纳米羟基磷灰石溶胶对人舌癌移植瘤作用

[目的]研究纳米羟基磷灰石溶胶(HAP-sol)对人舌癌裸鼠移植瘤的抑制作用。[方法]BALB/C裸鼠18只,分别接种1×107个舌鳞癌Tca8113细胞,成瘤后随机分为6组,分别瘤内注射生理盐水,0.2mg、0.4mg、0.6mg、0.8mg及1.0mgHAP-sol悬液,检测1￣5周体重变化。5周后处死,行病理学及Caspase3免疫组化检测。[结果]全组裸鼠接种Tca8113细胞1周后均成功长出肿瘤,注射HAP-sol后移植瘤生长均有不同程度的抑制,且抑制率与注射剂量基本成正相关性,最高达95.75%。Caspase3免疫组化检测发现注射针道周围呈不同程度阳性着色。[结论]HAP-sol瘤体内直接注射后对裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,且存在剂量依赖性。     

羟基磷灰石纳米粒子对人肝癌细胞增殖及细胞周期的作用研究

目的：研究羟基磷灰石(HAP)纳米粒子体外抗肝癌作用的机理。方法：采用形态学观察和MTT法检测HAP纳米粒子作用于人肝癌细胞系Bel-7402的量效和时效关系。流式细胞仪分析细胞周期的时相变化。结果：HAP纳米粒子在体外对人肝癌细胞系Bel-7402具有明显的抑制作用，并呈现良好的量效和时效关系。肝癌细胞的生长阻滞于G1期。结论：HAP纳米粒子具有体外抗肝癌作用，细胞增殖阻滞于G1期，阻断细胞周期的进展，导致癌细胞胀亡。     

缺钙纳米羟基磷灰石材料的细胞相容性

目的纳米羟基磷灰石具有广阔的应用前景,然而不同种类纳米羟基磷灰石的生物学性能差异尚不明确。本研究尝试评价缺钙纳米晶羟基磷灰石材料的细胞相容性,并与标准钙磷比羟基磷灰石材料进行比较。方法采用原代培养的成骨细胞检测两种不同钙磷比羟基磷灰石的细胞相容性,两种材料均为化学湿法合成的纳米级羟基磷灰石。羟基磷灰石的纳米颗粒为棒状晶粒,晶粒之间呈无序的交叉排列,标准钙磷比材料晶粒直径40—55nm,长度79—100nm;缺钙羟基磷灰石的纳米晶直径为25～40nm,长度75—100nm。采用MTT法观察成骨细胞在两种材料表面3d后的增殖情况,并用SEM观察第3d时细胞在材料表面的附着形态,细胞培养第5d时对碱性磷酸酶活性进行检测。结果成骨细胞在缺钙纳米晶羟基磷灰石表面的细胞增殖数量显著高于标准钙磷比纳米晶羟基磷灰石,细胞数量相当于后者的130％。在两种羟基磷灰石材料表面成骨细胞胞核明显,胞浆丰富,具有正常的细胞形态;在缺钙纳米晶羟基磷灰石表面细胞出现大量细胞伪足和细小突触结构,表现出更为活跃的细胞伸展形态。具有更高的碱性磷酸酶活性,缺钙纳米晶羟基磷灰石表面的细胞碱性磷酸酶相对活性值为0．73,标准钙磷比材料为0．13。结论缺钙纳米羟基磷灰石表面较标准钙磷比羟基磷灰石更适于成骨细胞生长,对成骨细胞碱性磷酸酶表达也有一定促进作用。     

羟基磷灰石纳米粒子对人肝癌细胞增殖及细胞周期的作用研究

目的研究羟基磷灰石 (HAP)纳米粒子体外抗肝癌作用的机理.方法采用形态学观察和MTT法检测HAP纳米粒子作用于人肝癌细胞系Bel-7402的量效和时效关系.流式细胞仪分析细胞周期的时相变化.结果HAP纳米粒子在体外对人肝癌细胞系Bel-7402具有明显的抑制作用,并呈现良好的量效和时效关系.肝癌细胞的生长阻滞于G1期.结论HAP纳米粒子具有体外抗肝癌作用,细胞增殖阻滞于G1期,阻断细胞周期的进展,导致癌细胞胀亡.     

