去甲肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞转化生长因子β1表达的影响

目的探讨去甲肾上腺素对人THP-1源性巨噬细胞转化生长因子β1表达的影响。方法不同浓度的去甲肾上腺素（10pmol/L～10μmol/L）作用THP-1源性巨噬细胞24h,运用逆转录多聚酶链反应检测转化生长因子β1mRNA的表达,酶联免疫吸附试验检测转化生长因子β1蛋白的表达。结果100nmol/L、1μmol/L及10μmol/L去甲肾上腺素引起巨噬细胞中转化生长因子β1mRNA水平分别下降9.3%（P〈0.05）、39.5%（P〈0.01）和47.8%（P〈0.01）,1μmol/L及10μmol/L的去甲肾上腺素作用于THP-1巨噬细胞其细胞上清中转化生长因子β1蛋白含量分别下降24.7%（P〈0.01）和32.8%（P〈0.01）。结论应激浓度的去甲肾上腺素能降低THP-1源性巨噬细胞转化生长因子β1基因的表达。     

β受体介导肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞清道夫受体AI与ABCA1基因表达的影响

目的 探讨肾上腺素对THP-1源巨噬细胞ATP结合盒转运体A1与清道夫受体AI mRNA表达影响的β受体介导作用.方法 分别用β1受体拮抗剂美托洛尔(10 nmol/L～100 μmol/L)和β2受体拮抗剂丁氧胺(2.5mol/L～25 μmol/L)预处理细胞1 h,再加入终浓度为1 μmol/L肾上腺素继续孵育24 h,检测受试基因的表达.结果 1 μmol/L的肾上腺素上调清道夫受体AI mRNA水平和下调ATP结合盒转运体A1 mRNA水平,与各自对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).而终浓度为1 μmol/L肾上腺素分别与不同浓度的β肾上腺素能受体拮抗剂美托洛尔和丁氧胺联合作用时,随着美托洛尔和丁氧胺浓度加大,各组ATP结合盒转运体A1 mRNA的表达升高而清道夫受体AI mRNA的表达随浓度升高呈下降趋势,与1 μmol/L肾上腺素组比较差异有统计学意义(P<0.05),且丁氧胺对肾上腺素的拮抗作用在2.5 μmol/L达到平台期.结论 肾上腺素可能通过β1和β2肾上腺素能受体介导从而上调THP-1源性巨噬细胞清道夫受体AI mRNA水平和下调ATP结合盒转运体AI mBNA水平.     

不对称二甲基精氨酸对THP-1源性巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子的影响

目的 研究不对称二甲基精氨酸对THP-1源性巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子的影响.方法 150 nmol/L佛波酯诱导THP-1细胞48 h使其转化为巨噬细胞,并用抗人CD68进行免疫细胞化学鉴定,以不同浓度的不对称二甲基精氨酸(1、5、10、20和30μmoL/L)作用于THP-1源性巨噬细胞24 h及20 μmol/L不对称二甲基精氨酸作用于THP-1源性巨噬细胞0 h、6 h、12 h、24 h及48 h ,逆转录聚合酶链反应检测各组细胞的巨噬细胞移动抑制因子Mrna表达水平,酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中巨噬细胞移动抑制因子的蛋白含量.结果 与对照组相比,5、10、20和30μmol/L的不对称二甲基精氨酸作用于THP-1源性巨噬细胞24 h后,巨噬细胞移动抑制因子的Mrna和蛋白表达水平均明显提高(P<0.05).与0 h组相比,20 μmol/L不对称二甲基精氨酸作用于THP-1源性巨噬细胞12、24和48 h,巨噬细胞移动抑制因子的Mrna和蛋白表达水平均明显提高(P<0.05).结论 不对称二甲基精氨酸可上调THP-1源性巨噬细胞的巨噬细胞移动抑制因子表达,并呈剂量和时间依赖性,不对称二甲基精氨酸可能通过诱导巨噬细胞移动抑制因子的表达而促进动脉粥样硬化的发生和发展.     

