酒精性肝纤维化中肝星状细胞活化的机制研究进展

肝星状细胞(HSC)活化是各种病因所致肝纤维化过程中的关键环节。在酒精性肝病的发展过程中,乙醇和代谢产物乙醛可改变机体氧化还原状态,活化枯否细胞,释放大量细胞因子,诱导HSC活化、增殖和胶原合成,形成肝纤维化。本文将对酒精性肝纤维化中HSC活化的机制和相关靶点加以综述,为开发抗肝纤维化药物和临床治疗提供新的思路。     

以肝星状细胞为靶标的抗肝纤维化治疗进展

任何病因导致的慢性肝损伤,均可发展为肝纤维化。损伤肝脏的纤维化形成过程中,活化肝星状细胞(HSC)是主要细胞类型,并有重要细胞因子参与。目前治疗都以阻止活化HSC在损伤部位聚集和细胞外基质沉积为目标。该文就以HSC为靶标的抗肝纤维化最新治疗方案作一综述。     

肝纤维化时肝星状细胞激活因素研究进展

肝纤维化（liver　fibrosis,LF）是指肝细胞发生坏死及炎症刺激时,肝脏中胶原蛋白等细胞外基质（ECM）增生与降解失去平衡,导致肝脏内纤维结缔组织异常沉积的病理过程。在过去的几十年中,对肝纤维化的发生机制及其转归的研究一直是医学界研究的重点,目前肝星状细胞已成为研究LF发生机制中最受重视的细胞。     

肝纤维化病程中Kupffer细胞分泌的细胞因子对肝星状细胞活化增殖、凋亡的调控

肝纤维化是对慢性肝损伤的愈合反应,为一个可逆的过程。肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝脏分泌细胞外基质(extra cellular matrixc,ECM)的主要细胞,在肝纤维化的发展机制中占有重要的地位。如何控制HSC的活性并逆转肝纤维化的进程是抗肝纤维化研究的重点之一。在肝纤维化病程中,一系列细胞因子通过旁分泌和自分泌方式作用于邻近的HSC,影响其增殖、趋化、代谢及凋亡。鉴于Kupffers细胞为细胞因子的主要来源,其在肝纤维化病程中对HSC细胞的活化增殖、凋亡发挥着重要的调控作用。HSC、Kupffers细胞及细胞因子与肝纤维化的发生发展关系极为密切,阐明其关系,有助于以HSC为靶点的肝纤维化方面的研究,现就其关系综述如下。     

MicroRNA-154对大鼠肝星状细胞HSC-T6凋亡的影响

摘 要 目的： 探讨MicroRNA-154（miR-154）对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）凋亡的影响。方法: 用合成的miR-154模拟物（miR-154 mimics）和miR-154抑制物（miR-154 inhibitor）转染HSC-T6,以其阴性对照物（ mimics NC、inhibitor NC ）转染细胞作为阴性对照。采用CCK-8试剂检测miR-154对HSC-T6增殖的影响;采用流式细胞术检测miR-154对HSC-T6细胞周期和凋亡的影响。 结果: miR-154可以显著提高细胞增殖能力,降低细胞凋亡率（P＜0.01）;细胞内过表达miR-154可使G₀/G₁期细胞比例显著下降,S期细胞比例显著升高（P＜0.01）;抑制细胞内miR-154表达可显著提高细胞凋亡率,G₀/G₁期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著下降（P＜0.01）。结论:MicroRNA-154可以促进肝星状细胞的增殖,抑制肝星状细胞的凋亡。     

肝星状细胞与肝纤维化

肝纤维化 (liverfibrosis)是指肝脏慢性炎症或损伤导致肝脏内纤维结缔组织异常增生 ,是所有慢性肝病共有的病理改变 ,其共同特点是以胶原蛋白为主的细胞外基质 (extracellularmatrix ,ECM )各成分合成增多 ,降解相对不足 ,过多沉积在肝内引起肝纤维化 ,若进一步发展引起肝小叶改建、假小叶和结节形成 ,则进入肝硬化。Safadi等[1 ] 研究表明肝纤维化在去除损伤因素后尚有逆转的可能 ,大大地激发了人们对肝纤维化发病机制的研究。目前 ,学者们普遍认为肝星状细胞 (hepaticstellatecell,HSC)是肝脏合成ECM的主要细胞[2 ] 。因此 ,肝星状细…     

