聚丙烯-TiO2/CA复合膜固定化脂肪酶最佳条件的研究

以聚丙烯-TiO2/CA复合膜对脂肪酶进行吸附固定,研究了最佳固定化条件:温度20℃,pH8.0,振荡速度100 r/min,吸附时间2h,膜酶活力最高为4.5U/cm2。膜固定化酶转化反应最佳条件:温度35℃,比游离酶降低了5℃;最适pH 8.5,与游离酶相比pH向碱性偏移,间歇水解橄榄油132h酶活为原酶活的56.7%。     

高碘酸钠氧化法固定化磷脂酶A1的研究

研究了高碘酸钠氧化法在纤维素滤纸膜载体上固定化磷脂酶A₁的最佳条件。结果表明,以固定化酶活力为指标,当高碘酸钠浓度为0.15mol/L,活化80min,与浓度为0.05g/mL酶的磷酸盐缓冲溶液（pH为5.8）于戊二醛浓度0.4%、温度4℃交联4h,获得的固定化磷脂酶A₁酶活最高为4.8U/cm²。固定化酶膜的酶学性质为:最适温度35℃;最适pH为9.0。与游离酶相比,pH向碱性偏移1.0;经7次重复使用后,固定化酶膜活力为原酶活的65%以上。SEM结果显示,经高碘酸钠氧化后的纤维素滤纸膜能较好地固定磷脂酶A₁。     

固定化对动植物酯酶性质的影响

比较了离子交换法得到的固定化小麦酯酶和固定化鸡肝酯酶的主要性质与相应的游离酶的性质。结果表明 ,固定化小麦酯酶的最适pH在 5 5附近 ,比游离小麦酶的最适 pH增加了0 8个 pH单位 ;固定化鸡肝酯酶的最适pH在 8 0附近 ,比游离鸡肝酯酶的最适 pH增加了 0 5个pH单位 ;固定化小麦酯酶的最适温度与游离酶的相当 ,但酶活力 温度曲线的峰形变小 ;固定化鸡肝酯酶的最适温度比游离鸡肝酯酶的下降了 5℃ ,酶活力 温度曲线的峰形也略变陡峭。这 2种固定化酯酶对有机磷类农药 (敌敌畏 )抑制的响应明显高于游离酶对农药抑制的响应     

金针菇漆酶的固定化及其性质研究

采用海藻酸钠包埋法制备固定化漆酶,结果表明,固定化pH值为4.5,海藻酸钠与CaCl2质量浓度均为2％,酶液与海藻酸钠体积比为1∶1时,漆酶的固定化效果最佳,酶活回收率为48.6％.固定化酶的最适pH值为3.0,最适温度为40℃,米氏常数Km为21.5μmol/L,游离酶的最适pH值为3.0,最适温度为30℃,米氏常数Km为18.6μmol/L,与游离酶相比,固定化漆酶的热稳定性有明显提高,耐酸性略有增加,最适反应温度提高了10℃.     

β-半乳糖苷酶的固定化及其在乳清行业中的应用

利用海藻酸钠和壳聚糖2种固定化载体对2种β-半乳糖苷酶(Lactozym酶和源于米曲霉的β-半乳糖苷酶)进行固定化,研究了温度和pH对酶活力的影响、游离酶和固定化酶水解乳清中乳糖以及固定化酶的重复利用性。结果表明:与游离酶相比较,固定化酶在最适反应温度、最适反应pH,乳糖水解和重复利用性方面均有不同程度的变化,表现出良好的稳定性。相比之下,壳聚糖固定化酶比海藻酸钠固定化酶的效果好,其中壳聚糖固定化源于米曲霉的β-半乳糖苷酶效果更为突出,该酶的最适反应温度50℃,最适反应pH为3.0,在相同加酶量的条件下水解乳清2 h后,乳糖水解率为72.99%,重复利用6次后,乳糖水解率仍能达到68.58%,重复利用性高,减少成本。研究为利用固定化酶工业化水解乳清中乳糖奠定了一定基础。     

