人大细胞肺癌细胞系NL9980和L9981的建立及其生物学特性研究

目的 探讨从人大细胞肺癌细胞株WCQH-9801分离构建不同转移潜能肺癌细胞株的可能性，并鉴定其生物学和分子生物学差异。方法 应用单个细胞克隆技术分离建立不同肺癌细胞亚系NL9980和L9981；应用Southern blot、RT-PCR、Western blot检测NL9980和L9981细胞株中nm23-H1基因多态性、mRNA和蛋白转录表达水平；应用MTT法、平板法、Boyden小室法、染色体分型法以及动物实验检测NL9980和L9981细胞株的体内体外生物学特征。结果 ①成功分离建立具有不同转移能力的人大细胞肺癌细胞系NL9980和L9981；②L9981细胞系存在nm23-H1等位基因杂合性缺失、mRNA和蛋白表达缺失，而NL9980细胞株：nm23-H1等位基因结构和转录表达均正常；③L9981细胞株的体外增殖能力、克隆形成率和体外侵袭力均显著高于NL9980细胞株；④L9981细胞株在裸鼠体内的成瘤性和肺部转移率均显著高于NL9980；⑤NL9980和L9981染色体众数比较无显著性差异。结论 ①NL9980和L9981细胞株具有不同的生物学和分子生物学特征；②L9981细胞株的高侵袭和高转移潜能可能与nm23-H1等位基因缺失有关。     

肺癌高转移和低转移细胞株中差异基因的分析

目的:以人肺癌低转移细胞株SPC-A-1为对照,分析人肺癌高转移细胞株SPC-A-1sci的分子转移机制及其相关的信号通路,寻找肺癌转移的关键基因.方法:应用芯片技术检测人肺癌低转移细胞株SPC-A-1和高转移细胞株SPC-A-1sci的差异基因.采用显著性通路分析和构建信号转导网络等生物信息学分析方法寻找肿瘤转移相关的潜在关键基因和信号通路.结果:与SPC-A-1细胞比较,SPC-A-1sci细胞共有上调表达的差异基因2 892个,下调表达的差异基因3 248个;上调差异基因参与的显著性信号转导通路共有48条,下调差异基因参与的显著性信号转导通路共65条.网络中的关键基因主要是丝裂原活化蛋白激酶1、表皮生长因子受体、AKT1、AKT3、PIK3CD( phosphoinositide-3-kinase,catalytic,delta polypeptide)、PIK 3R1 [phosphoinositide-3-kinase 3,regulatory subunit 1 (alpha)]、PIK 3R3、KRAS和胰岛素样生长因子1受体等.结论:人肺癌高转移细胞株SPC-A-1sci的基因芯片检测和生物信息学分析为肺癌转移的基础研究和临床防治提供了依据.     

nm23-H1基因逆转人高转移大细胞肺癌细胞L9981转移表型的分子机制

背景与目的:nm23-H1基因已被证明是转移抑制基因,转染野生型nm23-H1基因可以逆转肿瘤的恶性转移表型,但是nm23-H1基因抑制或逆转肺癌转移的分子机制却知之甚少,我们在建立转nm23-H1基因的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981-nm23-H1的基础上,进一步探讨nm23-H1基因抑制肺癌转移的分子机制。方法:应用MTT法和改良的Boyden小室法分析转基因前后细胞的体外增殖能力及体外侵袭力的变化,体内实验分析转基因前后细胞在裸鼠体内的成瘤性及肺转移能力的改变,同时应用RT-PCR和Westernblot分别检测各组细胞中转移相关基因β-catenin、E-Cadherin、CD44S、CD44V6、MMP-2、TIMP-1、VEGF、基因mRNA及蛋白表达水平。结果:(1)转基因细胞株L9981-nm23-H1的体外增殖能力[(0%vs.(19.5±2.9)%]、克隆形成能力(10.3±0.7vs.21.7±1.3)及侵袭力显著低于L9981细胞(31.0±3.0vs.151.0±6.3)(P<0.01);(2)nm23-H1基因在裸鼠体内的抑瘤率显著增高(82.6%vs.0%),且转染nm23-H1基因的L9981细胞裸鼠体内移植瘤肺转移显著降低(0%vs.100%)(P<0.01);(3)nm23-H1基因能够上调β-catenin、E-Cadherin、TIMP-1基因mRNA及蛋白表达,下调VEGF、CD44V6和MMP-2基因mRNA及蛋白表达(P<0.01);(4)nm23-H1表达上调CD44S基因mRNA表达(P<0.01),而对其蛋白表达     