肝星状细胞激活与增殖相关信号转导通路在肝纤维化中的作用及机制

肝星状细胞激活和增殖在肝纤维化的发生过程中占有重要的地位。控制肝星状细胞的激活和增殖并逆肝纤维化的进程是抗肝纤维化研究的重点之一。本综述以肝星状细胞激活与增殖相关信号转导通路为中心,探讨其在肝纤维化发病作用方面的作用机制。通过干预细胞外信号传导通路,为研究肝纤维化的发病机制和药物治疗提供新的途径。     

大鼠肝星状细胞的分离和培养

目的:本文参考Friedman等的不连续密度离心法并作改良,建立了一种经济、简便、可靠的分离大鼠肝星状细胞(HSC)的方法。方法:用链霉蛋白酶和胶原酶灌流大鼠肝脏,Nycodenz密度梯度离心分离HSC,并进行体外培养,结果:分离培养的HSC经台盼蓝拒染实验活细胞大于98％,细胞得率为3.95×10个/肝脏。结论:该方法简便、实用、稳定、可靠,而且本方法的建立为进一步研究HSC与肝纤维化的关系,尤其是细胞水平及分子生物学水平的研究奠定了基础。     

丹参对体外培养肝星状细胞TGF-β的影响

肝纤维化是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生,导致肝内弥漫性细胞外基质过度沉淀的病理过程,是所有慢性肝病共有的病理改变。目前认为肝星状细胞(HSC)的活化与增生是肝纤维化进展的中心环节,其中以转化生长因子β(TGF-β)最为重要[1]。为此我们拟观察注射用丹参(冻干)对体外培养HSC增殖及TGF-β1表达的影响。     

黑老虎根提取物调控微小 RNA-193对肝星状细胞 HSC-T6增殖凋亡的影响

目的探讨黑老虎根提取物对肝星状细胞(HSC-T6)增殖、凋亡的影响及分子机制。方法于2018年10月至 2019年12月进行该研究。将肝星状细胞 HSC-T6分为实验组(1、2、3组)、过表达微小 RNA(miR-NC)组、过表达微小 RNA-193(miR-193)组、实验 3+抑制物 miR-NC(anti-miR-NC)组、实验 3+抑制物 miR-193(anti-miR-193)组。流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况;细胞计数试剂盒 8(CCK-8)检测细胞存活率;蛋白质印迹法检测活化胱天蛋白酶 -3(cleaved caspase-3)、增殖细胞核抗原(Ki67)蛋白表达;时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测 miR-193表达水平。结果与对照组相比,实验 2、3组HSC-T6细胞 G0-G1期比例［(34.03±2.66)%实比(42.60±2.74)%、(50.37±3.42)%］细胞凋亡率［(7.40±0.88)%比(15.56±1.30)%、(21.75±1.62)%］、cleaved caspase-3(0.23±0.01比     

Pirfenidone inhibits carbon tetrachloride- and albumin complex-induced liver fibrosis in rodents by preventing activation of hepatic stellate cells