羟基磷灰石纳米粒子对人白血病细胞K562毒性作用的研究

目的:探讨羟基磷灰石(HAP)纳米粒子体外抑制人白血病细胞K562的生长增殖作用.方法:采用MTT法检测HAP和联合应用化疗药物对K562细胞的增殖抑制及化疗增敏作用.结果:(1)HAP和抗癌药物对K562细胞增殖均有抑制作用;(2)K562细胞生长抑制率与HAP的浓度和作用时间呈明显正相关性;(3)HAP与化疗药物合用具有更良好的抑癌效果.结论:HAP纳米粒子明显抑制K562细胞生长,具有体外抗白血病作用和化疗增敏作用.     

羟基磷灰石纳米粒子对人白血病细胞K562毒性作用的研究

目的:探讨羟基磷灰石(HAP)纳米粒子体外抑制人白血病细胞K562的生长增殖作用。方法:采用MTT法检测HAP和联合应用化疗药物对K562细胞的增殖抑制及化疗增敏作用。结果:(1)HAP和抗癌药物对K562细胞增殖均有抑制作用;(2)K562细胞生长抑制率与HAP的浓度和作用时间呈明显正相关性;(3)HAP与化疗药物合用具有更良好的抑癌效果。结论:HAP纳米粒子明显抑制K562细胞生长,具有体外抗白血病作用和化疗增敏作用。     

羟基磷灰石纳米粒子对HL—60细胞增殖抑制作用的研究

目的：探讨羟基磷灰石(HAP)纳米粒子对HL-60细胞的生长抑制作用。方法：采用体外细胞培养和四甲基氮唑蓝(MTT)测定等方法。将不同浓度的HAP纳米粒子(0．001～0．02)mg／mL分别加入HL-60细胞培养液中，置37℃、5％CO2培养48h。结果：1)不同浓度HAP对HL-60细胞增殖均可产生影响，在倒置显微镜下，可见全部测定孔细胞增殖均较对照孔低下，且呈明显量效关系。2)不同浓度HAP对HL-60细胞生长抑制率呈明显正相关性，在浓度为1．0、5．0、10．0、15．0、20．0时，抑制率相应为16．80、39．20、53．60、64．20、75．00。结论：HAP纳米粒子明显抑制HL-60细胞生长，具有细胞毒和基因毒作用。HAP纳米粒子对白血病及肿瘤的治疗将具有良好的开发应用前景。     

羟基磷灰石纳米粒子对HL-60细胞增殖抑制作用的研究

目的:探讨羟基磷灰石(HAP)纳米粒子对HL60细胞的生长抑制作用。方法:采用体外细胞培养和四甲基氮唑蓝(MTT)测定等方法。将不同浓度的HAP纳米粒子(0001~002)mg/mL分别加入HL60细胞培养液中,置37℃、5%CO2培养48h。结果:1)不同浓度HAP对HL60细胞增殖均可产生影响,在倒置显微镜下,可见全部测定孔细胞增殖均较对照孔低下,且呈明显量效关系。2)不同浓度HAP对HL60细胞生长抑制率呈明显正相关性,在浓度为10、50、100、150、200时,抑制率相应为1680、3920、5360、6420、7500。结论:HAP纳米粒子明显抑制HL60细胞生长,具有细胞毒和基因毒作用。HAP纳米粒子对白血病及肿瘤的治疗将具有良好的开发应用前景。     

羟基磷灰石纳米粒子体外抗肝癌的实验研究

[目的]研究羟基磷灰石（HAP）纳米粒子对肝癌细胞和肝细胞的选择性作用。[方法]以细胞系Bel-7402人肝癌细胞和大鼠肝细胞为对象,倒置显微镜下观察细胞的生长状态,应用活细胞计数法绘制生长曲线。[结果]经HAP纳米粒子（1.4×10-4mol/L）作用的肝癌细胞与其对照组相比,细胞数量逐渐减少,胞质空泡样变,二者存在显著性差异（P<0.01）。而加入不同浓度HAP纳米粒子的肝细胞组,存活细胞数量明显增多,与对照组之间无明显差异。[结论]HAP纳米粒子有明显的体外抗肝癌作用,而对正常肝细胞影响轻微。     

纳米羟基磷灰石对人骨肉瘤细胞U2OS增殖和凋亡的影响

目的:探索纳米羟基磷灰石（Nano-HAP）对人骨肉瘤细胞U2OS增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度的Nano-HAP处理人骨肉瘤细胞U2OS后,通过FDA染色检测Nano-HAP对细胞黏附的影响;CCK8实验和克隆形成实验检测Nano-HAP对细胞生长增殖的影响;最后利用Annexinv-FITC凋亡检测试剂盒检测Nano-HAP对细胞凋亡的影响。结果:不同浓度的Nano-HAP对U2OS的黏附没有显著影响,但是对U2OS的克隆形成具有显著抑制作用,同时在50 μg/ml 和800 μg/ml时,可以显著抑制骨肉瘤细胞U2OS的增殖。结论:Nano-HAP对骨肉瘤细胞具有显著的抑制增殖促进凋亡作用,但效应与纳米粒子浓度并无直接的线性关系。     

