小鼠后肢缺血模型肌肉组织中S1P相关受体基因表达的研究

目的：：观察不同时间点小鼠后肢缺血模型肌肉组织中S1 P受体的基因表达情况,探讨其在后肢缺血模型血管新生及血流恢复中的作用。方法：将18只8~12周龄C57 Bl/6 J小鼠随机分为3 d组,即术后3 d组、术后7 d组及术后14 d组,每组6只。采用戊巴比妥麻醉小鼠,取仰卧位,钝性分离皮肤肌肉等外周组织后,分别结扎小鼠左后肢股动静脉及其分支后缝合,建立小鼠后肢缺血模型。分别于术后第1、3、5、7、10和14天采用激光多普勒血流分析仪观察缺血后肢血流变化情况。于术后第3、7和14天处死动物取腓肠肌组织行CD31免疫组织化学染色,计数微脉管密度,并提取腓肠肌组织中RNA,应用实时定量荧光PCR( real-time PCR)技术测定腓肠肌组织中S1P受体的mRNA表达情况。结果：术后14 d内,缺血侧与未缺血侧血流比值及缺血侧CD31阳性染色微脉管密度随时间改变逐渐增加。术后第3天,S1P1、S1P2和S1P3受体mRNA表达水平显著性增高,差异有统计学意义(P<0.05);术后第7天和第14天,S1P2受体mRNA表达水平均显著地增高,差异具有统计学意义(P<0.05),而S1P1和S1P3受体mRNA表达水平无明显改变(P>0.05)。结论：小鼠后肢缺血后的血管新生和血流恢复情况在早期可能与S1P1受体、S1P2受体和S1P3受体上调有关,随后与S1P2受体上调有关。     

Isll在后肢发育过程中的表达及作用

目的研究Isll在后肢发育过程中的表达及作用。方法使用Isll—nLacZ、Isll-Cre、HoxB6-Cre和Isllvt小鼠模型,以及X—gal染色、骨染色、组织分析方法研究Isll在后肢发育过程中的表达及作用。结果随着小鼠后肢开始发育,在胚胎期第10．5天,Isll在后肢原基高表达。在胚胎逐渐发育至胚胎期第12．5天的过程中,Isll在后肢的表达逐渐下调。在胚胎期第12．5天,Isll仅在后肢的最后部表达。但在胚胎期第13．5、15．5天,Isll在后肢的后半部表达明显升高,主要在后肢骨骼肌细胞中表达。Isll—Cre谱系研究显示,Isll参与后肢的骨和骨骼肌细胞的形成。利用HoxB6．Cre在后肢中敲除Isll可导致突变鼠后肢发育严重异常,伴有坐骨,耻骨,腓骨和跟骨及脚趾骨发育不良或缺失,突变鼠5号脚趾缺失最多见,而1号脚趾缺失累及较少。突变鼠后肢骨骼肌细胞的中央核比例远高于对照组。结论Isll在小鼠后肢发育过程中动态表达,参与后肢骨骼肌细胞和骨细胞的发育,对后肢发育过程中近一远和前后轴的建立起重要作用。     

大鼠缺血心肌中iNOS的表达及对毛细血管新生的影响

目的　观察不同时期缺血心肌中iNOSmRNA及蛋白质表达及对毛细血管新生的影响。方法　雄性Wistar大鼠 2 4只 ,分别检测心肌梗塞后 1周、2周、3周、4周缺血心肌中内皮细胞数、毛细血管密度和iNOSmRNA及蛋白质表达情况 ;另取复制成功的心肌梗塞大鼠 12只 ,随机分为 2组 ,各 6只 ,一组用iNOS抑制剂S methylisothiourea(SMT ;3mg·kg 1 ·d 1 ) ,另一组用盐水代替SMT作对照 ,2周后检测缺血心肌中内皮细胞数及毛细血管密度。结果　 (1)心肌梗塞 1周后缺血心肌中毛细血管密度、内皮细胞数均明显增加 ,2周后达高峰 ,3周后开始下降 ,4周后下降到 1周时水平。(2 )心肌梗塞 1周后缺血心肌中iNOSmRNA及蛋白质表达明显增加 ,2周后达高峰 ,3周后开始下降 ,4周后下降到正常水平。 (3)加用SMT干预后的大鼠缺血心肌中内皮细胞数和毛细血管密度显著下降。结论　心肌梗塞后缺血心肌中iNOSmRNA及蛋白质表达显著增加 ,且与缺血心肌中内皮细胞和毛细血管密度变化相一致 ;iNOS有促进缺血心肌中内皮细胞增殖和毛细血管新生作用     