• 1 Pirfenidone (PFD; 5‐methyl‐1‐phenyl‐2(1H)‐pyridone) is an effective and novel agent with antifibrotic and anti‐inflammatory properties. In the present study, we investigated the antifibrotic effects of PFD on experimental liver fibrosis models in rodents and the possible underlying molecular mechanisms.
• 2 Liver fibrosis was induced by carbon tetrachloride (CCl₄) in BALB/c mice. Pirfenidone (250 mg/kg) and silymarin (50 mg/kg) were given to different groups of rats by gastric gavage for 4 weeks. Pirfenidone significantly attenuated fibrosis severity, as determined by histopathological scores and hydroxyproline levels in liver tissue, by 49.8 and 44.9%, respectively, compared with the CCl₄‐treated group. The antifibrotic effects of PFD were significantly greater than those of silymarin, as indicated by a decrease of 23.5 and 24.8% in histopathological scores and hydroxyproline levels, respectively.
• 3 Liver fibrosis was also induced by albumin antigen–antibody complex in Wistar rats, which were then treated with the same doses of PFD and silymarin for 8 weeks. Pirfenidone significantly reduced the degree of fibrosis compared with CCl₄‐treated rats (by 45.0 and 51.0% as determined by histopathological scores and hydroxyproline levels in liver tissue, respectively). The antifibrotic effects of PFD were comparable to those of silymarin.
• 4 The effects of PFD on the expression of extracellular matrix‐associated genes in human hepatic stellate cells (the LX‐2 cell line) were measured by real‐time quantitative polymerase chain reaction. LX‐2 cells were treated with or without 100 μmol/L or 1 mmol/L PFD for 24 h. Pirfenidone significantly inhibited the expression of a‐smooth muscle actin and Type I collagen in 8 ng/mL transforming growth factor‐β1‐ or 5% fetal bovine serum‐activated LX‐2 cells in a dose‐dependent manner.
• 5 In conclusion, the results of the present study demonstrate that PFD is effective in ameliorating fibrogenesis induced by CCl₄ in mice and by the albumin complex in rats. These effects were mediated mainly via inhibition of the activation of hepatic stellate cells, as well as antifibrotic actions (i.e. inhibition of collagen synthesis) of PFD.

     

白芍总苷治疗四氯化碳致大鼠肝纤维化的作用与其影响肝星状细胞功能的关系*

目的:研究白芍总苷(TGP)通过影响肝星状细胞(HSC)的功能发挥治疗四氯化碳(CCl_4)致大鼠肝纤维化的作用。方法:建立CCl_4诱导化学性肝纤维化模型,全自动生化仪检测血清中丙氨酸氯基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)水平;放免法检测血清及体外HSC培养上清中透明质酸(HA)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的含量;流式细胞仪检测HSC凋亡率。苏木素-伊红染色处理肝脏组织切片,光镜观察病理学改变。结果:在CCl_4诱导大鼠肝纤维化模型,TGP给药(40,80,160mg·kg~(-1),ig)均明显降低血清ALT,AST,ALP,HA和PCⅢ水平;升高白蛋白水平及白蛋白球蛋白比值(A/G)。TGP(60,120和240mg·L~(-1))能明显降低HSC体外分泌的HA和PCⅢ水平,促进HSC凋亡,明显改善肝脏病理组织状况。结论:TGP对CCl_4致大鼠肝纤维化具有治疗作用,该作用与其降低HSC分泌HA和PCⅢ、促进HSC凋亡有关。     

肝星状细胞核糖体蛋白S5(RPS5)特异性敲减对肝纤维化的影响

目的 观察特异性敲减肝星状细胞（HSC）内核糖体蛋白S5(RPS5)对大鼠肝纤维化的影响。方法 构建胶质纤维酸性蛋白（GFAP）启动子驱动的RPS5 shRNA腺病毒,分别用AdGFa2-shRPS5及其对照AdGFa2 shNC转染大鼠原代HSC和肝细胞,通过蛋白印迹法和实时PCR测定RPS5、α-SMA和Ⅰ型胶原表达情况;采用二甲基亚硝胺（DMN）和胆管结扎术（BDL）的方法建立大鼠肝纤维化模型,尾静脉注射腺病毒特异性敲减肝内HSC的RPS5水平。肝组织切片HE染色分析病理改变情况;羟脯氨酸含量测定、切片天狼星红和Masson染色评价胶原沉积情况;免疫组织化学染色检测α-SMA和RPS5的表达情况。结果 AdGFa2-shRPS5能够特异性敲减HSC中的RPS5表达水平,增加α-SMA和Ⅰ型胶原在体外表达。体内研究结果表明,在两种慢性肝损伤动物模型中,特异性敲减HSC中RPS5表达水平能够促进HSC活化,增加细胞外基质的沉积,促进肝纤维化。结论 RPS5对HSC激活和肝纤维化发生至关重要,可能是治疗肝纤维化的潜在靶点。     

