脉动式张应力环境下培养组织工程血管的初步实验

目的探讨脉动式张应力环境下,在生物反应器内进行组织工程血管（TEBV）培养的可行性。方法从人脐动脉获取血管平滑肌细胞（VSMC）,经体外培养扩增后接种到聚乙醇酸（PGA）支架并置于生物反应器内进行三维培养。实验组利用气动式左心循环辅助泵对VSMC施加模拟人体内血管环境（压力120mmHg,1mmHg=0．133kPa,频率60次／rain）的脉动式张应力作用。对照组无张力环境下进行三维培养。2周后收获TEBV分别行扫描电镜（SEM）检测、组织切片HE染色和Masson染色。结果实验组TEBV外观色泽鲜亮,具有一定厚度和弹性,能自我维持管腔形状。SEM显示实验组TEBV管壁表面光滑平整,横切面有丰富的细胞外基质（ECM）,ECM分布均匀,把PGA完全包裹。HE染色管壁均匀致密,ECM及细胞的排列具有一定方向性,其中含有未降解的PGA碎片。Masson染色管壁胶原纤维丰富。对照组TEBV外观色泽暗淡,管壁薄,弹性差,从支架取下后管腔塌陷。SEM显示管壁表面欠光滑,横切面上ECM含量少,大部分PGA没有被包裹。组织切片染色管壁结构疏松,ECM和胶原纤维含量较少,层次感差。结论在生物反应器内的脉动式张应力环境下,可培养出具有良好形态结构的组织工程血管样组织。     

红花、郁金对血管平滑肌细胞表型及增殖变化的影响

目的 :系统观察活血化淤中药红花、郁金提取液对高糖血清培养的大鼠血管平滑肌细胞表型转变及增殖的影响 ,以期阐明活血化淤中药防治动脉粥样硬化的作用机制。方法 :利用贴块法对大鼠血管平滑肌细胞进行原代和传代培养 ,取第三代血管平滑肌细胞将其分为 4组 :对照组、高糖组、高糖加中药组、高糖加秋水仙碱组进行培养。电镜观察各组血管平滑肌细胞超微结构改变 ,用 [3Ｈ]-ＴＤＲ掺入法测定血管平滑肌细胞内ＤＮＡ合成速率 ,用ＧＭＩＡＳ彩色图像分析系统进行血管平滑肌细胞图像处理 ,以每个细胞平均积分光密度表示血管平滑肌细胞核内ＤＮＡ…     

纵向应力作用下的血管重建

在体血管除了受到血压和剪切血流外,还受到显著的纵向张力作用。纵向张力影响血管的生理功能及其对血压和血流的响应。虽然对血压和血流改变时的血管重建已有了很多了解,但对血管纵向应变及其相应的血管组织重建却了解甚少。本文总结了血管纵向张力和应变的在体观测结果,以及血管对纵向应力改变的细胞和组织层次的响应与适应性重建。增加纵向张力导致组织重建,过度减少纵向张力会导致血管发生屈曲。纵向张力作用下血管组织重建的研究将增强对血管正常生理功能和病理变化的认识。     

神经肽PACAP对血管平滑肌细胞形态及增殖功能的影响

神经肽ＰＡＣＡＰ对血管平滑肌细胞形态及增殖功能的影响常青邓漪平＊（暨南大学医学院组织胚胎学教研室＊中山医科大学组织胚胎学教研室）垂体腺苷酸环化酶激活肽（ＰｉｔｕｉｔａｒｙＡｄｅｎｙ－ｌａｔｅＣｙｃｌａｓｅＡｃｔｉｖａｔｉｎｇＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ，Ｐ...     

周期性应变对血管平滑肌细胞生长的影响

为研究周期性应变对VSMCs生长的确切作用,我们利用脉动膜式张应力系统,给VSMCs施加8%,1 Hz和14%,1 Hz两种不同条件的周期性应变.用细胞计数的方法观察VSMCs的生长曲线,用3HTdR掺入率测定法检测VSMCs的DNA合成变化.结果发现8%,1Hz的周期性应变抑制VSMCs生长和DNA合成;14%,1 Hz的周期性应变VSMCs生长和DNA的合成明显增加,24 h和48 h其DNA合成分别是对照组的1.4和1.8倍.结果表明近生理条件下的周期性应变抑制VSMCs的生长,超生理范围的应变促进VSMCs的生长.     