沙利度胺对小鼠肝癌血管形成的影响

目的 :研究沙利度胺对小鼠肝癌血管形成的影响 ,并初步探讨其抑瘤机制。方法 :小鼠肝癌 HAC细胞接种于昆明种小鼠前肢腋下皮下 ,建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型 ,随机分为阴性对照组 (蒸馏水灌胃 )、阳性对照组 (接种后第 1、3、5天 ip环磷酰胺 10 0 m g/ kg)、沙利度胺 A组和沙利度胺 B组 (分别于接种后第 1、5天灌胃 5 0 m g· kg- 1 · d- 1 沙利度胺 0 .5 m l)。采用Envision System免疫组织化学方法 ,检测肿瘤组织微血管密度 (MVD)、增殖细胞核抗原 (PCNA)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)。 结果 :阴性对照组、阳性对照组 MVD分别为 (16 .8± 5 .2 )、(11.5± 2 .8) ,PCNA指数分别为 (5 7.1± 6 .3) %、(6 8.2± 4.1) % ,VEGF阳性率分别为 (11.5± 4.3) %、(5 .4± 3.9) %。沙利度胺 A组、B组 MVD分别为 (2 .9± 1.3)、(10 .5±2 .7) ,PCNA指数分别为 (5 1.6± 3.3) %、(5 5 .7± 18.1) % ,VEGF阳性率分别为 (0 .8± 0 .2 ) %、(2 .2± 1.1) %。沙利度胺组MVD、VEGF阳性率均低于阴性对照组 ,差异显著 (P<0 .0 5 )。阳性对照组、沙利度胺 A组、B组抑瘤率分别为 83.8%、5 0 .1%、41.5 %。结论 :沙利度胺通过抑制小鼠肝癌的血管生成 ,抑制肿瘤生长 ,联合使用其他药物 ,可能在实体瘤的治疗中具有良好的应用     

人源碱性成纤维细胞因子基因对缺血心肌血管新生的影响

目的探讨人源碱性成纤维细胞因子(hbFGF)基因对兔缺血心肌血管生成的影响。方法分别向40只新西兰兔心肌缺血模型的心肌注射1010、1012、1013v.g./Kg的携带hbFGFcDNA的腺相关病毒载体或磷酸盐缓冲液。4周后取心肌组织,采用RT-PCR检测hbFGF基因的表达;并于高倍镜下计数缺血区域新生血管数目。结果随着治疗剂量的增加,治疗各组的hbFGFmRNA表达依次增高,差异均具有显著性(P<0.05)。单个高倍视野(HPF)内的新生血管数分别为(4.52±1.37)、(10.78±1.62)和(18.64±3.32)条,而对照组为(4.46±1.42)条。高、中剂量组的新生血管计数结果显著高于对照组(P<0.05)。结论rAAV-2载体介导的hbFGF基因能诱导缺血心肌血管生成,且呈剂量依赖性。     

高同型半胱氨酸血症对大鼠缺血性病变的影响

目的 探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对大鼠缺血性病变的影响.方法 32只SD大鼠随机分为对照组(n=16,每日给予正常饮水)和高同型半胱氨酸组(HH组,n=16,每日给予含1 g/kg蛋氨酸的饮用水).饮水14 d后,手术切除左侧股动、静脉造成单侧下肢缺血模型,继续按各组的饮水方法15 d后观察相关血清生化指标;测定缺血肌肉组织中一氧化氮(NOx)和环磷酸鸟苷(cGMP)的含量;免疫组化法测定双下肢肌肉毛细血管密度;血管造影法观察缺血下肢血管新生的情况.结果 术后第15天,HH组血清高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、尿素氮、尿酸及尿素氮/血肌酐明显高于正常组;而叶酸、维生素B12、 HDL-C和内生肌酐清除率显著低于对照组(P＜0.05或P＜0.01);HDL-C与同型半胱氨酸呈显著负相关(P＜0.05);毛细血管密度和血管造影毛细血管评分记数均显著低于对照组(P＜0.01,P＜0.05);组织中的NOx和cGMP含量均显著低于对照组(P＜0.05,P＜0.01).结论 HHcy不仅可抑制大鼠缺血组织的自我修复,还能降低高密度脂蛋白的浓度,并且导致大鼠不同程度的肾功能损害,多方面加重疾病的进程.     

