0时生长情况良好;且具有较为广泛的抑菌谱,对大肠杆菌O157:H7、蜡样芽孢杆菌、单增李斯特氏菌、阪崎肠杆菌等均有较好抑制作用,但对霉菌和酵母无作用;代谢产物经温度（20~121 ℃）、pH（2.0~8.0）处理后仍有较好抑菌活性;经木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K、过氧化氢酶处理后菌株代谢产物抑菌活性未有明显变化。表明从传统发酵食品中筛选的乳酸菌具有良好益生特性,其代谢产物稳定性好,可作为发酵产品中的生产菌株,可进一步开发利用。     

融合魏斯氏菌对单增李斯特菌生物膜形成的影响

从东北传统酸菜的12株乳酸菌中筛选对单增李斯特菌有较强拮抗作用的低温生长菌株,并分析其对单增李斯特菌生物膜形成的影响。首先测定乳酸菌菌株的低温生长特征和抑菌活性;然后采用定性法和定量法分析乳酸菌菌株对单核细胞增生李斯特菌生物膜形成和形态结构的影响;最终通过生理生化和16S rDNA测序对乳酸菌菌株进行鉴定。结果表明：菌株Z01在10℃低温下生长,培养72 h后OD595nm值增加0.23,且具有抗单增李斯特菌活性,抑菌圈直径达19.79 mm。菌株Z01粗提物的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）为16.0 mg/mL,当粗提物浓度为0.5 MIC和1.0 MIC时,对生物膜形成抑制率分别为59.33%和77.77%,对生物膜黏附细菌的抑制率分别为14.49%和26.44%。该菌株被鉴定为融合魏斯氏菌（Weissella confusa）,为研发在低温条件控制单核细胞增生李斯特菌的生物制剂奠定基础。     

八种精油对乳酸菌及致病菌的选择抑制性筛选及其应用研究

为了开发适宜的精油-发酵乳产品,该文以6株乳酸菌及2株致病菌为指示菌,采用滤纸片法和最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)法研究8种精油的抑菌活性;用OD₆₀₀值分析精油浓度对指示菌生长曲线的影响;并监测了精油-发酵乳发酵及储藏过程活菌数、产酸及抗氧化能力等的变化。结果表明,牛至、肉桂、百里香、丁香精油对指示菌具有良好的选择抑制性,其抑制致病菌的能力显著强于抑制乳酸菌(P<0.05)。牛至精油效果最佳,对致病菌、乳酸菌的抑菌圈直径分别为35.03～43.89和17.88～19.86 mm;相同pH下,精油对乳酸菌MIC远大于对致病菌的MIC;精油对指示菌的MIC随pH降低而降低。牛至精油对致病菌、乳酸菌的MIC分别为0.156～0.313和0.625～2.500μL/mL。0.156、0.313μL/mL的牛至精油对乳酸菌影响较小,生长量可达空白的91.54%～104.57%,对金黄色葡萄球菌部分抑制,生长量为空白的0%～51.06%,对大肠杆菌完全抑制。0.156、0.313μL/mL的牛至精油在发酵乳发...     

抗耐药性大肠杆菌乳酸菌的筛选及抑菌机制

筛选对耐药性大肠杆菌（Escherichia coli）拮抗活性较强的乳酸菌,并探究其作用机制。采用牛津杯打孔法筛选对耐药性E. coli具有抑制活性的乳酸菌,并通过生理生化实验和16S rDNA序列对其进行鉴定。通过测定阿奇霉素、乳酸菌粗提物、乳酸菌粗提物和阿奇霉素共同作用对耐药性E. coli电导率、胞外蛋白、紫外吸收物质等指标的影响,探究乳酸菌粗提物对耐药性E. coli的抑菌机制。结果表明：菌株XCT1-1对耐药性E. coli的抑菌直径达20.31 mm,且被鉴定为植物乳杆菌。乳酸菌XCT1-1粗提物、乳酸菌XCT1-1粗提物和阿奇霉素共同处理耐药性E. coli 10 h后,导致其胞外电导率分别增加20.54%、21.93%,胞外蛋白含量增加25.24%、27.93%,紫外吸收物质含量增加63.56%、77.12%。经扫描电镜观察,用乳酸菌XCT1-1粗提物、乳酸菌XCT1-1粗提物和阿奇霉素共同处理后,耐药性E. coli细胞壁和细胞膜被破坏,前者菌体表面出现褶皱,后者菌体细胞整体结构坍塌。结果表明,乳酸菌XCT1-1粗提物、乳酸菌XCT1-1粗提物和阿奇霉素共同作用于耐药性E. coli,都是通过膜损伤发挥拮抗作用,且乳酸菌粗提物提高了阿奇霉素对耐药性E. coli的敏感性。     

