凋亡相关基因Livin mRNA在骨肉瘤中的表达及意义

目的 探讨凋亡相关基因Livin mRNA在骨肉瘤的表达及其与骨肉瘤发生发展的关系.方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测47例骨肉瘤组织中Livin mRNA的表达情况.结合临床资料进行分析.结果 Livin mRNA在经病理证实的20例肿瘤外5cm的正常骨组织中均未检出,47例骨肉瘤组织中29例表达阳性,Livin mRNA的表达与Enneking分期有关（P〈0.05）,而与肿瘤部位和Dahlin病理分型无关（P〉0.05）.结论 Livin mRNA在骨肉瘤组织中的特异性表达可能在骨肉瘤的发生发展中起重要作用.阻断Livin mRNA的表达可为骨肉瘤的治疗提供新的途径.     

Livin及Caspase-3在骨肉瘤中的表达

目的探讨Livin及Caspase-3在骨肉瘤中的表达及两者之间的关系。方法应用免疫组化方法检测Livin及Caspase-3在45例骨肉瘤及15例骨软骨瘤中的表达,并分析其与各项临床病理指标之间的关系。结果Livin在骨肉瘤组织中阳性表达率为62．2％,而在骨软骨瘤中不表达,两者比较有显著性差异（P〈0．01）,Livin在骨肉瘤组织中的表达与分化程度、转移有关（P〈0．05,P〈0．01）;Caspase-3在骨肉瘤及骨软骨瘤中阳性率分别为48．9％和80％,两者比较也有显著性差异（P〈0．05）;Livin与Caspase-3之间呈负相关。结论Livin的高表达可能与骨肉瘤的发生、发展及转移有关。Caspase-3在骨肉瘤中的表达下降,它与Livin一起参与了骨肉瘤的发病。     

人骨肉瘤组织中Livin和Caspase-7蛋白的表达及其临床意义

分析Livin和Caspase-7蛋白在骨肉瘤中的表达,探讨两者在骨肉瘤的临床诊断、治疗及预后中的意义。方法：收集2001年2月至2012年12月我院骨科收治的51例骨肉瘤患者的石蜡切片标本及12例正常骨痂组织标本,采用免疫组化法检测标本中Livin和Caspase-7蛋白的表达,并分析两者表达的相关性及与骨肉瘤各临床病理指标和预后之间的关系。结果：与正常骨痂组织相比,骨肉瘤患者组织中Livin蛋白的阳性表达率明显增高[66.7%（34/51） vs 8.3%（1/12）,P<001];而Caspase-7蛋白的阳性表达率则明显降低[49.0%（25/51）vs 100.0%（12/12）,P<0.01]。Livin和Caspase-7蛋白的阳性表达与骨肉瘤的大小、Enncking分期及患者5年生存率显著相关（P<0.01）,与患者年龄、性别、病理分型及肿瘤的部位无相关性（P＞0.05）;Livin蛋白的阳性表达和Caspase-7蛋白的阳性表达之间呈负相关性（ r=-0.305,P=0.029）。结论：Livin蛋白在骨肉瘤组织中高表达,而Caspase-7蛋白在骨肉瘤组织中低表达,两者表达呈负相关性;Livin可能通过某种机制调控Caspase-7的表达,从而抑制了骨肉瘤细胞凋亡并促使骨肉瘤的发生与发展。     

Livin反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞活性的影响

目的 探讨Livin在骨肉瘤细胞中的表达及Livin反义寡核苷酸（ASODN）对骨肉瘤细胞活性及功能的影响。方法 设计针对Livin的ASODN序列,根据转染效率评价结果,选择下调作用最强的ASODN序列制备脂质体-寡核苷酸复合物并转染 MG-63 细胞。采用免疫细胞染色法及Western blotting检测转染24 h后MG-63 细胞中Livin的表达情况,CellTiter-Glo法检测转染72 h后MG-63 细胞的增殖情况,划痕法检测ASODN对MG-63细胞迁移能力的影响,流式细胞仪检测转染24 h后 MG-63 细胞的凋亡情况和细胞周期。结果 Livin蛋白主要表达于MG-63细胞的胞质。选用下调作用最强的ASODN转染MG-63细胞后,Livin蛋白表达显著下降;不同浓度Livin ASODN 对 MG-63细胞的增殖及迁移有剂量依赖抑制作用;而ASODN 组的凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。结论 靶向Livin的ASODN可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力并促进其凋亡。     