小檗碱调节肝X受体α去乙酰化促进THP-1

目的 观察小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)表达及其细胞内胆固醇流出的影响,并探讨肝x受体α(LXR-α)去乙酰化在此过程中的作用.方法 用不同浓度的小檗碱(0、5、10、20 μmol/L)处理THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞24 h,或以20 μmol/L小檗碱处理THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞不同的时间(0、6、12、24 h).采用Western Blot检测ABCA1、LXR-α和乙酰化LXR-α的蛋白表达,液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出,高效液相色谱法测定细胞内胆固醇浓度.结果 与对照组比较,小檗碱呈浓度(0～20 μmol/L)和时间依赖性(0～24 h)上调巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达和下调乙酰化LXR-α的表达,增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇的流出,减少细胞内胆固醇的含量.上述效应在20 μmol/L小檗碱处理THP-1巨噬细胞24 h后达到最大值.结论 小檗碱能上调THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达,并促进细胞内胆固醇流出,这种效应与调节LXR-α乙酰化有关.     

同型半胱氨酸对泡沫细胞中LXRα-ABCA1信号通路的影响

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)通过影响脂代谢调控基因LXRα及其下游靶基因ABCA1和ABCG1的表达致人类急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)源性巨噬细胞泡沫化在脂代谢紊乱中的作用。方法:培养THP-1单核细胞,佛波酯、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同诱导,采用中性红对巨噬细胞染色,并应用流式细胞技术检测巨噬细胞表面CD14的表达,测定巨噬细胞的含量。分为5组,分别加入0、10、50、100、200μmol/L的Hcy培养24h;采用RT-PCR法检测LXRα、ABCA1、ABCG1的mRNA表达;采用Western Blot法检测LXRα、ABCA1、ABCG1的蛋白表达。结果:实验组(Hcy 10、50、100、200μmol/L)泡沫细胞计数阳性百分率均较对照组升高(均P0.05),其中以Hcy 100μmol/L组升高明显。在Hcy诱导浓度50μmol/L时巨噬细胞51.26%,CD14表达阳性率53.36%;诱导浓度100μmol/L时巨噬细胞98.5%,CD14表达阳性率73.37%。在不同浓度Hcy干预下,泡沫细胞内LXRα、ABCA1、ABCG1的mRNA及蛋白表达均低于对照组(均P0.05)。结论:Hcy可降低THP-1源性泡沫细胞内LXRα、ABCA1、ABCG1mRNA及蛋白水平的表达,LXRα可能是Hcy影响脂代谢LXRα-ABCA1信号通路中的靶基因。     

辛伐他汀对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇代谢和SR-A表达的影响

目的探讨不同浓度辛伐他汀对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇代谢和SR-A表达的影响。方法以50 nmol/L佛波酯诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞,氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导巨噬细胞建立泡沫细胞模型,通过不同浓度辛伐他汀干预后,油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,高效液相色谱检测细胞内游离胆固醇和胆固醇酯含量,W estern b lot检测SR-A蛋白的表达。结果与ox-LDL组比较,辛伐他汀处理组巨噬细胞的油红O染色阳性细胞数和细胞内胆固醇酯含量均显著减少（P均〈0.01）,同时SR-A蛋白表达明显下降（P〈0.01）,呈剂量依赖性。结论辛伐他汀可抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞泡沫化,可能与辛伐他汀抑制SR-A的表达,从而减弱巨噬细胞对ox-LDL的摄取有关。     