去甲肾上腺素促进血管平滑肌增殖和细胞表型转化

目的:研究去甲肾上腺素(NE)对血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和增殖的影响及作用机制.方法:用NE分别作用体外培养和血清饥饿的血管平滑肌细胞,用5-BrdU标记VSMC的增殖、RT-PCR检测VSMC表型标志基因SM22a和增殖负性调控基因高血压相关基因-1(HRG-1)的表达.结果:NE和OX-LDL分别作用血清培养的VSMC后,SM22α和HRG-1表达下凋,5-BrdU标记的阳性增殖细胞增多;NE分别与α1-肾上腺素受体拮抗剂(α1-R-)和β1-肾上腺素受体拮抗剂(β1-R)共作用时,SM22α和HRG-1的表达明显上调.而当NE作用血清饥饿VSMC时,NE上调SM22α和HRG-1的表达.结论:NE对VSMC有促表型转化和增殖作用,且这种作用呈现像神经样的可逆性调节作用.其作用机制主要通过肾上腺索受体α1和β1来实现的.     

香烟尘粒对血管平滑肌细胞生长的影响

目的观察二甲基亚砜溶解的香烟尘粒 (DSP)对血管平滑肌细胞(VSMC)生长的影响。方法以兔主动脉血管平滑肌细胞为实验对象 ,将1、2、3、4、8μl·ml -1剂量DSP加入培养基中。采用四氮唑盐 (MTT)比色试验和细胞蛋白测定评价DSP对VSMC生长的影响 ;透射电子显微镜 (TEM)观察细胞超微结构变化 ;流式细胞仪 (FCM)检测细胞凋亡情况。结果1、2μl·ml-1DSP可刺激VSMC增殖 (P<0.01) ,4、8μl·ml -1DSP能抑制VSMC增殖 (P<0.05,P<0.01) ,减少细胞总蛋白 (P<0.05,P<0.01)。电镜下 ,2、4μl·ml-1 DSP组均有典型的细胞凋亡形态学变化。2μl·ml-1 DSP组凋亡率为(10.2±3.2) % ,4μl·ml-1DSP组凋亡率为 (29.2±8.7) % ,均较对照组显著增高 (P<0.05,P<0.01)。结论DSP既可刺激VSMC增殖 ,又可促进VSMC凋亡 ,吸烟参与动脉粥样硬化病理过程的机制 ,可能与其影响VSMC增殖和凋亡两者的平衡有关。     

血小板源生长因子在血管平滑肌细胞异常增殖中的作用

血小板源生长因子(PDGF)是一种重要的促细胞分裂剂,可以刺激多种细胞分裂和增殖,在体内PDGF表达与分泌受白细胞介素1、缺氧、转化生长因子、血管紧张素Ⅱ等因素的影响.不同器官的细胞所含PDGF受体的类型有差异性.血小板源生长因子与其受体结合后,通过磷酯酰肌醇-3激酶、Ras、磷脂酶激活、Ca2+离子等途径介导细胞内的信号转导.PDGF在动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄、高血压血管重塑的发生发展中具有重要意义.     

血管平滑肌细胞迁移、增殖致冠状动脉搭桥术后再狭窄分子机制的研究进展

血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cell，VSMC）增殖和凋亡涉及冠状动脉搭桥（Coronary Artery Bypass Graft，CABG）术后损伤血管异常再塑的病原学和再狭窄的发病机制。CABG术后血管新生内膜形成和管壁重构再塑过程中，血管内皮细胞（Vascular Endothelial Cell，VEC）的损伤导致多种炎症因子和生长调节因子的表达、激活紊乱，诱导VSMC进行表型调变（Made Letion），使其对损伤后的细胞增殖和凋亡调节失常；VSMC细胞周期调节因子、凋亡程序性基因和细胞外基质（Extra Cellular Matrix，EcM）的表达异常，刺激VSMC从血管中层向内膜迁移．发生过度增殖和凋亡抑制，并导致ECM合成增加和脂质沉积，引起管壁纤维化和粥样硬化病变的发生和进展，是CABG术后再狭窄的重要发病机制。     