壳聚糖固定化α-葡萄糖苷酶的研究

以粉末状壳聚糖为载体 ,采用吸附 交联的方法将α 葡萄糖苷酶固定化。在最适固定化条件下 ,室温吸附 6h ,然后与 3 5%的戊二醛在 4 5℃交联 6h ,可得到固定化酶的活力为1430 0U ,酶活力回收率为 59 6 %。通过实验发现 ,与游离酶相比 ,固定化酶的最适 pH向酸性方向移动 0 5pH单位 ,为 pH 4 5;最适作用温度达到 70℃ ,比游离α 葡萄糖苷酶提高 5℃ ;酸碱稳定性、热稳定性及贮存稳定性均有较大提高 ;在 6 0℃操作半衰期为 16 8h     

醋酸纤维素-聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶的研究

以醋酸纤维素(CA)和聚四氟乙烯(PTFE)为材料制备醋酸纤维素-聚四氟乙烯复合膜,采用吸附-交联相结合的固定化方法,用该复合膜固定化脂肪酶。研究温度、吸附时间、酶液质量浓度、交联时间和交联剂体积分数对脂肪酶固定化效率和催化效果的影响,并对固定化酶膜的酶学性质进行研究。得到最佳的固定化条件为：温度25℃、吸附时间2h、酶液质量浓度0.02g/mL、交联时间3h、交联剂(戊二醛)体积分数0.2%,固定化酶最大酶活力为17.2U/cm2。固定化酶膜的酶学性质为：最适温度35℃,比游离酶降低了5℃;最适pH8.5,与游离酶相比pH值向碱性偏移1.0;经10次(10h /次)重复使用后,固定化酶相对酶活力为55.5%。SEM结果显示CA-PTFE复合膜能较好的固定化脂肪酶。     

硅胶固定化胰蛋白酶的工艺及特性研究

以硅胶为载体,戊二醛为交联剂,进行了胰蛋白酶固定化的研究.以光度比色法测定蛋白酶活力为指标,优化了戊二醛浓度、pH和酶用量等固定化参数,研究了固定化酶的基本特性、最适作用温度和pH及其对酪蛋白的酶解.结果表明:经优化,制备功能化载体的戊二醛最适浓度为1%,固定化pH为8.0,酶与载体比例为50mg/g.固定化胰蛋白酶比活力为4.89×105U/g,最适作用温度和pH范围分别为60℃和6.0～10.0.50℃水解酪蛋白,水解60min,重复使用8次,回收酶活力约为90%.     

利用固定化乳糖酶连续生产低乳糖乳的研究

利用离子交换树脂D151固定黑曲霉来源乳糖酶,研究固定化酶的酶学特性,优化水解牛乳的工艺条件,以期改善乳糖酶的性质,达到连续生产低乳糖乳的目的.结果表明:固定化酶的最适作用温度和热稳定性与游离酶相比均有所降低.固定化酶最适pH与游离酶相比稍向碱性移动;两者酸碱稳定性有较大差异.金属离子对游离酶和固定化酶水解的抑制或激活作用有较大差异.固定化酶与游离酶相比,对乳糖的Km值稍有升高;低温贮存稳定性稍有增强;在牛奶的天然pH(约为6.5)条件下使用更为适宜.在填充床反应器中,固定化酶连续生产低乳糖乳的最佳条件为:温度为50℃,底物空间流速为1.5h-1,可获得79.7%的乳糖水解率.每隔20h清洗反应柱,固定化酶在10d内生产的乳糖水解乳符合低乳糖乳的要求.固定化乳糖酶连续使用半衰期约为22d.该研究为工业化利用固定化酶连续生产低乳糖乳提供了技术依据.     

