模拟失重对肺微血管内皮细胞F-actin的影响

目的：观察回转模拟失重对肺微血管内皮细胞纤维肌动蛋白（F-actin）的影响,探讨其在失重环境下的损伤机制。方法：组织块贴壁法原代培养肺微血管内皮细胞,采用回转器模拟失重效应。PMVEC回转培养24h、48h和72h,同时设1g同步对照静置培养。采用免疫荧光技术标记PMVEC内的F-actin,以激光共聚焦显微镜观察采集荧光图像。结果：与同步对照相比,不同时间回转的PMVEC微丝骨架均发生明显破坏,且这种破坏随着回转模拟失重时间的延长而加重。结论：模拟失重可破坏PMVEC内F-actin,导致PMVEC损伤。     

模拟失重对肺微血管内皮细胞屏障功能的影响

目的 研究模拟失重对肺微血管内皮细胞屏障功能的影响,为防御失重所导致的不良影响寻找新的治疗靶点.方法 采用回转器模拟失重效应干预肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC),回转培养72h,同时设1g对照静置培养组.之后用免疫荧光染色标记细胞骨架肌动蛋白F-actin,并在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架的改变;光镜下观察单核细胞(THP-1) 与PMVEC 的黏附作用,并计算黏附率;绿色荧光标记的腺病毒感染细胞,荧光显微镜下观察,并在流式细胞仪检测感染效率.结果 回转72h PMVEC 胞质内F-actin 的表达减少,微丝的拉丝感和方向感明显弱化,排列松散,细胞伸展不好,体积变小;模拟失重抑制PMVEC 对单核细胞的黏附,导致黏附率(37.69%±6.5% vs 51.25%±8.2%,P<0.05) 下降;模拟失重组的腺病毒感染率更高(84.55%±5.31% vs 66.32%±5.74%,P<0.05),更容易受到腺病毒感染.结论 模拟失重可以损伤PMVECs 的屏障功能.     

模拟失重对大鼠肺微血管通透性的影响

目的：研究模拟失重条件下肺微血管通透性的变化。方法：采用尾悬为模拟失重，分为悬吊7d和21d及对照4组，每组10只健康雄性SD大鼠，共40只大鼠。用肺泡毛细血管对异硫氰酸荧光素钠标记的右旋糖苷通透性指数表示肺泡毛细血管通透性并对其进行了测定，并采用免疫组织化学技术检测肺组织的血管通透因子的改变情况。结果：7d悬吊组模拟失重大鼠肺微血管通透性指数显著增大（P＜0．01），且21d悬吊组模拟失重大鼠肺微血通透性指数仍较大（P＜0．05），但同7d悬吊组相比增大程度已明显降低；7d尾悬吊模拟失重大鼠肺组织血管通透因子的表达水平明显高于正常对照组（P＜0．05），且21d悬吊组模拟失重大鼠肺组织血管通透因子的表达水平仍较高（P＜0．05），但增高程度已明显低于7d悬吊组。结论：在模拟失重条件下肺组织微血管通透性增高，并且随着时间延长增高程度会有所降低。     

百草枯诱导大鼠肺微血管内皮细胞凋亡实验研究

目的探讨百草枯（PQ）对大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）的直接毒性和能否诱导大鼠PMVECs的凋亡。方法雄性SD大鼠PMVECs的原代培养和鉴定。培养的大鼠PMVECs在不同浓度PQ的培养基中培养不同时间,通过MTT法、琼脂糖凝胶电泳、DAPI染色、流式细胞术来检测PQ对人鼠PMVECs的毒性和凋亡的影响。结果成功地培养出大鼠PMVECs。MTT法测试发现PQ对大鼠PMVECs的增殖代谢活性具有剂量和时间依赖性的抑制作用;琼脂糖凝胶电泳显示凋亡的DNA阶梯;通过形态学观察,发现细胞凋亡的特征如核固缩、核碎裂;流式细胞术揭示凋亡峰出现。结论PQ在体外对大鼠PMVECs的增殖具有抑制作用并能诱导其凋亡;PMVECs凋亡可能是PQ所致的急性肺损伤的机制之一。     

红景天苷抑制模拟微重力诱导的肺微血管内皮细胞凋亡

目的研究红景天苷(Sa1)抑制模拟微重力诱导的肺微血管内皮细胞凋亡作用并探讨其可能的机制。方法采用回转器回转细胞模拟微重力效应,将传代培养的人肺微血管内皮细胞分为3组:对照组、回转组、回转+Sal预处理组,采用An-nexinV-FITC试剂盒对细胞染色,以流式细胞仪进行细胞凋亡检测,另通过Real-time PCR检测Bcl-2、Bax及Caspase-3基因表达情况,Western blot法检测PI3K、p-Akt与Caspase-3的蛋白表达情况。结果流式细胞仪定量结果表明回转72h后HPMEC的凋亡率显著高于同步对照组,Bcl-2基因表达降低,而Bax与Caspase-3基因表达升高,并且PI3K和p-Akt蛋白表达减低,Caspase-3蛋白表达升高;而Sal预处理后细胞凋亡率较回转组降低,Bcl-2基因表达升高,而Bax与Caspase-3基因表达下降,同时PI3K和p-Akt蛋白表达上升,Caspase-3蛋白表达下降。结论红景天苷可以抑制模拟微重力诱导的肺微血管内皮细胞凋亡,其机制可能为影响了PI3k/Akt通路。     

