磷酯酶C对家兔血小板聚集和超微结构的影响

目的　应用电镜研究磷酯酶C(phospholipaseC ,PLC)对家兔血小板聚集和超微结构的影响 ,以探讨用药后PLC抗血小板聚集作用的机制。方法　家兔颈动脉插管取血 ,制备PRP ,将其分为 4组 :①空白对照组 ;②生理盐水组 ;③ 0 5UPLC组 ;④ 2 5UPLC组。 2～ 4组分别用ADP诱导聚集 ,测出其聚集抑制率 ,各组分别制成超薄切片样品进行电镜观察、摄片。结果　 0 5、2 5UPLC明显抑制血小板聚集反应 ,聚集抑制率分别为 86 0 3 %± 12 6%和 82 47%±5 49% ;0 5UPLC抑制血小板形成伪足 ,α颗粒和致密颗粒较多 ,OCS管腔较小 ,其超微结构较生理盐水组变化小 ;2 5UPLC处理血小板的形态结构和超微结构与空白对照组无差异 ,血小板呈圆形或椭圆形 ,边缘光滑 ,无伪足样突起 ,α颗粒、致密颗粒、OCS等正常分布于胞质中。结论　PLC明显抑制ADP诱导的血小板聚集反应及其超微结构的改变 ,这可能是PLC抗血小板聚集作用的重要原因之一     

磷酯酶C抗血小板功能的研究Ⅰ——对血小板聚集率和粘附率的作用

目的　通过研究PLC对家兔血小板粘附率和聚集率的作用 ,以探讨PLC对血小板功能的影响。方法　家兔麻醉后 ,经十二指肠给予阴性对照辅料 ,阳性对照ASA和 6种剂量的PLC ,于给药前及给药后 1、2、4h颈动脉取血测定以ADP、AA、Collagen为诱导剂时的血小板聚集率 ,同时用玻球法测定血小板的粘附率。结果　PLC 10 0、 2 0 0IU·kg-1对家兔血小板粘附率无明显影响。PLC 4 0 0～ 10 0 0IU·kg-1可显著地降低血小板粘附率 ,并呈现一定的剂量效应依赖关系。同一剂量PLC组给药后 1、2、4h时相比P <0 0 5。PLC10 0～ 10 0 0IU·kg-16种剂量组在用ADP、AA、Collagen诱导时 ,均可显著地抑制血小板聚集 ;与阴性对照辅料组相比P <0 0 5 ,与阳性对照组相比 ,在ADP诱导时 ,10 0IU·kg-1组的抑制较弱 (P <0 0 5 ) ,而 80 0、10 0 0IU·kg-1组的抑制较强 (P <0 0 5 ) ,并呈一定的剂量效应和时间效应关系 ;而在AA诱导时 ,PLC各组在给药后 2、4h时的抑制率与ASA的相当 ,无明显剂量效应依赖关系 ,而有一定的时间效应关系 ;在Collagen诱导时 ,PLC各组的抑制作用均弱于ASA(P<0 0 5 ) ,无明显的剂量效应依赖关系 ,而有一定的时间效应关系。结论　①PLC经十二指肠给药 ,10 0、2 0 0IU·kg-1对家兔血小板粘附性无明显影响 ,而 4     

钩藤碱对家兔血小板聚集及胞浆游离钙离子浓度的影响

目的 研究钩藤碱(Rhy)对兔血小板细胞内游离钙离子浓度及血小板聚集的影响.方法 56只雄性家兔的血样随机分为正常对照组,阿司匹林0.85,1.69和2.78 mmol·L-1组,Rhy 0.33,0.65和1.30 mmol·L-1组.Born法测定血小板聚集率,双波长Fura-2荧光分光光度法测定血小板胞浆游离钙离...     

