肾细胞癌RASSF1A基因启动子区甲基化状况与表达水平研究

目的 检测19例肾细胞癌患者癌组织及癌旁组织Ras相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)基因启动子区甲基化情况并检测其mRNA表达水平,探索两者之间的联系.方法 收集肾细胞癌患者癌组织及相应癌旁组织19份,分别提取其基因组DNA,以甲基化特异性PCR(Methylation special PCR, MSP)法检测RASSF1A基因启动子区甲基化情况,并以QPCR法检测了RASSF1A基因的mRNA表达水平.结果 19例中有10例肾细胞癌患者癌组织存在高甲基化, mRNA表达水平表达降低,二者之间存在显著负相关性(r=-0.8734, P<0.01).结论 肾细胞癌中RASSF1A基因启动子区存在高甲基化,并抑制该基因的表达.     

肾细胞癌RASSFlA基因启动子区甲基化状况与表达水平研究

目的检测19例肾细胞癌患者癌组织及癌旁组织Ras相关区域家族蛋白1A（RASSFlA）基因启动子区甲基化情况并检测其mRNA表达水平,探索两者之间的联系。方法收集肾细胞癌患者癌组织及相应癌旁组织19份,分别提取其基因组DNA,以甲基化特异性PCR（Methylation special PCR,MSP）法检测RASSFlA基因启动子区甲基化情况。并以QPCR法检测了RASSFlA基因的mRNA表达水平。结果19例中有lO例肾细胞癌患者癌组织存在高甲基化,mRNA表达水平表达降低,二者之间存在显著负相关性（r=-0．8734,P〈0．01）。结论肾细胞癌中RASSFlA基因启动子区存在高甲基化,并抑制该基因的表达。     

基因组消减杂交技术筛选肾透明细胞癌转移相关甲基化基因

目的:筛选能够早期诊断和预测肾透明细胞癌转移相关基因的甲基化生物标志.方法:应用本室从临床新鲜组织标本体外培养建立的低转移性和高转移性肾透明细胞癌细胞株,病理学鉴定后提取基因组DNA,应用3轮NotⅠ基因组消减杂交的方法富集差异甲基化序列,差异序列连接载体,转化宿主菌和α筛选后,选取40个序列进行测序,应用生物信息学分析确定启动子CpG岛甲基化序列,并对未知基因功能进行预测.结果:DNA测序后获得了27个单一克隆在高转移和低转移性肾透明细胞癌基因组中存在甲基化差异;其中5个序列具有CpG岛,其中2个对应于基因MYADM和LOC646024的启动子区.MYADM与血细胞成熟、干细胞再生有关;而LOC646024与NK细胞抗肿瘤相关的UL16结合蛋白1有85%的相似度.结论:本研究从不同转移能力的中国人肾透明细胞癌基因组中获得多种转移相关性的新甲基化序列,发现MYADM和LOC646024候选基因与肾癌转移相关.     

肾透明细胞癌中survivin和PCNA表达及其相关性研究

目的 探讨survivin基因表达与肾遗明细胞癌生物学行为及与PCNA表达的关系。方法 利用免疫组化法检测58例肾透明细胞癌和10例正常肾组织中survivin和PCNA的表达。结果 survivin和PCNA的表达阳性检测率分别为65．5％（38／58）和77．6％（45／58），而在10例正常肾组织阳性表达率分别为0（0／10）和30．0％（3／10）。survivin和PCNA的阳性表达均与肾透明细胞癌病理分级、临床分期、有无淋巴结转移密切相羌。survivin的阳性表达与PCNA的阳性表达呈正相关。结论 survivin和pCNA基因在肾透明细胞癌的发生、发展中起着协同的作用。它们的检测可能对肾透明细胞癌恶性程度的判定、预后和进一步治疗提供有效的依据。     