应用活体内生物发光技术对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981成瘤性和转移性研究

背景与目的应用阳离子脂质体介导的基因转染方法对nm23-H1缺失的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981进行荧光素酶基因(Luc)标记,建立稳定高效表达荧光素酶(Luciferase)基因的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981-Luc。应用活体生物荧光成像技术,非侵入性地连续检测小鼠(裸鼠和SCID鼠)皮下肿瘤模型发展演进、自发转移的过程。方法将带有荧光素酶基因(Luc)的质粒PGL4.17经阳离子脂质体介导转入人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中,筛选出高效稳定表达荧光素酶的细胞株。将转染后的细胞接种于裸鼠和SCID鼠右后腿腹股沟皮下,建立皮下肿瘤模型,利用活体内可见光成像系统观察其在小鼠体内的生长和转移过程。结果转基因人高转移大细胞肺癌细胞株L9981-Luc可在体内、外持续稳定表达荧光素酶,细胞数和发光值成直线相关。成功地建立了表达荧光素酶活性的动物肿瘤皮下自发转移模型。L9981-Luc保留了原有的高转移特性。瘤重和发光强度呈直线相关。结论利用活体内生物发光技术可以非侵袭性地连续示踪肿瘤细胞在活体内的生长和转移过程,为研究肺癌侵袭转移过程及其机理和最佳治疗策略的选择提供了新的手段和工具。     

人肺癌细胞中TSLC1基因表达缺失与DNA甲基化的相关性研究

背景与目的TSLC1在多种肿瘤中表达下调或失活,其表达下调与DNA高甲基化有很大关系。本研究旨在探索TSLC1在肺癌细胞中的表达缺失与其启动子区DNA甲基化的关系。方法采用RT-PCR和Real-time PCR方法检测TSLC1在正常肺组织和3种肺癌细胞系(A549、NCI-H446和Calu-3)中的表达谱;运用亚硫酸氢盐修饰后测序(bisulfite sequencing)方法检测上述正常肺组织和肺癌细胞中TSLC1启动子区的甲基化状态;应用甲基化转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理上述细胞后,采用Real-time PCR方法检测处理前后TSLC1的表达变化。结果TSLC1在正常肺组织和A549细胞中表达,其启动子区DNA未发生甲基化;而在NCI-H446和Calu-3细胞中表达缺失,其启动子区DNA发生高甲基化,并且5-Aza-dC处理NCI-H446和Calu-3细胞后可促进TSLC1的表达。结论TSLC1在肺癌细胞中的表达缺失是由其启动子区的DNA高甲基化引起。     

DNA甲基化转移酶及DNA甲基化转移酶抑制剂在肿瘤研究中的新视角

表观遗传改变例如DNA甲基化涉及多种癌症的发生和进展。DNA甲基化包括可逆的甲基基团添加至CpG二核苷酸中5′位胞嘧啶上。而DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferases,DNMT)是负责甲基基团添加至CpG二核苷酸的酶,与组蛋白修饰一起,是发生于转录抑制所必须的起始事件。已经证明在多种人恶性肿瘤中DNMT的表达增高,并且通过DNMT介导的基因失活促进肿瘤进展。DNMT在衰老与凋亡过程中都起到一定作用。表观遗传改变是潜在可逆的,这刺激DNA甲基化抑制剂药理学的发展,为肿瘤的治疗提供了一个新的途径。     