白细胞介素10对人THP-1源巨噬细胞泡沫化过程中SR-A表达的影响

目的:本研究旨在观察白细胞介素-10(IL-10)对人THP-1源巨噬细胞泡沫化过程中清道夫受体A(SR-A)表达的影响,探讨在动脉粥样硬化形成中IL-10对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞泡沫化的干预作用。方法:体外建立泡沫细胞培养体系,将细胞分为5组即THP-1单核细胞组,巨噬细胞组,IL-10刺激巨噬细胞组,ox-LDL刺激巨噬细胞组(泡沫细胞组),ox-LDL和IL-10联合刺激巨噬细胞组。采用RT-PCR和Westernbloting分别检测SR-A的mRNA和蛋白表达变化,脂质油红O化学染色方法检测各组细胞脂质摄取量的情况。结果:当THP-1分化为巨噬细胞时,SR-A开始大量表达;IL-10刺激可显著抑制巨噬细胞组SR-A的表达,其mRNA和蛋白分别下降为未刺激前的0.6倍和0.7倍,泡沫细胞形成率也下降为未刺激前的0.6倍。巨噬细胞经ox-LDL刺激形成泡沫细胞时,SR-A的表达进一步升高,其mRNA和蛋白分别增加为巨噬细胞组的1.5倍和1.4倍,泡沫细胞形成率提高为巨噬细胞组的1.7倍。在此过程中加入IL-10联合刺激,观察到SR-A的表达量有显著降低,其mRNA和蛋白均下降为单用ox-LDL刺激巨噬细胞组的0.4倍,ox-LDL的摄取量也下降为单用ox-LDL刺激巨噬细胞组的0.3倍。结论:IL-10抑制巨噬细胞SR-A表达,IL-10对ox-LDL诱导巨噬细胞SR-A的表达具明显干预作用。IL-10通过抑制SR-A表达可能在抗动脉粥样硬化的发生中发挥重要作用。     

PHF-2在氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1源性

目的　观察氧化型低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞植物同源结构域指蛋白2（PHF-2）表达的影响,探讨表观遗传调节在氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞炎症反应中的作用。方法　用不同浓度（0、50、100、150　mg/L）氧化型低密度脂蛋白处理THP-1巨噬细胞4　h,采用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子α和巨噬细胞炎性蛋白1β的表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western　blot分别检测PHF-2　mRNA和蛋白质的表达;采用免疫共沉淀法检测PHF-2和p65核因子κB的结合。结果　100～150　mg/L氧化型低密度脂蛋白处理THP-1巨噬细胞4　h后,肿瘤坏死因子α和巨噬细胞炎性蛋白1β的表达明显上调;氧化型低密度脂蛋白呈浓度依赖性上调THP-1巨噬细胞PHF-2　mRNA和蛋白质的表达,并促进PHF-2和p65核因子κB的结合。结论　　PHF-2参与氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞核因子κB激活和炎症因子表达。     

PCSK9-siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中对Bax、Bcl-2表达的影响

目的 研究PCSK9siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中对Bax、Bcl-2表达的影响.方法 用不同浓度ox-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,免疫印迹法检测Bax、Bcl-2表达变化.应用Lipofectamine2000分别转染30、50 nmol/L和80 nmol/L PCSK9 siRNAs 进THP-1 源性巨噬细胞中,作用24 h后加入ox-LDL 处理48 h,免疫印迹法分析细胞Bax、Bcl-2表达,Hoechst33258染色观察形态评价细胞凋亡.结果 随着ox-LDL浓度的增加,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2蛋白表达下调,呈浓度依赖性,80 μg/mL ox-LDL处理组作用最为明显;80 μg/mL ox-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间后,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2蛋白表达下调,呈时间依赖性,48 h处理组作用最为明显;PCSK9 siRNA能明显下调Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,且均呈浓度依赖性;Hoechst33258染色显示,PCSK9 siRNA转染组细胞凋亡明显减少.结论 PCSK9 siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1 源性巨噬细胞凋亡中下调促凋亡蛋白Bax表达,上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达.     