菱角壳黄酮提取物抑菌活性评价及对冷鲜鸭肉中假单胞菌生长特性的影响

为探究菱角壳黄酮提取物的抑菌能力及其对冷鲜鸭肉中假单胞菌生长特性的影响,采用抑菌圈法、MIC值测定和液体中生长曲线来评价其对食品中常见微生物生长的抑制作用,建立假单胞菌经浓度为2.5 mg/mL的黄酮纯化物处理后的鸭肉基质中的一级生长预测模型。结果表明:菱角壳黄酮提取物对假单胞菌、金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用,其中黄酮纯化物对假单胞菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果更好,抑菌圈直径分别为(47.01±0.43)、(45.06±0.35) mm;菱角壳黄酮提取物对热杀索丝菌有一定的抑制效果,对大肠杆菌、乳酸菌和酵母菌无抑菌效果。菱角壳黄酮粗提物和纯化物对假单胞菌的MIC值均为3.125 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的MIC值分别为12.000和3.125 mg/mL。采用对供试菌抑菌效果最好的菱角壳黄酮纯化物浓度(2.5 mg/mL)处理鸭肉,在不同温度下储藏,发现与10、15和20 ℃相比,0和5 ℃可将冷鲜鸭肉的货架期延长至8 d以上,并且通过建立假单胞菌在经浓度为2.5 mg/mL的菱角壳黄酮纯化物处理后的鸭肉基质中的一级模型可知,在0~15 ℃储藏时,菱角壳黄酮提取物作为保鲜剂的抑菌效果较好,能够有效延长食品保质期,但随温度升高,其抑菌能力逐渐减弱,这为菱角壳开发为天然抑菌剂提供了理论基础。     

基于Modified Gompertz研究食品模型中肉桂精油的抑菌活性

香辛料精油可以有效地抑制微生物生长,延缓食品腐败变质,但体内应用时其抑菌活性常受到食品成分的影响。本文以最低抑菌浓度(MIC)和抑菌圈直径(DIZ)为指标,发现肉桂、丁香、大蒜、生姜、百里香、鼠尾草、迷迭香、芥末和牛至9种香辛料精油中肉桂精油是对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌活性均最高的精油,MIC分别为250μL/L和500μL/L,DIZ分别为31.8±1.7 mm和30.5±0.5 mm。通过Modified Gompertz生长模型,研究肉桂精油在蛋白质和碳水化合物两类食品模型中对两种受试细菌延滞期(λ)和最大比生长速率(μmax)的影响。结果显示:蛋白质和碳水化合物对肉桂精油抑菌活性均有加强作用;大肠杆菌在牛肉和马铃薯模型(含有1/4MIC肉桂精油)中的λ较Luria-Bertani培养基分别延长1.76倍和2.51倍;同样模型中,金黄色葡萄球菌在24 h内生长完全受到抑制。上述结果表明肉桂精油具有在蛋白质或碳水化合物成分高的食品中推广应用的潜力。     

桉树提取物与苯唑西林对MRSA的抗菌作用

分别以乙醇和水为提取剂,提取桉树叶中的有效成分,观察其对7种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抑菌作用,并将未加桉树提取物和加了桉树提取物的苯唑西林的抑菌作用进行对比。结果表明,桉树的乙醇提取物和水提取物对7种MRSA的最小抑菌浓度(MIC)分别为1~5g/L和2~10g/L。添加0.2g/L的桉树乙醇提取物之后,苯唑西林对7种MRSA的MIC范围由62.5~250mg/L减小至7.8~31.3mg/L,添加1g/L的桉树水提取物之后,苯唑西林对7种MRSA的MIC,除了试验菌株MRSA No.16之外,减小至7.8 mg/L,而MRSA No.16的最小抑菌浓度从250mg/L减小至62.5mg/L。试验结果证明了桉树提取物与苯唑西林对7种MRSA具有良好的协同抑菌效果,采用乳胶凝集法发现,桉树乙醇提取物抑制青霉素结合蛋白2(PBP2’)的合成,从而降低MRSA对苯唑西林的耐药性。     