Plumbagin对人类大细胞肺癌NL9980细胞系抑癌作用的研究

目的研究Plumbagin对人类大细胞肺癌NL9980细胞系的抗肿瘤作用并探索其机制。方法不同浓度Plumbagin处理NL9980细胞系,采用MTT法观察其对肿瘤细胞增殖的影响,确定药物IC50,采用流式细胞术检测对细胞系诱导凋亡的作用,采用Boyden小室侵袭实验检测对体外侵袭力的抑制作用;以IC50 Plumbagin处理NL9980细胞系,于处理后6、24及48h收获细胞,以实时定量PCR方法检测bcl-2、bax、VEGF和CYCD1等基因的mRNA表达变化。结果MTT法显示Plumbagin明显抑制NL9980细胞系的细胞增殖,IC50为7．5μmol／L;Plumbagin对NL9980细胞系具有体外诱导凋亡作用,且明显抑制其体外侵袭能力,Bodyen小室侵袭实验检测对照组和Plumbagin组平均穿膜细胞数分别为161．59±47．32和26．58±9．07。Plumbagin处理NL9980细胞系后不同时间点检测结果显示,bcl-2、VEGF和CYCD1基因表达均逐渐减低,bax基因表达逐渐增高,组间差异有统计学意义（均P〈0．05）。结论Plumbagin对大细胞肺癌NL9980细胞系具有明确的抗肿瘤作用。Plumbagin可能通过多种作用机制发挥其抑癌作用,显示了其成为抗大细胞肺癌药物的前景。     

nm23-H1转染对肺癌L9981细胞株整合素家族的影响

目的:探讨nm23-H1基因对肺癌细胞整合素分子表达的影响。方法:利用半定量RT-PCR技术检测转染前后integrinβ1、integrinβ3基因的mRNA表达;流式细胞仪检测转染前后integrinβ1、integrinβ3基因的蛋白表达。结果:转染后细胞株integrinβ1、integrinβ3 mRNA与蛋白表达下调。结论:nm23-H1基因对肺癌细胞株L9981 integrinβ1、integrinβ3 mRNA与蛋白表达具有负调控作用。     

硒化合物诱导人高转移大细胞肺癌L9981产生活性氧变化的研究

背景与目的已有研究表明甲基硒酸具有防癌和抗癌作用。本研究拟探讨甲基硒酸及亚硒酸钠在人高转移大细胞肺癌L9981的代谢过程中是否产生活性氧及其变化,进一步明确氧化应激在不同硒化合物中发挥抗癌效应的地位。方法应用细胞活力计数仪,检测硒化合物对L9981的生长抑制影响;采用活性氧荧光探针羧基-H2DCFDA探测经硒化合物诱导的L9981细胞内活性氧的含量;采用N-乙酰半胱氨酸(NAC)与硒化合物同时处理L9981细胞后,流式细胞术检测细胞内活性氧的变化。结果①2.5μMMSA即可明显抑制L9981细胞生长,且随浓度增加,效应增强。②甲基硒酸及亚硒酸钠均可诱导L9981产生显著的ROS变化,亚硒酸钠产生时间早于MSA;③采用NAC同时处理L9981后,甲基硒酸能够显著的促进细胞产生活性氧,而亚硒酸钠能够显著的抑制细胞内活性氧的产生。结论①甲基硒酸及亚硒酸钠对L9981均具有抑制生长的作用,并且具有剂量依赖性;②氧化应激反应参与了MSA及亚硒酸钠诱导L9981细胞死亡的过程。     