血管平滑肌细胞对联合培养内皮祖细胞黏附、增殖与形态的影响

目的：探讨血管平滑肌细胞对联合培养的内皮祖细胞黏附、增殖与分化的影响。方法：从人脐血中分离纯化内皮祖细胞并鉴定；建立内皮祖细胞和平滑肌细胞的联合培养模型；细胞粘附实验测定内皮祖细胞的粘附能力；形态学观察内皮祖细胞的分化与增殖。结果：与血管平滑肌细胞联合培养的内皮祖细胞的粘附能力比单独培养时提高了63％，长梭形细胞数量增加，同时克隆形成单位的数量下降了约60％。结论：血管平滑肌细胞促进了内皮祖细胞的粘附与分化，同时抑制了内皮祖细胞的增殖能力。     

低切应力、血管重建与心血管疾病

心血管疾病如高血压、动脉粥样硬化等是危害人类生命健康最严重的疾病之一.心血管病都有共同的发病学基础和基本的病理过程,表现为血管重建(vascular remodeling).血管重建是机体在生长、发育、衰老以及心血管疾病过程中的一种普遍现象,其主要表现是血管平滑肌细胞(VSMC)重排、迁移、增殖、肥大、凋亡和细胞外基质增加等.     

与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的形态学和生长增殖

目的　探讨平滑肌细胞对内皮细胞形态和增殖的影响 ,为内皮细胞种植的组织工程学提供理论基础。　方法　模拟血管壁的内层结构及内皮细胞平滑肌细胞间的相互影响途径 ,建立内皮细胞与平滑肌细胞联合培养的模型 ,应用形态学、细胞计数对内皮细胞的结构和增殖进行研究。　结果　联合培养的新内皮细胞呈伸长性生长 ,沿细胞长轴排列的微丝增多 ,增殖受抑制。　结论　内皮细胞和平滑肌细胞联合培养的新模型是目前研究这两种细胞间相互影响的最佳方式。联合培养的内皮细胞的形态结构更接近于在体生理状态 ,这一变化可能更有利于其抗应力功能的调节     

切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的形态学改变

内皮细胞与平滑肌细胞是血管壁的主要组成细胞。血管平滑肌细胞与流体切应力是影响血管内皮细胞形态和功能的重要因素。形态学作为内皮细胞研究中最直观的指标,一直受到重视。单独培养的内皮细胞丧失了在体条件下的长梭形、沿流体方向平行排列的特征,呈现“铺路石”样外观。与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞呈长梭形,与在体条件下的内皮细胞形态较为接近;但排列无极性,这可能是因为内皮细胞缺少了与其腔面直接作用的流体应力的缘故。为了了解切应力对联合培养的内皮细胞的影响,本文建立了用于内皮细胞和平滑肌细胞联合培养的应力测试系…     

一氧化碳对大鼠血管平滑肌细胞低氧性增殖反应的作用

目的：观察低氧时大鼠肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）受血管舒张因子一氧化碳的作用。方法：随机分为常氧组、低氧组（１％Ｏ２＋５％ＣＯ２＋９４％Ｎ２）、一氧化碳组（３％ＣＯ＋５％ＣＯ２＋９２％Ｎ２）,采用流式细胞仪、增殖细胞抗原（ＰＣＮＡ）、「６３Ｈ」－胸腺嘧啶「＾３Ｈ」－ＴｄＲ摄取量,检测ＰＡＳＭＣ增生的情况。结果：（１）流式细胞仪检测低氧组ＰＡＳＭＣＣ２／Ｍ期细胞比例明显增多,Ｇ０／Ｇ１期细胞比例明     