克拉霉素抑制血管生成及肿瘤转移的实验

目的　研究克拉霉素对血管生成的影响并在此基础上观察其抗肿瘤转移的作用 ,为其临床应用提供实验依据 .方法　采用 b- FGF诱导小鼠腹壁 Matrigel种植体方法进行血管生成实验 ,比较克拉霉素处理组和对照组 Matrigel种植体内血红蛋白含量和微血管面积的差异 .采用 L ewis肺癌C5 7BL /6小鼠模型 ,观察比较克拉霉素对肿瘤组织内微血管密度、移植瘤体积、肺脏转移和实验小鼠存活时间的影响 .结果　克拉霉素剂量大于或等于 4 0 mg· kg- 1· d- 1时 ,Matrigel种植体中血红蛋白含量和微血管面积开始明显减少 ,并具有剂量 -效应关系 .克拉霉素能够明显降低肿瘤组织内的微血管密度 [(2 7± 10 ) vs (14± 7) ,P=0 .0 4 2 ],肺脏转移瘤数量 [(10± 5 ) vs (17± 9) ,P=0 .0 39]并明显延长荷瘤小鼠的存活时间 [(2 7± 10 ) d vs(19± 8) d,P=0 .0 2 2 ].结论　克拉霉素对 b- FGF诱导和肿瘤组织内的血管生成均具有明显抑制作用 ,能够有效减少荷瘤小鼠的肿瘤转移并延长存活时间 ,在肿瘤的综合治疗中具有一定的应用价值     

Angiogenesis effects of adenovirus—mediated gene transfer of VEGF—B on chronic ischemic myocardium

Objective: To study the angiogenesis effects of adenovirus-mediated gene transfer of VEGF-B on chronic ischemic myocardium. Methods: Domestic pigs underwent thoracotomy and placement of an ameroid constrictor on the circumflex coronary artery. Four weeks later, Ad. VEGF-B, Ad. LacZ or PBS were administrated directly into the myocardium at 10 sites in the circumflex distribution (109 PFU or 100 μl) according to groups. Echocardiography and ex vivo coronary angiography were performed. The injection sites around myocardium were harvested and subjected to histological analysis and immunochemical staining. Results: E-chocardiography assessment 4 weeks after vector administration demonstrated significant improvement of regional wall systolic function. Collateral vessel development assessed by angiography was also significantly greater in Ad. VEGF-B animals than that in control animals. Vascular density analysis revealed a mean of 43±5 neovessels per high-power field in Ad. VEGF-B group versus 19±4 and 17±6 in     

