兔坐骨神经损伤后许旺细胞的增殖能力及延迟整流钾离子通道活动变化

目的:观察成年兔坐骨神经分别受到75V,125V电压损伤后雪旺细胞增殖及延迟整流K+离子通道的变化情况。方法:建立兔坐骨神经电损伤实验模型,应用双酶消化法分离受损区域神经雪旺细胞,选择损伤后第3天作为观察点,应用细胞计数和同位素H3掺入胸腺嘧啶核苷技术观察雪旺细胞的增殖变化。应用膜片钳全细胞记录雪旺细胞延迟钾整流离子通道的变化并相互比较。结果:125V电损伤后较75V电损伤后雪旺细胞的增殖能力减弱,相应的雪旺细胞延迟整流钾离子通道活动表现出同样的变化趋势。结论:雪旺细胞延迟整流钾离子通道自身受到125V电压损伤后,较75V电损伤造成了更大的功能破坏和活动改变,这种变化影响雪旺细胞的增殖。     

血小板源性生长因子B在损伤周围神经再生中的作用

目的：观察血小板源性生长因子B（PDGF-B）在损伤大鼠坐骨神经中的表达,旨在阐明其在末梢神经再生中的作用。 方法：分别构建大鼠坐骨神经切割伤和碾压伤模型,应用免疫组织化学S-P法检测PDGF-B的表达。结果：两类损伤模型中,损伤近端神经和再生轴突PDGF-B的表达均增强。两类损伤模型均可见损伤神经远端的雪旺氏细胞PDGF-B表达量明显增加,在碾压伤模型中,随着轴突-雪旺氏细胞关系的恢复,PDGF-B表达水平下降,并最终恢复正常;在切割伤模型中,二者关系不能恢复,PDGF-B减至极低水平。 结论：坐骨神经损伤后PDGF-B的表达增强在末梢神经再生中发挥重要作用。     

不同方式损伤周围神经后许旺细胞钾通道基因的表达

目的:观察不同方式损伤兔坐骨神经电后受损区域神经许旺细胞Kv1.5钾通道基因的表达水平。方法:随机将实验动物分为3组:50V电损伤组、100V电损伤组、神经切割伤组,双酶消化法分离受损区域坐骨神经许旺细胞并体外培养,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术比较各组许旺细胞Kv1.5 mRNA的表达水平。结果:3组动物损伤区域神经许旺细胞均有Kv1.5基因的表达,其中损伤后3～7dKv1.5基因的表达最为显著;50V组及神经切割伤组两组之间比较无显著性差异(P>0.05);而100V组Kv1.5基因的表达水平较低,与其他两组有显著性差异(P<0.05)。结论:坐骨神经损伤后许旺细胞Kv1.5基因的表达与损伤后时间及损伤电压大小有关,可能与许旺细胞的增殖有密切关系。     

猫胚神经加自体雪旺氏细胞桥接大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的:研究修复周围神经缺损新材料。方法:Wistar大鼠80只,切断左大腿坐骨神经,造成15 mm缺损,分别用自体神经(C组)、液氮冷冻猫胚神经(B组)、液氮冷冻猫胚神经加自体雪旺氏细胞粗制品(C组)桥接。术后4,12,24周取桥体、桥体远端坐骨神经分别行光镜观察、图像分析、电生理检测。所得数据经多因数方差分析和q检验。结果:加入自体雪旺氏细胞猫胚神经组(C组)有髓纤维数目、复合动作电位峰值恢复率、传导速度恢复率与自体神经移植组(A组)比较无显著性差异;而单纯猫胚神经组(B组)大多数指标均不及A、C两组(P<0.01)。结论:植入自体雪旺氏细胞的胚胎神经桥接周围神经缺损效果优于单纯胚胎神经,是一种良好的替代自体神经的桥接物。     

雪旺氏细胞基底膜成份——Laminin和Fibronectin在神经再生中的作用探讨——Laminin和Fibronectin抗血清的活体应用及观察

本文的目的在干探索雪旺氏细胞基底膜的两种主要成份Laminin和Fibronectin在神经再生中对轴突的生长、生长行为及对其它非神经细胞的作用及影响。 实验用近交克隆系大鼠106只。34只鼠的双侧坐骨神经,经预神经退变处理后,切除1cm长的神经段作为供体神经。将这些神经段经过5次冷冻处理以杀死雪旺氏细胞,然后再用稀释200倍的正常兔血清处理。对照组用这样处理后的神经段(24     

含有血运雪旺氏细胞的鞘膜管桥接神经缺损的实验研究与临床应用

用含有血运雪旺氏细胞的鞘膜管,桥接兔坐骨神经缺损4cm,术后6个月神经纤维沿着鞘膜管生长良好,神经纤维排列规则,其复合运动电位、传导速度、波伏、横径平均值,与自体神经移植对比差异无显著性。临床应用48例获得较好效果。表明有血运雪旺氏细胞与鞘膜管结合,对神经再生有更大促进作用。     