m5C甲基化相关基因预测肾透明细胞癌的预后

目的：利用肿瘤基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中的数据,构建m5C甲基化相关基因组成的生存预后模型,分析与肾透明细胞癌生存有关的独立预后影响因素以预测肾透明细胞癌患者的预后。方法：从TCGA数据库下载肾透明细胞癌患者资料,从已发表的文献中获取m5C甲基化相关基因并分析其在肿瘤组和对照组间的表达差异。对这些基因进行共识聚类分析以揭示m5C甲基化相关基因与肾透明细胞癌预后之间的关系。通过单变量Cox分析和Lasso?Cox回归分析构建出生存预后模型并分析与肾透明细胞癌相关的预后影响因素,GO和KEGG富集分析进一步探索生物功能和潜在的信号通路。通过qRT?PCR验证m5C甲基化相关基因在肾透明细胞癌细胞系及组织和正常肾细胞系及组织之间的差异表达。 结果：m5C甲基化相关基因在肾透明细胞癌肿瘤组和正常组之间存在差异性表达。共识聚类分析结果显示亚群1的肾透明细胞癌患者预后优于亚群2。构建的生存预后模型将肾透明细胞癌分为高风险组和低风险组,单变量和多变量Cox分析显示分级和分期可能是肾透明细胞癌的独立预后因素,而GO和KEGG分析显示m5C?RNA甲基化修饰可影响肾透明细胞癌的进展。 此外,qRT?PCR实验也证实m5C甲基化相关基因在肾透明细胞癌肿瘤组和正常组之间表达存在差异。结论：本文构建的m5C 甲基化相关基因的生存预后模型可以预测肾透明细胞癌患者的预后。     

凋亡抑制基因XIAP在肾透明细胞癌中的表达

目的研究凋亡抑制基因XIAP在肾透明细胞癌组织的表达情况,以探讨其与肾癌临床病理特征的关系。方法应用反转录-聚合酶链反应和免疫组织化学法,检测XIAP在70例肾透明细胞癌中的表达情况。结果70例肾癌组织中XIAP基因高表达,XIAP蛋白阳性表达率74.2%,10例非肿瘤肾组织无1例XIAP表达阳性;随着病理分级和临床分期的逐渐升高,XIAP蛋白的表达也愈高,差异有统计学意义(P<0.05);XIAP的表达与肾癌的病理分级、临床分期相关(P<0.05)。结论XIAP的表达与肾癌的病理分级、临床分期密切相关,XIAP可作为反映肾癌生物学行为的指标之一,有可能用于肾癌预后的判断。     

SATB1在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的 检测肾透明细胞癌中特异AT序列结合蛋白1(SATB1)的表达,分析SATB1的表达与肾透明细胞癌的发生、进展及转移的关系及意义.方法 以RT-PCR法检测30例成对肾癌组织及癌旁正常组织、5例非癌肾组织、肾透明细胞癌786-O细胞株中SATB1 mRNA的表达,分析SATB1表达与临床病理参数的相关性.结果 SATB1在肾透明细胞癌癌组织及癌旁组织中均有表达,癌组织中SATB1 mRNA表达量显著高于癌旁组织(P＜0.05),SATB1在非癌肾组织中有微弱表达,SATB1 mRNA的表达随临床分期的升高而增加,并且在淋巴结转移组高于未转移组(P＜0.05).结论 SATB1 mRNA的表达水平增高与肾透明细胞癌的发生、发展及转移有关.     