原儿茶酸对副溶血弧菌的抑菌和减毒作用

该研究旨在探讨原儿茶酸对副溶血弧菌的抑菌活性和减毒作用,揭示原儿茶酸抑菌的作用机制。通过测定最小抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentration,MIC）、生长曲线、核酸与蛋白质泄漏量、丙二醛（MDA）含量,利用扫描电镜观察副溶血弧菌形态的变化,来评估原儿茶酸对副溶血弧菌的抑菌活性及其对细胞膜完整性和通透性的影响。同时,通过检测亚抑菌浓度（Sub-inhibitory Concentrations,SICs）下原儿茶酸对副溶血弧菌毒力因子合成的影响,研究原儿茶酸对副溶血弧菌的毒力衰减作用。实验结果表明,原儿茶酸的MIC为2 mg/mL,经MIC浓度原儿茶酸处理后,副溶血弧菌发生严重内陷和破裂,上清液中核酸、蛋白质、MDA含量分别是对照组的2.65倍、1.94倍和10.05倍。此外,原儿茶酸在浓度为1/4 MIC时对胞外多糖、胞外蛋白酶、生物被膜的抑制率分别为40.57%、19.79%和26.04%,在浓度为1/2 MIC时的抑制率分别为52.85%、28.38%和34.69%。原儿茶酸主要作用于细胞膜,通过影响细胞膜的完整性和通透性抑制副溶血弧菌的生长,在亚抑菌浓度下便可有效减弱副溶血弧菌毒力。     

溴化呋喃酮对单增李斯特菌生物膜形成及黏附作用的影响

目的:为了预防控制单增李斯特菌的污染,研究群体感应抑制剂3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮在亚抑菌浓度下对单增李斯特菌生物膜形成的调控及黏附作用。方法:采用倍比稀释法确定抑制剂的最小抑菌浓度(MIC)和最低致死剂量(MBC),研究在亚抑菌浓度MIC,5MIC,10MIC时,单增李斯特菌生长曲线、细菌总蛋白含量、胞外多糖含量变化规律。通过结晶紫染色法观察生物膜形成情况,计算抑制率;通过细胞黏附试验测定对黏附率的影响。结果:3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮对单增李斯特菌的MIC为25μg/mL,MBC为400μg/mL;在工作质量浓度分别为25,125,250μg/mL时,对单增李斯特菌生物膜形成的抑制率分别为18.83%,39.98%和83.27%,细菌总蛋白和胞外多糖明显减少;对单增李斯特菌侵染Caco-2细胞黏附率抑制率分别为44.41%,67.68%和85.28%。结论:3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮在亚抑菌浓度下,对单增李斯特菌生物膜的形成以及黏附细胞均存在一定的调控作用,且随着抑制剂浓度的增加抑制效果更明显。     

中草药提取液对采后西兰花主要致腐菌的抑制作用研究

为探讨中草药提取液对采后西兰花致腐菌芸苔生链格孢菌和核盘菌的抑制效果,采用生长速率法、滤纸片法对不同中草药提取液的抑菌效果进行对比,然后利用西兰花活体验证试验做进一步验证,筛选出抑菌效果较好的中草药种类,并进一步通过体积浓度梯度稀释法,对其最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)进行了探讨。结果表明:不同天然植物提取液对采后西兰花主要致腐微生物链格孢菌和核盘菌均有不同程度的抑制作用,其中山豆根、肉豆蔻提取液的抑菌效果较强。山豆根、肉豆蔻提取液对链格孢菌的MIC均为占培养液体积(V/V)的10%、MBC分别为占培养液体积(V/V)的20%和40%;山豆根、肉豆蔻提取液对核盘菌的MIC分别为占培养液体积(V/V)的20%和10%,MBC分别为占培养液体积(V/V)的40%和20%。     

乳酸链球菌素对乳酸菌抑菌作用的研究

目的：为了观察Nisin 对乳酸菌的抑菌效果,探讨Nisin 作为食品级载体筛选方法的最佳抑菌浓度和持续时间。方法：采用试管稀释法和纸片扩散法检测Nisin 对乳酸菌的抑菌浓度,并根据乳酸菌的OD600nm 作出生长曲线,以研究Nisin 对乳酸菌的抑菌效果。结果：Nisin 对乳品工业常用乳酸菌具有较强的抑菌作用,仅某些乳酸乳球菌对Nisin 表现出抗性;Nisin 对乳酸菌有较持久的抑菌效果,可达30～48h 以上。结论：该实验为Nisin 作为食品级载体筛选方法的最佳抑菌浓度和持续时间提供了依据。     