miR-139-5p靶向GPR56抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:研究miR-139-5p对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测软骨肉瘤细胞中miR-139-5p、GPR56的mRNA表达;Western blot检测细胞中GPR56的蛋白表达;将miR-139-5p组（转染miR-139-5p mimics）、miR-NC组（转染miR-NC）、si-NC组（转染si-NC）、si-GPR56组（转染si-GPR56）、miR-139-5p+pcDNA3.1组（miR-139-5p mimics和pcDNA3.1共转染）、miR-139-5p+pcDNA3.1-GPR56组（miR-139-5p mimics和pcDNA3.1-GPR56共转染）,均以脂质体法转染至U-2OS细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;Transwell检测各组细胞的迁移、侵袭。结果:与人正常成骨细胞hFOB1.19相比,人骨肉瘤细胞U-2OS中miR-139-5p表达显著降低,GPR56表达显著升高（P＜0.05）。过表达miR-139-5p、敲减GPR56均可明显抑制U-2OS细胞增殖、迁移、侵袭;GPR56是miR-139-5p的靶点。过表达GPR56可逆转miR-139-5p对U-2OS细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:miR-139-5p可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向GPR56有关,将可为骨肉瘤的治疗提供新靶点。     

MMP-2、TIMP-2在骨肉瘤侵袭转移中的作用

目的 研究骨肉瘤术后标本中MMP-2、TIMP-2的表达,结合临床病理资料,探讨二者在骨肉瘤侵袭转移过程中的作用和相互关系.方法 利用免疫组织化学染色法检测53例骨肉瘤标本及20例骨软骨瘤中MMP-2、TIMP-2的表达.结果 MMP-2在骨肉瘤中高表达,在骨软骨瘤中低表达,而TIMP-2则相反.MMP-2和TIMP-2的表达与骨肉瘤的病理组织类型无明显关系,而与软组织侵袭和远处转移有关.MMP-2和TIMP-2在骨肉瘤中的表达有明显的相关性.MMP-2和TIMP-2表达之间的平衡在骨肉瘤侵袭转移过程中有重要作用,MMP-2阳性TIMP-2阴性时具有明显的软组织侵袭和远处转移倾向.结论 MMP-2和TIMP-2表达与骨肉瘤的侵袭、转移有密切关系,为骨肉瘤侵袭转移的预测和预后的判断及临床治疗提供理论依据.     

lncRNA HOXA11-AS对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探究长链非编码RNA(long-nocoding RNA,lncRNA) HOXA11-AS在骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法:采用2012年1月至2015年12月浙江省人民医院骨外科13例骨肉瘤组织及癌旁正常组织,以及骨肉瘤细胞系MG63、U20S和人成骨细胞株hFOB1.19,用实时荧光定量PCR检测骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞系MG63和U20S中lncRNA HOXA11-AS的表达水平.用慢病毒载体构建稳定过表达lncRNA HOXA11-AS的骨肉瘤MG63及U20S细胞,用CCK-8和克隆形成实验、Transwell小室法分别检测过表达lncRNA HOXA11-AS对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响.建立过表达lncRNA HOXA11-AS MG63骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤模型,以空载体慢病毒Lv-NC转染的细胞作为对照,观察过表达lncRNA HOXA11-AS对裸鼠移植瘤生长的影响.结果:lncRNA在骨肉瘤组织和MG63及U20S细胞中表达水平显著下调(P＜0.01).与hFOB1.19细胞比,过表达lncRNA HOXA11-AS细胞后,(1)显著抑制骨肉瘤MG63及U20S细胞的增殖[(4.03 ±0.98) vs(6.96 ±0.54),(4.68±0.77) vs (8.87±1.23),均P＜0.01]、迁移细胞数[(83.00 ±6.03) vs(168±12.54),(96.00 ±8.77)vs(184.00±14.63)个,均P＜0.01]和侵袭细胞数[(35.00±3.48) vs (97.00±8.32),(38.00±1.73) vs (87.00±6.37)个,均P＜0.01];(2)显著抑制骨肉瘤裸鼠皮下移植瘤的生长(P＜0.01).结论:lncRNA HOXA11-AS在骨肉瘤细胞中低表达,且lncRNA HOXA11-AS过表达对骨肉瘤的发生发展具有抑制作用,可以作为骨肉瘤治疗潜在的分子靶点.     