甲基莲心碱对血小板聚集和胞浆游离钙离子浓度的影响

采用比浊法和Ｆｕｒａ－２荧光测定法，研究甲基莲心碱（Ｎｅｆ）对人和大鼠血小板聚集功能及胞浆游离钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的影响．实验结果表明，Ｎｅｆ在体内外明显抑制多种诱聚剂诱导的血小板聚集，在有外钙或无外钙状态下，对血小板静息［Ｃａ２＋］ｉ无明显影响，但对ＡＤＰ刺激后的血小板［Ｃａ２＋］ｉ的升高有明显抑制作用，且呈剂量依赖性，表明Ｎｅｆ具有抑制血小板外钙内流和内钙释放的双重作用     

二苯乙烯苷对血小板聚集和细胞质游离钙离子浓度的影响

［摘要］目的观察二苯乙烯苷对兔血小板内游离钙离子浓度（［Ca2+］i）的影响,探讨其抗血小板聚集的作用机制。方法采用比浊法测定兔血小板聚集功能;双波长荧光探针Fura 2测定血小板细胞质内［Ca2+］i。结果1～10 μmol&#8226;L 1二苯乙烯苷体外给药对二磷酸腺苷（ADP）和凝血酶引起的血小板聚集有浓度依赖性抑制作用。有无细胞外钙时, 1～10 μmol&#8226;L 1二苯乙烯苷对静息态血小板的［Ca2+］i均无明显影响,但对激活态血小板［Ca2+］i的升高有明显抑制作用,呈剂量依赖性。结论二苯乙烯苷抑制血小板聚集的作用机制可能与其抑制血小板细胞质 ［Ca2+］i的升高有关。     

磷酯酶C对实验性血栓形成和纤溶功能的影响

磷酯酶Ｃ(ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＣ ,ＰＬＣ)是一类作用于磷脂Ｃ3磷酯酰键的脂类水解酶 ,具有多种生物功能 ,研究表明 ,ＰＬＣ具有抗凝血及延缓血小板聚集的功能[1,2 ] 。通过体内、外两种给药途径研究了ＰＬＣ对实验性静脉血栓形成及纤溶功能的影响。希望通过这些临床前药理研究 ,为将ＰＬＣ开发成为具有自主知识产权的创新药物提供有益的参考。1　材料和方法1 1　试剂　尿激酶 (南京大学药厂 )、凝血酶 (华中科技大学同济医学院血液研究所 )、人纤维蛋白原 (中国药品生物制品检定所 )、普鲁卡因 (武汉滨湖制药厂 )、苯巴比妥钠 (上海…     

磷酯酶C对实验性血栓形成和纤溶功能的影响

Schirner[2]发现VCR和博莱霉素的血管毒性与瘤株无关,而阿霉素、5-氟脲嘧啶、足叶乙苷、环磷酰氨类药物的血管毒性因瘤株而异,这一现象令人困惑。     

银耳多糖对小鼠脾细胞内游离钙离子浓度的影响

为进一步探讨银耳多糖(TP)免疫调节作用的机制,建立了特异性荧光探针Fura-2测定脾细胞内游离钙离子浓度的方法,观察TP对脾细胞内游离钙离子浓度的影响。结果表明,TP在一定剂量范围内可以剂量依赖方式增加脾细胞内游离钙离子的浓度,并与ConA有协同作用。在外钙为零时,TP对内钙释放无影响,钙通道阻断剂维拉帕米(verapamil 10μg·mL^-1)可阻断TP升高脾细胞内游离钙离子浓度的作用。     