抑眩宁颗粒对小鼠和大鼠缺血性眩晕的治疗作用及其机制

目的：探讨抑眩宁颗粒对缺血性眩晕小鼠和大鼠的治疗作用,阐述其对小鼠和大鼠脑组织炎症损伤及氧化应激的影响。方法：分别采用机械眩晕和结扎双侧颈总动脉（CCA）的方法建立眩晕小鼠和大鼠模型。选择小鼠和大鼠各60只,随机分为正常对照组、模型组、低剂量抑眩宁颗粒组（2.25 g·kg^-1/1.50 g·kg^-1）、中剂量抑眩宁颗粒组（4.50 g·kg^-1/3.00 g·kg^-1）、高剂量抑眩宁颗粒组（9.00 g·kg^-1/6.00 g·kg^-1）和阳性对照组（1.50 g·kg^-1/1.00 mg·kg^-1盐酸氟桂利嗪胶囊）,每组10只。正常对照组和模型组小鼠和大鼠灌胃给予10 mL·kg^-1生理盐水,其余各组小鼠和大鼠给予10 mL·kg^-1相应药物,每天1次,连续给药7 d。分别测定各组小鼠和大鼠跳台逃避时间,检测各组小鼠的进食量,比色法检测各组大鼠脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平,ELISA法检测各组大鼠脑组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）水平。结果：与模型组比较,各剂量抑眩宁颗粒组和阳性对照组小鼠和大鼠跳台逃避时间缩短（P<0.05或P<0.01）,各组小鼠进食量增多;与模型组比较,各剂量抑眩宁颗粒组大鼠脑组织中SOD明显升高（P<0.05或P<0.01）,各剂量抑眩宁颗粒组大鼠脑组织中MDA水平明显降低（P<0.01）。与模型组比较,中和高剂量抑眩宁颗粒组大鼠脑组织中TNF-α和IL-1β水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论：抑眩宁颗粒可抑制缺血性眩晕大鼠脑组织中的炎症损伤,降低氧化应激反应,从而对缺血性眩晕发挥治疗作用。     

阿司匹林对大鼠缺血心肌血管生成及内皮祖细胞动员的影响

目的观察阿司匹林对大鼠缺血心肌血管生成和内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)动员的影响和可能机制.方法实验大鼠分为正常对照组、假手术组、心肌缺血加大剂量阿司匹林组、心肌缺血加小剂量阿司匹林组和单纯心肌缺血组.心肌缺血组和假手术组于术后一周从心腔内取血测血管内皮生长因子(VEGF),外周血分离单个核细胞培养计数EPCs,28 d后取缺血区心肌免疫组化法测毛细血管密度.结果单纯心肌缺血组和假手术组与正常对照组相比,血浆VEGF显著增多[(101.51±16.97)、(94.67±11.78)vs(80.07±10.32),(P＜0.05)];心肌缺血加小剂量阿司匹林组与正常对照组相比,外周血EPCs显著增多[(42±7)vs(20±6),(P＜0.05)];单纯心肌缺血组与正常对照组相比,毛细血管密度显著增加[(600±104)vs(431±73),(P＜0.05)];大剂量阿司匹林抑制了因缺血导致的VEGF、EPCs和毛细血管密度的增加分别由缺血时的(101.51±16.97)、(46±9)、(600±104)降至(70.76±10.15)、(23±6)、(431±80),(P＜0.05).结论大剂量阿司匹林可通过抑制VEGF的表达,抑制大鼠缺血心肌的血管生成和因缺血和损伤导致的EPCs的动员.     

大鼠缺血心肌微血管内皮细胞血管新生的生物学特征

[目的]观察大鼠缺血心肌微血管内皮细胞(CMECs)血管新生的生物学特征。[方法]采用结扎法建立大鼠心肌缺血模型,植块法培养CMECs,倒置相差显微镜观察细胞形态学特征,免疫细胞化学法检测CMECs特异性抗原。实验分组将大鼠缺血CMECs作为缺血组(I组),正常大鼠CMECs作为对照组(N组),采用噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线并检测细胞增殖能力,划痕法测定细胞迁移能力,倒置相差显微镜观察管腔结构形成情况。采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测细胞增殖相关蛋白激酶(ERK)和细胞死亡相关分子(p53)mRNA的表达情况。[结果]大鼠CMECs具备典型微血管内皮细胞特征,Ⅷ因子、CD31相关抗原免疫染色鉴定均为阳性。N组和I组迁移窗口期均为第1天,成管窗口期均为第2天,N组和I组的增殖窗口期分别为第3天、第6天。两组比较,I组迁移率、增殖率和成管率均低于N组,以迁移率降低最为明显(P0.01)。I组ERK、p53 mRNA表达均高于N组(P0.05)。[结论]缺血CMECs的血管新生能力明显降低,血管新生增殖窗口期改变,可能与ERK和p53mRNA表达的变化有关,为进一步研究其基因组学及药物干预提供实验依据。     

脑源性EPO及其脑缺血耐受作用

脑源性EPO的发现和研究,为探讨脑缺血耐受机制提供了新的视角,也为脑缺血的防治提供了新的启示。笔者就EPO在脑组织中的分布、表达和在脑缺血时发挥的脑缺血耐受作用的新近研究做一综述。     