乳糖酶的固定化及其特性的研究

本文研究了用卡拉胶包埋法制备固定化脆壁酵母乳糖酶的方法以及影响制备的因素。此法具有包埋酶活力回收率高,方法简便等优点。比较研究了固定化乳糖酶和非固定化乳糖酶的一些生物化学特性。其中固定化酶的最适pH、最适温度和最适水解乳糖浓度与非固定化酶相比无显著性改变。对此固定化酶水解乳清、脱脂乳和全乳中乳糖的研究表明,它能有效地水解这些溶液中的乳糖;在45℃下,它水解这些溶液中乳糖的半衰期均在169～200h之间。     

高碘酸钠氧化法固定化脂肪酶的研究

研究了以醋酸纤维素/聚丙烯复合膜为载体的高碘酸钠氧化法固定化脂肪酶的固定化条件,采用响应面分析法对固定化条件进一步优化,并对固定化酶膜的酶学性质进行了讨论。结果表明,以固定化酶活力为指标,当高碘酸钠浓度为0.15 mol/L,活化为60 min时,浓度为0.013 g/mL的酶液与pH 8.0的磷酸盐缓冲溶液于戊二醛质量分数0.24%,温度4℃下,进行交联反应,反应3.1 h后,获得的固定化酶活最高,为0.52 U/cm2。固定化酶膜的酶学性质为:固定化酶最适温度35℃,最适pH为9.0。     

固定化脂肪酶性能研究及在洗毛中的应用

利用硅藻土吸附法对解酯假丝酵母发酵产生的脂肪酶进行了固定化,研究了固定化酶和游离酶的酶学性质,以及用固定化脂肪酶对羊毛进行生物酶法洗毛。结果表明:固定化酶比游离酶的最适作用温度提高了5℃,最适作用pH值向碱性方向移动了0.5个单位,热稳定性和pH值稳定性有了大幅度提高。在固定化酶的最适作用pH值下,得到最佳的洗毛条件为:温度45℃、浴比1∶35、时间20 h。     

脂肪酶在磁性纳米粒子上固定化及其酶学性质研究

以Fe_3O_4纳米粒子为载体,碳化二亚胺为交联剂,共价结合制备固定化脂肪酶,探讨脂肪酶固定化影响因素,并对固定化脂肪酶性质进行研究;运用TEM测定其粒径,用FTIR检测脂肪酶—Fe_3O_4磁性纳米粒子耦联。结果表明,脂肪酶固定化适宜条件为:200 mg磁性纳米粒子,加入2 ml 2.5mg/mL脂肪酶磷酸盐缓冲液(0.1mol/L,pH7.5),在4℃超声分散45 min,固定化酶最适pH为7.0,最适温度为45℃,均与游离酶相似;与游离酶相比,该固定化脂肪酶热稳定性明显提高,并具有良好操作和存储稳定性。     

大孔树脂D101固定中性脂肪酶及其生物催化应用

以大孔树脂D101固定化中性脂肪酶,研究了固定化条件对酶催化活性的影响,得到了最佳固定化条件:给酶量为90IU/g,固定化温度为35℃,时间为12h,此时固定化酶的活力回收约为60%。固定化酶的半失活温度由游离酶的53℃提高到57℃,最适反应温度和最适pH分别由42℃上升至44℃和由7.5下降到7.3。对固定化中性脂肪酶在生物柴油合成中应用也进行了初步研究。     

棉织物上SESA活化法固定化脂肪酶工艺的研究

研究了对-β-硫酸酯乙砜基苯胺活化法在棉织物上固定化脂肪酶的工艺条件,并考察了固定化酶的最适作用温度和pH及间歇操作稳定性。最佳固定化条件为醚化pH为10.0,偶联pH为7.0,脂肪酶的浓度为6mg/ml,偶联时间为12h,所得固定化脂肪酶的最大活力为35U/g(棉)·min。固定化酶的最适作用温度为35℃,最适pH为8.0,半衰期为6d。     