失重或模拟失重对血管内皮细胞影响的研究进展

随着载人航天事业的不断深入,失重对航天员的生理影响,尤其是对心血管系统影响的研究也日趋深入。航天医学实践证明, 航天员长期处在失重环境中,重力的缺失将会引起人体生理功能的显著变化,其中心血管功能失调最为常见。随着各国深空探测的不断实施,失重对心血管系统的研究显得越来越重要。本文就近年来失重或模拟失重对血管内皮细胞的结构和功能影响做一综述。     

重组Shh因子对海水浸泡肺微血管内皮细胞增殖和凋亡的影响研究

目的 观察不同剂量重组Shh(recombinant sonic hedgehog,rShh)因子对海水浸泡肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cell,PMVEC)的促进增殖及抗凋亡作用.方法 组织块法原代培养大鼠PMVEC,建立大鼠PMVEC海水浸泡模型,加入不同剂量重组Shh因子,采用TUNEL法检测PMVEC凋亡率.采用2,3-苯基溴化四唑(MTT)染色计数法测定细胞增殖活性.结果 海水浸泡可导致PMVEC损伤,表现为PMVEC细胞增殖受到抑制以及凋亡发生率增加.重组Shh能降低海水所致PMVEC增殖抑制率和其凋亡率,在实验剂量范围内,其促增殖和抗凋亡作用呈剂量依赖性.结论 重组Shh可促进海水浸泡PMVEC增殖和抑制其凋亡.     

TNFα对大鼠肺微血管内皮细胞cAMP的影响

目的结合既往工作,探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)作用后大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)cAMP浓度的变化及其与β-AR变化的关系。方法在100ml培养瓶内接种等量RPMVEC,细胞单层汇合后分3组:TNFα组加5000U/mlTNFα,TNFα 山莨菪碱组加5000U/mlTNFα 10μg/ml山莨菪碱,正常对照组加等量稀释液(各组n=4)。于作用后15、90min采用放免法测定RPMVEC cAMP浓度。结果正常RPMVEC cAMP浓度为11.83±1.35fmol/μl。TNFα组和TNFα 山莨菪碱组,15min和90min两个时相点细胞内cAMP浓度均显著高于正常对照组(P<0.01)。TNFα 山莨菪碱组15min与TNFα组15min比较,细胞内cAMP浓度显著增高(P<0.01);TNFα 山莨菪碱组90min与TNFα组90min比较,胞内cAMP浓度无显著差异(P>0.05)。TNFα组15min与90min比较,胞内cAMP浓度显著增高(P<0.05)。结论TNFα作用可引起RPMVEC cAMP浓度显著升高,其机制可能与腺苷酸环化酶活化有关,而与TNFα引起的β-AR变化下调无关。     

百草枯诱导大鼠肺微血管内皮细胞凋亡实验研究

【论文特点介绍】百草枯的肺毒性在于通过增加氧化应激导致肺损伤,而氧化应激可能是导致细胞凋亡的最后共同通路。众所周知,百草枯可以在体内外产生氧自由基损伤肺微血管内皮。然而,在百草枯所致的肺损伤中,     

大鼠肺微血管内皮细胞的分离培养

目的探讨一种分离和培养大鼠肺微血管内皮细胞(LMVEC)的简单方法。方法组织贴块法培养大鼠LMVEC,倒置显微镜下观察细胞的形态和生长特性,并采用免疫组化方法进行鉴定。结果获得的LMVEC具有规律的铺路石镶嵌状排列,内皮细胞特异性抗体CD31免疫组化染色阳性。结论组织贴块法培养LMVEC是简单可行的。     

组织块法培养大鼠肺微血管内皮细胞的综合鉴定

目的 为组织块法培养的大鼠肺微血管内皮细胞(rat pulmonary microvascular endothelial cells,RPMVECs)建立合理可靠的多指标综合鉴定方案.方法 采用外周肺组织贴块法培养RPMVECs,抽取组织块进行切片观察,以大鼠肺动脉平滑肌细胞和人脐静脉内皮细胞为对照,对培养细胞进行CD34、植物凝集素BSI、Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学鉴定,通过光镜和透射电镜观察细胞形态和超微结构.结果 组织切片显示组织块源于外周肺组织,CD34免疫细胞化学染色阳性,植物凝集素BSI结合试验阳性,而Ⅷ因子相关抗原染色阴性,透射电镜未见Weibel-Palade小体.结论 Ⅷ因子相关抗原和Weibel-Palade小体并非RPMVECs鉴定的理想指标,联合应用外周肺组织切片、CD34和植物凝集素BSI三指标为组织块法培养的RPMVECs提供了一个简单易行、合理、可靠的综合鉴定方案.     