CD151对人舌鳞癌细胞Tca8113迁移作用的影响

背景与目的:CD151在肿瘤组织中的高表达与肿瘤的转移和预后密切相关,但其具体机制尚不清楚。本研究旨在探讨携带全长正义和反义CD151基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-antiCD151)对人舌鳞癌细胞Tca8113细胞迁移的影响。方法:利用含酶切位点的PCR引物克隆CD151基因,分别呈正向和反向插入包装质粒pAAV,并包装成rAAV-CD151,rAAV-antiCD151,斑点杂交测定病毒滴度;rAAV-CD151与rAAV-antiCD151分别转染Tca8113细胞2周后,Westernblot检测CD151表达,通过Boyden趋化小室研究其对Tca8113细胞迁移的影响。结果:斑点杂交结果显示rAAV-CD151和rAAV-antiCD151病毒滴度分别为2.0×1011pfu/ml,1.0×1011pfu/ml;转染rAAV-CD151后,Tca8113细胞CD151的表达较未转染组增加了108%,细胞迁移数(93.6±11.6)显著高于未转染组和转染rAAV-GFP对照组(53.0±6.6和46.0±7.0,P<0.05);转染rAAV-antiCD151后,Tca8113细胞CD151的表达较未转染组减少了79%,细胞迁移数(24.0±4.4)显著低于未转染组和转染rAAV-GFP对照组(P<0.05)。结论:CD151在肿瘤细胞的迁移中起重要的作用,是肿瘤转移的重要分子基础。携带反义CD151基因的重组腺相关病毒作为一种新的治疗工具,可以特异性阻断肿瘤细胞CD151表达,抑制肿瘤细胞的迁移。     

人舌癌细胞耐药系Tca8113/BLM的建立及其耐药机理的分析

目的 :建立舌癌平阳霉素 (BleomycinA5Hydrochloride ,BLM)耐药细胞系Tca8113/BLM ;研究Tca8113/BLM细胞P 糖蛋白 (P glycoprotein ,P gp)和多药耐药相关蛋白 (MRP)表达变化与其耐药的相关性。方法 :采用大剂量BLM(30 μg/ml)反复间歇 2 4小时暴露法处理舌癌细胞系Tca8113细胞 ;用MTT法检测该耐药细胞模型的多药耐药性 ;激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测P gp、MRP ;并用流式细胞仪检测细胞周期的分布 ,细胞内阿霉素 (ADM)蓄积 ,以及经典钙离子生物泵阻断剂逆转剂黄体酮 (Progesterone,Prog)对ADM蓄积的影响。结果 :①Tca8113/BLM耐药性稳定 ,耐药指数为 12 ,且对其它化疗药物产生交叉耐药性 ;②Tca8113/BLM的倍增时间延长 ,G1期细胞减少 ,G2和S期细胞增多 ;③P gp和MRP在Tca8113/BLM细胞中强阳性表达 ,在Tca8113细胞中弱阳性表达 ,两者相比差异有显著性 (P <0 .0 1) ;④ADM在Tca8113/BLM细胞内蓄积明显低于Tca8113细胞 (P <0 .0 5 ) ;⑤Prog能显著提高Tca8113/BLM细胞内ADM蓄积 ,而对Tca8113细胞内ADM蓄积无明显作用。结论 :建立了舌癌BLM耐药细胞系Tca8113/BLM ,发现Tca8113/BLM的耐药性与P gp和MRP过表达有密切关系     

Inhibitory effect of celecoxib combined with cisplatin on growth of human tongue squamous carcinoma Tca8113 cell xenograft tumor

Objective  

The aim of this study was to observe the inhibitory effect of application of COX-2 inhibitor, celecoxib, combined with cisplatin on the growth of human tongue squamous carcinoma Tca8113 cell xenograft by animal experiment.     