MALAT1靶向调控miR-205与骨肉瘤侵袭的实验研究

目的   探讨人肺腺癌转移相关转录本1（MALAT1）与miR-205的关系,揭示MALAT1促进骨肉瘤发生发展的分子机制。方法   实时荧光定量PCR（QPCR）法检测骨肉瘤组织、癌旁正常组织、人成骨细胞（hFOB）以及骨肉瘤MG63、Sao-2细胞株中MALAT1和miR-205的表达;生物信息学及荧光素酶实验观察MALAT1对miR-205的靶向调控;miR-205 mimics转染Sao-2和MG63细胞后QPCR检测MALAT1表达, si-MALAT1转染Sao-2和MG63细胞后QPCR检测miR-205表达;miR-205 mimics和si-MALAT1分别转染MG63细胞,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Western blotting检测MMP-2、MMP-9表达。结果   骨肉瘤组织、癌旁正常组织中MALAT1和miR-205表达量分别为4.7±0.6、2.6±0.08和2.2±0.09、3.7±0.3,差异有统计学意义（P＜0.05）;MG63、Sao-2细胞株中MALAT1和miR-205表达量分别为2.4±0.7、2.1±0.05和0.53±0.04、0.47±0.02,与hFOB中的0.9±0.01、0.82±0.04比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;生物信息学及荧光素酶检测显示MALAT1序列中存在miR-205的3个互补序列,且两者存在靶向调控作用;转染si-MALAT1的Sao-2和MG63细胞中miR-205的表达量分别为3.4±0.7、3.8±0.6,对照组为1.4±0.5、1.0±0.1,差异有统计学意义（P＜0.05）;转染miR-205 mimics的Sao-2、MG63细胞中MALAT1的表达量分别为0.51±0.05、0.42±0.03,而对照组为1.5±0.7、1.28±0.4,差异有统计学意义（P＜0.05）;Transwell实验结果 显示miR-205 mimics组MG63细胞侵袭数为（28.52±3.68）个,低于miR-205 mimics与pMALAT1共转染组的（42.63±5.67）个,差异具有统计学意义（P＜0.05）;Western blotting结果 显示miR-205 mimics组MMP-2、MMP-9的表达量分别为0.41±0.02、0.49±0.04,显著低于miR-205与pMALAT1共转染组的0.73±0.01、0.80±0.05,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论   MALAT1与miR-205之间存在双向抑制关系,MALAT1通过抑制miR-205的表达促进骨肉瘤细胞的侵袭。     

低分子量肝素抑制骨肉瘤细胞Livin表达并诱导细胞凋亡的实验研究

Objective： To investigate the inhibitory effects of LMWH suppressing the expression of Livin and inducing the apoptosis of the osteosarcoma cells. Methods： Osteosarcoma cells line MG-63 was cultured in vitro. MTT assay and flow cytometry were used to study the effect of LMWH with different concentration suppressed the prolifetation and induced apoptosis in osteosarcoma cells line MG-63. The expression of Livin of osteosarcoma cells line MG-63 was analysed by the immunohistochemistrical method and PT-PCR. Results： Low molecular weight heparin could inhibit the growth of osteosarcoma cell line MG-63. With the LMWH＇s increasing, the apoptosis rate was increased significantly. Immunohistochemistrical method and PT-PCR showed that the expression of Livin of osteosarcoma cells line MG-63 declined obviously than that before medication. Conclusion： LMWH has very strong anti-tumor effect in vitro. The possible mechanisms of LMWH anti-tumor effect are associate with the effect of suppressing the expression of Livin and inducing cell apoptosis.     

沉默 H19对骨肉瘤细胞系 MG63增殖、侵袭的影响

目的：研究长链非编码 RNA H19对骨肉瘤 MG63细胞增殖、侵袭的影响。方法：RNA 干涉技术沉默MG63细胞中 H19,荧光实时定量 PCR（RT －qPCR）检测骨肉瘤 MG63细胞中 H19的表达情况;流式细胞术检测细胞周期的变化;MTT 实验检测沉默 H19表达对细胞增殖的影响;Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果：H19－siRNA 可有效沉默 H19在骨肉瘤细胞 MG63中的表达,沉默 MG63细胞中 H19的表达可以明显抑制骨肉瘤细胞的细胞周期,降低骨肉瘤细胞的增殖、侵袭能力。结论：H19在骨肉瘤的发生发展及侵袭中发挥重要作用。     