自体雪旺氏细胞植入去肌浆骨骼肌修复周围神经缺损的实验研究

先用化学手段使骨骼肌细胞脆性增加，再以物理挤压方法去除１／２左右肌浆制成修复周围神经缺损的移植体。将此移植体植入雪旺氏细胞培养液与自体雪旺氏细胞制成的悬液，修复鼠１０ｍｍ坐骨神经缺损，并与热变性骨骼肌植入相同悬液和自体神经移植作对照比较。桥接术后６个月，检测试验侧／正常侧小腿三头肌肌张力比值和湿重比值、试验侧坐骨神经传导速度、和移植体远端／近端神经干髓鞘密度比值４项指标。经统计学处理去肌浆骨骼肌组     

猫胚神经加自体雪旺氏细胞桥接大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的：探索新的周围神经缺损修复材料和方法。方法：Ｗｉｓｔａｒ大鼠８０只,切断左大会骨神经并造成１５ｍｍ缺损的 分别用自体（Ａ组）,液氮猫胚神经（Ｂ组）、液氮猫胚神经加自体雪旺氏细胞粗制品（Ｃ组）进行桥接,于术后４、１２、２４周取桥体、桥体远端坐骨神经分别行光镜观察、图像分析、电生理检测。所得数据经多历数方差分析和ｑ检验。结果：加入自体雪旺氏细胞猫胚神经组其有髓纤维数目,复合动物电位峰值恢复率、传导     

腺样囊性癌SACC-83细胞对雪旺氏细胞的促生长作用

目的:观察在体外共培养中腺样囊性癌细胞对由坐骨神经生长出的雪旺氏细胞的影响。方法:将腺样囊性癌细胞、舌癌细胞及成纤维细胞分别与小鼠坐骨神经共培养,制备细胞玻片并行S100免疫组化染色实验。结果:腺样囊性癌细胞可促进由坐骨神经长出的雪旺氏细胞增生;经S100免疫组化染色,阳性为雪旺细胞;阴性为成纤维细胞。结论:坐骨神经与腺样囊性癌细胞共培养可促进雪旺氏细胞增生。     

异体去肌浆骨骼肌修复周围神经缺损的实验研究

本文报告动物异体和自体骨骼肌去除肌浆,再植入雪旺氏细胞培养掖与自体雪旺氏细胞制成的悬液,然后分别用于修复鼠10mm坐骨神经缺损的实验研究结果。结果提示异体去肌浆骨骼肌也可作为一种非神经移植体。     

血管化同种异体神经复合体桥接修复兔坐骨神经缺损的实验研究

目的 探讨将经化学去细胞处理的同种异体神经复合体预血管化处理后移植修复兔长段坐骨神经缺损的可行性,以及早期血管化移植体对神经功能恢复的影响.方法 将雪旺细胞与血管内皮细胞联合培养后种植于经化学去细胞处理的同种异体神经段中,形成预血管化的神经复合体并将其用于修复兔坐骨神经缺损（实验组）,对照组移植体中单纯种植雪旺细胞无血管内皮细胞.术后4、8、16周对2组动物行肌电图检查,观察神经功能恢复情况,然后,手术取材,应用光镜、电镜观察坐骨神经再生和髓鞘形成情况,应用图像分析系统对髓鞘厚度以及有髓神经纤维轴突的直径、数目进行量化分析.结果 大体观察,术后4、8、16周2组动物全身及局部均未出现明显的排斥反应.无论是在足部溃疡恢复,还是在神经传导速度、再生神经纤维的数量、超微结构的恢复方面实验组均优于对照组.结论 应用预血管化的组织工程人工神经移植体修复兔坐骨神经缺损,能有效地促进受损神经的功能恢复.     

Study on the adoption of Schwann cell phenotype by bone marrow stromal cells in vitro and in vivo

To explore the possibilities of bone marrow stromal cells （MSCs） to adopt Schwann cell phenotype in vitro and in vivo in SD rats. Methods MSCs were obtained from tibia and femur bone marrow and cultured in culture flasks. Beta-mercaptoethanol followed by retinoic acid, forskolin, basic-FGF, PDGF and heregulin were added to induce differentiation of MSCs＇. Schwann cell markers, p75, S-100 and GFAP were used to discriminate induced properties of MSCs＇ by immunofluorescent staining. PKH-67-1abelled MSCs were transplanted into the mechanically injured rat sciatic nerve, and laser confocal microscopy was performed to localize the PKH67 labelled MSCs in the injured sciatic nerve two weeks after the operation. Fluorescence PKH67 attenuation rule was evaluated by flow cytometry in vitro. Results MSCs changed morphologically into cells resembling primary cultured Schwann cells after their induction in vitro. In vivo, a large number of MSCs were cumulated within the layer of epineurium around the injured nerve and expressed Schwann cell markers, p75, S- 100, and GFAP. Conclusion MSCs are able to support nerve fiber regeneration and re-myelination by taking on Schwann cell function, and can be potentially used as possible substitutable cells for artificial nerve conduits to promote nerve regeneration.     