WNT信号通路抑制因子-1和β连环蛋白在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨WNT信号通路抑制因子-1(WIF-1)和β连环蛋白(β-catenin)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达及其与肾癌临床分期、病理分级的相关性。方法选取2010年2月—2015年6月中国医科大学附属盛京医院第二泌尿外科行根治性手术切除的ccRCC患者102例为研究对象,应用免疫组织化学SP法检测102例肾细胞癌组织及相对应的癌旁正常肾脏组织中WIF-1、β-catenin表达情况。结果 WIF-1在ccRCC组织及正常组织中的表达差异有统计学意义(59.7±19.6 vs.112.2±18.6,t=3.104,P<0.05);β-catenin在ccRCC组织及正常组织中的表达差异亦有统计学意义(157.1±17.2 vs.102.1±18.7,t=4.015,P<0.05)。WIF-1的表达与肾透明细胞癌的临床分期(r=-0.542,P<0.05)、病理分级(r=-0.476,P<0.05)呈负相关;β-catenin的表达与肾透明细胞癌的临床分期(r=0.511,P<0.05)、病理分级(r=0.562,P<0.05)呈正相关.;WIF-1与β-catenin在肾癌中的表达呈负相关(r=-0.425,P<0.01)。结论 WIF-1表达降低和β-catenin表达升高与肾癌的病理分级和临床分期有关,对ccRCC预后评价有一定参考意义,也可为其治疗提供一种可能的靶向治疗途径。     

宫颈癌细胞中DAPK1基因CpG岛甲基化及其表达

目的 :探讨宫颈癌细胞中凋亡相关蛋白激酶 1(DAPK1 )基因CpG岛甲基化及其表达与宫颈癌的相关性 .方法 :应用甲基化特异性PCR和SABC免疫组化方法 ,检测 32(鳞癌 1 8,腺癌 1 4 )例宫颈癌组织DAPK1基因CpG岛甲基化修饰及蛋白表达 .结果 :宫颈癌中DAPK1基因甲基化扩增阳性率明显增高 5 6 .3% ,与正常宫颈比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,鳞癌与腺癌甲基化扩增阳性率无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;宫颈癌中DAPK1蛋白表达阳性率降低 1 5 .6 3% ,与正常宫颈比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,鳞癌和 7例与腺癌无显著性差异 (P >0 .0 5 ) .结论 :DAPK1基因CpG岛异常甲基化修饰能抑制DAPK1的转录 ,使DAPK1蛋白不表达 ,丧失抑癌作用 ,是促进正常宫颈上皮细胞癌变的一个重要因素     

黏蛋白在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的: 探讨黏蛋白1(MUC1)在人肾透明细胞癌中的表达及意义.方法: 采用免疫组织化学SP法检测57例肾透明细胞癌(RCCC组)和21例肾癌旁组织(对照组)中MUC1的表达.应用Image-Pro Plus 6.0型图像分析软件定量测定阳性染色区的平均吸光度值.结果: MUC1定位表达于细胞质中,肾癌细胞和癌旁组织中均有表达,RCCC组平均吸光度值为0.4295±0.0939,对照组为0.3371±0.0822,差异有统计学意义(P<0.01).MUC1表达与肾癌的临床分期及有无转移均有一定关系(P<0.01和P<0.05).结论: MUC1 在人肾透明细胞癌中表达增强,可能在人肾透明细胞癌的发生、发展、浸润及转移中起重要作用,可能成为肾癌免疫治疗的靶抗原.     

肾细胞癌中DACT2基因启动子区甲基化状态与mRNA表达的研究

目的 探讨DACT2基因在肾细胞癌(RCC)发生、发展中的作用.方法 收集该院2014年8月至2015年8月59例住院RCC患者肾癌根治术后RCC及相应癌旁组织、正常组织标本,分别应用甲基化特异性PCR(MSP)、实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测其DACT2基因甲基化状态、mRNA表达情况,应用免疫组织化学过氧化酶标记的链霉卵白素(SP)法检测其细胞质内β-catenin蛋白的表达,并分析RCC组织DACT2基因甲基化状态及mRNA表达与临床病理特征的关系,以及DACT2基因甲基化与mRNA及β-catenin表达的关系.结果 RCC组织中DACT2 mRNA相对表达水平(0.427±0.025)明显低于癌旁组织(0.801±0.047)和正常组织(0.872±0.022),RCC组织中DACT2基因甲基化阳性率(45.76%)明显高于癌旁组织(6.78%)及正常组织(5.08%),差异均有统计学意义(P<0.05),而癌旁组织与正常组织比较差异均无统计学意义(P>0.05).在RCC组织中DACT2基因mRNA相对表达水平及启动子区甲基化发生率与患者的年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、Fuhrman分级等临床资料间均无明显相关性(P>0.05).甲基化组中DACT2基因的mRNA相对表达水平低于非甲基化组,差异有统计学意义(P<0.05).RCC组织中β-catenin蛋白在细胞质中的表达率高于癌旁组织和正常组织,差异有统计学意义(P<0.05),且DACT2基因甲基化与β-catenin蛋白表达呈正相关(r=0.324,P=0.012).结论 DACT2基因启动子区甲基化及其mRNA相对表达水平降低可能参与RCC的发生,但与RCC的临床进展无关,DACT2基因启动子区发生甲基化可能是引起其mRNA相对表达降低的原因之一,且肾癌组织DACT2基因甲基化的发生可能与β-catenin的高表达有关.     