有机溶剂体系固定化脂肪酶催化合成生物柴油

探讨了有机溶剂体系固定化Candida antarctica脂肪酶催化大豆色拉油合成生物柴油的过程。将固定化Candida antarctica脂肪酶置于有机溶剂体系中催化合成生物柴油的效果较好。研究发现,在40℃下反应10 h,固定化Candida antarctica脂肪酶以石油醚作为有机溶剂转化率最高,当总醇油物质的量比为3∶1,固定化酶占5%(相对于油质量),加入5%质量分数的水时固定化酶反应活性最高,酯化率可以达到88.4%。固定化酶重复使用10次仍具有较高活性。     

海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微胶囊二步法固定化β-葡萄糖苷酶的制备

以二步法制备的ACA微胶囊为载体,对β-葡萄糖苷酶进行固定化,以固定化β-葡萄糖苷酶的酶比活力和酶的稳定性为考查指标,对影响二步法制备固定化β-葡萄糖苷酶的各因素及其性质进行了探讨。ACA微胶囊二步法固定β-葡萄糖苷酶的优化条件是:3.5%海藻酸钠溶解0.15g酶,逐滴滴入到2%的CaCl2溶液中引发25min,所形成微球先在0.4%壳聚糖(0.5%(v/v)醋酸溶解)溶液中进行成膜反应,再在0.2%海藻酸钠进行覆膜反应,然后用1%戊二醛交联4h(4℃)。用上述最适条件制备固定化酶,总酶活的回收率为68.3%。4℃下贮藏,固定化β-葡萄糖苷酶的酶活力在一个月内保持稳定,重复使用3次后其活力仍保持在原来的80%以上。固定化酶反应的最适温度是60℃,最适pH是4.6。     

Effect of membranes with various hydrophobic/hydrophilic properties on lipase immobilized activity and stability

In this study, three membranes: regenerated cellulose (RC), glass fiber (GF) and polyvinylidene fluoride (PVDF), were grafted with 1,4-diaminobutane (DA) and activated with glutaraldehyde (GA) for lipase covalent immobilization. The efficiencies of lipases immobilized on these membranes with different hydrophobic/hydrophilic properties were compared. The lipase immobilized on hydrophobic PVDF-DA-GA membrane exhibited more than an 11-fold increase in activity compared to its immobilization on a hydrophilic RC-DA-GA membrane. The relationship between surface hydrophobicity and immobilized efficiencies was investigated using hydrophobic/hydrophilic GF membranes which were prepared by grafting a different ratio of n-butylamine/1,4-diaminobutane (BA/DA). The immobilized lipase activity on the GF membrane increased with the increased BA/DA ratio. This means that lipase activity was exhibited more on the hydrophobic surface. Moreover, the modified PVDF-DA membrane was grafted with GA, epichlorohydrin (EPI) and cyanuric chloride (CC), respectively. The lipase immobilized on the PVDF-DA-EPI membrane displayed the highest specific activity compared to other membranes. This immobilized lipase exhibited more significant stability on pH, thermal, reuse, and storage than did the free enzyme. The results exhibited that the EPI modified PVDF is a promising support for lipase immobilization.     

响应面法优化脂肪酶的固定化条件及其水解橄榄油的特性研究

采用Sepharose CL-4B和7种大孔树脂为载体固定Palatase 20000L脂肪酶,对载体进行筛选,以酶活力为指标,采用响应面法优化固定化条件,并考察所制得固定化酶的稳定性和水解橄榄油的酶学性质。结果表明：以大孔树脂HPD-600为载体制得的固定化酶具有较高的活性和良好的稳定性。其最优的固定化条件为：pH3.9,酶与载体比例为9.1mg/g,吸附时间1.8h。在最优条件下制得固定化酶在最适合条件下测得的酶活力达到1440U/g,酶活回收率大于50%。固定化酶最适作用温度为50℃,最适作用pH值为8.0。固定化酶的Km值为0.130g/mL,高于游离酶的Km(0.069g/mL)。固定化酶的热稳定性有一定程度的提高,其重复操作5次后相对酶活力仍保持在58%以上。