兔坐骨神经实验性电损伤后的功能评价

目的 观察兔坐骨神经实验性电损伤后不同时期神经电特性的改变,并了解其变化规律。方法 以不同的电压损伤神经后按不同时间进行功能指标观察。包括神经传导速度、潜伏期、动作电位峰值、刺激阈值。结果 动作电位峰值随着损伤电位的增加而减少,随着时间的延长逐渐恢复,潜伏期随着损伤电压的增大而增大,随着时间的延长逐渐恢复正常,随着损伤电压增大传导速度逐渐降低,随着观察时间的延长传导速度逐渐恢复。结论 神经损伤的程度与损伤电压直接相关,神经纤维的粗细影响着神经受损的程度。动作电位峰值可以反映出神经干的损伤程度和神经纤维的再生情况。     

兔坐骨神经实验性电损伤后形态学变化

目的：观察在不同损伤电压情况下,神经轴突超微结构的变化。方法：在兔梨状肌以远分别用５０,７５,２００Ｖ交流电损伤３ｃｍ坐骨神经,然后在１ｗｋ,２ｗｋ,１ｍｏ,３ｍｏ时切取神经组织标本在透射电镜下观察神经纤维超微结构变化。结果：５０Ｖ损伤组２ｗｋ时形态改变轻微,１ｍｏ时神经结构恢复正常。７５Ｖ损伤组２ｗｋ时神经纤维损伤程度加重,１ｍｏ时可见有新生纤维,３ｍｏ时变性纤维数目减少,新生纤维结构趋于成熟。     

EDTA法纯化成年大鼠许旺细胞的实验研究

目的 探讨乙二醇-双-(2-氨基乙醚)四乙酸(EDTA)纯化成年大鼠许旺细胞的可行性。方法 取SD成年大鼠的双侧坐骨神经,高倍显微镜下剥除神经外膜及束膜。复合胶原酶NB4消化30min,600g离心去除上清液。加入含神经生长因子的培养液,置于细胞培养箱中预变性1周。胰蛋白酶消化预变性的神经获得原代细胞。培养至亚融合状态,EDTA-PBS溶液作用3min,显微镜下观察许旺细胞的变化。离心去上清,加入许旺细胞培养液悬浮,种植于培养瓶,置于培养箱培养。培养至亚融合,P75免疫荧光法检测许旺细胞的纯度。结果 通过两次EDTA法纯化,许旺细胞纯度已经达到99%以上。结论 EDTA可以高效纯化成年大鼠的许旺细胞。     

施万细胞复合人发角蛋白模拟微重力条件培养构建组织工程化神经

目的利用旋转式细胞培养系统模拟微重力条件体外构建人发角蛋白组织工程化神经。方法从乳鼠坐骨神经分离培养施万细胞,将传代施万细胞与人发角蛋白(HHK)在旋转式细胞培养系统内联合培养,分别在倒置显微镜和扫描电镜下观察施万细胞与HHK的相容性,评价体外构建效果。结果施万细胞分离培养成功,纯度达97%。联合培养后施万细胞在光镜下呈单层或多层贴附于HHK支架表面。扫描电镜下呈细长梭形,生长方向与HHK细丝长轴相一致,随着培养时间的延长其贴附程度加强,数量增加。结论在旋转式培养系统下施万细胞与HHK具有良好的粘附性和相容性,体外构建HHK组织工程化神经初步成功。     

萌动激活灵芝孢子促进大鼠受损伤的脊髓运动神经元轴突再生的作用

目的探讨萌动激活灵芝孢子对大鼠坐骨神经切断再吻合后受损伤运动神经元轴突再生的影响。方法对单侧坐骨神经切断再吻合后的大鼠ig给予萌动激活灵芝孢子,通过电生理、荧光金(FG)逆行标记和组织学等方法观察受损伤运动神经元轴突再生情况。结果坐骨神经切断再吻合6周后,灵芝孢子组坐骨神经再生轴突的动作电位潜伏期及峰峰值的恢复率以及运动神经元胞体的荧光金逆行标记率均明显高于对照组,灵芝孢子组大鼠腓肠肌萎缩程度也轻于对照组。结论萌动激活灵芝孢子能够促进大鼠坐骨神经切断再吻合后的脊髓受损伤运动神经元轴突再生。     

成年大鼠周围神经损伤后远侧端雪旺细胞变化的体外研究

目的:体外观察大鼠坐骨神经损伤不同时间段远侧端雪旺细胞的变化。方法:切断成年SD大鼠坐骨神经,以远侧端为研究对象,术后1、2周和1个月取材,进行雪旺细胞体外培养,倒置相差显微镜,S-100免疫荧光染色及激光扫描共聚焦显微镜观察雪旺细胞的形态,MTT检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期。结果:神经被切断后,雪旺细胞形态发生改变,1月组最明显;细胞活力和增殖能力也发生变化,切断1周组活力和增殖能力最强,随后逐渐变弱。结论:周围神经损伤后雪旺细胞形态发生变化,细胞的活力和增殖能力随着时间的推移逐渐下降但仍未停止增殖。