肾透明细胞癌组织中T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1的表达

目的:探讨T 淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)表达与肾透明细胞癌发生、发展和转移的关系.方法:应用免疫组化及原位杂交方法检测10例正常肾组织及68例肾透明细胞癌组织中Tiam1 蛋白及mRNA的表达.结果:68例肾透明细胞癌组织中Tiam1蛋白及mRNA的阳性表达率分别为63.2%(43/68)、54.4%(37/68),10例正常肾组织中Tiam1蛋白及mRNA表达均为阴性,二者相比差异有统计学意义(P蛋白<0.001;PmRNA=0.001).Tiam1蛋白及mRNA的表达与肿瘤的临床分期(χ2蛋白=15.308,P<0.001;χ2mRNA=10.329,P=0.001)、淋巴结转移(χ2蛋白=5.620,P=0.018;χ2mRNA=9.379,P=0.002)及远处转移(χ2蛋白=6.654,P=0.010;χ2mRNA=4.148,P=0.042)有关,而与肿瘤大小无关(χ2蛋白=0.651,P=0.420;χ2mRNA=0.005,P=0.941).结论:Tiam1对判断肾透明细胞癌的侵袭转移和预后有重要意义.     

食管鳞状细胞癌中WIF-1基因启动子区甲基化状态及mRNA表达的研究

目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中WIF-1基因启动子甲基化状态及mRNA表达水平及其与病理指标之间的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测62例ESCC组织及30例癌旁组织中WIF-1基因启动子区甲基化状态和mRNA的表达水平,应用SPSS13.0探讨其与临床病理资料的关系。结果 WIF-1基因在癌组织中的甲基化率59.7%(37/62)明显高于癌旁组织13.3%(4/30),差异有显著性(P<0.05);其甲基化状态与年龄、分化程度及淋巴结转移情况相关(P<0.05);而与其他临床资料(性别、部位、浸润深度、临床分期)无明显相关性(P>0.05)。WIF-1基因mRNA在ESCC组的表达量(0.565±0.112)显著低于癌旁正常组(0.666±0.107),差异有显著性(P<0.05)。结论 WIF-1基因启动子甲基化在食管鳞癌的进展过程中起着重要的作用;WIF-1基因mRNA表达异常可能与ESCC的发生有关,此基因甲基化与mRNA表达两者之间的关系有待进一步研究。     

肾透明细胞癌患者肿瘤组织中CD146 mRNA的表达及意义

目的探讨肾透明细胞癌( CCRCC)患者肿瘤组织中CD146 mRNA的表达及意义。方法用ELISA法定量检测CD146蛋白含量及Real-Time PCR技术检测102例CCRCC患者肿瘤组织中CD146 mRNA的表达,并以51例肾脏良性病变患者手术正常肾组织作为对照。结果发现存在转移的CCRCC患者, CD146蛋白浓度与对照组比较差异有统计学意义(F =52.1,P <0.01),CD146 mRNA 的平均表达值(0.0438±0.0024)明显高于原位CCRCC患者(0.0382±0.0011,P=0.018)和对照组患者(0.0344±0.0010,P=0.001)。结论 CD146 mRNA表达上调与CCRCC的病理分级及淋巴结转移相关,有望成为评判CCRCC恶性程度、转移潜能及预后的一个新指标,为临床的干预性治疗提供可靠±据。     