内肥素对THP-1源性泡沫细胞形成中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达的影响

目的:观察内肥素对THP-1源性泡沫细胞形成中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响,及其在动脉粥样硬化中的作用机制.方法:给予不同浓度的内肥素处理24 h和同一浓度的内肥素处理THP-1源性巨噬细胞0～36 h,运用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,运用逆转录聚合酶链反应和Western-blot检测LOX-1的mRNA和蛋白的表达水平.结果:高浓度的内肥素处理负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞24 h后,细胞浆内的脂滴明显增多.在负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞上,内肥素上调LOX-1 mRNA和蛋白表达.结论:内肥素上调THP-1源性泡沫细胞中LOX-1的表达.     

大黄酸对人肾小管上皮细胞血小板反应蛋白1和转化生长因子β1表达的影响

目的:探讨大黄酸对人肾小管上皮细胞(HK-2)血小板反应蛋白1(TSP-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:体外培养HK-2细胞,观察AngⅡ(1×10-7mol/L)诱导下低、中和高浓度的大黄酸(10μg/ml、20μg/ml和40μg/ml)对HK-2TSP-1、TGF-β1的mRNA和蛋白表达的影响。采用Real Time PCR检测细胞TSP-1、TGF-β1mRNA表达,采用Westernb lot检测TSP-1、TGF-β1蛋白表达。培养上清液中TGF-β1和活性TGF-β1检测采用ELISA法。结果:与空白对照组比较,AngⅡ(1×10-7mol/L)明显上调了HK-2TSP-1的mRNA表达(3.84±0.48vs1.32±0.19;P<0.05)、伴有TGF-β1的mRNA表达增加(3.68±0.46vs1.18±0.13;P<0.05)。同时AngⅡ(1×10-7mol/L)也上调TSP-1蛋白表达(0.5246±0.0936 vs 0.1015±0.0768;P<0.01),伴有TGF-β1蛋白表达的增加(0.5948±0.0624 vs 0.1264±0.0811;P<0.01)。与AngⅡ阳性对照组比较,中浓度和高浓度大黄酸明显抑制了AngⅡ(1×10-7mol/L)诱导的TSP-1、TGF-β1的mRNA(P<0.05,P<0.01)和蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。中浓度大黄酸干预组总的TGF-β1含量和活性TGF-β1含量均减少,(P<0.05);高浓度大黄酸干预组总的TGF-β1含量和活性TGF-β1含量均明显减少(P<0.01)。结论:大黄酸能抑制人肾小管上皮细胞TSP-1、TGF-β1的mRNA和蛋白表达,抑制TGF-β分泌。     

内脂素通过过氧化体增殖物激活型受体γ信号转导通路上调酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达

目的观察过氧化体增殖物激活型受体γ信号转导通路在内脂素调控人THP-1单核细胞源性巨噬细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达中的作用,探讨内脂素诱导泡沫细胞形成的机制和途径。方法 THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,随机分组,给予不同浓度的内脂素和过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂罗格列酮进行干预,分别运用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,逆转录聚合酶链反应法和免疫印迹法检测细胞过氧化体增殖物激活型受体γ和酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白的表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量,总胆固醇与游离胆固醇之差为胆固醇酯含量。结果与对照组比较,内脂素组细胞内脂滴形成增加,过氧化体增殖物激活型受体γmRNA和蛋白表达水平降低(P0.05),酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白表达水平升高(P0.05),细胞内胆固醇酯含量升高(P0.05);随着内脂素浓度(10-7mol/L、10-6mol/L和10-5mol/L)升高,过氧化体增殖物激活型受体γmRNA和蛋白表达水平逐渐降低(r值分别为-0.73和-0.83,P0.05),酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白表达水平逐渐升高(r值分别为0.91和0.72,P0.05)。与内脂素组比较,罗格列酮组酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白表达水平降低(P0.05),细胞内胆固醇酯含量降低(P0.05);随着罗格列酮浓度(10μmol/L、15μmol/L和20μmol/L)升高,酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白表达水平逐渐降低(r值分别为-0.69和-0.84,P0.05)。结论内脂素呈浓度依赖性下调THP-1单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ的表达,上调酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达,而罗格列酮呈浓度依赖性抑制内脂素所诱导的上述效应。提示内脂素可能通过过氧化体增殖物激活型受体γ信号转导通路上调酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达,使细胞内胆固醇酯合成增加,从而诱导泡沫细胞形成。     