产细菌素植物乳杆菌的筛选及其细菌素对大黄鱼保鲜效果

本研究首先利用富集培养、稀释涂布和琼脂平板扩散实验从传统发酵食品中筛选乳酸菌,采用生理生化实验、16S rDNA基因序列同源性分析对菌株进行鉴定。其次,通过排酸实验、过氧化氢排除实验、蛋白酶水解实验明确该乳酸菌所产的主要抑菌物质。最后,通过醇沉水提、Sephadex LH-20层析获得细菌素粗提物,并将其应用于大黄鱼整鱼保鲜。每3 d取样进行感官评价、pH测定、菌落总数测定、总挥发性盐基氮测定和质构分析,评价其保鲜效果。结果表明,所筛选获得的菌株为植物乳杆菌,命名为MMB-11。植物乳杆菌MMB-11所产细菌素对蛋白酶敏感,具有良好的酸耐受性和热稳定性。将该细菌素应用于大黄鱼保鲜发现,在保藏12 d时,MMB-11细菌素处理组、对照组和Nisin处理组菌落总数分别为3.50×104、1.10×105和4.50×104 CFU/g,挥发性盐基氮分别为20.91±0.66、31.37±0.21和21.44±0.45 mg/100 g。因此,相较于Nisin处理组和对照组,MMB-11细菌素粗提液对大黄鱼具有更好的保鲜效果。本研究可为大黄鱼安全无害的生物保鲜剂的开发奠定理论基础。     

Antimicrobial activity of nisin against Oenococcus oeni and other wine bacteria

Nisin is a bacteriocin used against food spoilage bacteria. Sulphur dioxide is a potent antioxidant as well as an antimicrobial agent widely used in the wine industry. In this study we describe the effect of these important antibacterial agents on the growth of a collection of 64 lactic acid bacteria (23 Oenococcus, 29 Lactobacillus, 3 Leuconostoc and 9 Pediococcus), 23 acetic acid bacteria and 20 yeast isolates, most of them recovered from wine. Minimal inhibitory concentrations (MIC) and minimal bactericide concentrations of nisin, potassium metabisulphite and ethanol were determined. Nisin MIC(50) values for the tested isolates were as follows: 0.024, 12.5, 200 and > or micro for oenococci, lactobacilli-pediococci-leuconostoc, acetic acid bacteria and yeasts, respectively. Synergistic effects on bacterial growth inhibition were observed, and potassium metabisulphite MIC(50) values decreased from one to three orders of dilution when it was combined with subinhibitory concentrations of nisin in the growth media. This effect was observed in all lactic acid bacteria species of our study. Significant differences in nisin sensitivity were observed between Gram-positive and Gram-negative bacteria, and between Oenococcus oeni and other species of lactic acid bacteria. It is concluded that appropriate combinations of nisin and metabisulphite could control the growth of spoilage bacteria in wine and therefore allow a decrease in the levels of sulphur dioxide currently used by the wine industry.     

产抗菌肽乳源乳酸菌的筛选及定向培养

为了获得乳酸菌高效表达抗菌肽的代谢调控方法,对德氏乳杆菌保加利亚亚种等7种乳酸菌进行了产抗菌肽能力的筛选和定向培养。筛选出具有较高抑菌活性的菌株嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌,它们产生的抑菌物质经排除酸、过氧化氢后,仍具有抑菌活性,然而经蛋白酶处理后其抑菌活性明显下降。结果表明,两种菌发酵上清液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有抑制作用。经一系列定向培养嗜酸乳杆菌抑菌直径达到(23.53±0.06)mm,与未经定向培养的抑菌直径(11.63±0.15)mm相比抑菌活性提高了102%;经定向培养的干酪乳杆菌抑菌直径达到(21.27±0.25)mm,与未经定向培养的抑菌直径(12.50±0.10)mm相比抑菌活性提高了70.2%。     

抑制口腔变异链球菌的乳酸菌筛选及其抑菌机理

利用乳酸菌能抑制有害菌的特性,从实验室保藏的乳酸菌中筛选能抑制口腔变异链球菌的菌株,并测定了筛选菌株的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）,以及其对变异链球菌菌膜形成和黏附性的影响,初步研究其抑菌机理。结果表明,有5 株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum） K25、SKT109、YW3-2、YW5-1、YW1-1对变异链球菌具有明显的抑制作用。4 株变异链球菌指示菌中,变异链球菌（Streptococcus mutans）1.2499、1.2500对植物乳杆菌比较敏感。植物乳杆菌K25对变异链球菌的抑制作用比其他4株植物乳杆菌的作用更明显,其MIC最低（1.25×107～2.50×107 CFU/mL）。同时,菌株K25对变异链球菌菌膜形成的抑制率较高,还显著地降低变异链球菌的黏附率。对菌株K25抑菌机理的初步研究表明,其代谢过程中产生的乳酸和过氧化氢起到了主要的抑菌作用。     