FBXO11蛋白在透明细胞性肾细胞癌中表达的意义

目的 探讨FBXO11在透明细胞性肾细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,CCRCC）中表达的意义。方法 采用免疫组织化学方法检测77例CCRCC患者肿瘤及35例癌旁组织FBXO11蛋白的表达,分析FBXO11蛋白表达与患者临床病理特征的关系。将CCRCC患者临床病理特征及FBXO11蛋白表达进行COX单因素分析。将单因素分析中有统计学意义的因素引入COX多因素模型,分析影响CCRCC患者总生存期（overall survival,OS）缩短的独立危险因素。结果 FBXO11蛋白阳性表达率在CCRCC中为48.1%,明显高于癌旁组织的25.7%（P<0.05）。FBXO11蛋白阳性表达率在无静脉内癌栓组明显低于有静脉内癌栓组（P<0.05）。COX单因素分析显示高组织学分级、伴有远处转移和高表达FBXO11蛋白是CCRCC患者OS缩短的危险因素（P<0.05）。COX多因素分析显示高表达FBXO11蛋白是CCRCC患者OS缩短的独立预后因素。结论 FBXO11蛋白的高表达可能与CCRCC进展快及患者生存时间短密切相关,检测FBXO11蛋白对CCRCC患者的预后判断有参考价值。     

ALDH1和ABCG2在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义

目的检测肿瘤干细胞标记物ALDH1和ABCG2在人肾透明细胞癌中的表达情况,探讨二者相关性及与临床病理因素的关系。方法采用免疫组化法检测78例肾透明细胞癌及30例癌旁正常肾组织中ALDH1和ABCG2的表达,结合临床病理资料进行关性联分析。结果 ALDH1和ABCG2在肾透明细胞癌组织中的表达明显高于正常肾组织(P<0.05);ALDH1和ABCG2在肾透明细胞癌中的阳性表达与肿瘤的病理分级、临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05),而与患者性别、年龄及肿瘤直径无关(P>0.05)。结论 ALDH1、ABCG2的表达可能在肾透明细胞癌的发生、发展中起着重要的作用。     

膀胱移行细胞癌DBCCR1基因启动子甲基化分析

目的探讨膀胱移行细胞癌DBCCR1基因启动子甲基化状态及其临床意义。方法应用甲基化特异性PCR方法检测40例膀胱移行细胞癌和8例正常膀胱粘膜组织中DBCCRI基因甲基化程度,x^2检验分析其甲基化程度与膀胱癌病理分级分期之间的关系。结果正常膀胱组织未检测到DBCCR1基因启动子甲基化,在膀胱移行细胞癌启动子甲基化扩增阳性化率达42．5％,与膀胱癌病理分级分期没有相关性（P〉0．05）。结论DBCCR1基因启动子异常高甲基化是其失活的主要机制之一,也是膀胱移行细胞癌中一早期事件。     

40例维吾尔族妇女子宫颈鳞癌DAPK基因启动子甲基化分析

目的：分析新疆维吾尔族妇女子宫颈鳞癌死亡相关蛋白激酶（death-associated protein kinase,DAPK）基因启动子甲基化,确定DAPK基因启动子甲基化同新疆维吾尔族妇女子宫颈鳞癌发生的相关性。方法：运用甲基化特异性PCR（methylation-specific polymerase chain reaction,MSP）法检测维吾尔族妇女40例子宫颈鳞癌患者和40例子宫颈正常组织DAPK基因启动子甲基化。结果：维吾尔族妇女子宫颈鳞癌DAPK基因启动子甲基化率为65.0%（26/40）,正常子宫颈组织中DAPK基因启动子甲基化检出率为7.5%（3/40）。结论：DAPK基因启动子甲基化与维吾尔族妇女子宫颈鳞癌发生相关。