脂质过氧化诱导培养的内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α和血管细胞粘附分子1

为了解脂质过氧化损伤能否诱导内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α和血管细胞粘附分子1 mRNA,将培养的内皮细胞随机分为实验组(在培养液中分别加入1 μmol/L、5 μmol/L及10 μmol/L联胺)和对照组(不加联胺).用地高辛随机引物标记的人巨噬细胞炎性蛋白1α和血管细胞粘附分子1 cDNA探针与各组内皮细胞进行核酸原位杂交.用异硫氰酸胍法提取各组细胞的总RNA,与上述探针进行斑点杂交.原位杂交显示,正常内皮细胞的胞浆和胞核均表达巨噬细胞炎性蛋白1α和血管细胞粘附分子1 mRNA,为蓝色颗粒.加联胺后,上述两种细胞因子的表达明显增强(P<0.05),并与所加联胺的浓度呈正相关.斑点杂交显示,1 μmol/L联胺组巨噬细胞炎性蛋白1α和血管细胞粘附分子1 mRNA的表达分别为对照组的1.40倍和1.22倍;5 μmol/L联胺组为对照组的1.90倍和1.56倍;10 μmol/L联胺组为对照组的2.50倍和2.04倍,与联胺的浓度呈正相关.结果提示,脂质过氧化可通过刺激内皮细胞产生血管细胞粘附分子1和巨噬细胞炎性蛋白1α诱导单核细胞粘附于内皮,并向内皮下间隙迁移,在动脉粥样硬化发生过程中单核细胞的募集可能起重要作用.     

去甲肾上腺素和哌唑嗪对自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞膜Ca~(2+)-ATPase活性和PMCA1 mRNA表达的影响

目的 观察去甲肾上腺素及其俚.肾上腺素能受体拮抗剂哌唑嗪对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Ca~(2+)-ATPasee活性及mRNA表达的影响.方法 采用生化酶学法和逆转录聚合酶链反应技术观察不同浓度去甲肾上腺素和哌唑嗪对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Ca~(2+)-ATPase活性和mRNA表达的影响.结果 与自发性高血压大鼠组比较,10~(-7)mol/L去甲肾上腺素能减弱Ca~(2+)-ATPase活性(P<0.01)及mRNA的表达(P<0.01),10~(-5) mol/L和10~(-6) mol/L哌唑嗪能减弱10~(-7)moL/L去甲肾上腺素对Ca~(2+)-ATPase活性的抑制作用(P<0.05).10~(-6) mol/L哌唑嗪可抑制10~(-7)mol/L去甲肾上腺素对PMCA1 mRNA表达的影响(P<0.05).单用哌唑嗪对Ca~(2+)-ATPase活性及mRNA表达水平无明显改变(P>0.05).结论 去甲肾上腺素抑制自发性高血压大鼠Ca~(2+)-ATPase活性和下调PMCA1 mRNA表达,可能是通过α_1肾上腺素能受体途径介导基因转录的下调.哌唑嗪可通过阻断α_1肾上腺素能受体途径抑制去甲肾上腺素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Ca~(2+)-ATPase活性和PMCA1 mRNA表达的影响.     