过表达HGF促慢性缺血心肌处血管生成的实验研究

目的研究过表达HGF对促进缺血心肌处血管生成作用及对心功能的影响。方法经左胸冠状动脉回旋支放置Ameroid环的方法建立稳定有效的慢性心肌缺血猪模型。随机分为3组(n=6)于缺血心肌处分别注射4×109pfu 200μL AdHGF、4×109pfu 200μL AdNull、200μL Ns。继续饲养4周,检测心脏功能及心肌HGF蛋白表达等。结果全部实验动物成功构建慢性缺血性心脏病模型;治疗后心脏彩超检查示AdHGF组左室前壁缺血区室壁增厚,灌注明显改善,运动增强,LVEDV、LEEF、FS明显增加(P<0.05);AdHGF组心肌组织HGF蛋白较对照组获得较高表达(P<0.05);AdHGF组心肌血管数量及密度均明显高于对照组(P<0.05);Ad-HGF组VIII因子阳性的血管数量明显高于AdNull组(P<0.05)。结论过表达HGF促进慢性缺血心肌处血管生成,增加心肌血流灌注,改善缺血心肌局部微环境,从而改善和保护心功能的作用。     

BQ610对猫急性缺血性心律失常的拮抗作用

目的：观察内皮素A受体拮抗剂BQ610对猫急性心肌缺血性心律失常的影响,以探讨内皮素在急性缺血性心律失常发生中的作用。方法：结扎猫左冠状动脉前降支（LAD）起始段,造成急性心肌缺血,观察30 min缺血期内心律失常发生情况及LAD内注射BQ610对心律失常的影响。结果：BQ610呈剂量依赖性拮抗LAD结扎引起的猫急性缺血性心律失常。结论：内源性内皮素可能通过内皮素A受体参与致急性缺血性心律失常。     

复方肿瘤血管生成抑制因子口服液对小鼠生殖细胞的影响

目的探讨复方肿瘤血管生成抑制因子口服液（ＣＯＬ－ＴＡＩ）对小鼠生殖细胞的毒性作用。方法小鼠口服３种不同剂量的受试物后,对精子的数量、活动率、存活率、精子形态和生殖器官组织切片进行观察。结果在ＣＯＬ－ＴＡＩ剂量为７３、３６５、１８２４ｍｇ·Ｋｇ－１的实验条件下,对小鼠体重、饮食等行为和性器官组织切片观察,与对照组无明显差异（Ｐ＞０．０５）。ＣＯＬ－ＴＡＩ不引起小鼠精子数量、活动率、存活率,不引起异常精子的产生（Ｐ＞０．０５）。结论复方肿瘤血管生成抑制因子口服液对小鼠生殖细胞无毒性作用。     

丁苯酞促进心肌梗死大鼠血管再生的作用研究#br#

［摘要］目的探讨丁苯酞（dl-3-n-butyphthalide,NBP）对心肌梗死大鼠血管再生的促进作用及其相关机制。方法取SD大鼠建立心肌梗死模型,分为假手术（Sham,0.9％氯化钠注射液）组、心肌梗死（MI）组、NBP低剂量（NBP-L,20 mg/kg）组和NBP高剂量（NBP-H,40 mg/kg）组,每组6只大鼠。每天给药1次,连续给药2周。通过氯化三苯基四氮唑染色计算心肌梗死面积,超声心动图检测心脏功能,免疫组织化学染色检测心肌梗死边缘区新生血管密度,实时荧光定量PCR检测心肌组织中血管生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,β-FGF）以及Notch 1基因表达情况。结果Sham组大鼠均未见心肌梗死灶,MI组、NBP-L组和NBP-H组大鼠心肌梗死面积百分率大于Sham组,NBP-L组和NBP-H组大鼠心肌梗死面积百分率小于MI组,NBP-H组大鼠心肌梗死面积百分率小于NBP-L组（P＜0.05）。MI组、NBP-L组和NBP-H组大鼠LVESP、+dp/dt max、-dp/dt max低于Sham组,LVED高于Sham组,NBP-L组和NBP-H组大鼠LVESP、+dp/dt max、-dp/dt max高于MI组,LVED低于MI组,NBP-H组大鼠LVESP、+dp/dt max、-dp/dt max高于NBP-L组,LVED低于NBP-L组（P＜0.05）。NBP-L组和NBP-H组心肌梗死边缘区毛细血管密度高于MI组,NBP-H组心肌梗死边缘区毛细血管密度高于NBP-L组（P＜0.05)。MI组大鼠心肌VEGF、β-FGF mRNA水平低于Sham组,NBP-L组和NBP-H组VEGF和β-FGF mRNA水平高于Sham组和MI组,NBP-H组VEGF和β-FGF mRNA水平高于NBP-L组（P＜0.05）。MI组大鼠心肌组织中Notch 1基因表达明显低于Sham组,NBP-L组和NBP-H组大鼠心肌中Notch 1基因表达高于Sham组和MI组,NBP-H组大鼠心肌中Notch 1基因表达高于NBP-L组（P＜0.05）。结论NBP能够促进心肌梗死后大鼠血管再生,并且可能与激活Notch 1通路有关。     