Plumbagin对人大细胞肺癌NL9980细胞系抑癌作用的研究

 【摘要】　目的　研究Plumbagin对人类大细胞肺癌NL9980细胞系的抗肿瘤作用并探索其机制。方法　不同浓度Plumbagin处理NL9980细胞系，采用MTT法观察其对肿瘤细胞增殖的影响，确定药物IC50，采用流式细胞术检测对细胞系诱导凋亡的作用，采用Boyden小室侵袭实验检测对体外侵袭力的抑制作用；以IC50 Plumbagin处理NL9980细胞系，于处理后6、24及48 h收获细胞，以实时定量PCR方法检测bcl-2、bax、VEGF和CYCD1等基因的mRNA表达变化。结果　MTT法显示Plumbagin明显抑制NL9980细胞系的细胞增殖，IC50为7.5 μmol／L；Plumbagin对NL9980细胞系具有体外诱导凋亡作用，且明显抑制其体外侵袭能力，Bodyen小室侵袭实验检测对照组和Plumbagin组平均穿膜细胞数分别为161.59±47.32和26.58±9.07。Plumbagin处理NL9980细胞系后不同时间点检测结果显示，bcl-2、VEGF和CYCD1基因表达均逐渐减低，bax基因表达逐渐增高，组间差异有统计学意义（均P＜0.05）。结论　Plumbagin对大细胞肺癌NL9980细胞系具有明确的抗肿瘤作用。Plumbagin可能通过多种作用机制发挥其抑癌作用，显示了其成为抗大细胞肺癌药物的前景。     

Methylation Profile Difference in Human High-Metastatic Large Cell Lung Cancer Cell Lines with Different Metastatic Potential

Background and Objective Invasion and metastasis is one malignant phenotype of lung cancer and cause the death of lung cancer patients. Present evidence has proved that invasion and     

The Effects of Intracellular Glutathione Content on the Sensitivity of Methylseleninic Acid to Human High-metastatic Large Cell Lung Cancer Cell Line L9981

Background and objective Lung cancer has not only become the most frequent malignant cancer which is increasing fastest among all the tumors, but also become the rst killer which     

Transfection of Nm23-H1 Gene Inhibited the Metastatic Potential of Human High-metastatic Large Cell Lung Cancer L9981

Background and objective Invasion and metastasis is not only the malignant phenotypes of lung cancer but also the main cause of death. Elucidating the molecular mechanism of tumor     

Changes of the Proteomic Profiles in Human High-metastatic Large Cell Lung Cancer Cell Line L9981 by Transfecting with nm23-H1 Gene

Background and Objective Cancer metastasis is not only the malignant characteristics of lung cancer, but also the key cause of failure to cure and high mortality. It has been proved that     

DNA甲基化在肺癌早期诊断中的研究进展

肺癌是当今世界上对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤,目前缺乏理想的早期诊断手段。在肺癌发生早期就存在很多DNA甲基化的改变,检测DNA甲基化有望成为肺癌早期诊断的重要手段。     

Down-regulation and It's Molecular Biology of Nm-23H1 Gene Transfection on PKC Signal Path-way in Human High-metastatic Large Cell Lung Cancer Cell Line L9981

Backgroud and Objective At present, lung cancer has become the most frenquent malignant tumor in China and in the world which its mortality and morbidity is increasing fastest. It     

Down-regulation and It's Molecular Biology of Nm-23H1 gene Transfection on Ras-to-MAPK Signal Transduction Pathway in Human High-metastatic Large Cell Lung Cancer Cell Line L9981

Backgroud and Objective Tumor metastasis is not only the malignant marker and characteristics of lung cancer, but also the key cause of failure to cure and lose their life of the patients with     

The Inhibiting Effects and It's Molecular Mecanisms of the Fungi of Huai Er's on Human Large Cell Lung Cancer Cell Line L9981

Background and Objective Lung cancer, which threatens human’s health and life, is the malignant tumor with the most rapid increase of morbidity. Although recent years the basic and     

Methylseleninic Acid on The Apoptosis Induction and Invasion Inhibition in Human High-Meta-static Large Cell Lung Cancer Cell Line L9981

Background and Objective Lung cancer, which has been proved to have fastest increasing rate of morbidity and mortality, appears to be one of the most dangerous malignant tumor that is     

Alteration in Gene Expression Prof ile and Biological Behavior in Human Lung Cancer Cell Line NL9980 by Nm23-H1 Gene Silencing

Background and Objective Lung cancer is the leading cause of cancer death in both men and women. Tumor metastasis is an essential aspect of lung cancer progression. Nm23-H1 is a