丹红、C反应蛋白与基质金属蛋白酶1表达的关系

目的探讨中药丹红、C反应蛋白与THP-1源性巨噬细胞基质金属蛋白酶1表达的关系。方法采用佛波醇将THP-1细胞诱导分化成巨噬细胞后,用酶联免疫吸附法测定细胞基质金属蛋白酶1蛋白表达峰值时间。再将其分为对照组、C反应蛋白干预组、丹红注射液干预组。酶联免疫吸附法测定不同组别细胞培养上清液中基质金属蛋白酶1蛋白浓度,再用逆转录聚合酶链反应测定细胞不同时间和C反应蛋白干预组基质金属蛋白酶1的mRNA表达。并将基质金属蛋白酶1蛋白浓度和mRNA表达进行比较分析。结果显微镜下观察到细胞株THP-1在佛波醇诱导下转变为巨噬细胞,在24 h细胞的上清液基质金属蛋白酶1蛋白和mRNA表达到峰值。与对照组相比,C反应蛋白干预组中基质金属蛋白酶1蛋白和mRNA表达升高,5、10、25、50 mg/L C反应蛋白干预时基质金属蛋白酶1表达逐渐增高(P<0.05),呈剂量依赖性。与对照组相比,丹红注射液干预组中基质金属蛋白酶1的表达降低,0、200、400、800、1 600、3 200 mL/L丹红干预时基质金属蛋白酶1的表达减低(P<0.05),呈节段性依赖性递减,且0 mg/L和50 mg/L C反应蛋白干预下两组干预基质金属蛋白酶1表达无差异(P>0.05)。结论 THP-1细胞分化成巨噬细胞后,在24 h基质金属蛋白酶1蛋白和mRNA表达最高,C反应蛋白能促进THP-1源性巨噬细胞表达基质金属蛋白酶1,丹红能抑制基质金属蛋白酶1分泌,在有C反应蛋白干预基质金属蛋白酶1表达无显著差别。     

不同浓度的血管紧张素Ⅱ、血管紧张素-(1-7)对THP-1巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达的影响

目的观察不同浓度血管紧张素Ⅱ、血管紧张素-(1-7)对单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达的影响。方法体外培养原代THP-1细胞,取5~8代细胞用佛波酯诱导分化为巨噬细胞,将细胞分成空白对照组(不加任何处理因素)、不同浓度(0.1、1、10μmol/L)血管紧张素-(1-7)组和不同浓度(0.1、1、5和10μmol/L)血管紧张素Ⅱ组加入相应处理因素培养48 h后,RT-PCR法和免疫印迹法分别检测过氧化体增殖物激活型受体γ的mRNA和蛋白表达。结果不同浓度血管紧张素-(1-7)组过氧化体增殖物激活型受体γ的mRNA及蛋白表达均比空白对照组显著升高(P<0.05),而且随着血管紧张素-(1-7)浓度的升高,其mRNA及蛋白的表达也升高(P<0.05);而不同浓度血管紧张素Ⅱ组过氧化体增殖物激活型受体γ的mRNA及蛋白表达均较空白对照组降低(P<0.05),且过氧化体增殖物激活型受体γ的mRNA及蛋白表达随着血管紧张素Ⅱ浓度的升高而降低(P<0.05)。结论血管紧张素-(1-7)呈浓度依赖性促进THP-1巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ的表达;血管紧张素Ⅱ呈浓度依赖性抑制THP-1巨噬细胞过氧...     

AngⅡ对THP-1源巨噬细胞高密度脂蛋白受体表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对THP-1源巨噬细胞高密度脂蛋白受体(SR-B1)表达的影响。方法运用反转录-多聚酶反应(RT-PCR)和Western blotting分别检测不同浓度AngⅡ对SR-B1mRNA与SR-B1蛋白表达的影响。结果AngⅡ能引起THP-1源巨噬细胞SR-B1mRNA与蛋白质的表达下调(P0.05),并呈浓度依赖性。结论AngⅡ能抑制THP-1巨噬细胞SR-B1的表达。     