ET-1促进人血管平滑肌细胞的表型变化和增殖

目的：研究ET-1与VSMC表型变化和增殖的关系。方法：用MTT法研究ET—1对平滑肌细胞增殖的影响，^3H-TdR法测定ET-1对平滑肌细胞DNA合成的作用，流式细胞仪法观察对平滑肌细胞增殖周期的影响，逆转录聚合酶链法观察对平滑肌细胞表型变化的影响。结果：与对照组比较，ET-1明显促进平滑肌细胞增殖；促进平滑肌细胞DNA合成；促进平滑肌细胞从G0期向S期的转变，G0／G1期细胞百分比明显降低，而S期细胞百分比增加；促进平滑肌细胞的表型转化，从第2d到第7d随时间延长1-Caldesmon表达逐渐增高。结论：ET-1促进平滑肌细胞表型转化，同时对平滑肌细胞增殖亦有明显的促进作用。     

不同体外条件培养对大鼠血管平滑肌细胞表型、增殖和细胞骨架的影响

目的 探讨不同体外培养条件与血管平滑肌细胞(VSMCs)表型、增殖和细胞骨架蛋白表达之间的差异及生物学意义。 方法 体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验分为6组：2代对照组、2代血清饥饿组、4代对照组、4代血清饥饿组、6代对照组和6代血清饥饿组;用5-Brdu标记增殖细胞;RT-PCR检测表型基因SM22ɑ mRNA的表达;免疫细胞化学检测细胞骨架蛋白SMɑ-actin、β-Tubulin和Desmin的表达。 结果 体外培养的VSMCs,随培养代数的增多,细胞骨架蛋白表达减少,电镜超微结构可见胞质中内质网、高尔基体等细胞器增多,有大量的分泌小泡;血清饥饿胞中线粒体增多并电子密度增高。 血清培养条件下SMɑ-actin随培养代数的增加其表达减少,血清饥饿培养可使SMɑ-actin表达可逆性上调;β-Tubulin和Desmin随培养代数的增加表达减少更明显,而血清饥饿上调作用也不明显,至第6代基本不表达。 结论 血清培养和血清饥饿培养在不同代中对VSMCs表型转化、增殖和细胞骨架有着不同的影响,它们之间存在着内在的联系,在维持细胞形态、收缩功能和血管重构方面起了重要作用。β-Tubulin和Desmin表达消失可能具有重要生物学意义。     

胰岛素通过活性氧的产生促进VEGF表达及血管平滑肌细胞迁移和增殖

 目的:探讨活性氧（reactive oxygen species, ROS）在胰岛素促进的血管平滑肌细胞迁移和增殖中的作用及分子机制。方法:采用原代培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞,应用DCF-DA荧光探针检测细胞内ROS的生成;应用实时定量PCR、Western blotting和ELISA法检测mRNA和蛋白的表达;应用转染报告基因的方法检测基因的转录活性;划痕法测定细胞迁移;CCK-8法测定细胞增殖。结果:胰岛素处理后血管平滑肌细胞内ROS产生明显增加。过氧化氢酶和NADPH氧化酶抑制剂二亚苯基碘鎓（DPI）明显抑制胰岛素促进的ROS生成及p-Akt、p-p70S6K1和p-ERK1/2蛋白的表达。过氧化氢酶和DPI明显降低胰岛素促进的血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的mRNA和蛋白表达及转录激活。抑制ROS产生明显抑制胰岛素刺激的血管平滑肌细胞迁移和增殖。结论: 胰岛素通过NADPH氧化酶途径促进血管平滑肌细胞ROS产生。ROS介导了胰岛素促进的Akt/p70S6K1和ERK信号通路的激活、VEGF表达及血管平滑肌细胞的迁移和增殖。     

前列腺素与动脉平滑肌细胞的增殖

动脉平滑肌细胞(SMC)发生增殖反应是动脉粥样硬化(AS)发生的中心环节。本文综述了前列腺素(PG)对(SMC)增殖的影响。体外和动物实验证实,PG(主要是PGE_1、PGI_2和PGD_2)能抑制动脉SMC的增殖,从而对AS的发生可能起负相关作用。