Livin和PlGF在骨肉瘤中的表达及临床意义

背景与目的:骨肉瘤是临床常见的成骨性恶性肿瘤,预后差.Livin是近年来发现的人凋亡抑制蛋白家族的新成员,特异性高表达于某些实体肿瘤组织,能抑制细胞凋亡.胎盘生长因子(placental growth factor,PlGF)在肿瘤等病理性血管生成中发挥着极为重要的作用.本研究旨在探讨Livin及PlGF在骨肉瘤中的表达,分析两者在骨肉瘤的临床诊断及治疗中的意义.方法:应用免疫组化方法检测本院骨科于2003年-2008年间收治的57例骨肉瘤患者的肿瘤组织及10例正常骨组织标本中Livin及PlGF的表达,根据阳性细胞百分比和染色强弱判断两者的表达水平,分析两者表达的相关性及与骨肉瘤各项临床病理指标之间的关系.结果:Livin与PlGF在57例骨肉瘤患者的肿瘤组织中阳性表达率分别为52.6%和64.9%,而在10例正常骨组织中均不表达,两组之间的差异有统计学意义(P＜0.05).Livin与PlGF阳性表达与骨肉瘤大小及Enneking分期相关,与患者年龄、性别、病理分型及肿瘤部位无关;Livin的阳性表达与PlGF的阳性表达之间无相关性(P=0.642).结论:Livin及PlGF均在骨肉瘤中高表达,并与骨肉瘤的肿瘤大小及Enneking分期呈正相关,可能与骨肉瘤的发生、发展相关.     

SKA2基因通过EMT调节人骨肉瘤细胞侵袭和迁移

目的:探究SKA2基因在人骨肉瘤细胞中敲低表达后对细胞上皮间充质转化(epithelial-mesenchy-mal transition,EMT)产生的影响,以及对细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响.方法:培养人骨肉瘤saos-2和143B细胞系.再用设计合成SKA2基因的siRNA,将siRNA转染到saos-2和14...     

柴胡皂苷D通过逆转EMT抑制人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭

目的:研究柴胡皂苷D对人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭能力的影响并初步探讨其潜在分子机制.方法:运用MTT试验检测柴胡皂苷D对细胞增殖的影响,划痕试验和Transwell迁移试验检测柴胡皂苷D细胞迁移能力的影响,Transwell侵袭试验研究柴胡皂苷D对细胞侵袭能力的影响,Western-blot检测柴胡皂苷D对EMT相关蛋白的影响.结果:对MG-63增殖无明显影响浓度的柴胡皂苷D显著抑制细胞的迁移和侵袭能力(P<0.001),柴胡皂苷D上调E-cadherin的表达而下调N-cadherin和Vimentin的表达.结论:柴胡皂苷D通过逆转EMT改变抑制人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭.     

KiSS-1抑制骨肉瘤MG63细胞的侵袭和迁移

摘 要　目的：探讨人肿瘤转移抑制基因KiSS-1对人骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移能力的影响。方法:构建KiSS-1表达质粒pSNAV2.0-KiSS-1。pSNAV2.0-KiSS-1质粒转染骨肉瘤MG63细胞,经G418筛选稳定表达KiSS-1基因的MG63细胞。应用real-time PCR、Western blotting检测KiSS-1 mRNA和蛋白的表达。Transwell小室法检测MG63细胞的侵袭力,millicell小室、细胞划痕愈合实验检测KiSS-1基因对MG63细胞迁移能力的影响。结果:成功建立pSNAV2.0-KiSS-1质粒并稳定转染MG63细胞（MG63-KiSS-1细胞）,MG63-KiSS-1细胞高表达KiSS-1 mRNA和蛋白。转染KiSS-1质粒后的MG63细胞侵袭力显著降低（P<0.05）;millicell法、细胞划痕愈合实验证实转染KiSS-1质粒后的MG63细胞迁移力也明显降低（P<0.05）。结论:KiSS-1基因能显著抑制人骨肉瘤MG63细胞的侵袭和迁移能力,在骨肉瘤的转移中起重要作用。     

MPPa-PDT抑制骨肉瘤 MG-63细胞侵袭和迁移

目的:探讨焦脱镁叶绿酸-a甲酯介导的光动力疗法(methyl ester pyropheophorbide-a mediated photodynamic thera-PY,MPPa-PDT)对人骨肉瘤MG-63细胞迁移及侵袭的影响及其可能机制.方法:采用CCK-8检测经MPPa-PDT处理后不同时间点的人骨肉瘤MG-63细胞增殖活性;划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blotting检测E-钙黏蛋白(E-cad)和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、-9蛋白的表达水平.结果:MPPa-PDT处理MG-63细胞12、24及48 h后MPPa-PDT组细胞增殖能力明显较对照组、MPPa组和LED组细胞降低(均P＜0.05),且MPPa-PDT组细胞的划痕愈合能力、迁移活力及侵袭能力也较这3组细胞显著下降(均P ＜0.05);MPPa-PDT组细胞E-cad的表达显著高于其他3组,MMP-2、MMP-9的表达则明显低于其他3组(均P＜0.05).结论:MPPa-PDT抑制人骨肉瘤MG-63细胞的侵袭和迁移能力;上调E-cad的表达,下调MMP-2、-9的表达可能是其作用机制之一.