磷酯酶C抗血小板功能的研究Ⅱ——对血小板释放和代谢的作用

目的　通过检测PLC对家兔血小板释放产物血栓素A2 (TXA2 )、代谢产物前列环素 (PGI2 )以及出血时间的影响 ,以探讨PLC抗血小板聚集的作用。方法　运用放射免疫方法测定以ADP、AA、collagen为诱导剂时 ,PLC对血小板TXB2 、6 Keto PGF1α生成量的影响。常规方法测定PLC对家兔出血时间 (BT)的影响。结果　 6种剂量PLC均能延长出血时间 ,但在给PLC 4h时 ,BT恢复至给药前水平 (P >0 0 5)。以ADP、AA、Collagen为诱导剂时 ,6种剂量的PLC能显著降低TXB2 的生成 (P <0 .0 5) ;以AA为诱导剂时 ,PLC 10 0U·kg- 1及以collagen为诱导剂时PLC 10 0U·kg- 1和PLC 2 0 0U·kg- 1其对TXB2 的生成的抑制作用较ASA组弱 (P <0 0 5) ;以ADP为诱导剂时PLC 10 0～ 40 0U·kg- 1,以AA为诱导剂时PLC 2 0 0～ 60 0U·kg- 1和以collagen为诱导剂时PLC 40 0～ 80 0U·kg- 1其对TXB2 的生成的抑制作用与ASA组相当 (P >0 0 5) ;以ADP为诱导剂时PLC 60 0～ 10 0 0U·kg- 1、以AA为诱导剂时PLC 80 0～ 10 0 0U·kg- 1和以collagen为诱导剂时PLC10 0 0U·kg- 1其对TXB2生成的抑制作用强于ASA组 (P <0 0 5)。 6种剂量的PLC组均明显增加 6 酮 PGF1α的生成量 (P <0 0 5) ,其作用强于ASA组 (P <0 0 5) ,并存在剂量效应关系和时间效?     

磷脂酶C对ADP诱导的兔血小板IP_3水平的影响

目的测定磷酯酶C(PLC)对ADP诱导的兔血小板三磷酸肌醇(IP3)的影响,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法取家兔血除去红细胞制备血小板,血小板计数后分为8个组。第1组用生理盐水处理,第2组用ADP处理,第3组用ASP处理以ADP诱导激活,第4~8组分别用不同剂量的PLC处理并以ADP诱导激活。采用三氯醋酸法制备血小板IP3,再用放射免疫分析法分别测定IP3含量。结果家兔血小板经生理盐水处理后的IP3含量为0.29 pmol/108血小板,而经ADP处理后IP3含量为0.39pmol/108血小板。经ASP 668μmol.L-1、5、10、15、20和25 U PLC.ml-1各组处理,并以ADP激活的血小板,测得的IP3含量分别为0.19、0.08、0.15、0.25、0.04和0.18(pmol/108血小板)。ADP组比生理盐水组IP3有明显的提高,而ASP组、不同的PLC组比ADP组IP3有明显的降低(P<0.05)。结论PLC使得ADP激活后的兔血小板IP3水平下降,且无剂量依赖性,表明PLC具有降低血小板中IP3水平的作用,这可能是PLC抗血小板聚集作用的重要原因之一。     

异钩藤碱体外对家兔血小板聚集和胞浆游离钙离子浓度的影响

目的研究异钩藤碱对血小板内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,以探讨其抗血小板聚集作用的可能机制。方法比浊法测定家兔血小板聚集功能;双波长Fura-2荧光法测定血小板胞浆[Ca2+]i。结果异钩藤碱0.33~1.30mmol.L-1体外给药对ADP和凝血酶引起的血小板聚集有浓度依赖性的抑制作用。存在细胞外钙时,异钩藤碱对基础状态血小板的[Ca2+]i和ADP及凝血酶诱导的[Ca2+]i水平有浓度依赖性的降低作用,而无细胞外钙存在时,则均无明显影响,表明其可抑制血小板的外钙内流,对内钙释放无明显抑制作用。结论异钩藤碱可抑制血小板聚集,其作用机制可能与其抑制血小板胞浆[Ca2+]升高有关。     

葡甲胺环腺苷酸对凝血酶诱导的人血小板胞浆游离钙浓度变化的影响

葡甲胺环腺苷酸对凝血酶诱导的人血小板胞浆游离钙浓度变化的影响陆志强，王道生，赵升皓（苏州医学院药理教研室，苏州２１５００７）葡甲胺环腺苷酸（ｍｅｇｌｕｍｉｎｅｃｙｃｌｉｃａｄｅｎｙｌａｔｅ，ＭＣＡ）是环腺苷酸（ｃＡＭＰ）与葡甲胺结合而成的ｃＡＭＰ类衍...     