慢性束缚应激对昆明小鼠MFC移植瘤血管形成的影响

目的 探讨慢性束缚应激对昆明小鼠移植瘤血管形成的影响.方法 将60只昆明小鼠随机分为正常对照组、单纯肿瘤组、单纯束缚组及肿瘤加束缚组,每组15只,建立相应的慢性束缚应激模型和MFC移植瘤模型,种瘤后10d处死小鼠,测量移植瘤体重量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清VEGF水平,免疫组织化学法检测移植瘤组织VEGF蛋白表达和微血管密度(MVD).结果 与单纯肿瘤组相比,肿瘤加束缚组的移植瘤生长较快,肿瘤增长率达51.08%(P＜0.01);慢性束缚应激可促进小鼠血清VEGF水平升高和移植瘤组织中VEGF与MVD的表达.结论 慢性束缚应激可通过血管形成来促进MFC移植瘤的生长.     

腺病毒介导的血管内皮生长因子165对兔外周血管生成作用的研究

目的：检验以腺病毒为载体的 血管内皮生长因子165（Ad-VEGF165)基因的表达规律及能否促进缺血骨骼肌血管生成。方法：将兔右股动脉离断后,在缺血肌肉组织中直接注入Ad-VEGF165或磷酸盐缓冲液（PBS）,5周后,以血管造影、免疫组化检查及单光子发射计算机断层（SPECT）显像检测局部缺血组织血管新生情况。用酶联免疫分析法（ELISA）检测血浆和肌肉组织中Ad-VEGF165的表达。结果：Ad-VEGF165注入缺血肌肉组织后24h达到表达高峰,1周时降至基线水平,血浆及对侧健康的肌肉组织中无目的基因表达,治疗缺血肢体侧枝血管（P＜0．01）、血管密度（P＜0．05）及相对血流（P＜0．01）均明显高于对照组。结论：缺血肌肉组织中直接注入Ad-VEGF165可诱导局部VEGF蛋白表达,促进缺血部位的血管生成,增加血流量。     

缺血后处理对大鼠无心跳供体肺移植的保护作用

目的: 在大鼠无心跳供体(non-heart-beating donor,NHBD)肺移植动物模型上观察缺血后处理对NHBD供肺的保护作用。方法: 将40只大鼠随机分成缺血后处理组(IPO组)和对照组(C组),每组10对,用“两套管一支架法”完成无心跳供体左肺原位移植。C组肺移植后直接开放肺动脉恢复灌注,而IPO组肺移植后给予5次1 min再灌 /1 min再阻断的后处理措施,然后全面恢复再灌注。结果: IPO组与C组比较,NHBD肺移植术后肺水含量低、肺损伤程度轻,而肺顺应性、肺结构和功能保存更好。此外,IPO组移植术后供肺细胞凋亡程度和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量较C组低,而SOD含量较C组高。结论: 缺血后处理可以减轻NHBD肺移植术后供肺缺血再灌注损伤,保存供肺结构和功能,还可抑制NHBD肺移植术后脂质过氧化反应和细胞凋亡。