大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法的改进及细胞鉴定

目的改进大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）的原代培养方法,并对培养细胞进行相关鉴定。方法从动物选择、取材、循环灌注、植块贴壁等方面对体外分离PMVECs的原代培养方法进行改良。原代培养细胞经传代、冻存与复苏,倒置显微镜观察培养细胞的形态学特征和生长特性,免疫组织化学染色检测血管内皮细胞表面标志物Ⅷ因子相关抗原和CD31表达,荧光显微镜观察细胞与PMVECs的特异性结合物植物凝集素BSI的结合情况（FITC-BSI结合试验）。结果倒置显微镜下,培养细胞呈多边形或梭形,融合为单层后呈典型的鹅卵石或铺路石样镶嵌生长并有接触抑制现象;免疫组织化学染色显示,细胞CD31和Ⅷ因子表达阳性;FITC-BSI结合试验呈阳性结果。结论改进的原代细胞培养方法操作简单、可重复性好且成功率高;综合鉴定表明培养细胞形态学及生物学特性与PMVECs一致。     

大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法的改进及细胞鉴定

目的 改进大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）的原代培养方法,并对培养细胞进行相关鉴定。方法 从动物选择、取材、循环灌注、植块贴壁等方面对体外分离PMVECs的原代培养方法进行改良。原代培养细胞经传代、冻存与复苏,倒置显微镜观察培养细胞的形态学特征和生长特性,免疫组织化学染色检测血管内皮细胞表面标志物Ⅷ因子相关抗原和CD31表达,荧光显微镜观察细胞与PMVECs的特异性结合物植物凝集素BSI的结合情况（FITCBSI结合试验）。结果 倒置显微镜下,培养细胞呈多边形或梭形,融合为单层后呈典型的鹅卵石或铺路石样镶嵌生长并有接触抑制现象;免疫组织化学染色显示,细胞CD31和Ⅷ因子表达阳性;FITC-BSI结合试验呈阳性结果。结论 改进的原代细胞培养方法操作简单、可重复性好且成功率高;综合鉴定表明培养细胞形态学及生物学特性与PMVECs一致。     

大鼠吸入性损伤血清对肺微血管内皮细胞的损伤作用

肺微血管内皮细胞（ＰＭＶＥＣ）体外培养法的建立对于研究吸入性损伤具有重要意义。以大鼠肺为材料，采用弹力蛋白酶消化法以获取ＰＭＶＥＣ，培养５ｄ～６ｄ后即可融合成片，经Ⅷ因子相关抗原染色鉴定，纯度可达９０％以上。以此为模型，加入大鼠烟雾吸入伤血清，可使ＰＭＶＥＣ分泌功能明显变化，血清ＮＯ及ＬＤＨ增高，同时细胞内ｃＡＭＰ含量降低，［Ｃａ２＋］ｉ水平明显升高，即信息传递系统受损。提示ＰＭＶＥＣ是吸入性损伤中肺损伤的重要靶细胞     

尿毒症患者血清对大鼠肺微血管内皮细胞单层通透性和骨架蛋白的影响

目的 观察尿毒症患者血清对培养大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)单层通透性、肌动蛋白骨架(F-肌动蛋白)的影响,探讨尿毒症患者血清对肺微血管内皮细胞损伤的机制.方法 体外培养大鼠RPMVEC并鉴定;用针头式滤器观察尿毒症患者血清对RPMVEC单层通透性的影响;F-actin用流式细胞仪测定.结果 健康对照组6、12 h单层通透性系数分别为(0.0382 4±0.0022)、(0.0393±0.0016)ml·min-1·cm-2·kPa-1;尿毒症患者血清6、12 h单层通透性系数分别为(0.0687±0.0014)、(0.0772±0.0031)ml·min-1·cm-2·kPa-1;流式细胞仪测定F-肌动蛋白的值分别为:阴性对照组10.60±3.3、正常健康对照组1233.34±13.92、尿毒症血清组(6 h)712±51、尿毒症血清组(12 h)613.31±42.81;实验发现尿毒症患者血清100μl作用于RPMVEC 6、12 h可使RPMVEC的单层通透性增高(P<0.01);F-肌动蛋白解聚(P<0.01),且二者呈负相关(r=-0.927,P<0.01).结论 尿毒症患者血清作用于RPMVEC一定时间,可引起RPMVEC单层通透性的增高与F-肌动蛋白解聚.尿毒症患者血清引起内皮单层通透性的增高的机制与F-肌动蛋白解聚密切相关.