Synthesis of lipidic amino acid and dipeptide inhibitors of human platelet phospholipase A2

Phospholipases A₂ (PLA₂s) catalyze the hydrolysis of glycerophospholipids at the sn-2 position, and their inhibition is considered a rational approach for the prevention and treatment of inflammation. A number of amides and esters of α-amino acids with saturated linear side chains, esters of α-amino alcohols and derivatives of lipidic peptides were prepared and tested against secreted humal platelet phospholipase A₂. Among the compounds tested the amides of free amino acids with long-chain amines presented the highest in vitro inhibitory activity. © Munksgaard 1996.     

G protein-independent stimulation of human myocardial phospholipase C by mastoparan

1. Phosphoinositide-specific phospholipase C (PLC) is involved in the regulation of many cellular functions. In the myocardium, PLC-generated second messengers play a role in the regulation of contractile function and in the pathophysiology of myocardial hypertrophy.
2. In the present study, the effect of mastoparan, a tetradecapeptide which is capable of activating heterotrimeric G proteins by mimicking the action of an activated receptor, on membrane-bound human myocardial PLC, was investigated in a cell-free assay with exogenous phospholipids as a substrate.
3. Mastoparan stimulated human myocardial PLC approximately two fold with a half-maximal effect at approximately 2 μM and a maximal effect at 10 μM. The peptide did not alter the dependence of PLC on free calcium ions. In order to exclude non-specific effects of mastoparan due to its amphiphilic properties, different mastoparan derivatives were used as positive and negative controls. Mas17, an inactive mastoparan analogue with phsyical properties very similar to mastoparan, did not induce substantial PLC stimulation in human myocardial membranes. In contrast, Mas7, the most active mastoparan derivative known, caused a more pronounced PLC activation compared with the mother compound indicating that the effect was sequence-specific. Human myocardial PLC stimulation was pertussis toxin-insensitive and could not be abolished by addition of excess α-subunits from purified retinal transducin or by excess GDP or GDPβS. In order to investigate whether mastoparan stimulated PLC via pertussis toxin-insensitive α_q, a deletion mutant of PLCβ₂ deficient of the site of interaction with α_q-subunits was expressed in COS-1 cells. Both wild-type and mutant PLCβ₂ were similarly sensitive to stimulation by mastoparan.
4. It is concluded that mastoparan stimulates human myocardial PLC by a mechanism distinct from heterotrimeric G proteins.

     

哒嗪类药物Y－909对凝血酶诱导的人血小板聚集和胞浆游离钙水平的影响

哒嗪类药物Ｙ－９０９对凝血酶诱导的人血小板聚集和胞浆游离钙水平的影响汪钟，于润，张宏，白建平（中国医学科学院基础医学研究所，北京１００００５）６－［对－（４－（４－甲氧基苯基）哌嗪基）－乙酰胺基苯基］－５－甲基－４，５－二氢－３（２氢）哒嗪酮｛６－［...     

茶黄素对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度的影响

目的研究茶黄素对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响并探讨其可能机制。方法用激光共聚焦显微镜探测细胞内游离钙浓度,结果用相对荧光强度((FI-FI0)/FI0,%;FI0:对照;FI:给药)表示。结果①茶黄素(10,20,40μmol.L-1)对正常台氏液中心肌细胞内游离钙浓度没有影响,却可浓度依赖性地降低模拟缺血液中心室肌细胞[Ca2+]i的增加。②预先应用L型钙通道开放剂Bay k8644,可大部分取消茶黄素(20μmol.L-1)在模拟缺血液中的作用。③茶黄素(20μmol.L-1)能明显抑制无钙台氏液中由低浓度ryanodine引起的[Ca2+]i增加。④当细胞外液钙浓度由1 mmol.L-1增加到10 mmol.L-1而诱发心室肌细胞钙超载时,部分心室肌细胞产生可传播的钙波,茶黄素(20μmol.L-1)可降低钙波发生的频率和持续时间,最终阻断钙波并降低[Ca2+]i。结论茶黄素可抑制电压门控性钙通道的外钙内流和减少肌浆网的内钙释放从而降低[Ca2+]i。