Crocin inhibits proliferation and nucleic acid synthesis and induces apoptosis in the human tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113

Background: Cancer chemoprevention is a proven effective strategy for oral squamous cell carcinomas (OSCCs). The present study was designed to investigate the effects of crocin, a potential chemopreventive agent, on growth and DNA and RNA content in a human tongue squamous cell carcinoma cell line, Tca8113. Methods: Tca8113 cells were treated with crocin for 24, 48, 72, and 96 h at concentrations of 0.1, 0.2, 0.4, and 0.8 mM. Tumor cell viability was investigated using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) assay. In addition, Tca8113 cells were treated with 0.4 mM crocin and cytotoxic effects as an inducer of apoptosis were analyzed using flow cytometry. Furthermore, acridine orange (AO) staining and observation using laser scanning confocal microscopy (LSCM) were used to determine the effects of the drug on nucleic acid synthesis. Results: Crocin decreased Tca8113 cell viability and growth remarkably at 24, 48, 72, and 96 h, in a concentration-dependent manner (P<0.05). In addition, 0.4 mM crocin significantly induced both early and late apoptosis of Tca8113 cells. Moreover, the cellular DNA and RNA content was significantly downregulated by 0.4 mM crocin compared with the negative control (P<0.01). Conclusions: Our observations support the feasibility of applying crocin as a chemoprophylactic agent and treatment for OSCCs.     

miR-203对Tca8113增殖能力影响观察

目的：探讨miR-203对人舌鳞癌细胞系Tea8113增殖能力的影响。方法：通过慢病毒转染技术构建miR-203过表达的舌鳞癌细胞模型。RT—PCR法检测miR-203过表达慢病毒转染前后miR-203的表达水平；MTT方法检测miR-203过表达（microup组）及阴性对照（NC组）2组细胞的增殖能力，连续检测5d，酶标仪检测A490值，绘制细胞增殖曲线；PI—FACS细胞周期检测miR-203过表达后对DNA合成和细胞周期的影响，取处于对数生长期的细胞，70％乙醇固定〉1h，细胞染色，流式细胞仪检测。结果：成功建立了miR-203过表达舌鳞癌细胞模型。定量PCR结果显示，Tca8113细胞中，microup组miR-203表达丰度是NC组的286．262倍，t=34．879，P=0．001。MTT检测结果表明，与Nc组相比，microup组细胞增殖能力明显降低；检测第4天microup组A490值为0．492±0．011，NC组为0．681±0．009，t=23．463，P〈0．001。PI-FACS细胞周期检测结果显示，microup组DNA合成前期（G1期）细胞所占百分率为（58．98±0．56）％，较NC组的（53．86±O．96）％明显增高，t=-7．989，P=0．001；而DNA合成期（S期）、合成后期（G。期）及有丝分裂期（M期）细胞所占百分率降低。结论：miR-203可能通过将细胞周期阻滞于G1期，从而抑制舌鳞癌细胞系Tca8113的细胞增殖能力。     

The inhibitory effect of a novel organoselenium compound BBSKE on the tongue cancer Tca8113 in vitro and in vivo

The aim of this study was to evaluate the anti-cancer effect of a novel organoselenium compound BBSKE (1,2-[bis(1,2-Benzisoselenazolone-3(2H)-ketone)]ethane, BBSKE, PCT: CN02/00412) on cell growth and apoptosis, focusing on the protein activity of Thioredoxin Reductase (TrxR) and Caspase-3, in oral squamous cell carcinoma (OSCC) in vitro and in vivo. Oral squamous cancer cell line Tca8113 was treated with various concentrations of BBSKE. Growth and apoptosis as well as the protein activities were analyzed. Morphologic changes of Tca8113 cells after 24h treatment of BBSKE were determined by fluorescence microscopy. The increase of Caspase-3 activity and decrease of Thioredoxin reductase (TrxR) activity were also measured. BBSKE induced a significant cell growth inhibition and elicited typical apoptotic morphologic changes (chromatic condensation, nucleus fragmentation). This phenomenon was accompanied by a change in protein activity of Thioredoxin reductase (TrxR) and Caspase-3. The anti-cancer effect of BBSKE was then studied in well-established Tca8113 xenografts in nude mice. In those tumors, anti-cancer effects were observed and significantly higher than the controls. Together, these results indicate that BBSKE can inhibit tongue cancer cell proliferation in vitro and in vivo, and induce apoptosis in Tca8113 cell lines partially via inhibiting the activity of TrxR and promoting the activity of Caspase-3.     

Kinetics of the thermotolerance of human tongue squamous cell carcinoma cells (Tca 8113) in vitro

This paper reports an observation on kinetics of induction and resolution of the thermotolerance expressed by Tca8113 in vitro in form of colony-forming rate, synchronization and laser flow cytometry after the cells being exposed to continuous and fractionized heat treatment of 41.5-45.5 degrees C for 4 hours. The process of thermotolerance kinetics could be divided into three phases: triggering, development and decay. The triggering phase lasted about 8 hours. The duration of development and decay phases was related to the temperature of initial heating. The higher the temperature, the shorter the duration. Generally, thermotolerance gradually disappeared 96 hours after the initial heating treatment. The thermotolerance of the synchronized cells in various phases was G1 greater than G2 greater than M greater than S. Hyperthermia simultaneously combined with pingyangmycin both produces a greater synergetic cytotoxic effect and reduces the degree of thermotolerance.     