粗玉米抗性淀粉的模拟肠道发酵产酸与外源乳酸菌关联性

在模拟大肠环境(厌氧和37℃)下,利用健康成人粪便提取物发酵粗玉米抗性淀粉,研究短链脂肪酸的产生情况,并剖析外源乳酸菌对产酸模式的影响。实验结果表明,粪便提取物单独发酵抗性淀粉时,短链脂肪酸含量随发酵时间增加而呈增加趋势;粪便提取物和2株乳酸杆菌共同发酵粗玉米抗性淀粉时,发酵产物中乙酸含量增加,丙酸和丁酸含量没有明显变化;当粪便提取物和2株乳酸球菌共同发酵粗玉米抗性淀粉时,发酵产物中丙酸和丁酸含量明显增加,乙酸含量没有明显变化。研究结果表明,外源性乳酸菌影响粗玉米抗性淀粉的模拟肠道发酵产酸模式。     

产抑菌活性物质菌株的筛选及其抑菌机理的研究

从内蒙古锡林郭勒盟地区酸马奶酒中分离出的9株乳酸菌和5株酵母菌中筛选抑菌效果较好的菌株,并对其发酵液的抑菌机理进行研究。以金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌肠亚种和荧光假单胞菌作为指示菌,通过牛津杯琼脂扩散法筛选出乳酸菌E13和D6与酵母菌J10A1的共生发酵液具有较强的抑菌能力,比乳酸菌单独发酵抑菌效果分别增加2.48 mm和1.45 mm。两株乳酸菌产生的抑菌活性物质使沙门氏菌生长曲线延滞期延长,对数期缩短,对数期峰值降低;电解质、可溶性总糖外渗,导致菌液电导率和可溶性总糖含量增加;糖吸收利用能力下降,磷代谢先变缓慢,随后趋于平稳。E13产生的抑菌活性物质的抑菌性更强。结果表明,乳酸菌产生的抑菌活性物质,不仅破坏细菌的细胞壁和细胞膜结构,还会影响菌体细胞代谢,导致细菌无法进行正常的生长和繁殖,从而发挥抑菌作用。     

蓝靛果花青素对乳酸菌生长及酸奶后酸化的影响

以热浸渍法、冷浸渍法、常温浸渍法为基础,通过部分添加不同浓度的二氧化硫和果胶酶,探究不同浸渍工艺对葡萄醪中单宁、总酚含量、pH值、色度、色调等指标的影响。结果表明,冷浸渍法（浸渍温度4 ℃、二氧化硫添加量50 mg/L、浸渍时间13 h）浸提时,葡萄醪中单宁含量6.884 mg/L,总酚含量122.332 mg/L,pH值3.85,色调最低,色度最高;常温浸渍法（浸渍温度20 ℃、二氧化硫添加量50 mg/L、浸渍时间13 h）浸提时,葡萄醪中单宁含量7.612 mg/L,总酚含量134.756 mg/L,pH值3.85,色调最低,色度最高;热浸渍法（浸提温度80 ℃,浸渍时间100 min）浸提时,葡萄醪中单宁含量23.451 mg/L,总酚含量264.688 mg/L,pH值3.43,色调最低,色度最高。     

Antibacterial activity of chitosans and chitosan oligomers with different molecular weights

Antibacterial activities of six chitosans and six chitosan oligomers with different molecular weights (Mws) were examined against four gram-negative (Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Salmonella typhimurium, and Vibrio parahaemolyticus) and seven gram-positive bacteria (Listeria monocytogenes, Bacillus megaterium, B. cereus, Staphylococcus aureus, Lactobacillus plantarum, L. brevis, and L. bulgaricus). Chitosans showed higher antibacterial activities than chitosan oligomers and markedly inhibited growth of most bacteria tested although inhibitory effects differed with Mws of chitosan and the particular bacterium. Chitosan generally showed stronger bactericidal effects with gram-positive bacteria than gram-negative bacteria in the presence of 0.1% chitosan. The minimum inhibitory concentration (MIC) of chitosans ranged from 0.05% to >0.1% depending on the bacteria and Mws of chitosan. As a chitosan solvent, 1% acetic acid was effective in inhibiting the growth of most of the bacteria tested except for lactic acid bacteria that were more effectively suppressed with 1% lactic or formic acids. Antibacterial activity of chitosan was inversely affected by pH (pH 4.5-5.9 range tested), with higher activity at lower pH value.