渥漫青霉素对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的探讨渥漫青霉素对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的影响.方法用链霉蛋白酶和胶原酶灌流大鼠肝脏,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠HSC,进行体外培养;并以MTT比色法观察渥漫青霉素对HSC增殖的影响.结果低浓度渥漫青霉素的抑制作用不明显(P>0.05),当药物浓度上升为2.5mg/L时,抑制作用增强,呈明显药物浓度依赖关系.结论渥漫青霉素抗肝纤维化的作用是抑制了HSC的增殖,它对于防治肝纤维化可能有一定的临床意义和应用前景.     

去甲肾上腺素和酚妥拉明对大鼠肝星状细胞的影响

目的：探讨α-肾上腺素激动剂去甲肾上腺素和拮抗剂酚妥拉明对体外活化的肝星状细胞（HSC-T6）的影响。方法：体外对HSC-T6进行复苏和培养传代;MTT法检测HSC-T6的增殖;放射免疫法检测HSC-T6培养上清液中透明质酸(HA)和III型前胶原（PCIII）的浓度;流式细胞仪检测HSC-T6凋亡率;免疫细胞化学染色检测组织基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)和基质金属酶-13(MMP-13)蛋白的表达。结果：在体外培养的活化HSC-T6中,去甲肾上腺素（10-5,10-7,10-9 mol•L-1）能促进细胞增殖,升高分泌HA和PCIII水平,增强TIMP-1蛋白的阳性表达并降低其凋亡率;酚妥拉明（10-5,10-7,10-9 mol•L-1）能抑制细胞增殖,促进MMP-13的阳性表达并增加HSC-T6的凋亡率。结论：去甲肾上腺素具有促进肝纤维化的作用,酚妥拉明则具有抗纤维化的作用,该作用与其对HSC-T6增殖、凋亡及HA和PCIII分泌水平调控有关。     

肝星状细胞信号转导机制及可能的抗肝纤维化药物作用新靶点

肝纤维化是肝脏对一系列慢性刺激的损伤修复反应,以细胞外基质的过度沉积为主要特征。近年来,肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的激活以及由此产生的一系列复杂生物学效应在肝纤维化发生、发展过程中所处的重要地位已得到普遍共识。各种损伤刺激通过不同或相同的HSC信号转导途径介导了HSC的激活,并使其转化为肌成纤维细胞,合成大量细胞外基质成分。作用于这些信号或其转导过程的药物正成为防治肝纤维化的策略之一。     

MicroRNA-154对大鼠肝星状细胞HSC-T6中β-catenin蛋白表达的影响

目的:探讨microRNA-154(miR-154)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cellc,HSC)中β-catenin蛋白表达的影响。方法:合成miR-154模拟物(miR-154 mimics)和miR-154抑制物(miR-154 inhibitor)转染HSC-T6,以其阴性对照物(mimics NC、inhibitor NC)转染细胞作为阴性对照组,不作处理的正常细胞为空白对照组(Blank);通过实时定量RT-PCR检测转染后各组细胞内的miR-154和β-catenin mRNA的相对表达,免疫印迹法(Western blotting)检测转染后各组细胞内β-catenin蛋白的表达。结果:β-catenin蛋白表达量和β-catenin mRNA表达量在转染miR-154 mimics组显著上调,与空白对照组和阴性对照组相比差异具有统计学意义,P<0.05;β-catenin蛋白表达量和β-catenin mRNA表达量在转染miR-154 inhibitor组显著下降,与空白对照组和阴性对照组相比差异具有统计学意义,P<0.05。结论:细胞内过表达miR-154能够诱导细胞中β-catenin mRNA及蛋白的过表达;抑制细胞内miR-154的表达则能够抑制细胞中β-catenin mRNA及蛋白的表达。