载脂蛋白A1对胆固醇逆转运及三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响

目的 观察载脂蛋白A1(apoAl)对人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)源性泡沫细胞内胆固醇、胆固醇酯含量和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCAl)表达的影响和机制.方法 以50 ng/ml的佛波酯诱导人THP-1,使其分化为巨噬细胞,再经50μg/ml氧化型低密度脂蛋白充分诱导使其转变为负脂的泡沫细胞;然后用不同浓度apoAl(5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20 μg/ml)孵育泡沫细胞24 h,以apoAl(10μg/ml)孵育泡沫细胞6 h、12 h、24 h.采用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,用氧化酶法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量;用反转录聚合酶链反应检测不同浓度apoAl干预泡沫细胞后ABCA1 mRNA的表达;用免疫荧光法检测经不同浓度和不同时间apoAl和ABCAl多克隆抗体干预泡沫细胞后ABCA1蛋白的表达.结果 (1)THP-1经佛波酯(50 ng/ml)和氧化型低密度脂蛋白(50μg/ml)分别干预48 h后可成功诱导为富含脂质的泡沫细胞;(2)apoA1可促进THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇逆向转运,减少细胞内胆固醇含量,呈浓度依赖性和时间依赖性;(3)随着apoA1干预浓度增加,THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内ABCA1 mRNA的表达变化不显著,但蛋白表达增加,0 μg/ml与5 μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml apoAl干预浓度下油红O染色阳性细胞率分别为(55±4)%与(43±9)%、(33±4)%、(28±1)%、(26±2)%,差异有统计学意义(均P<0.05);(4)ABCAl抗体干预可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白的表达.结论 apoA1-ABCA1通路参与泡沫细胞胆固醇逆向转运,apoA1起关键作用,apoA1增加ABCA1蛋白的表达可能与降低ABCA1蛋白的降解有关.     

瑞舒伐他汀对TPH-1巨噬细胞清道夫受体CD_（36）、SR-AⅠ表达的影响

目的观察瑞舒伐他汀对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的TPH-1巨噬细胞清道夫受体CD36和SR-AⅠ表达的影响。方法体外培养TPH-1巨噬细胞,分三组置6孔培养板中。对照组为正常生长的TPH-1巨噬细胞;ox-LDL组加入100 mg/L的ox-LDL培养24 h,诱导巨噬细胞泡沫化;瑞舒伐他汀组加入100 mg/L的ox-LDL培养24 h,诱导巨噬细胞泡沫化,然后加入瑞舒伐他汀10μmol/L培养2 h。检测各组细胞内清道夫受体CD36、SR-AⅠ蛋白及其mRNA。结果与对照组相比,ox-LDL组CD36、SR-AⅠ蛋白及其mRNA表达增加（P均〈0.05）;与ox-LDL组相比,瑞舒伐他汀组CD36、SR-AⅠ蛋白及mRNA表达明显降低（P均〈0.05）。结论瑞舒伐他汀可降低ox-LDL诱导的TPH-1巨噬细胞中清道夫受体CD36、SR-AⅠ的表达。     

咖啡酸苯乙酯对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子分泌的抑制作用

目的研究咖啡酸苯乙酯(CAPE)对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子分泌的影响及其可能机制。方法用不同浓度CAPE预处理THP-1源性巨噬细胞2 h,再用40 mg/L ox-LDL处理24 h,ELISA检测炎症因子TNF-α,IL-6以及MCP-1的分泌情况;用40 mg/L ox-LDL分别处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,Westernblot检测细胞COX-2蛋白表达的情况;最后,采用Western blot分析CAPE对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达、IκB-α降解及其NF-κB核转位的影响。结果 40 mg/L ox-LDL可诱导THP-1源性巨噬细胞TNF-α,IL-6以及MCP-1分泌增多,而CAPE明显抑制了ox-LDL诱导的细胞炎症因子分泌,呈浓度依赖性(P<0.05);随着ox-LDL处理时间的延长,THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达逐渐增高,以24 h最为明显(P<0.05),而CAPE能抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达上调,并可抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞IκB-α降解及其NF-κB核转位。结论 CAPE对ox-LDL诱导的巨噬细胞炎症因子分泌应具有抑制作用,作用机制可能与其抑制NF-κB激活,下调COX-2蛋白表达有关。