细胞色素P450表氧化酶对人舌鳞癌细胞Tca-8113裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的：研究细胞色素表氧化酶对在体肿瘤生长的影响。方法：将转染rAAV—CYP2J2、rAAV—CYPF87V、rAAV—antiCYP2J2和rAAV—GFP的Tea-8113细胞,分别接种至裸鼠皮下,观察皮下移植瘤的生长情况,并用免疫组织化学染色分析移植瘤细胞PCNA和CD31分子的表达情况。结果：转染rAAV—CYP2J2、rAAv—CYPF87V明显促进裸鼠皮下移植瘤的生长,并且使移植瘤出现时间（分别为5．8天和6．0天）明显较对照组和转染rAAV—GFP（分别为8．4天和8．6天）短;而转染反义rAAV—CYP2J2组移植瘤生长缓慢,出现时间也明显延长（约9．75天）。免疫组化结果显示,rAAV—CYP2J2、rAAV—CYPF87V明显促进移植瘤细胞PCNA和CD31的表达,移植瘤微血管密度明显增加。结论：CYP表氧化酶能明显促进在体肿瘤的生长,其机制可能与促进肿瘤血管生成密切相关。     

开环及闭环羟基喜树碱对口腔鳞癌细胞株抗癌作用的研究

背景与目的:羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)的抗癌活性与其内酯环(包括闭环和开环)密切相关,但关于闭环HCPT和开环HCPT的抗癌活性仍有争议,研究已显示开环HCPT对口腔鳞癌具有明显的体内外抑制作用,本文比较开环及闭环HCPT对口腔鳞癌细胞株Tca8113的体内外抗瘤作用及其作用机理。方法:采用开环及闭环HCPT处理Tca8113细胞及其裸鼠移植瘤,MTT法及流式细胞仪(FCM)检测HCPT对Tca8113细胞的细胞毒作用及对细胞周期的影响;观察经HCPT处理后Tca8113细胞移植瘤的生长状态,计算肿瘤倍增时间和抑瘤率;高效液相色谱仪检测裸鼠血浆及移植瘤中HCPT的浓度,计算药代动力学参数。结果:开环及闭环HCPT对Tca8113细胞具有相同的强杀伤作用,FCM检测显示小于1μmol/LHCPT可将细胞阻滞在S期和G2/M期,100μmol/LHCPT则诱导细胞凋亡。与对照组比较,HCPT组移植瘤生长减慢,倍增时间延长,肿瘤抑制率分别为69.6%(3mg/kg开环HCPT)、65.0%(3mg/kg闭环HCPT)和74.1%(10mg/kg开环HCPT)。腹腔注射10mg/kgHCPT后裸鼠血浆曲线下面积分别为2.66μg·h·ml-1(闭环HCPT)和0.42μg·h·ml-1(开环HCPT),肿瘤组织中可检测到HCPT。HCPT3mg/kg组未见明显的毒副作用,开环HCPT10mg/kg组可见明显的胃肠道反应,闭环HCPT10mg/kg组所有裸鼠死亡。结论:开环及闭环HCPT均对口腔鳞癌细胞具有强的体内外细胞毒作用,其机理与阻断细胞于S期和G2/M期以及诱导细胞凋亡有关,但闭环HCPT毒性较开环HCPT毒性大。     

c-myc转染对舌鳞癌细胞系Tca8113fas表达和凋亡的影响

背景与目的：恶性肿瘤的发生不仅与细胞的异常增殖有关,还与细胞的凋亡异常有关,本实验目的在于研究原癌基因c-myc(cellular avian myelocytoma virus)介导舌鳞癌细胞凋亡的可能性和分子机制。方法：脂质体法将含c-myc的重组质粒转染到舌鳞癌细胞Tca8113,G418筛选阳性克隆,RT－PCR检测转染前后fas(fatty acid synthase）表达水平,TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果：转染后fas mRNA表达上调,正常培养条件下,转染前后细胞凋亡指数无明显改变,低浓度血清条件下细胞凋亡指数增加,结论：低营养状态下c-myc可以介导舌鳞癌细胞凋亡,凋亡机制可能与上调fas mRNA表达有关。